Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dis Bruna D de S Silva 2010.pdf: 942780 bytes, checksum: 696823192ee17b463193f279bf7aed38 (MD5) Previous issue date: 2010-11-19 / Tuberculosis (TB) is a disease that afflicts mankind catastrophically, causing millions of new cases and deaths worldwide. It is estimated that one third of the world population is infected with the TB bacillus, Mycobacterium tuberculosis. Currently, the major challenges in TB control are the iden-tification of latent individuals, who are have increased chances to become ill, and the effective treat-ment of individuals with active disease. Understanding the immunology of this disease is of crucial importance for the development of new diagnostic tests and vaccines to combat this disease effec-tively. In order to elucidate the cellular immune response in tuberculosis, we evaluated the subpopu-lations of TCD4+ Th1, Th17 and T regulatory cells of patients with active pulmonary tuberculosis and rheumatoid arthritis against the recombinant antigen GLcB of M. tuberculosis. Peripheral blood mononuclear cells were obtained from twenty one patients with active pulmonary tuberculosis, re-cruited at Anuar Auad Hospital, twenty five patients with rheumatoid arthritis (RA), eleven individu-als with latent tuberculosis (TST+) and twelve healthy subjects (TST-). These cells were cultured, stimulated with antigen recombinant GLcB and Th1, Th17 and T regulatory subsets cells were eva-luated by flow cytometry. It was found that patients with active pulmonary tuberculosis have a high-er response of Th1 (8.21.9), Th17 (3.92.1) and T regulatory (2.81.2) antigen-specific recombi-nant GLcB when compared with individuals with latent infection (Th17=2.81.3; Treg=3.11.2) and healthy controls (Th17=1.40.8; Treg=0.60.3). Individuals with latent infection have only a signifi-cant percentage of Th1 cells specific (4.61.1) to GLcB when compared to controls (1.71.0). RA Patients that developed tuberculosis had immune response similar to those with only TB. Given these results, we conclude that the Th1 cells, Th17 and regulatory T cells are directly involved in active disease. / A Tuberculose (TB) é uma doença que atinge a humanidade de forma catastrófica, causando milhões de casos novos e de mortes no mundo todo. Estima-se que um terço da população mundial esteja infectada com o bacilo da TB, Mycobacterium tuberculosis. Atualmente, os principais desafios no controle da TB são: a identificação dos indivíduos latentes, que são os principais indivíduos com potencial desenvolvimento da doença e o tratamento efetivo dos indivíduos com doença ativa. O entendimento da resposta imunológica nessa doença é de crucial importância para o desenvolvimen-to de novos testes diagnósticos e novas vacinas para combater de forma efetiva essa enfermidade. Com o intuito de elucidar a resposta imune celular envolvida no desenvolvimento da tuberculose ativa, avaliamos as subpopulações de células TCD4+ Th1, Th17 e T reguladoras de pacientes com tuberculose pulmonar e pacientes com artrite reumatóide ativa frente ao antígeno recombinante GLcB do M. tuberculosis. Foram obtidas células mononucleares do sangue periférico de vinte e um pacientes com tuberculose pulmonar ativa, recrutados no Hospital de Doenças Tropicais Anuar Au-ad, vinte e cinco pacientes com artrite reumatóide, onze indivíduos com tuberculose latente (PT+) e doze indivíduos saudáveis (PT-). Estas células foram cultivadas, estimuladas com o antígeno recom-binante GLcB e as subpopulações Th1, Th17 e T reguladoras foram avaliadas através da análise das citocinas IFN-, IL-17 e TGF- e IL-10, respectivamente, por citometria de fluxo. Constatou-se que pacientes com tuberculose pulmonar ativa apresentam maior resposta de células Th1 (8.21.9), Th17 (3.92.1) e T reguladoras (2.81.2) específicas ao antígeno recombinante GLcB