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Estudo do perfil proteico nas membranas de espermatozóides congelados de caprinos

Santos, Diônes Oliveira [UNESP] January 2005 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T19:05:29Z : No. of bitstreams: 1 santos_do_dr_botfmvz.pdf: 1641256 bytes, checksum: 66b081e448579c7f03456bb3c349c89a (MD5) / Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) / O presente estudo identificou o perfil protéico da membrana plasmática dos espermatozóides, congelados, de caprinos, através de eletroforese bidimensional (2-D). O objetivo foi encontrar proteínas que possam ser utilizadas como marcadores de congelabilidade na seleção precoce de doadores de sêmen. Para isso, foram utilizados seis machos caprinos, da raça Anglo-nubiana, de propriedade da Embrapa Caprinos, mantidos em regime de estabulação. O sêmen foi colhido, em vagina artificial, durante três épocas de inseminação artificial (EIA I - época seca; II - época chuvosa-seca; III - época seca-chuvosa), nos anos de 2002, 2003 e 2004, e avaliado a fresco, quanto ao volume (mL), a concentração (x 109 spz/mL), motilidade progressiva individual (MIP-f, %), o vigor (0 a 5) e a morfologia (% de defeitos maiores, DMa-f; menores, Dme-f e totais, DT-f). Logo após, foi submetido a congelação, em palhetas de 0,5 mL, numa concentração de 150 x 106 espermatozóides por palheta, de acordo com o protocolo do Laboratório de Andrologia, Tecnologia de Sêmen e Inseminação Artificial da Embrapa Caprinos. Em seguida foi armazenado em nitrogênio líquido até seu uso na inseminação artificial e analise de proteínas. Para avaliar a fertilidade do sêmen foram inseminadas 321 cabras, sem raça definida, manejadas em pastagem nativa, com escore corporal entre 2,5 e 4,0, distribuídas por reprodutor e EIA’s. As cabras foram inseminadas após estimulação do estro, através do “Efeito Macho”, a partir do oitavo dia, pela via transcervical, entre 10 e 12 horas após a identificação do estro, quando o sêmen foi então descongelado. Os resultados das características espermáticas foram analisados pela analise de variância e as proteínas qualitativamente, registrando-se o peso molecular... . / The study identified the goat frozen sperm plasmatic membrane proteins profile, using bidimensional electrophoresis (2-D). The aim was to detect those proteins that eventually could be used as markers to select the males by fertility. To evaluate the fertility rates six Anglo-nubian goat male belonging to Embrapa Caprinos kept in stable was used. The sperm was collected by artificial vagina during three insemination seasons (EIA; I, dry season; II, rains-dry season; III, dry-rains season) and the years 2002, 2003 and 2004. The ejaculated sperm was evaluated by volume (mL), concentration (x109 spz/mL), individual progressive motility (MIP-f, %) and vigor-f (0 to 5), and morphology (% of major, DMa-f; minor Dme-f and total, DT-f, abnormalities). There after the sperm was frozen according to Laboratório de Andrologia, Tecnologia de Sêmen e Inseminação Artificial da Embrapa Caprinos, in 0.5 mL straw, with a concentration of 150 x 106 spz/straw and stored in liquid nitrogen. These frozen sperm was maintained until insemination and protein analysis. To evaluate the fertility rate, 321 crossbreed goats, raised on native pasture, with body score between 2.5 and 4.0, were inseminated. Males and EIA’s divided the goats in groups. The goats were inseminates after estrus stimulation (male effect) on eighth day after 10 to 12 hours of estrus identification. At insemination the sperm was towed and its characteristics evaluated. The sperm parameters were analyzed by variance analysis and the proteins qualified by molecular weight (kDa) and isoelectric point (pI). The ejaculated sperm showed values of MIP-f ranging from 68.4 to 86.3%, vigor-f 3.3 to 3.8 and DT-f 10.6 to 19.5%; the frozen values of MIP-d were 21.2 to 27.9%, vigor-d 1,7 to 2.0 and DT-d 12.6 to 17.6%. It was observed a significant variation (P<0.05) of MIP-f between the males and even EIA’s... (Complete abstract, click electronic address below).
