Sistemas de produção in vitro de embriões mamíferos muitas vezes requerem que o cultivo embrionário seja realizado de forma individualizada. Entretanto, os resultados obtidos com o cultivo in vitro (CIV) individual são inconstantes e, por vezes, inferiores ao CIV em grupo. Entre os sistemas que requerem o CIV individual, a técnica de handmade cloning (HMC) se destaca por produzir embriões sem zona pelúcida que não podem ser cultivados agrupados em protocolos convencionais de CIV. O objetivo deste experimento foi determinar as taxas de desenvolvimento in vitro e in vivo de embriões bovinos clonados pela técnica de HMC e submetidos a três diferentes sistemas de CIV em micropoços (Well of the well – WOW), sendo um industrial, confeccionado em polidimetilsiloxano (PDMS), que visou à padronização da configuração do sistema de CIV. Após 11 replicações, de 3.876 complexos cumuli-oócito bovinos maturados in vitro, 3.437 (88,6%) oócitos apresentaram a extrusão do 1º corpúsculo polar. Após a digestão da zona pelúcida, 2.992 estruturas foram bisseccionadas manualmente, com a produção de 2.288 hemi-citoplastos. Reconstruiram-se 1.011 embriões pela adesão de dois hemi-citoplastos a uma célula somática (célula-tronco mesenquimal bovina de uma fêmea adulta da raça Nelore), dos quais 751 (74,2%) embriões fusionaram após eletrofusão, sendo 715 ativados quimicamente. Os embriões clonados (n=705) foram então alocados aleatoriamente em três grupos experimentais para o CIV: Grupo 1 (G1) – micropoço modificado (WOW-modificado, FELTRIN et al., 2006a); Grupo 2 (G2) – micropoço convencional (WOW-convencional , VATJA et al., 2000); e Grupo 3 (G3) – micropoço – PDMS (WOW-PDMS) . Como grupo controle (FIV, Grupo 4, G4), 594 oócitos foram colocados em maturação, fecundação e cultivo in vitro, em paralelo aos grupos clonados. Os resultados das taxas de clivagem no Dia 2, de blastocisto no Dia 7 e de prenhez no Dia 30 de desenvolvimento foram analisados pelo teste do χ2 com nível de significância de 5%. Não houve diferença significativa quanto à taxa de clivagem nos diferentes grupos. Entretanto, a taxa de blastocisto (BL) no G1 (99/239; 41,4%) foi significativamente superior à observada no G2 (72/232; 31,0%) e no G3 (68/234; 29,1%), sendo estas últimas semelhantes entre si. A taxa de BL do grupo controle (315/594; 53,0%) foi superior aos três grupos experimentais. Finalmente, o desenvolvimento in vivo até o Dia 30 de prenhez não diferiu entre os grupos G1 (7/15; 46,7%), G2 (7/13; 53,9%) e G3 (6/16; 50,0%). O sistema em micropoço modificado promoveu melhores condições de CIV a embriões clonados por HMC, traduzido por maiores taxas de BL, não se refletindo, entretanto, em diferenças no desenvolvimento in vivo subseqüente à transferência para fêmeas receptoras. / In vitro production systems for mammalian embryos quite often require embryos to be cultured individually. However, results obtained after individual embryo in vitro culture (IVC) are frequently inconsistent and inferior to IVC in groups. The Handmade Cloning (HMC) procedure is among the systems that require individual IVC, since zona-free embryos cannot be grouped for culture by standard IVC protocols. The aim of this study was to evaluate the in vitro and in vivo development of bovine embryos cloned by HMC, after the IVC in three distinct microwell arrangements, including an industrial chip, manufactured in polydimethylsiloxane (PDMS), which aimed to standardize the pattern of the IVC system. After 11 replications, 3,437 (88.6%) oocytes were selected based on the extrusion of the first polar body, out of 3,876 in vitro-matured bovine cumuli-oocyte complexes. Following zona pellucida digestion, 2,992 structures were manually bisected, generating 2,288 hemi-cytoplasts. A total of 1,011 embryos were reconstructed by the adhesion of two hemi-cytoplasts to a somatic cell (bovine mesenchymal stem cells from an adult Nelore female), with 751 fusing (74.2%) following electrofusion, and 715 being chemically activated. Cloned embryos (n=705) were then randomly allocated to one of three IVC experimental groups: Group 1 (G1) – modified microwells (FELTRIN et al., 2006a); Group 2 (G2) – conventional microwells (VATJA et al., 2000); and Group 3 (G3) – microwells in PDMS. As control group (IVF, Group 4, G4), 594 oocytes were in vitro-matured, fertilized and cultured in parallel to the cloned groups. Cleavage, blastocyst and pregnancy rates evaluated on Days 2, 7 and 30 of development were analyzed by the χ2 test, for a significance level of 5%. No differences in cleavage rates were observed between groups. However, blastocyst rates in G1 (99/239; 41.4%) were significantly higher than in G2 (72/232; 31.0%) and in G3 (68/234; 29.1%), which did not differ between one another. Blastocyst rates in the IVF control group (315/594; 53.0%) were in turn higher than in all cloned experimental groups. Finally, in vivo development to Day 30 of pregnancy was not different between G1 (7/15; 46.7%), G2 (7/13; 53.9%) and G3 (6/16; 50.0%). In summary, the modified microwell system promoted superior development to the blastocyst stage than both the conventional and the DMPS-based microwell systems, with no impact on the subsequent in vivo development after transfer to female recipients.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-05Bitstream added on 2014-06-13T20:26:13Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_fs_dr_jabo.pdf: 3109118 bytes, checksum: 5a4b81536e1b9bd9d62a0e42796b675b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O fator de transcrição Oct-4 é bem conservado entre as espécies e é conhecido por ser expresso em embriões e células-tronco embrionárias (CTE), sendo um importante marcador da pluripotência. Recentemente, foi relatado que a combinação de Oct-4 com três outros fatores de transcrição Klf-4, c-Myc e Sox2 foram capazes de reprogramar células somáticas a um estado indiferenciado pluripotente, chamadas células-tronco pluripotentes induzidas (“células iPS”), as quais apresentam várias das mesmas propriedades das CTE incluindo a pluripotência, auto-renovação e proliferação. O objetivo desse estudo foi avaliar a funcionalidade do promotor Oct-4 de eqüino em CTE de