quando comparados com indivíduos com infecção latente (Th17=2.81.3; Treg=3.11.2), e controles saudáveis (Th17=1.40.8; Treg=0.60.3). Indivíduos com infecção latente apresentam somente porcentagem significativa de células Th1 (4.61.1) específicas ao GLcB quando comparado aos controles (1.71.0). Pacientes com AR não apresentaram diferença significativa na porcentagem destas células quanto à classificação em PT+ e PT-. Porém, pacientes com AR que desenvolveram tuberculose a-presentaram resposta semelhante aos pacientes com TB. Diante destes resultados, podemos concluir que as células Th1, Th17 e T reguladoras estão diretamente envolvidas na doença ativa.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-30T14:49:37Z No. of bitstreams: 1 regina_p_carvalho_ipec_pesquisaclinicadi_0005_2010.pdf: 1759534 bytes, checksum: 3ba01da2b81179270af6897d913fd20c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-30T14:49:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 regina_p_carvalho_ipec_pesquisaclinicadi_0005_2010.pdf: 1759534 bytes, checksum: 3ba01da2b81179270af6897d913fd20c (MD5) Previous issue date: 2010 / Fiocruz / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Introdução: A imunidade mediada por células tem um papel importante na resposta imune do hospedeiro à Leishmania. Em pacientes com leishmaniose cutânea, a presença de células ativadas tem sido correlacionada positivamente com o tamanho das lesões. Já a atividade citolítica de células T CD8 + vem sendo associada ao dano tecidual e à gravidade da forma mucosa. No entanto, não se sabe o perfil fenotípico induzido nas células de indivíduos clinicamente curados quando estes reencontram os antígenos de Leishmania. Objetivo: Identificar perfis imunológicos associados à cura clínica na leishmaniose cutânea, com foco na análise das características fenotípicas e funcionais de linfócitos T específicos para a Leishmania. Materiais e Métodos: Foram estudados 26 indivíduos curados de leishmaniose cutânea (LCC) divididos em dois grupos de acordo com o tempo de cura: (i) menor que 2 anos (<2 anos, n=13) e (ii) 2 a 5 anos (2-5 anos, n=13). Como grupo controle, foram utilizados 12 indivíduos sadios (IS) sem histórico prévio de leishmaniose. As células mononucleares do sangue periférico foram analisadas ex vivo e após cultivo in vitro na presença de antígenos de Leishmania (Ag-Lb). Foi analisada a expressão de moléculas de superfície relacionadas ao fenótipo dos linfócitos (CD3, CD4 e CD8), ao fenótipo funcional dos linfócitos de memória central (TMC) ou de memória efetora (TME) - (CCR7 e CD45RO), à ativação (CD69 e CD25), à citotoxicidade (C1.7) e à migração linfocitária (CLA). Essas moléculas foram avaliadas dentro da subpopulação de células T CD4+ e T CD8+. Resultados: A média da razão TCD4+/TCD8+ nos pacientes LCC foi similar nas células ex vivo e nas células estimuladas por Ag-Lb. Nos LCC, houve um aumento significativo do percentual de células CD25+ e CD69+ em T CD4+ e em T CD8+ após o estímulo com Ag-Lb. Houve uma correlação negativa entre o tempo de cura e o percentual de células T ativadas pelo antígeno (CD25 + e CD69+). Nos pacientes LCC, o percentual de linfócitos TME em CD4+ e CD8+ aumentou após o estímulo com Ag-Lb, quando comparado com as células ex vivo. Já o percentual de células TMC não se modificou. O percentual de células C1.7+ dentro de T CD8+ e de células CLA+ em T CD4+ e T CD8+ foi similar na análise de células ex vivo e após estímulo com Ag-Lb, em pacientes LCC. Nos IS, não foi observado aumento do percentual de células T para nenhuma das moléculas avaliadas, quando comparadas às células ex vivo e estimuladas com Ag- Lb. Conclusão: À medida que aumenta o tempo de cura clínica, há uma redução de moléculas associadas à ativação tanto em linfócitos T CD4+ quanto em T CD8+. Esses indivíduos apresentam um aumento de células de ME que