Objetivos: O objetivo deste estudo foi comparar os índices de Pulsatilidade (IP) e Resistência (IR) das artérias uterinas, o volume uterino e a espessura endometrial após o uso do Sistema Intra-uterino de Levonorgestrel (SIU-LNG) ou do agonista do GnRHa (GnRHa) em pacientes portadoras de endometriose pélvica. Pacientes e métodos: Setenta e nove mulheres voluntárias, com idade entre 18 e 40 anos, foram incluídas neste ensaio clínico comparativo, prospectivo, randomizado e controlado. Dezoito foram eliminadas do estudo baseadas nos critérios de exclusão, As 61 pacientes remanescentes foram divididas em dois grupos: 31 pacientes fizeram parte do grupo SIU-LNG (uma foi excluída antes da inserção por apresentar-se grávida) e 30 fizeram parte do grupo GnRHa. Foram submetidasa exame ultra-sonográfico transvaginal bidimensional no dia em que iniciaram o tratamento (inserção do SIU-LNG ou administração de uma ampola de 3,75 mg de GnRHa por via intra-muscular) e seis meses após, avaliando a espessura endometrial, o volume uterino e os IR e IP das artérias uterinas. Resultados: Ambos tratamentos promoveram redução da espessura endometrial (6.08±3.00mm para 2.70±0.98mm e 6.96±3.82mm para 3.23±2.32mm - média ±SD, grupo SIU-LNG e grupo GnRHa, respectivamente). O volume uterino teve redução no grupo usuário do GnRHa (86.67±28.38cm3 para 55.27±25.52cm3) sem alteração significativa nas usuárias do SIU-LNG (75.77±20.88cm3 para 75.97±26.62cm3). Em relação à ascularização uterina, notamos incremento dos IP das artérias uterinas em ambos os grupos (grupo SIU-LNG: artéria uterina direita de 2.38±0.72 para 2.76±0.99 (média ±SD) e artéria uterina esquerda 2.46±0.70 para 2.87±0.96, e grupo GnRHa: artéria uterina direita 2.04±0.59 para 3.12±0.98 eartéria uterina esquerda 2.24±0.59 para 3.15±0.89). Em relação ao IR das artérias uterinas, observamos incremento no grupo GnRHa em ambas artérias e somente na artéria uterina esquerda no grupo SIU-LNG (grupoSIU-LNG - artéria uterina direita de 0.85±0.08 para 0.88±0.07 e artéria uterina esquerda de 0.86±0.07 para 0.89±0.06, e grupo GnRHa: artéria uterina direita de 0.81±0.07 para 0.93±0.09 e artéria uterina esquerda 0.84±0.06 para 0.93±0.09). No entanto, ao compararmos as diferenças, a elevação foi significativamente maior nas usuárias do GnRHa. Conclusões: Ambos GnRHa e SIU-LNG promoveram redução na espessura endometrial e aumento no IP das artérias uterinas. Houve redução do volume uterino nas usuárias do grupo GnRHa, não se alterando no grupo SIU-LNG. Em relação ao IR, houve incremento em ambas as artérias nas usuárias de GnRHa e somente na artéria uterina esquerda nas usuárias do SIU-LNG. / Objectives:The objective of the present study was to compare the uterine arteries pulsatility index (PI) and resistence index (IR), uterine volume and endometrial thickness changes promoted by the use of the levonorgestrel intrauterine device (LNG-IUD) and the gonadotropin-releasing hormone analogue (GnRHa)in patients with endometriosis. Methods: Seventy nine women aged 18 to 40 years were included in this randomized controlled trial. Eighteen was excluded based on the exclusion criteria. The patients were randomly allocated in two groups: 31 women who used the LNG-IUD (since one became pregnant before insertion and wasexcluded) and 30 who used monthly GnRHa injections. They were submitted to a transvaginal two dimensional ultrasound scan on the day the treatment started and 6 months later, for the evaluation of uterine arteries PI, uterine arteries RI, uterine volume and endometrial thickness. Results: The use of LNG-IUD promoted an ndometrial thickness decrease (6.08±3.00mm to 2.7±0.98mm; mean±SD) as does the use of GnRHa (6.96±3.82mm to 3.23±2.32mm). The uterine volume decreased in the GnRHa group (86.67±28.38cm3to 55.27±25.52cm3), but