murinos. Três vetores plasmidiais expressando GFP (“green fluorescent protein”) sob o controle do promotor Oct-4 de equinos, camundongo e quatro vetores lentivirais, também contendo o gene reporter GFP e os promotores Oct-4 de equinos, camundongo e humanos, pLZ2-ecOCT-EGFP (meq) (sequência equivalente de camundongos), pLZ2-ecOCT-EGFP (heq) (sequência equivalente de humanos), pLZ2-mOCT-EGFP e pLZ2-hOCT-EGFP, respectivamente, foram construídos. Todos os vetores também contêm um sítio de resistência à blasticidina que permite a seleção das células estáveis e das células transduzidas. Essas construções plasmidiais foram verificadas se funcionavam eficientemente, bem como o efeito do promotor Oct-4 em transfectar transientes e estáveis CTE. As construções com promotor Oct-4 de camundongo, humano e eqüino (sequência análoga à de camundongo) produziram somente 6% de células GFP positivas com intensidade de fluorescência (IF) >1000 pela análise em citômetro de fluxo, enquanto que o plasmídeo contendo o promotor Oct-4 de eqüino (sequência equivalente à de humanos) produziu menos células GFP positivas (>3%) com IF >1000, quando... / The pluripotency transcription factor Oct-4 is well conserved among species and is known to be expressed in embryos and embryonic stem (ES) cells; it is being an important pluripotency marker. It was recently demonstrated that the combination of Oct-4 with three other factors Klf-4, c-myc and Sox2 were able to reprogram somatic cells to a pluripotent and undifferentiated state. These cells known as induced pluripotent stem (iPS) cells share several properties with ES cells including self-renewal, proliferation and pluripotency. The aim of this study was to assess the functionality of the horse Oct-4 promoter in mouse ES cells. Three plasmids vectors expressing GFP (green fluorescent protein) under the control of the horse, mouse and four lentivirus vectors also containing reporter gene GFP and horse, mouse and human promoters, pLZ2-ecOCT-EGFP (mouse sequence equivalent), pLZ2-ecOCT-EGFP (human sequence equivalent), pLZ2-mOCT-EGFP and pLZ2-hOCT-EGFP, respectively, were built. All these vectors also contain a blasticidin resistance cassette to allow selection of transfected stable cells and transduced cells. Afterwards, to assess the functionality of the Oct-4 promoter all plasmids were tranfected the into transient and stable mouse ES cells. Constructs with mouse, human and horse (mouse analog sequence) Oct-4 promoter produced only 6% GFP positive cells with fluorescence intensity (FI)>1000 by 20 FACs assay, while plasmid horse (human analog sequence) Oct-4 promoter produced less GFP positive cells (>3%) with FI>1000, when compared with the positive control and among groups. However, GFP expression was not present in stable cells, whereas there were Blasticidin-resistant colonies-forming from 6 days post-transfection. To optimize the system in mouse ES cells, pLZ2-mOCT-EGFP and pLZ2-hOCT-EGFP lentivectors, were tested as controls. It was used HIV-1-derived... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-08Bitstream added on 2014-06-13T19:45:13Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_e_dr_jabo.pdf: 663672 bytes, checksum: f044bd71ec8b6a869bb1626ab1b3b25b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da suplementação energética e com diferentes fontes de gordura na produção de embriões FIV e no perfil metabólico em novilhas nelore. Foram realizados dois experimentos, no primeiro, vinte novilhas Nelore (Bos taurus indicus) com idade média de 30 meses, com peso médio de 417,0 ± 42,4 kg foram distribuidas aleatoriamente em 3 tratamentos: T1 (n= 7), animais receberam 100% das exigências de manutença de energia, calculados conforme NRC (1997), T2 onde os animais receberam 170% das exigências de manutenção de energia (1,7 X M), e T3, onde os animais receberam 170 % das exigências de manutenção de energia com adição de 200 g de gordura protegida-AGCL (Megalac®). No segundo experimento 12 novilhas Nelore (Bos taurus indicus) com idade variando de 14 a 18 meses, com peso médio inicial de 309,6 kg, foram distribuidas em 4 tratamentos, de acordo com peso e população folicular avaliada por ultrasonografia: T1, animais receberam 100% dos requerimentos de mantença de energia, calculados conforme NRC (1997), T2- animais receberam 170% das exigências de mantença de energia, T3- idem ao T2, com adição de 4% de óleo de soja na MS, e T4- idem ao T2, com adição de 200 g de AGCL (Megalac ®). O período de adaptação foi quinze dias, onde os animais receberam feno de capim Brachiaria e ração concentrada... / Two experiments were carried to evaluate the effect of the energy and fat in the metabolic profile, follicular dynamic, oocyte and in vitro embryo production in Nelore heifers (Bos taurus indicus). In the first, twenty Nelore heifers with 30 months old, and average weight 417,0 ± 42,4 were allocated in 3 treatments, in accordance with weight and follicular population evaluated by ultrasound: T1, animals received 100% of energy maintenance, calculated as NRC (1997), T2- animals received 170% of energy maintenance; T3: animals received 170% of energy maintenance with addition of 200 g Megalac ®. In the second experiment, 12 Nelore heifers with 14-18 months and 309,6 kg average weight, were allocated in 3 treatments, in tree periods: T1, animals received 100% of energy maintenance, calculated as NRC (1997), T2- animals received 170% of energy maintenance; T3: animals received 170% of energy maintenance with addition of 4% soybean oil in Dry Matter and T4: animals received 170% of energy maintenance with addition of 200 g Megalac ®. After adaptation period, the treatment initiated, animals had synchronized ovulation, blood samples were collected, and follicular aspiration was carried to evaluate the oocytes and in vitro embryo production. Follicular development was monitored daily by ultrasonography until day post heat. The consumption of MS and the weight gain were lower in group T1 (P< 0.05), in relation to the others treatments. The FSH, LH, and albumin concentrations were not different (P > 0.05) among treatments. The cholesterol concentrations were higher in the T3 and T4 groups (P< 0.05) only in the second experiment... (Complete abstract, click electronic access below)