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Características reprodutivas de garanhões mantidos sob luz natural ou contínua, em ambiente tropical

Leme, Denise Pereira [UNESP] January 2003 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:46:34Z : No. of bitstreams: 1 leme_dp_dr_botfmvz.pdf: 218661 bytes, checksum: 5fd235801c901e97ff96506211ce3f28 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A influência da estação nas características reprodutivas de garanhões tem sido bem caracterizada nas regiões temperadas; entretanto, pouco se sabe sobre a sazonalidade de garanhões nos trópicos. Este estudo avaliou os efeitos da luz natural e da luz artificial contínua sobre as características reprodutivas de garanhões que vivem na região de Botucatu, SP, Brasil, nos períodos de maior e menor luminosidade do ano. Oito garanhões de diferentes raças e idades foram mantidos semi-estabulados por 12 meses. Um grupo (n=4) permaneceu sob luz natural e o outro (n=4) recebeu luz contínua nas baias durante à noite. As seguintes características reprodutivas foram avaliadas nos períodos de transição primavera-verão e outono-inverno: volume testicular total (VTT), sêmen, libido, concentrações séricas de FSH, LH e testosterona e citologia testicular. Neste estudo, os garanhões sob luz natural apresentaram maior VTT (p£0,05), melhor qualidade do sêmen (p£0,05), maior número de espermatozóides ejaculados (p£0,05) e menor porcentagem de células de Sertoli (p£0,05) em relação aos garanhões sob luz contínua, porém, não diferiram significantemente quanto às concentrações séricas de FSH, LH e testosterona. Ambos os grupos apresentaram uma diminuição do VTT, queda na libido, diminuição das concentrações de LH e aumento significativo da porcentagem de células de Sertoli (p£0,05) no período outono-inverno. Os garanhões sob luz natural não tiveram queda no número de espermatozóides ejaculados neste mesmo período, enquanto os garanhões sob luz contínua tiveram uma evidente diminuiçào do número de espermatozóides ejaculados. Portanto, a avaliação do sêmen dos garanhões sob luz natural não foi suficiente para mostrar sazonalidade reprodutiva nestes animais, ao contrário das demais características que mostraram diferenças sazonais. Isto ocorreu... . / The influence of season on reproductive characteristics of stallions has been well characterized in temperate zones. However, there are very few studies about seasonality of stallions in tropical zones. This study assessed the effects of natural and prolonged long photoperiod in the reproductive characteristics of stallions that live in Botucatu, Brazil during the periods of the year with the longest and shortest day lengths. Eight stallions of different age and breeds were kept in stalls just at night for a period of 12 months. These stallions were divided into two groups: natural light (n=4) and artificial light all night long (n=4). The following characteristics were assessed during the transition periods between spring-summer and autumn-winter: total testicular volume (TTV), semen, libido, serum concentrations of FSH, LH and testosterone, and testicular cytology. Although, the stallions under natural light had increased TTV (p£0,05), better semen quality (p£0,05), higher number of sperm in the ejaculates (p£0,05) and lower percentage of Sertoli cells (p£0,05) compared with these characteristics in the stallion under continued photoperiod, there were no significant differences in serum hormone concentrations between the two groups. The two groups had similar aspects in relation to the following results: decreased TTV, along with poor libido, lower serum LH levels and a significantly higher percentage of Sertoli cells (p£0,05) during autumn-winter. The stallions under natural light had no changes in the number of sperm in the ejaculates during the same period, but the stallions under continued photoperiod showed an evident decrease of the number of sperm in the ejaculates during autumn-winter. Thus, semen evaluation was not enough to show the seasonality in stallions under natural light as it was shown by the other results. This fact could be explained by the lack of efficiency in... (Complete abstract, click electronic address below).
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Regulação da expressão dos receptores de fatores de crescimento fibroblásticos 3c e 4 (FGFR-3c e FGFR-4) em folículos antrais bovinos

Teixeira, Andrey Borges [UNESP] January 2004 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:06:45Z : No. of bitstreams: 1 teixeira_ab_dr_botfmvz.pdf: 451690 bytes, checksum: 43a263398a04004fc36761e1858abd63 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudos recentes indicam o envolvimento do FGF-8 no controle do desenvolvimento folicular. O FGF-8 ativa preferencialmente o FGFR-3c e o FGFR-4, cuja expressão em folículos antrais ainda não foi determinada. No presente estudo, avaliou-se a expressão do FGFR-3c e -4 em células da teca e da granulosa de folículos antrais bovinos. e testou-se a hipótese de que a expressão destes genes é regulada durante o desenvolvimento fo!icular antral bovino. Ovários bovinos foram obtidos em matadouro local, folículos maiores que 5mm foram dissecados e medidos, células da teca e da granulosa foram separadas e o RNA total extraído. As concentrações de estradiol e de progesterona do fluido folicular foram determinadas por radioimunoensaio. Folículos com progesterona acima de 100ng/mL foram considerados atrésicos e excluídos da análise. Os folícu!.os restantes foram agrupados de acordo com a concentração de estradiol como se segue: (a) <5; (b) 5-20; (c) >20100; e (d) >100ng/mL. Além disso, os folículos foram divididos em três grupos de acordo com o tamanho: (a) 5-7; (b) 8-10 e (c) >10mm. Folículos inteiros entre 2 e 4mm de diâmetro foram incluídos na análise da expressão do FGFR-4. A expressão do FGFR-3c e FGFR-4 foi examinada por RT-PCR semiquantitativo com iniciadores espécie-específicos. O RT-PCR semiquantitativo foi validado pela escolha de números de ciclos de PCR e quantidade de RNA dentro da fase linear da curva de amplificação. A intensidade das bandas foi analisada por densitometria computadorizada. Em células da granulosa, houve correlação positiva entre a expressão do FGFR-3c e a concentração de estradiol no fluido folicular, em sintonia com