not in the LNG-IUD group (75.77±20.88cm3 to 75.97±26.62cm3). Uterine arteries PI increased in both groups : Uterine arteries PI: LNG-IUD right uterine arterie 2.38 ± 0.72 to 2.76 ± 0.99 and left uterine arterie 2.46 ± 0.70 to 2.87 ± 0.96, and GnRHa right uterine arterie 2.04 ± 0.59 to 3.12 ± 0.98 and left uterine arterie 2.24±0.59 to 3.15 ± 0.89. Uterine arteries RI increased in both arteries in GnRHa and only in the left uterine arterie in the LNG-IUD :Uterine arteries RI : LNG-IUD right uterine arterie 0.85 ± 0..08 to 0.88 ± 0.07 and left uterine arterie 0.86 ± 0.07 to 0.89 ± 0.06, and GnRHa right uterine arterie 0.81 ± 0.07 to 0.93 ± 0.09 and left uterine arterie 0.84 ± 0.06 to 0.93 ± 0.09 . However, the increase was significant higher in the GnRHa group. Conclusions: Both GnRHa and LNG-IUD promoted an endometrial thickness decrease and an increase in the uterine arteries PI. The uterine volume decreased in women who used GnRHa, but not in those who used LNG-IUD.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was to evaluate the use of immunological castration as an alternative to surgical castration in the production of beef cattle. In the research were used 48 Aberdeen Angus male bovines, monitored from initial age of six months and initial average weight of 160 kg at weaning. The animals were randomly distributed in the following treatments: surgically castrated at birth; surgically castrated at weaning; immunocastrated Bopriva® with three doses of vaccine, and immunocastrated Bopriva® with four doses of vaccine. The experimental design used was the completely randomized, with 12 replications. Means were classified by F test and compared by Tukey test with α=.05. There was interaction between date of sampling and treatment for serum testosterone levels in the blood plasma, however at slaughter all steers kept only residual levels of testosterone, characterized as castrated. Steers immunocastrated with three applications of Bopriva® had higher daily weight gain and total weight gain in the finishing phase, in relation to surgically castrated at weaning. However, throughout the evaluation stages, the performance was similar between treatments (P>.05). Steers castrated at birth had higher fat thickness to when adjusted 100 kg of cold carcass and lower chilling loss than castrated immunologically with three doses (P<.05). Immunocastration with three doses of Bopriva® provided increment in muscle participation in relation to surgically ones at both ages, and muscle: bone ratio in relation to castrated at weaning. It also reduced the participation of fat in relation to castrated at birth. Total internal organs in percentage of empty body weight, differ between the two immunocastration protocols, with superiority when applied four doses (3.61 vs 3.39 kg). Steers surgically castrated at birth showed superiority in the sum of sum of internal, toilet and kidney fats, for immunocastrated with three doses, regardless of the way it was expressed. The immunological castration proved to be a viable alternative to surgical castration, not changing the main parameters of economic interest and meat quality attributes, and promotes animal welfare, eliminating the surgery. / O objetivo deste estudo foi avaliar a utilização da castração imunológica, como alternativa a castração cirúrgica na produção de bovinos de corte. Na pesquisa foram utilizados 48 bovinos machos, da raça Aberdeen Angus, monitorados a partir de idade inicial de seis meses e peso médio incial de 160 kg, por ocasião do desmame. Os animais foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: castrados cirurgicamente ao nascer; castrados cirurgicamente a desmama; imunocastrados com três doses da vacina Bopriva® e imunocastrados com quatro doses da vacina Bopriva®. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, com 12 repetições por tratamento. As médias foram classificadas pelo teste F e comparadas pelo teste de Tukey, com α=0,05. Houve interação entre data de amostragem e tratamento sobre os níveis séricos de testosterona no plasma sanguíneo, todavia na ocasião do abate todos os novilhos mantinham apenas níveis residuais de testosterona, caracterizando-se como castrados. Novilhos imunocastrados com três aplicações de Bopriva® apresentaram maior ganho de peso diário e ganho de peso total, na fase de terminação, que castrados cirurgicamente ao desmame. Entretanto em toda a fase de avaliação o desempenho foi similar entre os tratamentos (P>0,05). Novilhos castrados cirurgicamente ao nascimento apresentaram maior espessura de gordura subcutânea, ajustada para 100 kg de carcaça fria e menor quebra ao resfriamento que castrados imunologicamente com três doses (P<0,05). A imunocastração com três doses proporcionou incremento na participação de músculo em relação aos castrados cirurgicamente nas duas idades, e na relação músculo:osso em relação aos castrados ao desmame, mas reduziu a participação de gordura em relação aos castrados ao nascimento. O total de órgãos internos expressos em percentual do peso de corpo vazio diferiu entre os dois protocolos de imunocastração, com superioridade quando aplicou-se quatro doses (3,61 vs 3,39 kg). Novilhos castrados cirurgicamente ao nascimento apresentaram superioridade no somatório das gorduras internas, de descarte e renal, em relação a imunocastrados com três doses, independente da forma como foi expressa. A castração imunológica mostrou-se como uma alternativa viável em relação à castração cirúrgica, não alterando os principais parâmetros de interesse econômico e atributos de qualidade da carne, além de promover o bem-estar animal, eliminando a intervenção cirúrgica.

O neuropeptídeo/hormônio CRF integra respostas de estresse a nível endócrino, imunológico e comportamental dos mamíferos. A atividade neuronal CRFérgica inapropriada pode estar por trás do aparecimento de sintomas associados a transtornos neuropsiquiátricos. Os experimentos apresentados nesta tese descrevem a modulação farmacológica de ligantes de CRF que compõem o sistema CRFérgico em ratos Wistar machos submetidos ao protocolo de estresse por derrota social. A experiência de episódios intermitentes à derrota social prejudicou o comportamento de interação social. Microinjeções de antagonista da proteína ligante de CRF e antagonista (CRF6-33) e antagonista específico do receptor de CRF do tipo 1 (CP316311) no núcleo intersticial da estria terminal, separadamente, restauraram a aproximação social em animais estressados. Esses achados sugerem que o conteúdo de CRF no núcleo intersticial da estria terminal está envolvido na modulação de respostas relacionadas à ansiedade induzidas pelo estresse social. / The CRF neuropeptide/hormone integrates endocrine, immune and behavioral stress responses of mammals. Inappropriate CRFergic neuronal activity may underlie the appearance of symptoms associated with neuropsychiatric disorders. The experiments presented in this dissertation describe the pharmacological modulation of CRF ligands composing the CRFergic system in male Wistar rats submitted to the social defeat stress protocol. The experience of intermittent episodes of social defeat disrupted behaviors of social interaction. Microinjections of an antagonist of CRF binding protein (CRF6-33) and specific antagonist of CRF receptor type 1 (CP316311) in the bed nucleus of stria terminalis, separately, restored the social approach behavior in stressed animals. These findings suggest that the CRF content in the bed nucleus of stria terminalis is involved in the modulation of anxiety-related responses induced by social stress.