O experimento 1 caracterizou as fêmeas com intervenção manual no parto, além de avaliar os efeitos que podem ocorrer na sua vida reprodutiva ao longo de 1 ano. Foram coletados dados do parto de 4.121 fêmeas, informações anteriores ao parto e registrados os motivos e momentos de remoção. Os animais foram divididos em grupo Controle (n=3.271) e Intervenção (n=850). O percentual de fêmeas submetidas à intervenção manual no parto foi de 20,6%. Houve aumento na distribuição de intervenções na ordem de parto (OP) acima de 5 e no verão (P<0,05). A distribuição não diferiu entre as classes de tamanho da leitegada (P>0,05). Foi verificada diferença na média de OP (3,6 e 4,7), duração do parto (208,3 e 224,6 min), leitões nascidos vivos (11,9 e 11,6), natimortos (0,3 e 0,6) e no percentual de fêmeas com natimortos (28,6 e 38,8%) nos grupos Controle e Intervenção, respectivamente. A remoção geral foi maior no grupo Intervenção (P=0,001) e antes da IA por motivos não reprodutivos (P<0,001). No desempenho subseqüente, houve diminuição da taxa de parto ajustada e do tamanho da leitegada subseqüente (P<0,05). O experimento 2 visou avaliar o parto com e sem intervenção manual, estimar o desempenho lactacional, e avaliar as causas de remoção e o desempenho reprodutivo subseqüente destas fêmeas. Foram comparadas 319 fêmeas, divididas em dois grupos: Controle (n=222) e Intervenção (n=97). Todas as fêmeas com intervenção receberam uma dose de antimicrobiano. Foram coletados dados reprodutivos referentes ao parto, o peso dos leitões no dia 1 (D1), dia 14 (D14) e no dia 21 (D21), e a produção de leite no 14º dia de lactação, pela técnica da pesagem-mamadapesagem. Foram coletados dados reprodutivos referentes ao parto, o peso dos leitões no dia 1 (D1), dia 14 (D14) e no dia 21 (D21), e a produção de leite no 14º dia de lactação, pela técnica da pesagem-mamadapesagem. Foram analisadas as informações do desempenho subseqüente e das causas de remoção das matrizes. Houve diferença (P<0,01) para as variáveis ordem de parto (3,2 e 4,0), leitões nascidos totais (12,2 e 11,2) e nascidos vivos (11,4 e 10,2) e número de natimortos (0,5 e 1,0) entre os grupo Controle e Intervenção, respectivamente. A produção de leite, aos 14 dias, não diferiu, porém o peso dos leitões aos 21 dias tende a ser menor (P=0,09) no grupo Intervenção. Houve diferença (P<0,05) nas remoções gerais (18,9 e 32,0%) e antes da IA (8,6 e 20,6%), sendo destas por motivos não reprodutivos (8,6 e 19,6%) entre os grupo Controle e Intervenção, respectivamente. Os resultados conjuntos mostram que a intervenção manual ao parto é efetuada com maior freqüência no verão, em fêmeas de maior ordem de parto e com menor tamanho da leitegada. Nestas fêmeas, o parto é mais prolongado e o número de natimortos é maior. A produção de leite, aos 14 dias, não é prejudicada, porém o peso dos leitões aos 21 dias tende a ser menor nas matrizes submetidas à palpação genital. As remoções são maiores nestas fêmeas, sendo realizadas antes da IA e por motivos não reprodutivos. As fêmeas submetidas a intervenção ao parto tem o desempenho reprodutivo subseqüente reduzido. / Experiment 1 characterized the females with manual intervention at the parturition, and evaluated the effect that can occur in theirs reproductive life, during one year. Data about the farrowing were collected from 4,121 females; information previous at parturition and the reasons and moments of removal were recorded. The animals were allocated in Control (n=3,271) and Intervention (n=850) groups. The percentage of females submitted to the manual intervention at the parturition was of 20.6%. There was an increase in the proportions of interventions in the order of parturition (OP) above 5. Moreover, this growth took place mainly in summer (P<0.05). Differences in the OP average (3.6 and 4.7), duration of farrowing (208.3 and 224.6 min), born alive piglets (11.9 and 11.6), stillborns (0.3 and 0.6) and in the percentage of females with stillborns (28.6 and 38.8%) were verified, in Control and Intervention group, respectively. Culling rate was higher in the Intervention group (P=0.001) and before the insemination, due to non-reproductive reasons (P<0.001). On the subsequent performance, there was reduction of the adjusted farrowing rate and in litter size (P<0.05). Experiment 2 sought to evaluate parturition with and without manual intervention, estimate the milk production and to evaluate the culling causes and the subsequent reproductive performance of these females. The females (n=319) were allocated in two groups and compared: Control (n=222) and Intervention (n=97). All the Intervention group females received a dose of antimicrobials. Reproductive data were collected at parturition, as well as pigs weight in day 1 (D1), day 14 (D14) and in day 21 (D21), and milk production on 14th day of lactation, by the weigh-suckle-weigh technique. The information of the subsequent performance and the sow’s removal causes were analyzed. There were differences for OP (3.2 and 4.0), total pigs born (12.2 and 11.2) and born alive piglets (11.4 and 10.2) and stillborn number (0.5 and 1.0) variables between Control and Intervention groups, respectively. Milk production, on 14th day, did not differ, however the piglets weight on 21 days tended to be lower (P=0.09) in the Intervention group. There was difference in the culling rate (18.9 and 32.0%) and before the insemination (8.6 and 20.6%), due to non-reproductive reasons (8.6 and 19.6%) between the Control and Intervention group, respectively. The set results show that the manual intervention at parturition is effected mainly in summer, in older females and with small litter size. In these females, the parturition is longer and the stillborn is higher. Even though the milk production is not affected, the piglets weight on 21 days tends to be lower in the sows submitted to the genital palpation. The culling rate is higher in these females, before the insemination and for non-reproductive reasons. Females submitted to intervention at the parturition have subsequent reproductive performance reduced.

