Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-07-27T14:16:50Z No. of bitstreams: 1 Ismaela Maria Ferreira de Melo.pdf: 3186927 bytes, checksum: 77c803b8ff84ef399aa780d93c4df4bf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-27T14:16:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ismaela Maria Ferreira de Melo.pdf: 3186927 bytes, checksum: 77c803b8ff84ef399aa780d93c4df4bf (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Diabetic retinopathy is a metabolic disease with cardiovascular involvement with high risk of vision loss. It causes structural and functional damage to the retina increases the expression of inflammatory cytokines (IL-6 and TNF-α) and induces pathological intraocular neovascularization. The aim of this study was to evaluate the effect of melatonin on histopathology, oxidative stress (retina and pancreas) and electrical retinal activity and if she would be able to mediate the expression of VEGF, IL-6 and TNF-α, in addition to index apoptotic. We used 50 rats divided into the following groups: GC: no induction mice diabetes by streptozotocin; GD: rats with diabetes induced by streptozotocin treated and placebo; GDM: rats by streptozotocin induced diabetes mellitus and after confirmation treated with melatonin at dosage of 10 mg / kg body weight for 20 days; GDMS: mice induced by streptozotocine diabetes and simultaneously treated with melatonin at dosage of 10 mg / kg for 20 days; GDI: rats by streptozotocin induced diabetes mellitus and after confirmation treated with insulin for 20 days. Diabetes was induced by intraperitoneal administration of streptozotocin (60mg / kg), melatonin was administered subcutaneously at night, and insulin (5U / day) by the same route. For apoptosis was performed TUNEL assay and immunohistochemistry targets were analyzed for IL-6, TNF-α and VEGF. The pancreatic oxidative stress was assessed by measurement of lipid peroxidation and reduced glutathione levels while stress in the retina was analyzed for the production of superoxide anions. The results showed that melatonin attenuated histopathological changes; decreased inflammation and regulated the mechanisms that caused oxidative stress and electroretinography interfere with the amplitude of the wave of the joint examination between the GC and GD groups. It is concluded that this hormone may be an important contributing factor in the treatment of diabetic retinopathy due to its antioxidant property and modulating inflammatory processes, softening the changes of this pathology, especially when administered concurrently with diabetes induction it was observed a significant improvement retinal preservation in increased serum insulin and decreased hyperglycemia. / A retinopatia diabética é uma doença metabólica com comprometimento microvascular com alto risco de perda da visão. Ela ocasiona danos estruturais e funcionais na retina, aumenta a expressão de citocinas inflamatórias (IL-6 e TNF-α) e induz a neovascularização intraocular patológica. O objetivo desse trabalho foi avaliar a ação da melatonina sobre a histopatologia, estresse oxidativo (retina e pâncreas) e atividade elétrica da retina bem como se ela seria capaz de mediar à expressão de VEGF, IL-6 e TNF-α, além do índice apoptótico. Utilizou-se 50 ratos divididos nos seguintes grupos: GC: ratos sem indução ao diabetes pela estreptozotocina; GD: ratos com diabetes induzidos pela estreptozotocina e tratados com placebo; GDM: ratos induzidos ao diabetes pela estreptozotocina e após confirmação do diabetes tratados com melatonina na dosagem de 10 mg/kg de peso corporal durante 20 dias; GDMS: ratos induzidos ao diabetes pela estreptozoticina e simultaneamente tratados com melatonina na dosagem de 10 mg/kg durante 20 dias; GDI: ratos induzidos ao diabetes pela estreptozotocina e após confirmação do diabetes tratados com insulina durante 20 dias. O diabetes foi induzido pela administração intraperitoneal de estreptozotocina (60mg/kg), a melatonina foi administrada à noite por via subcutânea, e a insulina (5U/dia) pela mesma via. Para apoptose foi realizado o método de TUNEL e para a análise imunohistoquímica foram analisados os alvos para IL-6, TNF-α e VEGF. O estresse oxidativo pancreático foi avaliado através da mensuração da peroxidação lipídica e níveis de glutationa reduzida, enquanto o estresse na retina foi analisado pela produção de ânions superóxidos. Os resultados mostraram que a melatonina atenuou as alterações histopatológicas; diminuiu o processo inflamatório e regulou os mecanismos que ocasionaram estresse oxidativo e no eletrorretinograma interferiu na amplitude da onda a do exame da mista entre os grupos GC e GD. Concluímos assim, que esse hormônio pode ser um importante fator coadjuvante no tratamento da retinopatia diabética devido a sua propriedade antioxidante e moduladora de processos inflamatórios, amenizando as alterações decorrentes desta patologia, principalmente quando administrado simultaneamente à indução do diabetes onde foi observado uma melhora expressiva na preservação da retina no aumento da insulina plasmática e na diminuição da hiperglicemia.