níveis mais altos de RNAm em grupos com maiores concentrações de estradiol, e também aumentou com o diâmetro folicular. Em células da teca, a expressão do FGFR-3c também foi detectada,... / Recent studies indicate the involvement of FGF-8 in the control of follicular development. FGF-8 preferentially activates FGFR-3c and FGFR-4, although the expression of these receptors has not been investigated in bovine antral follicles yet. In the present work, FGFR-3c and -4 gene expression was assessed in theca and granulosa cells from bovine antral follicles and the hypothesis that FGFR-3c and -4 gene expression is regulated during antral follicle development in cattle was tested. Bovine ovaries were obtained at a local abattoir, follicles greater than 5mm in diameter were dissected and measured, granulosa and theca cells were separated, and total RNA extracted. Estradiol and progesterone concentrations were measured in the follicular fluid by RIA. Follicles with progesterone levels above 100ng/mL were considered atretic and excluded from the analysis. Remaining follicles were grouped according to estradiol concentration as follows: (a) <5; (b) 5-20; (c) >20-100; and (d) >100ng/mL. In addition, follicles were divided into three groups according to size: (a) 57; (b) 8-10 and (c) >10mm. Whole follicles at 2-4mm in diameter were included in the analysis of FGFR-4 gene expression. FGFR-3c and FGFR-4 gene expression was examined by semi-quantitative RT-PCR using bovine specific primers. Semiquantitative RT-PCR was validated by choosing number of PCR cycles and amount of RNA within the linear range of the amplification curve. Band intensities were analyzed by computerized densitometry. In granulosa cells, FGFR-3c expression was positively correlated with estradiol concentration in the follicular fluid in agreement with higher mRNA levels in groups with higher estradiol concentrations, and also increased with follicle size. In theca cells, FGFR-3c gene expression was also detected but did not change with follicle size or estradiol concentration. For FGFR-4, gene expression was restrict...(Complete abstract click eletronic access below)
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Contribuição para a clonagem em eqüinos por meio de tranferência nuclear

Fernandes, Cláudia Barbosa [UNESP] 19 February 2008 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-19Bitstream added on 2014-06-13T19:45:14Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_cb_dr_botfmvz.pdf: 1180575 bytes, checksum: 4935fb442a1e2588265d053e96437a3a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Nos eqüideos o primeiro relato de sucesso na clonagem foi em Idaho – EUA, em maio de 2003 com o nascimento de uma mula clonada a partir de células fetais, e desde então esta biotecnologia contabiliza somente 21 eqüideos clonados no mundo. A clonagem em eqüídeos é extremamente difícil, pois os ovócitos não maturam bem in vitro, o que diminui significativamente a disponibilidade de citoplastos receptores de qualidade. Além disso, a dificuldades na obtenção de material em matadouros comerciais, o alto custo de manutenção dos animais em fazendas, bem como as baixas taxas de produção de blastocistos por transferência nuclear (3 a 10%) fazem com que poucos laboratórios se dediquem aos estudos dos processos envolvidos na produção in vitro de embriões de eqüídeos. Sendo assim, este projeto teve como objetivo geral criar no Laboratório de Produção in vitro da FMVZ – UNESP - Botucatu, condições para a produção no Brasil de eqüídeos clonados. No experimento I não foram observadas diferenças significativas (p = 0,661) entre a privação de soro fetal bovino e a confluência na integridade de membrana de fibroblastos eqüinos em cultivo pós-descongelação (>87%). Sob as mesmas condições de cultivo, foram avaliadas as taxas de sincronização do ciclo celular de fibroblastos eqüinos em G0/G1 na tentativa de estabelecer um protocolo de utilização destas células como doadoras de núcleo. As mais altas taxas de células sincronizadas em G0/G1 (> 97%) foram obtidas às 72, 96 e 168 horas após o início da privação de soro fetal bovino a 0,5%. No experimento II a incubação de ovócitos eqüinos em 66g/ml de roscovitine por 24 horas, pré e pós-maturação in vitro, foi eficiente na inibição da meiose, sincronizando o início do processo, permitindo uma melhor programação... / In the equine species, the first reported success of a cloned animal took place in Idaho, USA, in May 2003 when a cloned mule was born. In order to produce this clone fetal cells were used. Since then only 21 cloned horses births were reported. Equine cloning is extremely complicated due to difficulties in oocyte in vitro maturation, wich significantly reduce the availability of good quality oocytes to receive the genetic material of the donor cell. Moreover, the low number of commercial slaughterhouses, the high cost of maintenance of animals in the farms and the low efficiency of the method (3 to 10% blastocyst development) leads to the fact that only a few laboratories around the word are dedicated to study the process involved in horse embryos in vitro production. The main objective of the present experiment was to create, at the In Vitro Fertilization Laboratory from FMVZ – UNESP - Brazil, conditions to produce a equine clone. With this aim, five experiments were performed. In Experiment I no statistic differences (p = 0.661) were observed with the utilization of serum starvation or culture until confluence on viability of equine fibroblasts cultured after thawing (>87%). With the attempt of establishing a protocol to use these cells as nuclear donors, the cell cycle of equine fibroblasts were studied under the same conditions. The higher rates of cell cycle synchronization in G0/G1 (> 97%) were obtained 72, 96 and 168 hours after the beginning of serum starvation (0.5% fetal calf serum). In the Experiment II, the incubation of equine oocytes with 66g/ml of roscovitine during 24 hours, pre- and post- in vitro maturation, was efficient in inhibit meiosis, allowing a better organization of the nuclear transfer procedure. The meiosis blockage showed to be fully reversible after the removal of the roscovitine when nuclear maturation rates were compared with non-exposed oocytes (p = 0,714 for expanded COC and p = 0,275 for compact COC).