京都大学 / 0048 / 新制・論文博士 / 博士(医学) / 乙第13362号 / 論医博第2204号 / 新制||医||1045(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 稲垣 暢也, 教授 渡邉 大, 教授 影山 龍一郎 / 学位規則第4条第2項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

京都大学 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第23078号 / 医博第4705号 / 新制||医||1049(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 稲垣 暢也, 教授 万代 昌紀, 教授 小杉 眞司 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

Anxiety is an affective state defined by heightened arousal and unease in the absence of a clear and present fear-inducing stimulus. Chronic and inappropriate anxiety leads to anxiety disorders, the most common class of human mental disorder. Recent work suggests projections to the ventral tegmental area (VTA), are critical for anxiety behavior expression. However, the relationship between efferent VTA projections and anxiety is unclear. This thesis resolves anxiety circuitry connecting the dopaminergic (DAergic) VTA to the interpeduncular nucleus (IPN), coined the mesointerpeduncular circuit. I hypothesize the mesointerpeduncular circuit affects anxiety through the release of anxiogenic corticotropin releasing factor (CRF) during nicotine withdrawal and anxiolytic dopamine (DA) during drug naïve behavior. Electrophysiological and pharmacological data suggest CRF release from the DAergic VTA during nicotine withdrawal activates CRF receptor 1 (CRFR1) potentiating the glutamatergic activation of “Type 2” neurons and anxiety-like behavior in mice. However, in nicotine naïve conditions CRF production is negligible. Instead, in vivo DA release is anticorrelated with anxiety-like behaviors. Optogenetic stimulation and inhibition drives decreased and increased anxiety-like behaviors, respectively. Electrophysiological experiments reveal a complex interpeduncular microcircuit where D1-like DA receptor expressing “Type C” neurons in the caudal IPN (cIPN) regulate glutamatergic release in the ventral IPN (vIPN) through presynaptic GABA receptors. The result is propagation of the signal to excite “Type A” and inhibit “Type B” vIPN neurons. Finally, pharmacological activation or inhibition of interpeduncular D1-like DA receptors is sufficient to decrease and increase anxiety-like behaviors respectively. Thus, this circuit is important for modulating anxiety-like behavior.

No description available.

Ce travail a consisté à analyser, par des approches toxicocinétiques (TK) et mécanistiques, les effets oestrogéniques du Bisphenol A (BPA) sur un biomarqueur précoce et sensible : la sécrétion de l'hormone lutéinisante (LH) chez la brebis prépubère ovariectomisée. La plus faible concentration plasmatique en BPA induisant une inhibition de LH s'est avérée proche des concentrations maximales décrites chez l'Homme. Cette inhibition de LH pourrait impliquer une inhibition des systèmes neuronaux à kisspeptine. L'approche TK comparative d'espèces a montré que la clairance du BPA est toujours élevée, proche du débit sanguin hépatique. Pour une exposition à la dose journalière admissible, cette approche permet de prédire chez l'Homme des concentrations en BPA très inférieures à celles associées à une inhibition de LH dans notre modèle. / The goal of this thesis was to analyse through toxicokinetic (TK) and mechanistic approaches the estrogeno-mimetic effects of bisphenol A (BPA) on a precocious and sensitive biomarker: LH secretion in ovariectomized female lambs. The lowest plasma BPA concentrations associated to an inhibition of LH secretion appeared to be close to the highest one reported in human. LH suppression could be mediated by an inhibition of hypothalamic kisspeptin systems. The multispecies TK approach showed that BPA clearance is always high and equivalent to the liver blood flow. For an exposure scheme corresponding to the tolerable daily intake, this approach allows to predict human BPA concentration much lower than the one associated to LH inhibition in our highly sensitive lamb model.