Sistemas de produção in vitro de embriões mamíferos muitas vezes requerem que o cultivo embrionário seja realizado de forma individualizada. Entretanto, os resultados obtidos com o cultivo in vitro (CIV) individual são inconstantes e, por vezes, inferiores ao CIV em grupo. Entre os sistemas que requerem o CIV individual, a técnica de handmade cloning (HMC) se destaca por produzir embriões sem zona pelúcida que não podem ser cultivados agrupados em protocolos convencionais de CIV. O objetivo deste experimento foi determinar as taxas de desenvolvimento in vitro e in vivo de embriões bovinos clonados pela técnica de HMC e submetidos a três diferentes sistemas de CIV em micropoços (Well of the well – WOW), sendo um industrial, confeccionado em polidimetilsiloxano (PDMS), que visou à padronização da configuração do sistema de CIV. Após 11 replicações, de 3.876 complexos cumuli-oócito bovinos maturados in vitro, 3.437 (88,6%) oócitos apresentaram a extrusão do 1º corpúsculo polar. Após a digestão da zona pelúcida, 2.992 estruturas foram bisseccionadas manualmente, com a produção de 2.288 hemi-citoplastos. Reconstruiram-se 1.011 embriões pela adesão de dois hemi-citoplastos a uma célula somática (célula-tronco mesenquimal bovina de uma fêmea adulta da raça Nelore), dos quais 751 (74,2%) embriões fusionaram após eletrofusão, sendo 715 ativados quimicamente. Os embriões clonados (n=705) foram então alocados aleatoriamente em três grupos experimentais para o CIV: Grupo 1 (G1) – micropoço modificado (WOW-modificado, FELTRIN et al., 2006a); Grupo 2 (G2) – micropoço convencional (WOW-convencional , VATJA et al., 2000); e Grupo 3 (G3) – micropoço – PDMS (WOW-PDMS) . Como grupo controle (FIV, Grupo 4, G4), 594 oócitos foram colocados em maturação, fecundação e cultivo in vitro, em paralelo aos grupos clonados. Os resultados das taxas de clivagem no Dia 2, de blastocisto no Dia 7 e de prenhez no Dia 30 de desenvolvimento foram analisados pelo teste do χ2 com nível de significância de 5%. Não houve diferença significativa quanto à taxa de clivagem nos diferentes grupos. Entretanto, a taxa de blastocisto (BL) no G1 (99/239; 41,4%) foi significativamente superior à observada no G2 (72/232; 31,0%) e no G3 (68/234; 29,1%), sendo estas últimas semelhantes entre si. A taxa de BL do grupo controle (315/594; 53,0%) foi superior aos três grupos experimentais. Finalmente, o desenvolvimento in vivo até o Dia 30 de prenhez não diferiu entre os grupos G1 (7/15; 46,7%), G2 (7/13; 53,9%) e G3 (6/16; 50,0%). O sistema em micropoço modificado promoveu melhores condições de CIV a embriões clonados por HMC, traduzido por maiores taxas de BL, não se refletindo, entretanto, em diferenças no desenvolvimento in vivo subseqüente à transferência para fêmeas receptoras. / In vitro production systems for mammalian embryos quite often require embryos to be cultured individually. However, results obtained after individual embryo in vitro culture (IVC) are frequently inconsistent and inferior to IVC in groups. The Handmade Cloning (HMC) procedure is among the systems that require individual IVC, since zona-free embryos cannot be grouped for culture by standard IVC protocols. The aim of this study was to evaluate the in vitro and in vivo development of bovine embryos cloned by HMC, after the IVC in three distinct microwell arrangements, including an industrial chip, manufactured in polydimethylsiloxane (PDMS), which aimed to standardize the pattern of the IVC system. After 11 replications, 3,437 (88.6%) oocytes were selected based on the extrusion of the first polar body, out of 3,876 in vitro-matured bovine cumuli-oocyte complexes. Following zona pellucida digestion, 2,992 structures were manually bisected, generating 2,288 hemi-cytoplasts. A total of 1,011 embryos were reconstructed by the adhesion of two hemi-cytoplasts to a somatic cell (bovine mesenchymal stem cells from an adult Nelore female), with 751 fusing (74.2%) following electrofusion, and 715 being chemically activated. Cloned embryos (n=705) were then randomly allocated to one of three IVC experimental groups: Group 1 (G1) – modified microwells (FELTRIN et al., 2006a); Group 2 (G2) – conventional microwells (VATJA et al., 2000); and Group 3 (G3) – microwells in PDMS. As control group (IVF, Group 4, G4), 594 oocytes were in vitro-matured, fertilized and cultured in parallel to the cloned groups. Cleavage, blastocyst and pregnancy rates evaluated on Days 2, 7 and 30 of development were analyzed by the χ2 test, for a significance level of 5%. No differences in cleavage rates were observed between groups. However, blastocyst rates in G1 (99/239; 41.4%) were significantly higher than in G2 (72/232; 31.0%) and in G3 (68/234; 29.1%), which did not differ between one another. Blastocyst rates in the IVF control group (315/594; 53.0%) were in turn higher than in all cloned experimental groups. Finally, in vivo development to Day 30 of pregnancy was not different between G1 (7/15; 46.7%), G2 (7/13; 53.9%) and G3 (6/16; 50.0%). In summary, the modified microwell system promoted superior development to the blastocyst stage than both the conventional and the DMPS-based microwell systems, with no impact on the subsequent in vivo development after transfer to female recipients.