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Produção in vitro de embriões derivados de oócitos obtidos em diferentes fases da onda folicular de vacas Nelore(Bos taurus indicus)

Melo, Danilas Salinet de [UNESP] 17 December 2007 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-17Bitstream added on 2014-06-13T20:06:46Z : No. of bitstreams: 1 melo_ds_dr_botfmvz.pdf: 214896 bytes, checksum: fd202efac4cfc861e2f0e8d9a33f3ced (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo foi avaliar, em vacas Nelore, a influência da fase da onda folicular na qualidade e quantidade dos oócitos recuperados, através da OPU (ovum pick-up), assim como a produção de blastocistos. Todos os animais (n=10) receberam em dia aleatório do ciclo estral um implante auricular de progestágeno (Crestar) e uma aplicação de 2 mg de Benzoato de Estradiol (Estrogin) com o objetivo de sincronizar a onda folicular. Após sete dias o implante foi retirado e foi aplicada uma dose de 2ml de um análogo da PGF2 (Preloban®). Após de 24 hs as doadoras foram submetidas à aspiração do folículo dominante (AFD) sendo então este momento considerado dia 0. Após a AFD, as doadoras foram submetidos a OPU nos dias 3, 5, 7, e 9 (Grupo D3, D5, D7 e D9) da nova onda folicular. Foram realizadas quatro fases (Fase 1, 2, 3 e 4) onde os animais foram trocados de grupo a cada fase, de forma que cada animal foi submetido aos quatro tratamentos. A cada fase o protocolo era iniciado com dois dias de intervalo entre um grupo e outro, iniciando pelo grupo D9 e na seqüência os grupos D7, D5, D3, desta forma todas as doadoras foram aspiradas no mesmo dia, porém com a onda folicular em dias diferentes. O objetivo deste delineamento foi para que as aspirações fossem efetuadas no mesmo dia, de forma que os oócitos recuperados fossem maturados, fertilizados e cultivados in vitro numa mesma sessão de PIV. Duas hipóteses foram testadas: 1- O número de oócitos viáveis recuperados seria maior na fase inicial da onda folicular (dia 3) ou logo após a divergência folicular (dia 5) do que obtidos em períodos mais tardios da fase de dominância (dias 7 e 9). 2- Os oócitos aspirados no início da onda folicular (dia 3 ou 5) teriam melhor competência e produziriam maior número de blastocistos do que oócitos obtidos no final da onda (dias 7 e 9), pois estes estariam num grau de atresia avançado. Não houve diferença no número... / The objective of this experiment was to evaluate in Nelore cows the influence of the moment of the follicular wave in the quality and amount of the recovered oocytes, through the OPU, (ovum pick-up), as well as the production of blastocysts. All the animals (n=10) received in random day of the estrous cycle an auricular progestogen implant (Crestar) and was administered of 2mg of estradiol benzoate (Estrogin) with the objective of synchronizing the follicular wave. After seven days the implant was removed and a dose of 2ml of an analogous of PGF2 was administrated (Preloban®). After 24 hours the donors were submitted later of the dominant follicle aspiration (DFA) being then this moment considered day 0. After DFA the donors were submitted to OPU after on the 3, 5, 7, and 9 days (Groups D3, D5, D7 and D9) of the new follicular wave. Four sessions were accomplished (sessions 1, 2, 3 and 4) where the animals were changed from group to each phase, so that each animal it was submitted to the four treatments. To each phase the protocol was begun with two days of interval among a group and other, beginning for the group D9 and in the sequence the groups D7, D5, D3, this way all of the donors were aspirated in the same day, however with the follicular wave in different days. The objective of this outline was so that the aspirations were made in the same day, so that the recovered oocytes they went maturated, fertilized and development in vitro in a same session of IVP. Two hypotheses were tested: 1 - the number of recovered viable oocytes would be larger numerical in the initial phase of the wave follicular (day 3) or soon after the follicular divergence (day 5) of those obtained in later periods of the dominancy phase (days 7 and 9). 2 - The oocytes aspirated in the beginning of the follicular wave (day 3 or 5) they would be better competent and they would produce larger number of blastocysts than oocytes obtained in the end of the wave ...
