Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-17T17:42:44Z No. of bitstreams: 1 2009_HeitorCastroAlvesTeixeira.pdf: 614524 bytes, checksum: eee55f16afff873c87e0779c3280d3b0 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-17T17:43:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_HeitorCastroAlvesTeixeira.pdf: 614524 bytes, checksum: eee55f16afff873c87e0779c3280d3b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-17T17:43:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_HeitorCastroAlvesTeixeira.pdf: 614524 bytes, checksum: eee55f16afff873c87e0779c3280d3b0 (MD5) / O Brasil tem uma enorme experiência na reprodução assistida de seu rebanho bovino comercial, e dois protocolos de superestimulação ovariana foram desenvolvidos, para animais Bos taurus (P36) e Bos indicus (P24). Tendo em vista que o Banco Brasileiro de Germoplasma Animal (BBGA) possui um número reduzido de embriões estocados de bovinos naturalizados brasileiros, torna-se necessário o estudo da resposta desses animais a programas de superovulação para coleta de embriões. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi o de avaliar a resposta superestimulatória, a produção e a qualidade embrionária de matrizes do grupamento genético Curraleiro/Pé-duro utilizando os protocolos P24 e P36, visando promover o incremento de embriões desta população no BBGA. Doze vacas Curraleiras, originárias do rebanho de conservação da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, foram divididas aleatoriamente em três grupos experimentais: Controle, P24 e P36, em um delineamento experimental cross-over. Todas as doadoras tiveram o estro sincronizado e no quinto dia do ciclo estral as doadoras dos grupos P24 e P36 receberam implante intravaginal de progesterona e 2mg de benzoato de estradiol. A partir do nono dia do ciclo estral todas as doadoras receberam 133 mg de FSHp em oito doses decrescentes de 12 em 12 horas, com duas doses de 150μg de D-cloprostenol junto com a quinta e a sexta doses viii de FSH. Os tratamentos P24 e P36 diferiram em relação ao momento da retirada do implante de progesterona, 24h ou 36h após a primeira aplicação de D-cloprostenol. Todas as doadoras receberam 25μg de lecirelina no décimo terceiro dia do ciclo estral, com as inseminações realizadas 12 e 24 horas após. A coleta dos embriões foi feita sete dias após a primeira inseminação artificial. A avaliação dos ovários foi realizada, por ultrassonografia, no momento da administração da primeira e oitava doses de FSH, dois dias após a inseminação artificial e no momento da coleta dos embriões. Não houve diferença (P>0,05; Anova; Duncan) para resposta superestimulatória e superovulatória (folículos na emergência da onda, folículos ao fim da SOV, folículos não ovulados, corpos lúteos na coleta) entre os tratamentos. O número de estruturas totais foi maior (P<0,05) no P24 do que no Controle e o número de estruturas viáveis foi maior (P<0,05) no P24 e no P36 do que no Controle. O número de estruturas congeláveis e de estruturas inviáveis e a taxa de recuperação foram semelhantes entre os tratamentos (P>0,05). As vacas do grupamento genético Curraleiro/Péduro se apresentaram fisiologicamente mais próximas de animais taurinos quanto à resposta superovulatória e produção embrionária. Os resultados sugerem que seria mais indicado o uso dos protocolos de superovulação P24 ou P36 do que protocolos sem utilização de implante de progesterona em vacas Curraleiras/Pé-duro. Entretanto, devido a maior proporção entre estruturas congeláveis e totais alcançada com o uso do protocolo P36, sugere-se que este protocolo pode ser o mais indicado quando se visa o enriquecimento de bancos de germoplasma. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil has an enormous experience in the attended reproduction of its commercial cattle breeds, and two protocols of ovarian superestimulation were developed: one for Bos taurus (P36) and another for Bos indicus (P24) animals. The Brazilian Animal Gene Bank (BAGB) counts with a small number of stored embryos of local cattle breeds, for this reason it is necessary to study the response of those animals to superovulation and embryo transfer programs. The objective of this work was to evaluate superestimulatory response, embryo production and embryonic quality of Curraleiro/Pé-duro cows, using the protocols P24 and P36, seeking to promote the increase of criopreserved embryos of this population in BAGB. Twelve cows Curraleiro/Pé-duro, from the Conservation nucleus of Embrapa Genetic Resources and Biotechnology, were divided in three experimental groups: Control, P24 and P36, in a crossover experimental design. All cows had the estrus synchronized and in the fifth day of the estrus cycle, the cows of the groups P24 and P36 received an intravaginal progestogen implant and 2mg of estradiol benzoate. Starting from the ninth day of the estrus cycle all cows received 133 mg of FSHp in eight decreasing in 12 hours interval, with two doses of 150μg of D-cloprostenol with the fifth and the sixth doses of FSH. Treatments P24 and