O hipercortisolismo ACTH-dependente (HAD), também chamado de doença de Cushing, é uma das endocrinopatias mais comumente diagnosticadas na espécie canina. A sintomatologia clínica ocorre, secundariamente, aos efeitos gliconeogênicos, catabólicos, antiinflamatórios e imunossupressores dos glicocorticóides sobre vários sistemas orgânicos. Há uma marcante predisposição da doença na raça poodle e casos familiais têm sido diagnosticados sugerindo uma causa genética. As alterações moleculares que levam ao desenvolvimento do HAD em cães permanecem indefinidas. Dentre os genes implicados no desenvolvimento dos corticotrofos e na regulação do eixo corticotrófico, destacam-se o Tbx19 e o Crhr1, respectivamente. O Tbx19 é um fator de transcrição obrigatório para a transcrição do gene da proopiomelanocortina (POMC) e para a diferenciação terminal dos corticotrofos. Como está presente, exclusivamente, em corticotrofos normais e adenomatosos, foi proposto seu envolvimento na secreção excessiva de ACTH na doença de Cushing. A presença de CRHR1 nos corticotrofinomas na espécie humana e canina levantou a hipótese da sua participação na tumorigênese hipofisária, promovendo uma estimulação celular prolongada, mesmo na ausência de hormônios hipotalâmicos. Um aumento da expressão do CRHR1 foi demonstrado nos tumores corticotróficos, apesar da secreção autônoma de ACTH e dos níveis portais suprimidos de CRH em pacientes humanos e caninos com doença de Cushing. Os objetivos do presente trabalho foram pesquisar a presença de mutações germinativas nas regiões codificadoras dos genes Tbx19 e Crhr1 em cães com HAD. Para tanto, estudamos 50 cães da raça poodle com hipercortisolismo ACTH-dependente (33 fêmeas e 17 machos), com idade média de 8,71 anos e 50 cães controle da mesma raça (32 fêmeas e 18 machos) com idade superior a 6 anos (média de 9,38 anos) e sem endocrinopatias. O DNA genômico foi extraído e amplificado através da reação de polimerização em cadeia (PCR), utilizando-se oligonucleotídeos (primers) específicos para os genes Tbx19 e Crhr1. Foi identificada uma nova variante alélica tanto no Tbx19 como no Crhr1, ambas não descritas na literatura. No gene Tbx19, a variante p. S343G foi encontrada em dois cães não aparentados, mas também em dois controles normais, sugerindo tratar-se de um novo polimorfismo. Já a variante p. V97M do Crhr1 foi encontrada, em heterozigose em um animal com HAD, porém não foi observada em cem alelos normais. O códon 97 está localizado no domínio extracelular aminoterminal do gene Crhr1, de extrema importância para a ligação com alta afinidade ao ligante. O estudo molecular da estrutura quartenária da proteína mutada, seguido da avaliação da energia de ligação da superfície de contato entre o hormônio e o receptor revelou um rearranjo estrutural com alteração da superfície de contato entre o CRH e o seu receptor CRHR1, resultando em uma energia de ligação 17% superior à do receptor selvagem. Em conclusão, esse estudo não identificou alterações no gene Tbx19 associadas ao hipercortisolismo ACTH-dependente canino, mas por outro lado, identificou pela primeira vez, uma mutação ativadora no Crhr1, provavelmente responsável pelo hipercortisolismo ACTH-dependente em um cão da raça poodle. / The ACTH-dependent hypercortisolism (ADH), also called Cushing\'s disease, is one of the most commonly diagnosed endocrine diseases in dogs. The symptoms occur due to glucocorticoids excess leading to gluconeogenic, catabolic, anti-inflammatory and immunosuppressive effects in multiple organs and systems. There is a high incidence of Cushing\'s disease in Poodles and familial disease has been identified suggesting a genetic involvement. The molecular changes that lead to the development of ACTH-dependent hypercortisolism in dogs remain undefined. Among genes implicated in corticotroph development and in corticotropic axis regulation, we would like to point out Tbx19 and Crhr1, respectively. Tbx19 gene is a transcription factor required for transcription of the proopiomelanocortin gene and for terminal differentiation of the corticotroph. Inactivating mutations in that gene are associated with human isolated ACTH deficiency. Since Tbx19 is present exclusively in normal and