Submitted by (ana.araujo@ufrpe.br) on 2016-08-12T15:12:18Z No. of bitstreams: 1 Sergio de Sa Leitao Paiva Junior.pdf: 1027714 bytes, checksum: 382b44b0daa25e3bc9eed83acf4e7b18 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-12T15:12:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sergio de Sa Leitao Paiva Junior.pdf: 1027714 bytes, checksum: 382b44b0daa25e3bc9eed83acf4e7b18 (MD5) Previous issue date: 2006-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / We describe an automated method for blood vessel segmentation in two-dimensional color retinal images. This method may be used by specialized software for automated screening of diabetic rethinopaty and other eye diseases, for evaluation of treatment evolution, and clinical study. The proposed method is based on a combination of “2d matched filter” response procedure (for vessel location), and the Hoshen-Kopelman algorithm (for vessel segmentation). We compare the results obtained through this method with the results of manual segmentation of 20 imagens of the DRIVE project, where ROC(Receiver Operating Characteristic curve) analysis was used for quantitative comparison with others works published on this subject. / Descrevemos neste trabalho um método automático para localizar e segmentar vasos sanguíneos em imagens de fundo de olhos. Este método pode ser usado por um software especialista em imagens de retina para diagnosticar automaticamente doenças como retinopatia diabética entre outra s , para avaliação da evolução do tratamento, e para estudos clínicos. O método proposto é baseado na combinação do procedimento “2d matched fi l t e r” ( usado na localização dos vasos) com o algoritmo de “Hoshen-Kopelman” (usado na segmentação dos vasos). Resultados obtidos com este método foram comparados, com a segmentação manual em 20 imagens do projeto DRIVE,usando ROC(Receiver Operating Characterist i c curve) para comparação quant i t a t i v a com os resultados de outros trabalhos publicados sobre este assunto.

Orientador: Jacqueline Mendonça Lopes de Faria / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T05:59:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinto_CamilaCerboni_M.pdf: 1986479 bytes, checksum: ded3ea704f4525a18397a43b193730ac (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A presença de hipertensão arterial (HA) em pacientes com diabetes mellitus (DM) é identificada como o fator de risco independente mais importante para a progressão da retinopatia diabética (RD). O DM por si aumenta o estresse oxidativo na retina tanto em humanos quanto em animais. Contudo, o efeito da combinação da HA e do DM na retina ainda não foi demonstrado. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi investigar o estresse oxidativo na retina de modelo experimental que combina a HA genética e o DM induzido por estreptozotocina. Ratos espontaneamente hipertensos (SHR) de 4 semanas de idade e seus controles normotensos (WKY) receberam injeção intravenosa de estreptozotocina para indução do DM. Após 20 dias, os ratos foram sacrificados e os olhos e as retinas foram coletadas. Foi observado aumento na produção de ânion superóxido, avaliada através da quimiluminescência da lucigenina, nos ratos WKY diabéticos em relação aos controles (p<0,03) e os ratos SHR, controles e diabéticos, apresentaram elevada produção de superóxido em relação aos WKY controles (p<0.009). O sistema antioxidante da glutationa (forma reduzida-GSH) apresentou diminuição somente nos animais SHR diabéticos (p<0,04). A nitração de tirosina avaliada por imunohistoquímica para nitrotirosina (NT) foi igualmente elevada nos animais WKY diabéticos e SHR controles comparada com o grupo WKY controle (p<0,03) e foi observado um aumento nos animais SHR diabéticos (p<0,02). O dano do DNA devido ao estresse oxidativo avaliado por imunohistoquímica para 8-hidroxi-2¿-deoxiguanosina (8-OHdG) foi elevado nos animais SHR controles em comparação com os WKY controles (p=0,0003) e foi mais aumentado nos animais SHR diabéticos (p<0,0001). A atividade de NADPH oxidase, avaliada pela expressão de gp91phox e NOX-4, não apresentou alteração na retina dos animais hipertensos e diabéticos. Adicionalmente, a expressão do receptor de AGE, RAGE, não apresentou alteração no período estudado. Os ensaios de western blot para verificar a atividade de NF-kB demonstraram aumento somente nos ratos hipertensos. O DM determina um desequilíbrio precoce entre os sistemas oxidante e antioxidante causando danos à retina e a presença da HA exacerba este efeito. Essas anormalidades podem contribuir para o mecanismo pelo qual a hipertensão arterial agrava a RD / Abstract: The presence of arterial hypertension in patients with diabetes mellitus (DM) is identified as the most important independent risk factor for progression of diabetic retinopathy (DR). Independently, diabetes and hypertension increase oxidative stress in the retina both humans and animals. However, the effect of the combination of both hypertension and DM in the retina was never addressed. Therefore, the aim of this study was to investigate the oxidative stress in the retina of an experimental model that combines hypertension and DM. Four week old spontaneously hypertensive rats (SHR) and their normotensive counterpart Wystar Kyoto (WKY) rats were rendered diabetic by intravenous injection of streptozotocin. After 20 days, the rats were sacrificed and the eyes and retinas were collected. The production of superoxide evaluated by enhanced lucigenin method was higher in diabetic than the control WKY (p<0.03) and the SHR rats showed elevated superoxide production in both control and diabetic groups compared with non diabetic WKY (p<0.009). The antioxidant defense system of glutathione (reduced form, GSH), was significantly diminished only in diabetic SHR (p<0.04). Tirosyne nitration evaluated by immunohystochemistry for nitrotyrosine (NT) was equally elevated in both diabetic WKY and control SHY compared with control WKY (p<0.03) and further increment was observed in diabetic SHR group (p<0.02). The DNA damage due oxidative stress evaluated by immunohystochemistry for 8-hydroxy-2¿-deoxyguanosine (8-OHdG) was higher in control SHR than in control WKY (p=0.0003) and further increment was detect in diabetic SHR rats (p<0.0001). The NADPH oxidase activity, evaluated by the retinal expression of gp91phox and NOX-4, was not altered in the retina from hypertensive and diabetic rats. The expression of AGE-receptor (RAGE) was not altered. Western blot assay for NF-kB showed increased in control and diabetic SHR rats. Diabetes determines an early unbalance between oxidant and antioxidant systems leading to damage in the retina and the presence of hypertension exacerbates this effect. These abnormalities may contribute to mechanism by which the hypertension aggravates RD / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Jacqueline Mendonça Lopes de Faria, Jose Buttori Lopes de Faria / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T12:22:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosales_MarianaAparecidaBrunini_M.pdf: 16380865 bytes, checksum: 2583696b31144f3e138bf4910979d918 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A retinopatia diabética (RD) é a principal causa de cegueira adquirida em adultos em idade produtiva nos países desenvolvidos. A hipertensão (HA) é um importante fator de risco associado ao desenvolvimento da RD. O estresse oxidativo pode explicar como a hiperglicemia inicia os processos bioquímicos envolvidos na patogênese da RD. A retina possui vários mecanismos de defesa para minimizar o estresse oxidativo como "scavengers" de baixo peso molecular e sistemas enzimáticos. Sob condições do diabetes (DM), ocorre um aumento das espécies reativas, como o superóxido (O2·-) e óxido nítrico (NO·), conseqüentes da indução da reação da glicação. O produto desta reação, peroxinitrito (ONOO-), pode diretamente causar lesões em proteínas, lipídios e DNA. Embora muitos mecanismos patológicos da RD sejam focados