No início da lactação, alterações metabólicas produto do severo balanço energético negativo (BEN) predispõem ao desenvolvimento de lipidose hepática e cetose. O objetivo deste trabalho foi avaliar, através de indicadores bioquímicos, a condição metabólica em vacas leiteiras, durante os primeiros 60 dias de lactação submetidas a três tratamentos preventivos que poderiam melhorar o status energético no início da lactação e por tanto, auxiliar na prevenção de lipidose hepática e cetose. Além disso, buscou-se definir quais dos parâmetros laboratoriais utilizados na avaliação da condição metabólica, seriam mais úteis no direcionamento do diagnóstico e prevenção de transtornos metabólicos por lipomobilização. Cinquenta e quatro vacas multíparas da raça Holandesa foram alocadas em quatro grupos: controle, precursor da glicose (1-2 propaneidol: propileno-glicol: 300 mL/48 horas), protetor hepático (Mercepton:20 mL/48 horas), e suplemento energético (ácidos graxos poli-insaturados protegidos: Megalac-E:250 g/vaca/dia), administrados durante os primeiros 30 dias após o parto. Amostras de sangue e urina foram coletadas nos dias 0, 7, 14, 21, 28, 35, 42 e 49 após o parto, no horário da tarde antes da segunda ordenha, e realizou-se avaliação do escore da condição corporal (ECC) em cada amostragem. Foram coletadas amostras de soro e plasma para análise de ácidos graxos não esterificados (NEFA), albumina, aspartato-aminotransferase (AST), ß-hidroxibutirato (BHB), colesterol, glicose, globulinas, proteína total, triglicerídeos e uréia, através de espectrofotometria utilizando kits diagnósticos. Na urina, determinou-se o pH e corpos cetônicos. No presente trabalho foram considerados pontos de corte para cetose subclínica concentrações séricas de BHB ≥1,4 mmol/L e de NEFA ≥ 0,7 mmol/L. Foi encontrada uma incidência de 24% para cetose subclínica. Os resultados do presente estudo não demonstram o efeito preventivo de nenhum dos três tratamentos, confirmando que até agora não existe tratamento para superar o BEN. Valores séricos de AST, colesterol total e BHB, assim como a determinação de corpos cetônicos na urina são bons parâmetros bioquímicos no diagnóstico e prognóstico de lipomobilização no pós-parto inicial. / In early lactation dairy cattle experience metabolic alterations, caused by severe negative energy balance (NEB). This disbalance predisposes the development of fat liver and ketosis. The aim of this study was to evaluate a metabolic condition by biochemical indicators in high yielding dairy cows (≥25 kg/day) during the first sixty days of lactation. Cows were subjected to three preventive treatments that we hypothesed could improve the energy status in early lactation and therefore aid in the prevention of fat liver and ketosis. In addition, the trial had the aim of defining which of those laboratory parameters used for evaluating metabolic condition would be more useful for diagnostic and prevention of metabolic disease resulted from lipolysis. Fifty four multiparous Holstein cows were divided into four groups: control, glucose precursor (1-2 propaneidol - propylen-glyol: 300 mL/48 hours), hepatic protector (Mercepton 20 mL/ 48 hours), and protected fatty acids poli-unsaturated (Megalac-E: 250 g/cow/day). Blood and urine samples were collected on days 0, 7, 14, 21, 28, 35, 42 e 49 postpartum and in each period body condition score (BCS) was evaluated. Blood concentrations of non-esterified fatty acids (NEFA); albumin, AST, ß-hydroxybutyrate (BHB), total cholesterol, glucose, total protein, urea and triglycerides were determined through espectrophotometry by diagnostic kits. In urine determinations of ketone bodies and pH were performed. In the present study a cut-off point for subclinical ketosis was defined when blood concentration of BHB ≥1,4 mmol/L and concentration of blood NEFA ≥ 0,7 mmol/. The incidence of subclinical ketosis was 24%. The results of the present study do not demonstrate the preventive effect of any of the three treatments for overcoming the NEB. Serum levels of AST, total cholesterol and BHB and urine ketone bodies are good biochemical parameters for the diagnostic and prevention of lipolysis in early postpartum.