adenomatous corticotroph cells, its involvement in the secretion of ACTH in Cushing\'s disease was proposed. The presence of CRHR1 in corticotrophinomas in humans and dogs raised the possibility of its involvement in pituitary tumorigenesis, promoting prolonged cell stimulation, even in the absence of hypothalamic hormones. An increased expression of the CRHR1 mRNA was demonstrated in human and canine ACTH-secreting pituitary adenomas, despite the autonomous ACTH secretion and the low portal levels of CRH. The aim of this study was to investigate Tbx19 and Crhr1 coding region mutations in Poodle dogs with ACTH-dependent hypercortisolism. We studied 50 Poodle dogs with ADH (33 females and 17 males) with a mean age of 8.71 years and 50 control dogs of the same breed (32 females and 18 males) older than 6 years (mean 9.38 years) and without endocrinopathies. Genomic DNA was extracted from peripheral blood, amplified by the polymerase chain reaction (PCR) using specific intronic primers and submitted to automatic sequence. We identified a new allelic variant in the Tbx19 and Crhr1 coding regions. The allelic variant p. S343G in the Tbx19 gene was found in two unrelated dogs, but also in two normal controls, suggesting that this is a new polymorphism. The Crhr1 allelic variant p. V97M was found in heterozygosity in one animal with ACTH-dependent hypercortisolism, but was not observed in one hundred normal alleles. The codon 97 is located in the extracellular amino terminal domain of the Crhr1 and is extremely important for high affinity ligand binding. The molecular analysis of the quaternary structure of normal and mutated proteins, followed by evaluation of the binding energy of the contact surface between the hormone and the receptor showed a structural rearrangement of the mutated protein by changing the contact surface between the CRH and its receptor CRHR1, resulting in a binding energy 17% higher than the wild type. In conclusion, this study did not identify Tbx19 mutations associated with canine ACTH-dependent hypercortisolism, but on the other hand, we first identified a Crhr1 gain-of-function mutation probably responsible for ACTH-dependent hypercortisolism in a Poodle dog of our cohort.

INTRODUÇÃO: O diagnóstico diferencial da síndrome de Cushing (SC) ACTH-dependente é um dos maiores desafios da endocrinologia, devido ao comportamento clínico e laboratorial semelhante de alguns tumores carcinóides com a doença de Cushing (DC). Assim, testes dinâmicos de secreção de ACTH e cortisol têm sido utilizados com o objetivo de identificar respostas que sejam preditivas e específicas no diagnóstico diferencial. O padrão dessas respostas é atribuído à superexpressão de receptores; entretanto, poucos estudos foram realizados para comprovar tal associação. O objetivo deste estudo foi verificar se a secreção de ACTH e cortisol em resposta aos testes do CRH humano (hCRH), da desmopressina, e do peptídeo liberador do GH (GHRP-6) é dependente da magnitude de expressão dos seus respectivos receptores (CRHR1, AVPR1B e GHSR-1a) em amostras de tumores de pacientes portadores da SC ACTH-dependente. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Entre 2002 e 2004, foram avaliados 22 pacientes (20 com DC e dois com Secreção Ectópica de ACTH [SEA], carcinóide de pulmão e timo), idade mediana de 32 anos (15-54 anos), sendo 18 do sexo feminino e quatro do sexo masculino, provenientes da Disciplina de Endocrinologia e Metabologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Os pacientes foram submetidos aos testes do hCRH (100 µg), desmopressina (10 µg) e GHRP-6 (1 µg/kg) com dosagens de ACTH e cortisol e também de GH no caso do GHRP-6. Vinte e um indivíduos controles, pareados por sexo e idade, foram submetidos ao teste do GHRP-6. Durante o ato operatório, fragmentos de tumor foram coletados para posterior extração do RNA total. O estudo da expressão foi feito por meio de PCR quantitativo em tempo real dos genes CRHR1, AVPR1B e GHSR-1a em relação ao GAPDH. Fragmentos de tecidos normais (hipófise, pulmão e timo) procedentes de necropsias foram utilizados como controles. RESULTADOS: Observamos maior expressão de GHSR-1a nos pacientes responsivos ao GHRP-6, tanto naqueles com DC quanto