nos danos vasculares, tem sido descrito que o DM também induza danos nas células de Müller da retina neural que pode anteceder as anormalidades vasculares. A neurodegeneração retiniana pode ser detectada pelo aumento da imunoreatividade da proteína ácidica fibrilar glial (GFAP) em astrócitos e em células de Muller. O acúmulo de matriz extracelular (ECM) é instrumental para a quebra de barreira hematoretiniana da retina presente precocemente na patogênese da RD. O objetivo deste estudo foi investigar a eficácia do antioxidante tempol, mimético da superóxido dismutase (SOD), na prevenção das alterações precoces na retina de um modelo de RD que combina hipertensão e diabetes. Foram utilizados neste estudo ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e seu controle normotenso (WKY) com 4 semanas de idade. O diabetes foi induzido experimentalmente através de injeção intravenosa de estreptozotocina. Após a confirmação da indução do DM, os ratos SHR (DM-SHR) foram randomizados para receber ou não tratamento com injeção de tempol intraperitonealmente (DM-SHR-tempol). Após 20 dias, os ratos foram eutanaziados e suas retinas foram coletadas para extração de proteínas, ensaios colorimétricos e imunohistoquímica. Os animais diabéticos apresentaram os marcadores precoces de RD: houve aumento da expressão do GFAP no grupo SHR e DM-SHR comparado ao grupo WKY e aumento da FN no grupo DM-SHR comparado ao SHR e WKY. O balanço oxidativo, avaliado pela produção de superóxido e pelos produtos finais do óxido nítrico, assim como a defesa antioxidante, estimada pela expressão e atividade da Cu/Zn SOD, revelou um desequilíbrio acentuado no grupo DM-SHR em relação ao grupo SHR e WKY. Como resultado, o produto peroxinitrito detectada por imuno-histoquímica para nitrotirosina (NT) foi maior no grupo DM-SHR. A atividade da enzima poli (ADPribose) polimerase (PARP) detectada pela ribosilação, e a super regulação da expressão da óxido nítrico sintase induzida (iNOS) foram exacerbadas neste grupo. A administração do TEMPOL impediu o dano oxidativo, reduziu a ativação exacerbada da PARP e diminuiu os níveis de i-NOS nos ratos DM-SHR. Como conseqüência, os marcadores estruturais precoce da RD, GFAP e FN, foram prevenidos pelo TEMPOL. Estes resultados fornecem uma base racional para o desenvolvimento com fins farmacológicos do TEMPOL na prevenção e tratamento da RD. / Abstract: Diabetic retinopathy (DR) is the leading cause of blindness among working-age adults in developed countries. Hypertension (HA) is an important risk factor associated with the development of DR. Oxidative stress may explain how the hyperglycemia initiates the biochemical processes involved in the pathogenesis of DR. The retina has several defense mechanisms to minimize oxidative stress as scavengers of low molecular weight and enzyme systems. Under conditions of diabetes (DM), there is an increase of reactive species such as superoxide (O2o -) and nitric oxide (NO o), induced by glycation reaction. The product of this reaction, peroxynitrite (ONOO-), can directly damage proteins, lipids and DNA. Although many pathologic mechanisms of DR have been focused on vascular damage, it has been reported that DM also induces damage in nonvascular retinal neurons of Müller cells occurred prior to vascular abnormalities. The retinal neurodegeneration can be detected by increased immunoreactivity of glial fibrillary acidic protein (GFAP) in astrocytes and Muller cells. The extracellular matrix accumulation (ECM)) is instrumental to blood retinal barrier breakdown present in early pathogenesis of DR. The objective of this study was to investigate the efficacy of the antioxidant TEMPOL, mimetic of superoxide dismutase (SOD) in the prevention of early changes in the retina in a model that combines hypertension and diabetes. Four-week-old spontaneously hypertensive rats (SHR) and their normotensive control (WKY) were used in this research. Diabetes was induced experimentally by intravenous injection of streptozotocin. SHR