Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-05T13:27:43Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Cecília Da Cunha Camilo.pdf: 1238897 bytes, checksum: e26e3eb86bc9e96ee8e82757d4858f3e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-05T13:28:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Cecília Da Cunha Camilo.pdf: 1238897 bytes, checksum: e26e3eb86bc9e96ee8e82757d4858f3e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-05T13:28:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Cecília Da Cunha Camilo.pdf: 1238897 bytes, checksum: e26e3eb86bc9e96ee8e82757d4858f3e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-05T13:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Cecília Da Cunha Camilo.pdf: 1238897 bytes, checksum: e26e3eb86bc9e96ee8e82757d4858f3e (MD5) Previous issue date: 2012-12-06 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Mycoplasmas are microorganisms lacking cell walls with reduced ability Biosintética, which makes them extremely fastidious growth. The strength of these microorganisms to antimicrobials used in his therapy as tetracyclines, macrolides and quinolones have been reported with increased frequency. The determination of antimicrobial susceptibility is particularly difficult because not shown in broth turbidity which complicates the standardization of the inoculum and are extremely susceptible pH conditions. The method most commonly used for this purpose is based on metabolic inhibition using specific substrates. This study evaluated the susceptibility of isolates of Mycoplasma hominis and Ureaplasma sp. stored in the period from 2011 to 2012. The methodology used for the isolation comprised culture techniques, for storage and freezing of the strains we used selective broth enriched PPLO and BHI, Thawing of isolates was succeeded subculture in broth enriched selective and differential agar A7 for phenotypic characterization. Quantification, identification and antimicrobial susceptibility testing was performed using the the triage system Mycofast Evolution ® Screening (Elitech Group), whose identification is based on bacterial susceptibility by Identibiotiqué system. The susceptibility of the isolates was determined against antimicrobial agents Doxiciclina 8 μg/ml, Roxitromicina 4 μg/ml and Ofloxacina 4 μg/ml, widely used in the empirical treatment of patients with urogenital tract infections. Our study showed high level of resistance of the isolates to doxicycline and ofloxacin. This is the first study involving isolation and susceptibility profile of these agents undertaken in the Amazonia. / Micoplasmas são microrganismos desprovidos de parede celular, com reduzida capacidade Biossintética, o que os torna extremamente fastidiosos ao crescimento. A resistência destes microrganismos aos agentes antimicrobianos utilizados na sua terapia como as tetraciclinas, macrolídeos e quinolonas tem sido relatadas com frequência cada vez maior. A determinação da susceptibilidade a antimicrobianos é particularmente difícil porque não mostram turbidez em caldo o que dificulta a padronização do inóculo e são extremamente susceptíveis as condições de pH. A metodologia utilizada para este fim baseia-se na inibição metabólica utilizando substratos específicos. O presente trabalho avaliou a susceptibilidade de isolados de Mycoplasma hominis e Ureaplasma sp. arrmazenados no período de 2011 a 2012. A metodologia utilizada englobou técnicas de cultura; para a estocagem e congelamento das cepas empregou-se caldo seletivo enriquecido PPLO e BHI, O descongelamento dos isolados foi sucedido de subcultivos em caldos enriquecidos seletivos diferenciais e Agar A7 para caracterização fenotípica. A quantificação, a identificação e o teste de susceptibilidade a antimicrobianos foi realizada através do sistema de triagem Mycofast® Screening Evolution (Elitech Group), cuja identificação se baseia na susceptibilidade bacteriana pelo sistema Identibiotiqué. A susceptibilidade dos isolados foi determinada frente aos antimicrobianos doxiciclina 8 μg/ml, roxitromicina 4 μg/ml e ofloxacina 4 μg/ml, amplamente utilizados no tratamento empírico de pacientes com infecções do trato urogenital. Nosso estudo detectou alto nível de resistência dos isolados armazenados para doxiciclina e ofloxacina. Este é o primeiro estudo envolvendo isolamento e o perfil de susceptibilidade destes agentes realizado na região norte.