poderiam participar no controle dos parasitos caso ocorra uma reinfecção. Além disso, as células expandidas não apresentaram moléculas de superfície relacionadas à citotoxicidade ou migração para a pele. Considerando que os pacientes curados possuem um padrão de resposta imunoprotetor, tal padrão pode ser considerado um parâmetro importante para a seleção de antígenos candidatos para uma vacina. / Introduction: The cell-mediated immunity plays an important role in the immune response of the host to Leishmania. In cutaneous leishmaniasis patients, the presence of activated cells has been positively correlated with lesion size. The cytolytic activity of T CD8+ cells has been associated with tissue damage and the severity of mucosal form. However, the phenotypic profile induced in cells of clinical cured individuals, when they are exposed to Leishmania antigens again, is not known. Objective: Identify imunological profiles associated with clinical cure in cutaneous leishmaniasis, with emphasis on phenotypical and functional characteristics of Leishmania-specific T cells. Materials and Methods: In the study, 26 individuals cured from cutaneous leishmaniasis (CCL) were divided in two groups according to the time of cure: (i) less than 2 years (<2 years, n=13) and (ii) from 2 to 5 years (2-5 years, n=13). As the control group, 12 healthy subjects (HS) without previous history of leishmaniasis were used. Peripheral blood mononuclear cells were evaluated ex vivo and after in vitro culture in the presence of Leishmania antigens (Lb-Ag). It was analysed the expression of surface molecules related with lymphocytes phenotype (CD3, CD4 and CD8), functional phenotype of central memory (TCM) or effector memory lymphocytes (TEM) - (CCR7 and CD45RO), activation (CD69 and CD25), citotoxicity (C1.7) and lymphocyte migration (CLA). These molecules were evaluated within subpopulations of CD4 + and CD8+ T cells. Results: The mean ratio T CD4+/T CD8+ in CCL patients was similar in ex vivo cells and in Lb-Ag stimulated cells. In CCL, there was a significant increase in the percentual of CD25 + and CD69+ in CD4+ and in CD8+ T cells after Lb-Ag stimulus. There was a negative correlation between the time of cure and the percentual of T cells activated by the antigen (CD25+ and CD69+). In CCL patients, the percentual of TEM lymphocytes in CD4+ and in CD8+ increased after Lb-Ag stimulus, when compared to ex vivo cells. The percentual of TMC cells has not altered. The percentual of C1.7+ cells within CD8+ T cells and CLA+ in CD4+ and in CD8+ T cells was similar to the analysis of ex vivo cells and after Lb-Ag stimulus, in CCL patients. In the HS, it was not observed an increase in the percentual of T cells in any of the molecules analised, when comparing ex vivo to Lb-Ag stimulated cells. Conclusions: As the time of cure increases, there is a decrease of molecules related to activation in both CD4+ and CD8+ T cells. These individuals present an increase in EM cells that could take part in the parasite control in case of reinfection. Moreover, expanded cells have not presented surface molecules related to citotoxicity or migration to skin. Considering that cured patients have a imunoprotective response profile, such profile should be considered as an important parameter for selection of antigen candidates for the development of a vaccine.