no paciente com carcinóide pulmonar. Não houve maior expressão dos receptores CRHR1 e AVPR1B nos pacientes com DC responsivos aos respectivos testes, observando-se, no entanto, uma forte associação entre respostas in vivo e a expressão desses receptores nos pacientes com SEA. As concentrações de ACTH e cortisol induzidas pela administração de GHRP-6 foram mais elevadas nos pacientes com DC quando comparados aos controles, havendo, no entanto, superposição entre as respostas. Observamos também elevação dos níveis séricos de GH nos indivíduos controles e, em menor intensidade, nos pacientes com DC. CONCLUSÕES: Houve maior expressão do receptor GHSR-1a em pacientes com SC ACTH-dependente responsivos ao GHRP-6, estabelecendo-se uma relação direta entre a expressão do receptor e a resposta in vivo ao secretagogo, tanto em pacientes com DC quanto nos portadores de SEA. Uma associação entre a expressão dos receptores CRHR1 e AVPR1B com a resposta in vivo aos respectivos secretagogos foi observada nos pacientes com SEA e não nos pacientes com DC. Tendo em vista a resposta ao GHRP-6 em paciente com SEA, limita-se o uso desse peptídeo no diagnóstico diferencial da SC ACTH-dependente. / INTRODUCTION: The differential diagnosis of ACTH-dependent Cushing\'s syndrome (CS) is one of the major challenges in endocrinology, especially in view of the similar clinical and laboratorial behavior between some carcinoid tumors and Cushing\'s disease (CD). Hence, dynamic tests of ACTH and cortisol release have been carried out with the aim to identify predictive and specific responses for this differential diagnosis. The pattern of the responses has been attributed to receptors overexpression, yet few studies have been undertaken to confirm such association. The aim of the present study was to verify whether ACTH and cortisol release in response to human CRH (hCRH), desmopressin, and GH releasing peptide (GHRP-6) depends on the magnitude of expression of their respective receptors (CRHR1, AVPR1B e GHSR-1a) in samples of tumors from patients with ACTH-dependent CS. PATIENTS AND METHODS: Twenty two patients (20 with CD and 2 with Ectopic ACTH Syndrome [EAS], lung and thymus carcinoid tumors) from the Division of Endocrinology and Metabolism of University of Sao Paulo School of Medicine, median age of 32 years (15-54 years), being 18 females and 4 males, were evaluated between 2002 and 2004. The patients were submitted to dynamic tests with hCRH (100 µg), desmopressin (10 µg) and GHRP-6 (1 µg/kg), with measurement of ACTH and cortisol levels, and also of GH in the case of GHRP-6 stimulation. Twenty one age and sex-matched controls were submitted to the GHRP-6 test. During surgery, tumor fragments were collected and subsequently processed for total mRNA extraction. Gene expression of CRHR1, AVPR1B and GHSR-1a relative to GAPDH was quantitated by real-time qPCR. Tissue samples of normal pituitary, lung and thymus from necropsy were used as controls. RESULTS: Greater expression of GHSR-1a was observed in patients responsive to the GHRP-6 test, both in those with CD and in the one with pulmonary carcinoid tumor. No enhanced expression of receptors CRHR1 and AVPR1B was found in CD patients responsive to the respective dynamic tests, yet there was a strong association between the in vivo responses and the expression of those receptors in the two patients with EAS. GHRP-6 -induced ACTH and cortisol release was more marked in patients with CD as compared with control individuals, but there was overlap of the responses. GH stimulation was observed in control individuals and, to a lesser extent, in patients with CD. CONCLUSIONS: There was greater expression of GHSR-1a in patients with ACTH-dependent CS who responded to GHRP-6, establishing a direct association between receptor gene expression and the in vivo response to the secretagogue in both CD patients and those with EAS. An association between expression of CRHR1 and AVPR1B and the in vivo response to the respective secretagogues was found in patients with EAS but not in those with CD. In view of the response to GHRP-6 in a patient with EAS, we considered the use of this peptide in the differential diagnosis of ACTH-dependent CS of limited value.