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Função luteal e luteólise em cadelas: aspectos morfo-funcionais

Luz, Marcelo Rezende [UNESP] January 2004 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:26:16Z : No. of bitstreams: 1 luz_mr_dr_botfmvz.pdf: 553785 bytes, checksum: e550b3849c2b7afd2cf5f088ee9c930a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os mecanismos luteotróficos e luteolíticos que controlam a função luteal em cadelas têm sido investigados. Este estudo avaliou as concentrações plasmáticas de PGFM e progesterona ao longo da gestação e do diestro, e do estradiol a partir do dia 40 da gestação ou diestro; a produção in vitro de PGF2α através de cultivos de explantes de endométrio, corpo lúteo e placenta, com ou sem estímulo por PDBu; a ocorrência de apoptose nas células luteais; e o envolvimento da enzima caspase-3 na luteólise em cadelas. Foram utilizadas 17 cadelas sem-raça-definida, divididas em dois grupos: diestro e gestação. Foi verificado que a queda das concentrações plasmáticas de progesterona em cadelas é um fenômeno lento e gradativo, que ocorreu a partir do terço inicial da gestação ou do diestro. As concentrações basais de progesterona foram atingidas nos dias 64 e 66 da gestação e diestro, respectivamente. Altas concentrações de PGFM e estradiol foram detectadas na segunda metade do diestro e da gestação. Ocorreu aumento progressivo de PGFM na segunda metade da gestação, e não no diestro, que culminou com um pico préparto. Os cultivos in vitro evidenciaram que o endométrio possui grande capacidade de produção de PGF2α, estimulado ou não por PDBu, superior aos explantes de corpo lúteo e de placenta, e mais pronunciado nos explantes de endométrio de cadelas gestantes comparados aos de cadelas em diestro. As análises histológicas por HE e CEC evidenciaram raras células apoptóticas no corpo lúteo das cadelas gestantes e em diestro, com células luteais íntegras detectadas nos corpos lúteos de cadelas no final da gestação, pós-parto imediato e aos 65 dias do diestro. Material sugestivo de corpus albicans foi evidenciado nos ovários oriundos das cadelas aos 75 e 85 dias do diestro. As concentrações de UAF/μg/ptn de caspase-3 não diferiram entre as... . / Luteotrophic and luteolytic mechanisms that control the luteal function in bitches are being investigated. This study evaluated the PGFM and progesterone plasma concentrations throughout pregnancy and diestrus, and plasma estradiol concentrations from day 40 of pregnancy or diestrus on; the in vitro production of PGF2α from explants of endometrium, corpus luteum and placenta cultures, with or without PDBu stimulation; the occurrence of apoptosis in the luteal cells; and the involvement of the enzyme caspase-3 in the luteolysis in bitches. Seventeen crossbred bitches, divided into 2 groups were used: diestrus and pregnancy. It was observed that the decrease of the plasma progesterone concentrations in bitches is a slow and gradual process, wich happened since the initial third of pregnancy or diestrus. The basal values of progesterone occurred at days 64 and 66 of pregnancy and diestrus, respectively. High plasma concentrations of PGFM and estradiol were detected at the second half of pregnancy, and not of diestrus, and culminate with a pre-partum peak. The in vitro cultures showed that endometrium has a big capacity of PGF2α production, stimulated or not by PDBu, and superior to corpus luteum or placenta explants, and also much more pronounced in the endometrium explants from pregnant compared to diestrus bitches. The histological analysis by HE and CEC showed rare apoptotic cells in the corpus luteum from pregnant and diestrus bitches, with intact luteal cells detected in corpora lutea from bitches in final pregnancy, immediate post-partum period and at 65 days of diestrus. Material suggestive of corpus albicans was evidenced in the ovaries of bitches on days 75 and 85 of diestrus. The concentrations of UAF/μg/ptn of caspase-3 did not differ between pregnant or diestrus bitches, and was also detected in the material suggestive of corpus albicans.