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anna Carolina da Costa.pdf: 691308 bytes, checksum: 6714037f8e5e5965d7add36bb39f6e67 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / This study was conducted on 12 dairy farms and in laboratories Bacteriology and Quality of Milk, both of the School of Veterinary Medicine Federal University of Goias objective of this study to characterize the microorganisms in milk from cows with subclinical mastitis and relate the pathogens identified with the variation of cell count somatic (CCS), also identify the risk factors and the likely sources of infection to subclinical mastitis, by visual observations, application of questionnaires, by isolation and identification of pathogens from the hands of milkers, swabs and solutions liners and pre posdipping. The profile sensitivity to key antimicrobial and bactericidal effect of the extract of Calendula officinalis has been determined on the pathogens isolated in most cases subclinical mastitis in herds. To evaluate the variation of CCS in relation to the pathogens involved, we used analysis of frequency and Chi-square, and the risk factors were analyzed for Logistic regression to test associations between variables and increased CCS. It was found that agents with higher frequency of isolation were S. aureus (28.8% of samples), E. coli (19.8%) and Enterobacter spp. (11.3%). CCS average herd was approximately 875 x 103cél/mL, and the type etiologic agent of a significant influence on the variation in SCC. It was found that S. aureus and Streptococcus spp. were responsible for greater increase in SCC, with an average of 1192 x 1174 x 103cél/mL and 103cél/mL, respectively. This variation was significantly higher (p <0.05) when compared to the average SCC in milk were the other isolates microorganisms: S. coagulase negative, Pseudomonas spp., E. coli and Enterobacter spp. It was found that the risk factors that showed significant association with increased SCC were unsatisfactory hygiene environment and milker, inadequate drying of the teats, and factors related to milking equipment, such as poor maintenance and inadequate cleaning. The hands of the milkers and the sets of liners were able to convey both the infectious agents as the environment, important in epidemiology of bovine mastitis. It was also concluded that the extract of marigold showed bactericidal activity in vitro against S. aureus isolates, and antimicrobial agents used showed variation in the spectrum of sensitivity. / O presente trabalho foi conduzido em 12 explorações leiteiras e nos Laboratórios de Bacteriologia e de Qualidade de Leite, ambos da Escola de Veterinária da Universidade Federal de Goiás. Objetivou-se neste estudo caracterizar a população microbiana presente no leite de vacas com mastite subclínica e relacionar os patógenos identificados com a variação da contagem de células somáticas (CCS), além de identificar os fatores de risco e as prováveis fontes de infecção para a mastite subclínica, através de observações visuais, aplicação de questionários, pelo isolamento e identificação de patógenos das mãos de ordenhadores, suabes de teteiras e em soluções de pre e posdipping. O perfil de sensibilidade aos principais antimicrobianos e o efeito bactericida do extrato da Calendula officinalis foi determinado sobre os patógenos mais isolados em casos de mastite subclínica dos rebanhos estudados. Para avaliação da variação da CCS em relação aos patógenos envolvidos utilizou-se análises de frequência e o teste de qui-quadrado, e para os fatores de risco foram realizadas análises de Regressão Logística para testar associações entre as variáveis e o aumento da CCS. Constatou-se que os agentes com maior frequência de isolamento foram S. aureus (28,8% das amostras), E. coli (19,8%) e Enterobacter spp. (11,3%). A CCS média dos rebanhos foi de aproximadamente 875 x 103cél/mL, sendo que o tipo de agente etiológico apresentou efeito significativo sobre a variação na CCS. Verificou-se que S. aureus e Streptococcus spp. foram os responsáveis pela maior elevação da CCS, com média de 1.192 x 103cél/mL e 1.174 x 103cél/mL, respectivamente. Essa variação foi significativamente maior (p < 0,05) ao ser comparado às CCS médias do leite em que foram isolados os demais microrganismos: S. coagulase negativo, Pseudomonas spp., E. coli e Enterobacter spp. Verificou-se que os fatores de risco que apresentaram associação significativa com o aumento da CCS foram higiene insatisfatória do ambiente e ordenhador, secagem inadequada dos tetos, e fatores relacionados ao equipamento de ordenha, como falta de manutenção e limpeza inadequada. As mãos dos ordenhadores assim como os conjuntos de teteiras foram capazes de veicular tanto os agentes contagiosos quanto os ambientais, importantes na epidemiologia da mastite bovina. Conclui-se também que o extrato de calêndula apresentou atividade bactericida in vitro sobre S. aureus isolados, e os antimicrobianos utilizados apresentaram variação no espectro de sensibilidade.