P36 differed in the moment of the progestogen implant removal, that ocurried 24 or 36 hours after the first application of D-cloprostenol. All cows received 25μg of lecireline in the thirteenth day of the estrus cycle, with the inseminations accomplished 12 and 24 hours after. x The embryo collection was done seven days after the first artificial insemination. The evaluation of the ovaries was done through ultrasound scanning, in the moment of the administration of the first and eighth doses of FSH, two days after the artificial insemination and in the moment of the embryo collection. There was no difference (P>0,05, Anova Duncan) for superestimulatory and superovulatory response (follicles in the wave emergency, follicles in the end of SOV, follicles not ovulated and corpora lutea) among treatments. The number of total structures was greater (P>0.05) in P24 than in the Control and the number of viable structures was greater (P>0,05) in P24 and in P36 than in the Control. The number of .frozen structures. unviable structures and recovery tax were not different (P>0,05) among treatments. The curraleiro/Pé-duro cows presented physiological behavior common to Bos taurus when superestimulatory response and embryo production were evaluated. The results suggest that the use of P24 or P36 superestimulation protocols were better than the use of protocols without progestogen implant in Curraleiro/Pé-duro cows. However, a greater proportion of frozen structures related to the total structures was reached with the use of the P36 protocol, what suggests that this is the one that should be used when the enrichment of germoplasm bank is sought.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-10T14:13:38Z No. of bitstreams: 2 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2017-01-13T15:38:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-13T15:38:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) / A falta de informação acerca da situação sanitária do rebanho de bovinos Crioulos Lageanos em relação às infecções causadas por HVB-1 e BVDV, motivou a realização desta pesquisa, que teve como principal objetivo mensurar a prevalência de anticorpos contra esses vírus em bovinos criados no Planalto Serrano Catarinense. O capítulo 1 revisa a bibliografia pertinente à raça Crioula Lageana, bem como às infecções causadas por Pestivírivus (BVD) e Herpesvírus (HVB-1) com enfoque nos agentes virais supracitados. Ambos os patógenos provocam perdas expressivas de produtividade, sendo as mais importantes relacionadas aos aspectos reprodutivos. Repetições de cio, abortamentos e nascimento de bezerros fracos ou natimortos são os sinais clínicos mais frequentemente observados. O capítulo 2 mostra a sorologia realizada em seis propriedades criadoras e as prevalências de anticorpos contra HVB-1 e BVDV encontradas (27,18 e 58,25%, respectivamente). Todas as fazendas analisadas tiveram animais positivos para os dois agentes virais, além disso, os altos títulos de anticorpos observados são um indicativo de atividade viral no rebanho. Por último, o capítulo 3 aborda a importância da implantação de medidas de biossegurança nas propriedades, considerando o caráter preservacionista da criação desses animais. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The lack of information about the sanitary situation of the Criollo Lageano herd regarding the infections caused by HVB-1 and BVDV motivated the study. The aim is to mensure the prevalence of antibodies against these viruses in bovines from the Santa Catarina Highland Plateau. The first chapter reviews the bibliography related to the Criollo Lageano breed, and also the infections caused by the bovine pestivirus (BVDV) and bovine herpesvirus 1 (BHV-1) focusing the above mentioned viral agents. Both pathogenous cause sound losses on production, being remarkable the losses regarding reproductive aspects. Rutting repetition, abortion and the birth of weak or stillbirth calves are the most common clinic signals observed. Chapter 2 shows the serology done in six farms where cattles are reared and the antibodies prevalences against HVB - 1 and BVDV found (27.18 and 58.25% respectively). All analysed farms had positive animals for both of the viral agents. Also, the high antibody titles observed indicates the viral activity in the herd. Furthermore, chapter 3 is preoccupied in showing the importance of the biosecurity measures in properties, considering the preservation of the species.