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Rui Machado / Banca: Jairo Pereira Neves / Banca: César Roberto Esper / Banca: Cezinande de Meira / Resumo: Objetivando testar a ação do colesterol, desmosterol, ácido oléico-linoléico ou Q-Iactoalbumina sobre os espermatozóides ovinos, alíquotas de sêmen de 25 carneiros foram submetidas à criopreservação após tratamento com essas substâncias. O sêmen foi avaliado antes do processamento e após a refrigeração, descongelação e incubação quanto à, cinética pela análise subjetiva e computadorizada (CASA), morfologia, avaliação simultânea da integridade da membrana plasmática (IMP) e do acrossomo (IAC) e do potencial de membrana mitocondrial (PMM) pela associação da aglutinina de Pisum sativum conjugada ao isotiocianato de fluoresceína (FITC-PSA), iodeto de propídio (PI) e JC-1 e, status de capacitação pela c10rtetraciclina (CTC). A influência dos aditivos em poucos parâmetros não foi suficiente para sugerir a superioridade de qualquer um dos tratamentos. A criopreservação provocou prejuízos à cinética, IMP, IAC, PMM, além de induzir a capacitação e reação do acrossomo. Foram observadas diferenças entre grupos de carneiros quanto ao status de capacitação no sêmen in natura, assim como na sensibilidade desse sêmen à crioinjúria e criocapacitação. Após a descongelação, as mudanças semelhantes à capacitação foram maiores nos animais de menor IMP. A segregação dos carneiros de acordo com a crioresistência da membrana plasmática norteou o comportamento de vários outros parâmetros. Conclui-se, que o colesterol, desmosterol, ácido oléico-linoléico e alactoalbumina não protegem o sêmen ovino contra as crioinjúrias, que a congelação-descongelação é mais danosa que a refrigeração e, que existem diferenças entre grupos de indivíduos relacionadas à crioresistência e criocapacitação espermática. / Abstract: In order to evaluate the proteeting aetion of some substanceson ram spermatozoa, semen samples of 25 rams were colleeted and submitted to cryopreservation after treatment with cholesterol, desmosterol, oleic-linoleic acid or Q-Iactalbumin. Before the processing and after the procedures of cooling, freezing-thawing and incubation, semen was evaluated as to kínetcs by subjective and computerized analyses (CASA), morphology, simultaneously to plasma membrane integrity (PMI), acrosome integrity (ACI) and mitochondrial membrane potential (MMP) by isothiocyanate-conjugated Pisum sativum (FITCPSA), propidium iodide (PI) and JC-1 combination and as to sperm capacitation and acrosome reaction determined by chlortetracycline (CTC) assay. The influence resulted from the additives in a few parameters was not enough to suggest the superiority of any treatments. The cryopreservation process, especially the freezing-thawing, promotes damages to kinetics, PMI, ACI, MMP and induees accelerated eapacitation and acrosome reaction in spermatozoa. Differenees among groups of rams were observed regarding capacitation status in fresh semen as well as the sensibility of their semen to cryoinjury and cryocapacitation. Higher and more accelerated capacitation-like ehanges were observed in groups of rams presenting lower plasmatic membrane cryoresistance after thawing. The segregation of rams in different levels of PMI influenced the behavior of several other parameters. It was concluded that cholesterol, desmosterol, oleic-Iinoleic acid and Q-Iactalbumin do not protect the ram semen against the cryoinjuries as well as freezing-thawing is more harmful than cooling. Important differenees among groups of individuais were noticed as for the spermatozoa resistance to the damages provoked by cryopreservation such as the eryocapacitation susceptibility. / Doutor

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 459969 bytes, checksum: 684ba7361082f44d749b2627833c1178 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Morphofunctional studies on the testis allied to studies in endocrinology, embryology and cryopreservation of gametes, generate information that can be applied in assisted reproduction, favoring the development of methodologies used in conservation of species. The objectives of this study were to quantify morphological and functional structures of the testicular parenchyma, calculate gonadosomatic, tubulosomatic, leydigosomatic and Sertoli cell indices; describe the duration of the seminiferous epithelium cycle (SEC) by identifying the most advanced germ cells labeled by 5- bromodeoxyuridine (BrdU); characterize the various stages that constitute the seminiferous epithelium cycle based on tubular morphology and calculate daily sperm production per gram of testis of jaguarundi (Pumayagouaroundi). For this purpose we used five adult males, one from Centro de Triagem de AniamaisSilvestres at Universidade Federal de Viçosa and four from ParqueZoológico de São Paulo. After chemical restraint animals had their body weight, body size, and diameter of the chest measured, and underwent testicular biopsies in order to obtain biological material for histological and immunohistochemical evaluation. In the studied Jaguarundis the average weight was 6.6 kg, being that 0.032% of it was allocated in testis (gonadosomatic index), which has 57.36 m of seminiferous tubule, coming to a tubulosomatic index of 0.027% . The total number of Leydig cells found in this species was 72.96 million cells and leydigosomatic index was calculated at 0.001%. Eight stages of the SEC were described and had their relative frequencies determined based on the tubular morphology method. At SEC, pre- meiotic stage of the spermatogenic process was higher than the other ones (48.66 %). Through the use of a cell proliferation marker (BrdU) injected in the testicles, labeled cells were observed in round spermatids of stage V after 14 days of application. From this, we can conclude that a seminiferous epithelium cycle of the Jaguarundi lasts 8.4 days, and the total spermatogenic process duration is 37.8 days. The Jaguarundi presented in the seminiferous epithelium, in each cross section of the seminiferous tubule at stage I of the cycle, an average of 1.03 spermatogonia type A; 9.78 primary spermatocytes at pre-leptotene/leptotene; 10.68 primary spermatocytes in pachytene; 25.3 round spermatids. The spermatogenesis general yield in this species was approximately 18.9 cells, and each Sertoli cell was able to sustain and maintain 14.24 round spermatids. The daily sperm production found demonstrates that the Jaguarundi is an