Esse estudo comparou diferentes métodos fenotípicos e biomoleculares para avaliação da resistência antimicrobiana de 107 cepas de Salmonella spp. Isoladas de carcaças e couro de bovinos e de produtos cárneos. Os antimicrobianos testados foram ampicilina, cefotaxima, cloranfenicol, ciprofloxacina, gentamicina, imipenem, tetraciclina e trimetoprima. Os testes fenotípicos empregados foram: difusão do disco em ágar, utilizando discos produzidos por duas empresas diferentes e determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), realizada em placas de microtitulação e empregando tiras comerciais de antibióticos. O método biomolecular (PCR) objetivou a pesquisa de genes de resistência a antimicrobianos (blaTEM, blaOXA-1, blaPSE-1, cat1, cat2, floR, cmlA, cmlB, aac(3)IVa, aadB, aadD, aphA1, tetA, tetB, tetC, tetD, tetE, tetG e dhfrI) , localizados no cromossomo, plasmídeos e integrons classe 1, e foi aplicado para as cepas que apresentaram resistência a pelo menos um dos antibióticos testados por algum dos testes fenotípicos e para as cepas que apresentaram resultados contraditórios nos testes fenotípicos. Todos os métodos foram executados de acordo com as normas do ClinicaI and Laboratory Standards Institute. Foi detectada resistência a pelo menos um antibiótico em 26 cepas (24%), sendo que 20 (77%) dessas foram multirresistentes. A correlação de resultados obtidos pelo método de difusão de discos empregando os discos de duas marcas diferentes foi de 99,7%, enquanto a correlação dos resultados obtidos pelos dois métodos de determinação da CIM foi de 98,6%. Para os resultados obtidos pelos métodos de difusão de discos e determinação da CIM a correlação foi de 98,4%. Não foi observada uma boa correlação entre a presença dos genes detectados e o resultado apresentado pelos métodos fenotípicos. / This study compared different phenotypic and molecular methods for the evaluation of antimicrobial resistance of 107 strains of Salmonella spp. isolated from hides and carcasses of cattle and meat products. The antimicrobials tested were ampicillin, cefotaxime, chloramphenicol, ciprofloxacin, gentamicin, imipenem, tetracycline and trimethoprim. Phenotypic tests included agar disk diffusion, using disks produced by two different companies and determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) conducted in microtiter plates and commercial antibiotic strips. The biomolecular method (PCR) focused antimicrobial resistance genes (blaTEM, blaOXA-1, blaPSE-1, cat1, cat2, floR, cmlA, cmlB, aac(3)IVa, aadB, aadD, aphA1, tetA, tetB, tetC, tetD, tetE, tetG e dhfrI) located on chromosomes, plasmids and class 1 integrons, and was applied to the strains that were resistant to at least one of the antibiotics tested as detected by the phenotypic tests and to strains that showed contradictory results in the phenotypic tests. All methods were performed according to the standards of the Clinical and Laboratory Standards Institute. Resistance to at least one antibiotic was detected in 26 strains (24%), and 20 (77%) of these were multidrug-resistant. The correlation between results obtained by disk diffusion method using discs of two different brands was 99.7%, while the correlation of the results obtained by the two methods of determining the MIC was 98.6 %. For the results of the methods of disc diffusion and MIC determination the correlation was 98.4%. There was no good correlation between the presence of genes detected and the result presented by phenotypic methods.

Introdução: As enzimas do grupo AmpC degradam cefalosporinas e cefamicinas e não são inibidas pelo ácido clavulânico, sulbactam ou tazobactam. Podem ser codificadas por genes de localização plasmidial ou cromossômica. A sua detecção tem importância epidemiológica, pois a expressão concomitante à perda de porinas em Enterobactérias pode levar à resistência aos carbapenêmicos, fármacos amplamente utilizados no tratamento de infecções graves. Os relatos de detecção de AmpC plasmidial no Brasil são escassos, mas a análise do perfil de sensibilidade de Escherichia coli isoladas de casos de infecções urinárias de pacientes atendidos em um laboratório privado da cidade de São Paulo, no período de 2006 à 2010, evidenciou um aumento considerável de resistência à cefoxitina, um marcador para expressão de AmpC plasmidial. Em 2006 a frequência era de 0,03% e em 2011 foi de 0,65%. Uma das hipóteses para esse aumento é a disseminação de clones ou de genes que codificam AmpC, transferidos em plasmídeos. Objetivo: Caracterizar os determinantes genéticos em E. coli com fenótipo compatível com produção de AmpC plasmidial. Material e métodos: Foram estudadas todas as E. coli isoladas de cultura de urina, não sensíveis à cefoxitina, detectadas no Fleury Medicina e Saúde em São Paulo, no período de 02 de janeiro a 01 de fevereiro de 2012. Os isolados foram avaliados fenotipicamente quanto à pureza, identificação da espécie e bloqueio enzimático com discos de cefoxitina e ceftazidima adicionados de ácido fenilborônico. A presença de genes que codificam AmpCs plasmidiais foi avaliada utilizando-se dois métodos distintos de PCR. Foi realizado o sequenciamento dos genes detectados. O desempenho do bloqueio enzimático com ácido fenilborônico foi determinado utilizando-se a PCR como padrão ouro. O perfil plasmidial e a clonalidade foram avaliados respectivamente por lise alcalina e ERIC-PCR. Resultados e conclusões: De um total de 2.494 E. coli 12 albergavam genes de AmpC plasmidial; a frequência de AmpC plasmidial foi portanto de 1,8% em pacientes hospitalizados 0,46% em pacientes ambulatoriais. O sequenciamento dos genes que codificam AmpCs plasmidiais evidenciou tratarem-se de 11 blaCMY-2 e uma blaCMY-4. O melhor desempenho do teste fenotípico com cefoxitina, ceftazidima e ácido fenilborônico foi obtido quando utilizados um mínimo de 5 mm de