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Efeito da somatotrofina recombinante bovina (rbST) sobre a resposta superovulatória e recuperação embrionária em éguas tratadas com extrato de pituitária equina (EPE)

Gomes, Gustavo Mendes [UNESP] 28 August 2007 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-28Bitstream added on 2014-06-13T18:46:34Z : No. of bitstreams: 1 gomes_gm_dr_botfmvz.pdf: 347168 bytes, checksum: 1ed9988f6cb9f44d9af31f5249b88442 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A somatotrofina recombinante bovina (rbST) tem sido utilizado com sucesso em bovinos para melhorar resposta superovulatória e produção de embriões. Em função do exposto o objetivo deste estudo, foi o de avaliar o efeito da rbST na resposta superovulatória e recuperação embrionária de éguas superovuladas com EPE (12,5 mg duas vezes ao dia). Também foi estudado seu efeito na dinâmica ovariana de éguas superovuladas bem como determinando sua ação sistêmica através da avaliação dos níveis plasmáticos de insulina. Não foi observado efeito da associação do rbST ao protocolo de superovulação em éguas. Tendo sido a resposta superovulatória (2,93 e 2,86 ovulações, respectivamente para EPE e EPE+rbST), percentual de recuperação de embriões (46,3% x 60%, respectivamente para EPE e EPE+rbST) e número de embriões por égua tratada (1,36 e 1,71 embriões, respectivamente para EPE e EPE + rbST) similares entre os grupos (p>0.05). Da mesma forma, não foi observado efeito na dinâmica ovariana. Por outro lado a rbST se mostrou biologicamente ativo em éguas, pois aumentou significativamente os níveis plasmáticos de insulina 24 horas tendo o pico 48 horas após aplicação. Baseado nos resultados do presente experimento pode-se concluir que o rbST a despeito de se mostrar biologicamente ativo quando aplicado em éguas, não interferiu na resposta superovulatória e produção de embriões de éguas tratadas com EPE. / The aim of superovulation is to increase the number of embryos from genetically superior animals in embryo transfer program. Many studies showed that mares fail to respond to conventional superovulating drugs used in other species like pFSH and PMSG. The only drugs that are effective in induce superovulation in mares are EPE (equine pituitary extract) and Equine FSH. Recent studies have reported an increase in the number of ovulations using a higher frequency of administration of EPE, but the embryo recovery rates are still low. Growth hormone has been used to improve the superovulatory response in cows. The main objective of this study was to evaluate the effect of bovine growth hormone (ST) in superovulatory response and embryo production of superovulated mares. The utilization of bST did not show any effect on ovarian response and embryo production when used in mares superovulated with EPE. The superovulation answer (2,93 e 2,86 ovulations, respectively for EPE and EPE+bST), embryo recovery rates per ovulation (51% e 66%, respectively for EPE and EPE+bST) and the number of embryos produced per mare (1,36 e 1,71 embryos, respectively for EPE and EPE+bST), were similar between the experimental groups (p>0.05). Also no effects on follicular dynamic was observed. However, bST showed to be biologic active for a long time, when injected in mares, inducing an increase on sistemic insulin levels. Based on the results of the present experiment we can cocluded that in spite of biologic active in mares bST did not interfere on superovulatory answer and embryo production of superovulated mares.
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Expressão dos transcritos do receptor de LH em células da granulosa de fêmeas nelore submetidas ou não à superestimulação ovariana

Fernandes, Paulo [UNESP] 07 August 2008 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-07Bitstream added on 2014-06-13T21:07:31Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_p_dr_botfmvz.pdf: 525710 bytes, checksum: d101803790fb9aa88818f17ca9c56bde (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Objetivou-se com o presente trabalho avaliar a expressão das isoformas (M1 a M4) do receptor de LH (LHR) em células da granulosa de folículos 8,5 mm de diâmetro obtidos de novilhas cíclicas (grupo NC) ou de vacas superestimuladas (grupo VSE), na raça Nelore. As novilhas cíclicas (n=4) foram submetidas à sincronização da ovulação e em seguida monitoradas por ultra-sonografia transretal, até serem abatidas no terceiro ou quinto dia após a ovulação. As vacas do grupo VSE (n=5) foram submetidas à superestimulação ovariana (protocolo P-36 modificado) e ovariectomizadas 36 horas após a remoção da fonte de progesterona. A expressão das isoformas do LHR (M1 a M4) foram calculadas como valores relativos à expressão do GAPDH. Verificou-se menor expressão do gene do LHR no grupo VSE quando comparado ao grupo NC (6,5±0,35 e 28,96±0,4, respectivamente; Bonferroni, p<0,02). Quando os dados dos grupos NC e VSE foram analisados conjuntamente, obteve-se maior expressão das isoformas M1 (27,22±0,19) e M3 (28,37±0,22) quando comparadas com as isoformas M2 (6,46± 0,38) e M4 (5,05±0,43, Bonferroni, p<0,02). No grupo NC, a expressão do LHR foi mais intensa nos folículos coletados no quinto dia (12 mm de diâmetro, 38,1±0,03) quando comparados aos obtidos no terceiro dia (8,75 mm, 22,6±0,03, Bonferroni, p<0,01) após a