animal with a high level of production, since its production is about 51.52 million sperm per gram of testis. / As pesquisas morfofuncionais sobre o testículo aliadas aos estudos em endocrinologia, embriologia e criopreservação de gametas, produzem informações que podem ser aplicadas na reprodução assistida, favorecendo o desenvolvimento de metodologias utilizadas na conservação de espécies. Os objetivos deste estudo foram quantificar as estruturas morfofuncionais do parênquima testícular, calcular os índices gonadossomáticos, tubulossomáticos e leydigossomáticos e de célula de Sertoli; descrever a duração do ciclo do epitélio seminífero pela identificação das células germinativas mais avançadas marcadas pela 5-bromodeoxiuridina (BrdU); caracterizar os diversos estádios que constituem o ciclo do epitélio seminífero com base na morfologia tubular e calcular a produção espermática diária por grama de testículo de gato mourisco (Puma yagouaroundi). Para isso foram utilizados cinco animais machos adultos, sendo um proveniente do Centro de Triagem de Animais Silvestres da Universidade Federal de Viçosa e quatro do Parque zoológico de São Paulo. Após contenção químicaos animais tiveram suas medidas corporais de peso, tamanho corporal, e diâmetro de tórax mensurados, foram também submetidos a biópsias testiculares a fim de se obter material biológico para avaliação histológica e imunohistoquímica. Nos gatos mourisco estudados a média de peso foi de 6,6 kg sendo desses, 0,032% alocados em testículo (índice gonadossomático) que possui 57,36 m de túbulo seminífero perfazendo um índice tubulossomático de 0,027%. O número total de células de Leydig encontradas nessa espécie foi de 72,96 milhões de células e o índice leydigossomático foi calculado em 0,001%. Foram descritos e determinada a frequência relativa de oito estádios do ciclo do epitélio seminífero (CES) com base no método da morfologia tubular. No CES a fase pré-meiótica do processo espermatogênico foi maior que as outras (48,66%). Através do uso de um marcador de proliferação celular injetado intratesticularmente (BrdU) foram observadascélulas marcadas em espermátides arredondadas do estádio V, após 14 dias da aplicação. A partir daí, pode-se concluir que um ciclo do epitélio seminífero do gato mourisco dura 8,4 dias, e o processo espermatogênico duração total de 37,8 dias. O gato mourisco apresentou no epitélio seminífero, em cada secção transversal do túbulo seminífero no estádio I do ciclo, em média, 1,03 espermatogônias do tipo A; 9,78 espermatócitos primários em pré-leptóteno/leptóteno; 10,68 espermatócitos primários em paquíteno; 25,3 espermátides arredondadas. O rendimento geral da espermatogênese nesta espécie foi de aproximadamente 18,9 células, e cada célula de Sertoli foi capaz de sustentar e manter 14,24 espermátides arredondadas. A produção espermática diária encontrada demonstra que o gato mourisco é um animal com alto nível de produção, uma vez que sua produção é cerca de 51,52 milhões de espermatozoides por grama de testículo.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-28Bitstream added on 2014-06-13T19:26:54Z : No. of bitstreams: 1 carreira_jt_me_jabo.pdf: 1115702 bytes, checksum: f2dddb9edf2109b5192f0e4f605b5b97 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da gota citoplasmática proximal (GCP) no sêmen de bovinos quanto à integridade do DNA, das membranas citoplasmática, acrossomal, no potencial mitocondrial e verificar a taxa de produção de embriões in vitro. Três amostras descongeladas de cinco (Controle: espermiograma normal), e oito touros Bos indicus (Gota: GCP ≥15%) foram avaliadas. Foram realizados os seguintes testes: motilidade e vigor pós-descongelação, concentração, morfologia espermática, teste de termo-resistência lento (TTL), integridade da membrana acrossomal, plasmática e potencial mitocondrial utilizando sondas fluorescentes (PI, FITC-PSA e JC-1) e integridade da cromatina pelo método de coloração com laranja de acridina. Dois touros com índices elevados de GCP e três animais controle foram selecionados para fertilização in vitro (FIV). As análises estatísticas foram efetuadas empregando-se o programa Statistical Analysis System. O nível de significância foi de 5%. Os resultados obtidos demonstraram que altos índices de GCP não afetaram a motilidade e o vigor, antes e após o TTL, assim como não interferiram na porcentagem de acrossomas intactos. Os resultados destas avaliações mostraram que a alta incidência de GCP afetou a integridade da membrana acrossomal e plasmática bem como a presença de potencial mitocondrial. No entanto, a alta incidência de GCP não promoveu aumento na porcentagem de injúrias à cromatina após descongelação, mas os resultados sugerem que podem ser mais sensíveis à desnaturação quando incubados por três horas. No experimento II, os índices de produção de embriões in vitro podem ter sido afetados pela interação da alteração morfológica e o efeito individual do touro. / The objective of this study was to evaluate the effects of the proximal cytoplasmic droplets (PCD) in bovine semen, on the integrity of DNA, cytoplasmic membrane, acrossome, mitochondrial function and the rate of in vitro embryo production. Three batches of five (control group G1: normal sperm parameters) and eight Bos indicus bulls (G2: PCD ≥15%) were analysed. The following tests were carried out: post thaw motility and, vigor, concentration, sperm morphology, slow thermo-resistance (TRT), membrane integrity, acrossome status, mitochondrial function through fluorescent probes (FITC-PSA, PI and JC-1) and integrity of chromatin was accessed by acridine orange stain. Two bulls with high rates of PCD and three animals (control group) were selected for in vitro fertilization (IVF). Statistical analyses were performed using the Statistical Analysis System. The significance level was 5%. The results showed that high rates of PCD did not affect motility and vigor, before and after the TRT, and did not affect the percentage of intact acrossome. The results showed that the high incidence of PCD affected membrane integrity, acrossome status and mitochondrial function when compared to the G1 group due. However, the high incidence of PCD did not affect the percentage of chromatin injury after thawing, but results suggest that spermatozoa may be more susceptible to damage when incubated for three hours. In experiment II the embryo production rate may have been affected by the interaction of the morphology traits and the bull effect.