diferença entre o halo de inibição com o disco adicionado de ácido fenilborônico e puro para cefoxitina e ceftazidima. Com esses parâmetros a sensibilidade foi de 100,0%, a especificidade de 100%, o valor preditivo positivo 100 % e valor preditivo negativo 100%. Foi observada a presença e disseminação de três grupos clonais de E. coli produtoras de CMY entre hospitais na cidade de São Paulo. / Introduction: AmpC enzymes can degrade cephalosporins and cephamycins and are not inhibited by clavulanic acid, sulbactam or tazobactam. They can be encoded by genes of plasmid or chromosomal location. Detecting these enzymes is epidemiologically important because their expression and concomitant porins loss in Enterobacteriaceae can lead to resistance to carbapenems, antimicrobials widely used to treat serious infections. Reports of detection of plasmidial AmpCs in Brazil are scarce, but the analysis of the susceptibility profile of Escherichia coli isolated from cases of urinary tract infection in patients attended in a private laboratory, located at the city of São Paulo, from 2006 to 2010 indicated a considerable increase in cefoxitin resistance, a marker for plasmidial AmpC expression. In 2006 the rate was 0.03% and in 2011 it was 0.65%. One hypothesis for this increase was the spread of clones or genes encoding AmpC transferred into plasmids. Objective: To characterize the genetic determinants in E. coli presenting a phenotype consistent with plasmidial AmpC production. Material and Methods: We studied all E. coli not susceptible to cefoxitin isolated in urine cultures at Fleury Medicine and Health, in São Paulo, during the period from January 2nd to February 1st 2012. The isolates were phenotypically evaluated for purity, species identification and enzymatic blockage with cefoxitin and ceftazidime disks with added phenylboronic acid. The presence of genes encoding plasmidial AmpCs was evaluated using two different PCR methods. Sequencing of the genes detected was obtained. The performance of the enzymatic blockage with phenylboronic acid was determined using PCR as a gold standard. The plasmid profile and clonality were evaluated respectively by alkaline lysis and ERIC-PCR. Results and conclusions: Among 2,494 E. coli isolates, 12 had genes encoding for plasmidial AmpC; consequently the frequency of plasmidial AmpC in E. coli was 1.8% in inpatients and 0.46% in outpatients. Sequencing of the genes encoding plasmidial AmpCs showed them to be blaCMY-2 and just one blaCMY-4. The better performance of the phenotypic test was obtained when at least 5 mm inhibition zone difference was observed between the disc of cefoxitin and ceftazidime with added phenylboronic acid. With these parameters the sensitivity was 100%, specificity 100%, positive predictive value 100% and negative predictive value 100%. The presence and the dissemination of three clonal groups of CMY producing E. coli was observed among hospitals located at the city of São Paulo

A Bordetella avium é o agente etiológico da bordetelose aviária, uma doença altamente contagiosa que afeta o trato respiratório superior das aves. B. avium adere-se preferencialmente às células do epitélio ciliado traqueal, promovendo inflamação e deformação da mucosa respiratória. As infecções do trato respiratório das aves resultam em grandes prejuízos para toda indústria avícola, desta forma, o presente estudo teve como objetivo a caracterização genotípica e de sensibilidade a antimicrobianos de isolados de B. avium provenientes de perus com histórico de aerossaculite. Dentre os 300 animais examinados, isolou-se B. avium de 13 aves e foram selecionadas 20 cepas do agente para os estudos posteriores. Através do antibiograma realizado pela técnica de disco difusão observou-se um alto número de cepas resistentes aos antimicrobianos beta lactâmicos (amoxacilina, ampicilina, penicilina e ceftiofur), assim como para lincomicina, sulfonamidas e combinação sulfonamidas/trimetoprima (cotrimoxazol) e uma grande heterogeneidade resultando em 15 perfis distintos. Os antimicrobianos com maiores níveis de sensibilidade foram o florfenicol, seguidos pelas quinolonas, doxiciclina e pelas tetraciclinas. Todas as cepas foram caracterizadas através da PFGE e do AFLP, apresentando 15 pulsotipos e 16 perfis genotípicos respectivamente. Os métodos fenotípicos e genotípicos apresentaram capacidade discriminatória semelhante e revelaram uma grande diversidade dentre os isolados analisados. / Bordetella avium is the etiologic agent of avian bordetellosis, a highly contagious disease that affects the upper respiratory tract of birds. B. avium adheres preferentially to ciliated tracheal epithelial cells, promoting inflammation and deformation of the respiratory mucosa. Infections of the respiratory tract of birds resulting in large losses for the entire poultry industry in this way, this study aimed to characterize genotypic and antimicrobial susceptibility of isolates of B. avium from turkeys with a history of Airsacculitis. Among the 300 animals examined, B. avium was isolated from 13 turkeys and 20 strains were selected for further studies. Through the antibiogram performed by disk diffusion technique was observed a high number of strains resistant to beta-lactamic antibiotics (amoxicillin, ampicillin, penicillin and ceftiofur), as well as, lincomycin, sulfonamides and sulfonamide combination/ trimethoprim (cotrimoxazole) and a high level of heterogeneity resulting in 15 different profiles. The antimicrobials with higher levels of sensitivity were florfenicol, followed by quinolones, doxycycline and tetracycline. All strains were characterized through to PFGE and AFLP, presenting 15 pulsotypes and 16 genetic profiles, respectively. Phenotypic and genotypic methods showed similar discriminatory capacity and presented a high diversity among isolates examined.