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2015-10-07T12:05:17Z No. of bitstreams: 1 2010_FernandaPaulini.pdf: 3347183 bytes, checksum: 0e98600795c2662d94596a82b63bcf05 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-10-07T12:05:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_FernandaPaulini.pdf: 3347183 bytes, checksum: 0e98600795c2662d94596a82b63bcf05 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-07T12:05:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_FernandaPaulini.pdf: 3347183 bytes, checksum: 0e98600795c2662d94596a82b63bcf05 (MD5) / Os sistemas de cultivo de células da granulosa vêm se desenvolvendo com o intuito de assemelhar-se às condições esteroidogênicas encontradas in vivo no folículo ovariano. A remoção do ovócito resulta na luteinização espontânea das células somáticas foliculares, com alteração no padrão esteroidogênico, que também acontece quando estas células são colocadas em cultivo. Os fatores secretados pelo ovócito GDF9 e BMP15 possuem uma atuação importante, entretanto, ainda não totalmente esclarecida durante o processo de luteinização das células da granulosa. Com este trabalho objetivou-se expressar os genes GDF9 e BMP15 em cultivo de células da granulosa bovinas transgênicas e avaliar seus efeitos no processo de luteinização. Para a análise da luteinização, foram utilizados cultivo de células da granulosa transfectadas por lipossomos com vetores portando os genes GDF9 e BMP15, com coleta de meio e células obtidas diariamente durante 21 dias para dosagens de hormônios esteróides e análise da expressão gênica. Como marcador do processo de luteinização foi utilizado o gene StAR. A partir do mRNA das células foi possível verificar a expressão do GDF9, BMP15 e de seus respectivos receptores (ALK5, ALK6 e BMPRII). A análise da atividade esteroidogênica das células transgênicas demonstrou que a presença de GDF9 e BMP15 exerce inibição na produção do hormônio progesterona. O gene StAR, principal fator limitante da esteroidogênese, foi inibido após o pico de produção de progesterona, o que indicou uma provável atuação do GDF9 e BMP15 por meio desta via. Esse estudo aborda novas informações, que contribuem para o entendimento dos mecanismos moleculares e parácrinos pelos quais o ovócito é capaz de inibir a luteinização das células da granulosa, antes do início dos processos de maturação ovocitária e ovulação iniciados pelo pico de LH. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Granulosa cell culture is carried out to establish a similar steroidogenesis environment found in ovarian follicles. Somatic follicular cells spontaneously luteinize and modify their steroidogenesis activity when the oocyte is removed in the same away it happens in vivo. The GDF9 and BMP15 are oocyte secreted factors that have an important role on the luteinization of granulosa cells, but their effects are not totally understood. With the culture of transgenic bovine granulosa cells this work aimed to express the genes GDF9 and BMP15 and evaluate their effects on the luteinization process. Samples of cells and culture medium were obtained during 21 consecutive days to analyze the steroidogenic hormones concentration and gene expression. To confirm the expression of GDF9, BMP15 and their respective receptors (ALK5, ALK6 e BMPRII) the cDNA were amplified by PCR. The analysis of steroidogenic activity of transgenic cells demonstrated that the presence of GDF9 e BMP15 inhibits the production of progesterone and StAR gene expression. The StAR gene is the most limiting factor of steroidogenesis, and was used as a molecular marker of the luteinization process. This indicates that the inhibitory effect of GDF9 and BMP15 on the stereidogenesis use the StAR pathway. This study shed light in the molecular and paracrine mechanisms, by which the oocyte can inhibit the luteinization of granulosa cells before the induction of maturation and ovulation by the LH peak.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-graduação em Ciências Animais, 2014. / Submitted by Larissa Stefane Vieira Rodrigues (larissarodrigues@bce.unb.br) on 2014-12-11T17:52:36Z No. of bitstreams: 1 2014_RodrigoDornelesTortorella.pdf: 1610273 bytes, checksum: 0355b3b368491a0843c4c35c7dc827f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-12-12T15:01:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_RodrigoDornelesTortorella.pdf: 1610273 bytes, checksum: 0355b3b368491a0843c4c35c7dc827f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-12T15:01:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_RodrigoDornelesTortorella.pdf: 1610273 bytes, checksum: 0355b3b368491a0843c4c35c7dc827f5 (MD5) / O Curraleiro Pé-Duro possui como características desejáveis, a resistência ao estresse climático, ectoparasitas e endoparasitas. Contudo, atualmente encontra-se ameaçado devido ao pequeno número de animais existentes. Uma das alternativas para expandir a criação é o uso de biotecnologias da reprodução, que podem ser adaptadas para esta raça após um maior conhecimento da fisiologia reprodutiva das fêmeas. O trabalho teve por objetivo caracterizar a dinâmica folicular durante o ciclo estral na raça Curraleiro Pé-Duro e conhecer as respostas reprodutivas frente à inseminação artificial em tempo fixo (IATF). No Capítulo 2, novilhas (n = 12) e vacas (n = 11) não lactantes e cíclicas foram monitoradas (avaliação ultrassonográfica) diariamente durante um ciclo estral completo. Não houve diferença na dinâmica folicular entre novilhas e vacas. Desta forma, os dados foram combinados de acordo com o número de ondas foliculares. As fêmeas apresentaram predominantemente dois padrões de ondas