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 mayara MAGGIOLI.pdf: 1675170 bytes, checksum: 97b59ecd07956bdec51efc9f0ffbb42a (MD5) Previous issue date: 2010-03-05 / Curraleiro breed has adapted to the extensive breeding in the Brazilian savanna. These rustic animals seem to be more resistant to regional endemic diseases. Resistance to infection is directly correlated to the host immune response. In order to check if differences might exist among Curraleiro s immune response and the response of other exotic cattle breeds in the savannah region, Curraleiro and Nellore calves were assessed before and after immunization with BCG vaccine. Twelve young calves (around six months of age) were used. After quarantine, the animals were divided into four groups: Control (three calves from each breed) and Vaccinated (three calves from each breed). The mononuclear cells were obtained from peripheral blood at time zero (before vaccination), one, seven and, thirty days after the vaccination. The cells were submitted to phagocytosis test, NO production and analysis by flow cytometry of the following populations: NK, T&#61543;&#61540;, CD4 e CD8 as well as for their IFN-&#61543;production. The intradermic test was realized in all calves forty-five days after vaccination. Macrophages from Curraleiro breed showed superior phagocytosis rates (7.650±3.661) than Nellore macrophages (2.970±1.282). Before BCG vaccination, Curraleiro calves had higher numbers of CD4+ cells (2049±402.3), CD8+ cells (1207±166), T&#61543;&#61540;WC1+ cells (1443/mL±384,6) in peripheral blood, than Nellore calves (CD4: 1240/mL ±337; CD8: 772.1/mL ±278.3; T&#61543;&#61540;WC1+: 745.5/mL ±67.22). The CD4 and CD8 IFN-&#61543; positive cells were also higher in Curraleiro animals. Vaccination was able to generate specific immune response on both breeds. Thirty days after vaccination, Curraleiro animals presented greater levels of CD4IFN-&#61543;&#61472;positive (202.8±44.96) cells than Nellore ones (143.7±40.43). The findings of this study support the Curraleiro resistance profile in comparison to Nellore breed, due to a better capacity to induce specific immune response to M. bovis-BCG vaccine. / A raça Curraleiro se desenvolveu e se adaptou à criação extensiva na região do cerrado brasileiro. Estes animais rústicos parecem ser mais resistentes às doenças endêmicas regionais. A resistência às infecções esta diretamente correlacionada a resposta imune do hospedeiro. Para verificar se existe alguma diferença na resposta imune de animais Curraleiros e outras raças exóticas criadas na região do cerrado, bezerros das raças Curraleiro e Nelore foram avaliados após a vacinação com Mycobacterium bovis- BCG. Foram utilizados animais com idade variando de 6 a 7 meses (n=12), provenientes do estado de Goiás. Depois da quarentena, os animais foram divididos em grupos: controles (3 de cada raça) e vacinados (3 de cada raça). Após obtenção das células mononucleares do sangue periférico nos dias zero (antes da vacinação), um, sete, quinze e trinta dias apos a vacinação, as mesmas foram submetidas a ensaios de fagocitose, produção de NO, quantificação por citometria de fluxo das populações celulares NK, T&#61543;&#61540;, CD4 e CD8 e de suas produções de IFN-&#61543;. Quarenta e cinco dias após a vacinação, os animais foram submetidos ao teste intradérmico. Macrófagos provenientes da raça Curraleira apresentaram naturalmente maiores índices de fagocitose de leveduras não sensibilizadas (7,650±3,661) quando comparados aos dos Nelore (2,970±1,282). Além disso, antes da vacinação, bezerros Curraleiros tiveram no sangue periférico maior número de TCD4+(2049±402,3), TCD8+(1207±166), T&#61543;&#61540;WC1+(1443/mL±384,6) que os bezerros Nelores (CD4-1240/mL ±337; CD8-772,1/mL ±278,3; T&#61543;&#61540;WC1+-745,5/mL ±67,22). Em adição, as células CD4 e CD8 IFN-&#61543; positivas foram superiores nos animais Curraleiros. A vacinação foi capaz de induzir resposta imune específica nas duas raças testadas. Trinta dias após a vacinação os Curraleiros apresentavam CD4IFN-&#61543;&#61472;positivas (202,8±44,96) superiores aos Nelores (143,7±40,43). Os resultados apresentados nesta dissertação favorecem o perfil de resistência da raça bovina Curraleira quando comparada a raça Nelore devido a melhor capacidade de induzir resposta imune específica à vacina M. bovis-BCG.