A mastite representa um grande desafio na pecuária leiteira, visto que é uma das afecções que mais acometem o rebanho bovino ocasionando grande impacto econômico. As bactérias são importantes agentes associados à enfermidade, sendo que as mais comumente encontradas são as do gênero Staphylococcus, associadas tanto às manifestações clínicas quanto subclínicas. A terapia antimicrobiana é usualmente requerida como tratamento, auxiliando as defesas do animal para a eliminação do agente invasor, sendo assim, de suma importância monitorar a sensibilidade dos patógenos aos antimicrobianos. Visto que a resistência aos medicamentos utilizados tem se tornado frequente, há a necessidade de estudos mais abrangentes sobre o assunto. Desta forma, o presente estudo avaliou 300 isolados de Staphylococcus provenientes de amostras de leite de bovinos com mastite clínica e/ou subclínica de propriedades de exploração leiteira. A espécie mais detectada nas análises foi S. aureus, e dentre os genes que codificam para adesinas e biofilmes os mais frequentes foram (eno, fib e fnbA) e (bap, icaA, icaD). A combinação mais frequente no tocante às adesinas foi eno-fib-fnbA, e para os biofilmes foram bap e bap-icaD. Os maiores índices de resistência foram verificados para os antimicrobianos betalactâmicos (amoxicilina, ampicilina e penicilina). Identificou-se as maiores frequências de sensibilidade para cefalotina, seguida pela oxacilina e gentamicina, e não foi detectada relação de concordância da oxacilina com os betalactâmicos. Avaliou-se a concentração mínima inibitória (MIC) para ampicilina, gentamicina, oxacilina e penicilina, para todas as cepas resistentes no antibiograma. Posteriormente, investigou-se os genes responsáveis pela codificação de resistência antimicrobiana, com os genes femA e femB sendo os mais comuns, porém o gene femA não foi detectado em todas as cepas de S. aureus. Os genes mecA e bla<//i>Z foram identificados, porém em baixa frequência, e o homólogo de mecA, o mecALGA251, somente em duas cepas. As informações obtidas podem ajudar em diferentes aspectos acerca dos perfis dos microrganismos no tocante aos fatores de virulência dos mesmos, permitindo novas abordagens relativas a terapias e medidas de prevenção à mastite. / Mastitis represents a major challenge in dairy farming, since it is one of the affections that most impact the cattle herd, causing great economic distress. Bacteria are important agents associated with the disease, and the most commonly found are those of the genus Staphylococcus, associated with both clinical and subclinical manifestations. Antimicrobial therapy is usually required as a treatment, assisting the animal\'s defenses to eliminate the invading agent, and it is therefore of paramount importance to monitor the susceptibility of pathogens to antimicrobials. Since resistance to drugs commonly used has become frequent, there is a need for more comprehensive studies on the subject. Thus, the present study evaluated 300 isolates of Staphylococcus from samples of dairy cattle from dairy farms. The most prevalent species in the analyses were S. aureus, and among the genes coding for adhesins and biofilms the most frequent combinations were (eno, fib and fnbA) and (bap, icaA, icaD). The most frequent combination for adhesins was eno-fib-fnbA, and for biofilms they were bap and bap-icaD. The highest resistance indices were verified for betalactam antibiotics (amoxicillin, ampicillin and penicillin). The highest frequencies of sensitivity were identified for cephalothin, followed by oxacillin and gentamicin, and no concordance relationship was found between oxacillin and betalactam. Minimum inhibitory concentration (MIC) for ampicillin, gentamicin, oxacillin and penicillin were performed for all strains resistant to the antibiogram. Subsequently, the genes responsible for the encoding of antimicrobial resistance were investigated, with the femA and femB genes being the most common, but the femA gene was not detected in all strains of S. aureus. The mecA and blaZ genes were identified, but at low frequency, and the mecA homolog, mecALGA251, was only found in two strains. The information obtained can help in different aspects about the microorganisms\' profiles regarding their virulence factors, allowing new approaches to therapies and mastitis prevention measures.