Submitted by Ana Carolina Dutra (anacadutra@gmail.com) on 2018-04-23T12:49:30Z No. of bitstreams: 1 Impactos ambientais de uma unidade agropecuária estimados pela avaliação do ciclo de vida.pdf: 1688085 bytes, checksum: 7dc15a80e79961a1b65e72cc0e1d384c (MD5) / Approved for entry into archive by Bruna Bacalgini null (bruna@sorocaba.unesp.br) on 2018-04-23T13:54:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dutra_ac_me_soro.pdf: 1688085 bytes, checksum: 7dc15a80e79961a1b65e72cc0e1d384c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-23T13:54:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dutra_ac_me_soro.pdf: 1688085 bytes, checksum: 7dc15a80e79961a1b65e72cc0e1d384c (MD5) Previous issue date: 2018-03-27 / Com o passar dos anos, o desenvolvimento tecnológico e científico vem evoluindo rapidamente, levando a um aumento de consumo de matéria, recursos naturais e energia, além da geração de resíduos, emissões atmosféricas e efluentes. Dessa forma, políticas públicas e normas foram criadas para evitar, diminuir e mitigar impactos ambientais negativos resultantes de atividades antropogênicas. Nesse contexto, emergiu o pensamento do ciclo de vida, em que são analisados todos os impactos ambientais gerados por um processo ou produto desde a extração da matéria-prima até a disposição final. Como consequência, têm-se a ferramenta de Avaliação do Ciclo de Vida (ACV), a qual pode ser aplicada a inúmeros processos. Dessa forma, esse trabalho objetivou estimar os potenciais impactos ambientais gerados em uma unidade agropecuária multifuncional sob a perspectiva de ciclo de vida e a construção de um inventário de ciclo de vida (ICV) a partir dos aspectos ambientais pertinentes à unidade em estudo. A pesquisa foi desenvolvida na Divisão de Produção Rural (DPR) da Fundação Parque Zoológico de São Paulo, em Araçoiaba da Serra, a partir de sua divisão em subsistemas de acordo com as funções desempenhadas. Utilizou-se o software SimaPro para a inserção do ICV, o qual possui bases de dados contendo diversos aspectos ambientais, para a construção do ciclo de vida e cálculo dos potenciais impactos ambientais pelo método Eco-Indicator 99(H). Dentre as atividades desenvolvidas (educação ambiental, conservação e reprodução animal, produção agrícola e atividades de cunho administrativos), teve-se que os impactos ambientais da produção agrícola representaram 65,2% dos impactos globais da unidade no ano de 2016, sendo a maior parte influenciada pelo transporte semanal de produtos agrícolas. Destacam-se ainda os impactos ambientais decorrentes do cenário de destino final de todas as atividades, correspondendo ao deslocamento de resíduos não reciclados, principalmente resíduo orgânico e embalagens do tipo isopor, somando 53% dos impactos globais e fazendo com que a categoria de impacto ambiental mais influenciada fosse a de consumo de combustíveis fósseis. Estimandose um cenário de melhoria, encontra-se na compostagem de resíduos orgânicos a chance de diminuição de cerca de 10,3% dos impactos ambientais existentes em relação ao cenário original. / Over the years, technological and scientific development has evolved rapidly, leading to an increase in the consumption of matter, natural resources and energy, as well as the generation of waste, atmospheric emissions and effluents. In this way, public policies and norms were created to avoid, decrease and mitigate negative environmental impacts resulting from anthropogenic activities. In this context, life cycle thinking has emerged, in which all the environmental impacts generated by a process or product, from extraction of the raw material to disposal of residuals, are analyzed. As a consequence, there is the Life Cycle Assessment (LCA), an environmental management tool applied to various processes. This work aimed to estimate the potential environmental impacts generated in a multifunctional agricultural unit under the life cycle perspective and the construction of a life cycle inventory (LCI) from relevant resources for the unit studied. This research was developed in the Division of Rural Production (DRP) of the São Paulo Zoo Foundation, in Araçoiaba da Serra, dividing the unit in subsystems according to its functions. The SimaPro software, which has databases of different environmental aspects, was used to insert the LCI, the construction of the life cycle and the calculation of the potential environmental impacts by the Eco-Indicator 99(H) method. Among the activities carried out (environmental education, animal conservation and breeding, agricultural production and administrative activities), environmental impacts of agricultural production accounted for 65.2% of the total impacts of the unit in 2016, mostly influenced by the weekly transport of agricultural products. The environmental impacts from the disposal scenario of all activities are also highlighted, accounting for 53% of the global impacts and corresponding to the displacement of non-recycled waste, mainly organic waste and styrofoam packaging, implying consumption of fossil fuels the most influenced impact category. Estimating an improvement scenario, the organic decomposition of organic waste can decrease about 10.3% of environmental impacts in relation to the original scenario.