ovulação. Estes resultados são indicativos de que o tratamento superestimulatório com Folltropin® em vacas Nelore diminuiu a expressão do LHR nas células da granulosa, aumentou as concentrações intrafoliculares de progesterona, reduziu a razão E2/P4, e que a expressão das isoformas M1 e M3 foi mais abundante do que as M2 e M4 tanto nas novilhas cíclicas quanto nas vacas superestimuladas. / The aim of the present work was to evaluate in the Nelore breed the gene expression of LH receptor isoforms (M1 to M4) in granulosa cells of follicles 8.5 mm diameter from cycling heifers (CH) and superestimulated cows (SC). The cycling heifers (n=4) were submitted to synchronization of ovulation and afterwards evaluated by transrectal ultrasonography until the third and fifth days after ovulation, when the animals were slaughtered to obtain the ovaries and follicles. The SC group (n=5) were submitted to ovarian superstimulation (modified Protocol P-36) and ovariectomized 36 hours after removal of progesterone source. The results of the isoforms expression (M1 to M4) were calculated as GAPDH expression. There was a lower expression of LH receptor gene in SC group as compared to CH group (6.50±0.35 and 28.96±0.40, respectively, Bonferroni, p<0.02). When data of both groups were analyzed together, there was a higher expression of M1 (27.22±0.19) and M3 (28.37±0.22) isoforms when compared to M2 (6.46± 0.38) and M4 (5.05±0.43, Bonferroni, p<0.02). In CH group, LHR expression was more intense in follicles obtained in the fifth day (12 mm diameter, 38.1±0.03) when compared to those obtained on third day (8.75 mm, 22.6±0.03, Bonferroni, p<0.01) after ovulation. The results indicated that superstimulatory treatment with FSH in Nelore cows decreased LH receptor expression in granulosa cells, it increased the concentrations progesterone intrafolliculares, it reduced the reason E2/P4, and that M1 and M3 isoforms expression were more abundant than M2 and M4 in both cycling and superstimulated animals.
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Avaliação da biometria testicular, concentração plasmática de hormônios e minerais em bovinos Nelore variedade Mocha dos 12 aos 24 meses de idade

Lezier, Dorça Helena [UNESP] January 2003 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:46:36Z : No. of bitstreams: 1 lezier_dh_dr_botfmvz.pdf: 1066792 bytes, checksum: 3af5f3b732eb7f5741a6be203c09c6a6 (MD5) / No presente trabalho foram utilizados 55 bovinos Nelore variedade Mocha, criados sob condições extensivas, visando avaliar a biometria testicular, as concentrações plasmáticas de hormônio luteinizante, testosterona, triiodotironina, tiroxina e os teores de cobre e zinco, e o efeito da época do ano (seca e chuva) sobre estas características, dos 12 aos 24 meses de idade. Para as medidas testiculares foi utilizada fita métrica e a colheita de sangue foi realizada por venopunção, em tubos de vacutainer heparinizados. Após a centrifugação, o plasma foi armazenado a –20ºC para posterior análise hormonal e mineral. Os valores médios do perímetro escrotal, altura, largura dos testículos direito e esquerdo e o peso dos animais foram de: 24,91 ± 2,81 cm, 8,74 ± 1,04 cm; 4,68 ± 0,61 cm; 8,75 ± 1,10 cm, 4,66 ± 0,62 cm e 304,35 ± 1,30 Kg, respectivamente. As concentrações médias plasmáticas dos hormônios luteinizante, testosterona, triiodotironina e tiroxina foram de√0,25 ± 0,08 ng/dL ou 0,07 ± 0,08 ng/mL, 168,04 ± 95,70 ng/mL, 1,31 ± 0,12 ng/dL e 0,25 ± 0,07 μg/dL, respectivamente. Os teores médios de cobre e zinco foram de 0,29 ± 0,01 mg/L e 0,27 ± 0,01 mg/L respectivamente. O perímetro escrotal, altura e largura dos testículos direito e esquerdo, os hormônios luteinizante , testosterona, triiodotironina e tiroxina e os minerais cobre e zinco mostraram efeito significativo, p<0,01, para idade dos 12 aos 24 meses. O zinco apresentou diferença significativa, p<0,01, para época do ano (inverno e verão /seca e chuva). / In the present work 55 polled Nelore bovines were used, raised under extensive conditions, aiming to evaluate testicular biometry, plasmatic concentrations of luteinizant hormone, testosterone, triiodothyronine, thyroxine and copper and zinc concentration and the effect of season (draught and rain) over these characteristics, from 12 to 24 months old.It was used scrotal tape for the testicle measurement and the blood samples were obtained by jugular venopunction in heparinized vacun tubes. After the centrifugation, the plasma was storaged at –20ºC until hormonal and mineral assays. The average values of scrotal perimeter, height, right and left testicles width and weight of animals were: 24.91 cm, 8.74 cm, 4.68 cm, 8.75 cm, 4.66cm and 304.35 kg, respectively. Average plasmatic concentrations of square root hormones of luteinizant hormone, testosterone, triiodothyronine and thyroxine were 0.25 ± 0.08 ng/dL, 168.04 ± 95.70 ng.mL, 1.31 ± 0.12 ng/dL and 0.25 ± 0.07 μg/dL, respectively. Average concentration of copper and zinc were 0.29 ± 0.01 mg/L and 0.27 ± 0.01 mg/L, respectively. Scrotal perimeter, right and left testicles height and width, luteinizant hormones, testosterone, triiodothyronine and thyroxine and the minerals copper and zinc showed significant effect, p<0.01, for age from 12 to 24 months old. Zinc presented significant difference, p<0.01, for season (draught and rain).