foliculares, duas (36,8%) e três (63,2%), não havendo diferença na duração do ciclo estral entre estes. Nos animais com três ondas, a taxa de crescimento e máximo diâmetro do folículo ovulatório (FO) foram maiores em relação aos com duas ondas. Independentemente do padrão de ondas, a duração do FO foi menor do que do folículo dominante (FD) não ovulatório das outras ondas. O desenvolvimento (duração e volume) do corpo lúteo (CL) não diferiu entre os animais com duas e três ondas. No Capítulo 3, as avaliações ultrassonográficas foram realizadas a cada 8 horas até 5 dias após a ovulação, em novilhas (n = 11) e vacas (n = 11) não lactantes e cíclicas, para caracterizar com maior precisão a emergência e divergência folicular. Entre vacas e novilhas houve diferença apenas no tempo entre a ovulação e emergência (11,6 ± 3,3 h versus 20,3 ± 2,5 h, P ≤ 0,05) e a ovulação e divergência (52,4 ± 5,2 h versus 71,8 ± 4,1 h, P ≤ 0,05), respectivamente. Após a emergência folicular, a divergência ocorreu em torno de 45 horas e o tamanho do FD (8,1 ± 1 mm) foi similar ao maior folículo subordinado (FS, 7,6 ± 0,9 mm). A taxa de crescimento do FD e FS não diferiu até a divergência, sendo que após a taxa no FD manteve-se positiva enquanto que o FS regrediu. No Capítulo 4, foram verificadas as respostas foliculares e luteais de vacas cíclicas (n = 12), não lactantes e pluríparas frente à aplicação do benzoato de estradiol (BE) ou cipionato de estradiol (CE) como indutores da ovulação (Experimento 1), e a aplicação da gonadotrofina coriônica equina (eCG, Experimento 2) em protocolo de IATF. No Experimento 1, houve diferença apenas no momento da ovulação, sendo mais precoce e menos disperso nos animais que receberam o BE. No Experimento 2, o eCG não teve efeito benéfico sobre o crescimento folicular e luteal. Os dados obtidos no trabalho servirão de base para a manipulação do ciclo reprodutivo objetivando melhores resultados em programas de IATF e múltipla ovulação e transferência de embriões, ajudando assim na preservação e disseminação da raça. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Curraleiro Pé-Duro cattle have desirable adaptative traits as tolerance to climatic stresses and resistence to parasites. However, nowadays this breed is in dangerous due to the low number of animals. The use of reproductive biotechnologies could be an alternative to stimulate the spread of Curraleiro Pé-Duro. Although satisfactory results will just be achieved after knowledgement of female reproductive physiology. Thus, the aim of the present study was to characterize ovarian follicular dynamics during estrous cycle and reproductive responses after a fixed-time artificial insemination (FTAI). In Chapter 2, cyclic heifers (n = 12) and non-lactating, multiparous cows (n = 11) were examined daily by ultrasonography for two consecutive ovulations (an estrous cycle). Follicular and luteal characteristics were not different between heifers and cows. Consequently, data on cows and heifers were combined according to the number of follicular waves. Follicular dynamics was characterized by the predominance of two (36.8%) and three (63.2%) follicular waves. No difference in estrous cycle length between these follicular wave patterns was observed. The ovulatory follicle (OF) growth rate and maximum diameter were greater (P ≤ 0.05) in females showing three waves. The ovulatory wave was shorter (P ≤ 0.05) than the preceding waves regardless of the wave pattern. No difference was found in corpus luteum (CL) development (volume and life-span) between females with two and three follicular wave patterns. In Chapter 3, cyclic heifers (n = 11) and non-lactating, multiparous cows (n = 11) were examined every 8 hours by ultrasonography until five days after ovulation (D 0) to characterize ovarian follicular emergence and deviation. The interval from ovulation to emergence (11.6 ± 3.3 h versus 20.3 ± 2.5 h, P ≤ 0.05) and ovulation to deviation (52.4 ± 5.2 h versus 71.8 ± 4.1 h, P ≤ 0.05) was shorter in cows than in heifers, respectively. No other difference was observed between cows and heifers. DF diameter (8.1 ± 1 mm) did not differ (P = 0.09) from the largest subordinate follicle (SF) diameter (7.6 ± 0.9 mm) at the moment of deviation (around 45 hours after emergence). DF and SF growth rates were similar until deviation, at this moment SF growth rate decreased while DF growth rate remained constant. In Chapter 4, the aim was to evaluate the effects of estradiol benzoate (EB) and estradiol cypionate (CE) as ovulatory inducers (Experiment 1) and equine chorionic gonadotropin (eCG, Experiment 2) on follicular and luteal dynamics in a FTAI protocol. In Experiment 1, interval from P4 removal to ovulation was shorter and less variable in EB group (P ≤ 0.05). In Experiment 2, eCG did not to improve (P > 0.05) follicular and luteal growth. Data from this study will be useful to a better estrous cycle manipulation to achieve good results in artificial insemination, FTAI and multiple ovulation and embryo transfer programs aiming breed conservation and spread.