Introdução. A introdução dos antimicrobianos na prática clínica no século XX foi um grande avanço para a medicina. Entretanto, seu uso indiscriminado, tanto na medicina (humana e animal) quanto na agricultura e pecuária, possibilitou a seleção e disseminação de microrganismos resistentes. A transferência genética horizontal é um dos principais mecanismos responsáveis pela disseminação de genes que codificam resistência aos antimicrobianos, pois possibilita a transmissão da resistência de uma célula bacteriana (comensal ou patogênica) para outra. Genes codificadores de resistência a antimicrobianos de importância clínica são encontrados em microrganismos de origem ambiental, clínica e alimentar. Objetivo. O objetivo do presente estudo foi detectar genes que codificam resistência aos antibióticos -lactâmicos, Tetraciclinas e Quinolonas, em amostras de carne de frango, visando estudar a ocorrência da resistência antimicrobiana nesse produto considerado um alimento comum na dieta do homem. Materiais e Métodos. Foram utilizadas 30 amostras de carne de frango. Após a inoculação da carne de frango em caldo Luria 0,5 por cento , o DNA total das bactérias cultivadas nesse meio foi extraído por choque térmico e utilizado na pesquisa de genes de resistência pela técnica de PCR seguida de eletroforese em gel de agarose. Foi também realizada a pesquisa de Coliformes Termotolerantes por meio da técnica dos tubos múltiplos para estimar a qualidade higiênico sanitária das amostras. Resultados: Oito (26,7 por cento ) amostras apresentaram um ou mais genes codificadores de resistência à antimicrobianos -Lactâmicos, 28 (93,3 por cento ) amostras apresentaram um ou mais genes codificadores de resistência às Tetraciclinas e 28 (93,3 por cento ) amostras apresentaram um ou mais genes codificadores de resistência às Quinolonas. Conclusões: A realização deste estudo contribuiu com informações a respeito da circulação de genes de resistência na carne de frango e alerta as autoridades de Saúde Pública do Brasil quanto à disseminação da resistência bacteriana e a necessidade de mais estudos a respeito desse problema, já que esses são raros ou inexistentes no País. / Introduction. The introduction of antibiotics in clinical practice in the twentieth century was a breakthrough for medicine. However, their indiscriminate use in both medicine (human and animal) as in agriculture and livestock, enabled the selection and spread of resistant microorganisms. Horizontal gene transfer is a major mechanism responsible for the spread of genes encoding antimicrobial resistance, since it allows the transmission of resistance from one bacteria to another. Genes encoding resistance to antimicrobials of clinical importance are found in microorganisms present in food, environment and clinical sources. Objective. The aim of this study was to detect genes encoding resistance to -lactam antibiotics, tetracyclines and quinolones in meat samples from chicken samples, to study the occurrence of antimicrobial resistance in this product considered a common food in human diet. Materials and Methods. Thirty samples of chicken were used. After inoculation of chicken meat in Luria broth 0.5 per cent , the total DNA of the bacteria cultured was extracted by heat shock and used to search resistance genes by PCR followed by agarose gel electrophoresis. The search for thermotolerant coliforms was also conducted using the technique of multiple tubes in order to estimate the sanitary quality of the samples. Results: Eight (26,7 per cent ) of the samples had one or more genes encoding for resistance to -lactam antimicrobials, 28 (93,3 per cent ) had one or more genes encoding resistance to tetracyclines and 27 (93,3 per cent ) samples had one or more genes encoding resistance to quinolones. Conclusions: This study contributes to the scientific community and sanitary agencies, bringing information regarding the occurrence and distribution of resistance genes in chicken, alerting the Public Health authorities in Brazil about the spread of bacterial resistance and the need for more studies in this field, as these are rare or nonexistent in the country.