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Avaliação da dinâmica folicular em éguas superovuladas com extrato de pituitária eqüina e FSH eqüino purificado /

Machado, Milena da Silva. January 2004 (has links)
Orientador : Marco Antonio Alvarenga / Resumo: Vários estudos estão sendo realizados com o objetivo de criar e aperfeiçoar protocolos para a superovulação eqüina. O extrato de pituitária eqüina (EPE) é um preparado parcial de gonadotrofina eqüina, sendo o único composto que regularmente induz ovulações múltiplas em éguas. Contudo, a resposta superovulatória e a taxa de embriões recuperados têm sido baixas, quando comparadas com outras espécies. Estudos realizados em nosso laboratório demonstraram uma melhora no percentual de ovulações múltiplas em éguas superovuladas com a administração do EPE duas vezes ao dia e em doses decrescentes, porém, com baixas taxas de recuperação embrionária. Estudos em bovinos demonstraram que altas contaminações de LH nos preparados hormonais, são deletérias para a resposta ovariana, qualidade dos embriões e fertilidade. A administração do FSH purificado duas vezes ao dia com doses decrescentes, elevou a taxa de embriões recuperados e qualidade dos embriões em vacas. Devido aos baixos índices obtidos até o momento com superovulação em éguas, a proposta do nosso trabalho foi de caracterizar a dinâmica de crescimento folicular, resposta superovulatória e produção de embriões em éguas tratadas com dois diferentes protocolos de EPE (doses constantes e decrescentes) e FSH eqüino purificado (Bioniche-Canadá). Foram utilizadas seis éguas em bom estado nutricional, com idade entre 4 e 15 anos e massa corpórea de 400 a 500 Kg, com bom histórico reprodutivo. Essas éguas passaram por quatro tratamentos: GI (EPE 25mg/IM, duas vezes ao dia), GII (EPE em doses decrescentes- 40, 35, 30, 25, 20, 15 e 10mg duas vezes ao dia), GIII (FSH eqüino purificado 12,5mg/IM, duas vezes ao dia) e GIV... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Several methods have been studied aiming to superovulated mares. Equine pituitary extract (EPE) has been the compound most used to induce multiple ovulation in mares, however in despite the consistent superovulation response the embryo recovery rate is lower than expected. In our laboratory, we observed that twice-daily administration of EPE increases superovulatory response, with a still low embryo recovery rate. Studies in cows have shown that LH high contamination in the FSH base prepared, affects adversely ovarian response, embryo quality and fertility rate. Administration of purified FSH twice daily in decreasing doses increased the quality of the embryos and also the embryo recovery rates in cows. This experiment was conducted to study the follicular dynamics superstimulatory (SO) response and embryo production in mares treated with two different EPE protocols (constant and decreasing doses) and purify equine FSH (Bioniche, Canada). Six crossbreed mares were utilized, the same animals were used in all experimental groups to avoid individual variability, as follows Group I (EPE 25mg/IM, twice daily), Group II (EPE in decreasing doses (40, 35, 30, 25, 20, 15, 10) twice daily, Group III (equine FSH 12mg/IM, twice daily) and Group 4 (control). Follicular growth and ovulation were monitored daily by trans-rectal palpation and ultrasonography. Treatments were discontinued when the majority of follicles reached 35 mm of diameter and 3000UI of hCG was administered. Results were analyzed by Pearson Correlation Coefficients and Analysis of Variance. In group 2, it was observed a positive correlation between the number of initial follicles with 16-20mm and embryo production. However, 48 hours after the star of the treatment it was observed a positive correlation (P<0,05) between populations of follicles with 16-20mm of diameter and number of ovulations in all treated groups. Follicular growth... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

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