Os prejuízos causados por Escherichia coli patogênica para aves (APEC) na produção de aves é justificativa de pesquisas realizadas no mundo todo há décadas. Recentemente, o potencial zoonótico e a multirresistência das cepas desse patotipo têm sido alvo frequente dos trabalhos realizados com APEC. O objetivo desse trabalho foi caracterizar 225 cepas APEC isoladas de perus condenados por aerossaculite em abatedouros em relação à resistência a 14 antimicrobianos, perfil de virulência e grupos filogenéticos. 92% das amostras apresentaram perfil de multirresistência (MDR) e os índices mais altos de resistência foram a sulfonamidas (94%), tetraciclina (83%), eritromicina (82%), estreptomicina (60%), amoxicilina (53%) e ácido nalidíxico (48%). Metade das cepas foram classificadas no grupo filogenético B2 (50%), seguido por B1 (28,6%), grupo A (17,1%) e grupo D (4,8%). Os genes de virulência pesquisados tiveram prevalência de iroN (95%), iss (93%), cvi/cva (67%), iucD (67%), tsh (56%), irp2 (51%), ibeA (31%), vat (24%), neuS (19%), astA (17%) e papC (15%). Considerando o potencial zoonótico e a associação a um maior número de genes de virulência quando comparadas aos outros grupos filogenéticos, as cepas B2 foram selecionadas para pesquisa de integrons de classe 1 e clonalidade. As 112 amostras B2 eram pertencentes a 83 diferentes perfis ERIC, sendo classificadas como multiclonais. Os integrons de classe 1 estiveram presentes em 107 isolados (95,5%). Esses resultados demonstram que a maioria das cepas pesquisadas pertencia ao grupo mais virulento (B2) e relacionado a cepas ExPEC humanas. Aliado ao alto índice de multirresistência encontrado, esses dados sugerem que as aves podem servir como reservatório de cepas patogênicas e multirresistentes, tanto para humanos como para animais, reforçando a ideia de que as aves representem importante papel na cadeia epidemiológica das ExPEC. / Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC) has been studied for decades because of its economic impact on the poultry industry. Recently, the zoonotic potential of APEC and multidrug-resistant strains have emerged. The aim of this study was to investigate the virulence profile, phylogenetic background and antimicrobial resistance in 225 strains of Escherichia coli isolated from turkeys presenting airsacculitis. The results showed that 92% of strains presented a multidrug-resistance (MDR) profile, and the highest levels of resistance were to sulfamethazine (94%), tetracycline (83%). Half of these strains (112/225) were classified in phylogenetic group B2, followed by groups B1 (28.6%), A (17.1%) and D (4.8%). The prevalence of virulence genes was as follows: iroN (95%), iss (93%), cvi/cva (67%), iucD (67%), tsh (56%), irp2 (51%), ibeA (31%), vat (24%) neuS (19%), astA (17%) and papC (15%). Considering the zoonotic potential and association to a greater number of virulence genes when compared to other phylogenetic groups, B2 strains were selected for screening of class 1 integrons and clonality. The 112 samples belonging to 83 ERIC profiles and classified as multiclonal. Class 1 integrons were present in 107 isolates (95.5%).These results demonstrate that the majority of the investigated strains belonged to group B2, which is more virulent and is related to human ExPEC strains. Coupled with the high rate of multidrug-resistance found, these data suggest that turkeys may serve as a reservoir for pathogenic and multidrug-resistance strains, for humans and animals, reinforcing the idea that poultry plays an important role in the epidemiological chain of ExPEC.

A tuberculose, causada por Mycobacterium tuberculosis, ainda é uma emergência de saúde pública global. O surgimento das cepas multirresistentes (MDR) e das cepas extensivamente resistentes (XDR) agravam a situação, diminuindo o número de fármacos disponíveis para o tratamento. Embora a isoniazida seja uma das primeiras moléculas introduzidas no tratamento da tuberculose, diferentes mecanismos de resistência têm sido propostos e o tema ainda não foi totalmente esclarecido. Neste trabalho foi realizada a caraterização estrutural e biofísica de 7 mutantes da proteína InhA identificadas a partir de isolados clínicos de M. tuberculosis resistentes à isoniazida. Os ensaios de calorimetria de titulação isotérmica (ITC) mostram diminuições nos valores da constante de dissociação (Kd) dos mutantes para os NADH em aproximadamente cinco vezes quando comparado com a proteína selvagem. As estruturas cristalográficas dos mutantes de InhA mostram novas moléculas de água que parecem estar envolvidas nas variações entrópicas e entálpicas observadas em dados calorimétricos. Estes resultados corroboram e sugerem que a diminuição na afinidade pelo NADH e a desestabilização do tetrâmero de InhA podem ser fenômenos associados a resistência à isoniazida. / Tuberculosis, caused by the infection of Mycobacterium tuberculosis, still remains as a global health emergency. The emergence of multidrug-resistant strains (MDR) and extensively drug-resistant strains (XDR) strains further aggravates the crisis, reducing the limited number of drugs available for the treatment of the disease. Even though isoniazid was one of the first drugs introduced in the antitubercular therapy, many resistance mechanisms were proposed and the subject is still not clear. In this work, a structural and biophysical characterization of seven mutant InhA proteins identified in clinical M. tuberculosis strains resistant to isoniazid were performed. Isothermal titration calorimetry (ITC) assays showed a decrease in the dissociation constant (Kd) values of the InhA mutants by up to almost five-fold when compared to the wild-type protein. Crystallographic structures of InhA mutants showed new water molecules that appear to be involved in the entropic and enthalpic variations described by the thermodynamic assays. These results corroborate and suggest that the decrease in affinity for NADH and the destabilization of the InhA tetramer may be the phenomena associated to isoniazid resistance.

O patógeno Escherichia coli pertence ao grupo de cepas que podem causar infecções extraintestinais, designadas como (ExPEC). Existem cepas de E. coli ExPEC, tais como: a E. coli causadora de meningite neonatal (NMEC), a E. coli uropatogênica (UPEC) e a E. coli patogênica para aves (APEC). Na avicultura, esta bactéria é responsável por vários processos patológicos, atuando tanto como agente primário como secundário, sendo responsável por significativas perdas econômicas que ocorrem na produção avícola. Vários trabalhos têm demonstrado que muitos isolados ExPEC de humanos e animais compartilham genes de virulência em comum, sugerindo que ocorra uma troca genética entre essas cepas, e o risco para a saúde humana de tais bactérias ainda é indefinido. Além disto, existe outra preocupação em relação ao fato de estudos sugerirem que a E. coli pode facilmente adquirir resistência a antimicrobianos utilizados por humanos e animais. As aves domésticas são reconhecidas como importante fonte de disseminação de resistência antimicrobiana às amostras de E. coli. O objetivo do presente estudo foi realizar a caracterização de amostras de Escherichia coli patogênica aviária (APEC) e Escherichia coli uropatogênica (UPEC) através da classificação em grupos filogenéticos e da avaliação da resistência antimicrobiana. Neste trabalho foram utilizados os dados disponíveis referentes a 237 cepas de E. coli isoladas de camas de aviários, lesões de celulite e quadros respiratórios de frangos de corte e 211 amostras de E. coli uropatogênica (UPEC) isoladas de pacientes com infecção urinária. Para verificar se existia diferença significativa entre a resistência antimicrobiana a (ampicilina, gentamicina, norfloxacina, amicacina e cefuroxima) e a origem das amostras, e destes mesmos antimicrobianos em relação aos grupos filogenéticos. As amostras APEC diferiram na resistência antimicrobiana das amostras UPEC para ampicilina, gentamicina, norfloxacina e cefuroxima. O mesmo não foi observado para a amicacina. Nas condições do presente trabalho, estes resultados contrariam, parcialmente, os estudos que sugerem que a resistência antimicrobiana é originária das amostras de origem avícola, já que três dos cinco fármacos testados apresentaram maior resistência nas amostras UPEC que nas APEC. Quando analisada a relação entre os grupos filogenéticos observou-se que o perfil de resistência antimicrobiana foi semelhante em todos os grupos, somente para norfloxacina e ampicilina houve diferença, porém a resistência estava bem distribuída entre os quatro grupos, comprovando que a patogenicidade não se relaciona com a resistência antimicrobiana. Este fato já havia sido caracterizado em trabalho anterior da mesma autora. Estes resultados ressaltam a necessidade de realizar monitorizações rotineiras e constantes visando conhecer as flutuações da patogenicidade e da resistência antimicrobiana, separadamente. / The pathogen Escherichia coli, belongs to the group of strains that can cause extraintestinal infections, designated as (ExPEC). There are strains of extraintestinal E. coli ExPEC as: a E. coli that causes neonatal meningitis (NMEC), a uropathogenic E. coli (UPEC) and a avian pathogenic E. coli (APEC). In poultry, this bacterium is responsible for several pathological processes, acting as primary agent and secondary as well, and it is also responsible for significant economic losses that occur in poultry production. Several articles show that many ExPEC isolates from humans and animals share common virulence genes, suggesting a genetic exchange between these strains, and the risk to human health of more bacteria is still undefined. In addition, there is another concern about studies which suggest that E. coli can readily acquire antimicrobial resistance when used by animals and humans. Poultry is recognized as an important source of dissemination of antimicrobial resistance in E. coli samples. The objective of the present study was to characterize samples of avian pathogenic Escherichia coli (APEC) and uropathogenic Escherichia coli (UPEC) using phylogenetic groups and antimicrobial resistance. In this study, we used data available on 237 strains of E. coli isolated from avian litter, cellulitis lesions and respiratory lesions of broilers and 211 uropathogenic E. coli (UPEC) samples isolated from patients with urinary tract infection. To verify if there was a significant difference between the antimicrobial resistance (ampicillin, gentamicin, norfloxacin, amicacin, cefuroxime) and the origin of the samples, and of these same antimicrobials and phylogenetic groups. The APEC samples differed in antimicrobial resistance of the UPEC for ampicillin, gentamicin, norfloxacin and cefuroxime. The same was not observed for amikacin. Under the conditions of the present study, these results partially contradict the studies which suggest that antimicrobial resistance originates from samples of poultry origin, three of the five drugs tested, presented higher resistance in the UPEC samples than in the APEC. When analyzing the relationship between the phylogenetic groups, it was observed that the antimicrobial resistance profile was similar in all groups, only for norfloxacin and ampicillin there was a difference, but the resistance was well distributed among the four groups, proving that the pathogenicity was not related with antimicrobial resistance. This fact had already been characterized in previous paper by the same author. These results highlight the need to perform routine and constant monitoring in order to know the fluctuations in pathogenicity and antimicrobial resistance, separately.