diabetic (DM-SHR) rats were andomized to receive or not treatment with intraperitoneal injection of tempol (DM-SHR-tempol). fter 20 days, the rats were euthanized and their retinas were collected for protein extraction, colorimetric assays and immunohistochemistry. The presence of exacerbated early markers of DR was detected by increased GFAP expression in SHR and SHR-DM group compared to WKY and FN in group DM-SHR compared to SHR and WKY. The oxidative balance, evaluated by superoxide production and nitric oxide end-product levels and the counterpart antioxidant defense, estimated by the expression and activity of Cu / Zn SOD showed a marked unbalance in DM-SHR group compared to SHR and WKY group. As a result, the product peroxynitrite detected by immunohistochemistry for nitrotyrosine (NT) was higher in the DM-SHR. The activity of the enzyme poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) detected by ribosylation, and the upregulation of inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression were exacerbated in this group. The administration of TEMPOL prevented the oxidative damage, reduced the exacerbated activation of PARP and decreased iNOS levels in DM-SHR rats. As a result, the structural markers of early RD, GFAP and FN, were prevented by tempol. These findings provide a rationale for the development with pharmacological purposes of tempol in the prevention and treatment of DR. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Diabete Melito (DM) é uma endocrinopatia frequentemente diagnosticada na clínica de pequenos animais e desenvolve-se pela deficiência relativa ou absoluta de insulina, sendo caracterizada pela hiperglicemia crônica. Complicações associadas ao DM são frequentes, dentre elas podemos citar catarata e retinopatia. A catarata, que é a oftalmopatia mais frequente nos cães, impossibilita à fundoscopia e nestes casos a avaliação da função retiniana pode ser feita com o auxílio do eletrorretinograma de campo total. O objetivo deste estudo foi avaliar a progressão da retinopatia diabética por meio de eletrorretinograma (ERG) de campo total pré e pós-operatória (180 dias) em cães portadores de catarata madura e hipermadura submetidos à facoemulsificação. Vinte e quatro cães (Grupo Diabético (DM) = 12 cães; Grupo Não Diabético (NDM) = 12 cães) de raças diversas foram avaliados. Previamente ao ERG, todos os cães foram submetidos ao exame oftalmológico completo e ultrassom ocular. Todos os cães foram sedados seguindo o mesmo protocolo. ERG de campo total foi realizado com sistema eletrodiagnóstico Veris 2000 e cúpula de estimulação (Ganzfeld), segundo o protocolo da ISCEV contendo 5 respostas. Para obtenção dos registros utilizou-se eletrodo bipolar Burian Allen. Avaliou-se a amplitude pico a pico das 5 respostas e o tempo de culminação da onda-b na resposta de bastonetes, máxima resposta, cones e flicker para cada registro em condições escotópicas e fotópicas. As respostas obtidas em cada olho no momento basal e após 6 meses foram comparadas por meio do teste de Wilcoxon. O teste de Mann-Whitney foi utilizado para comparação de respostas dos olhos operados (OP) com os olhos contralaterais (OC), assim como para comparação entre os grupos DM e NDM. O efeito da cirurgia e do tempo de DM foi ainda avaliado por meio do cálculo das diferenças entre as respostas no momento pré e pós 6 meses de cada olho (delta OP e delta OC). Observou-se diferenças entre OP e OC, no momento pré, nas respostas dos bastonetes e da máxima resposta (amplitude e tempo de culminação onda-b). No momento pós, foram observados diferenças entre OP e OC no tempo de culminação dos bastonetes e flicker, e nas amplitudes do potencial oscilatório, cones e flicker. No grupo NDM, não foram observados diferenças entre os momentos pré e pós assim como entre OP e OC. Quando comparadas as respostas dos grupos DM e NDM, observou-se valores significativamente maiores no grupo DM, no tempo de culminação da onda-b na máxima resposta do OP no momento pós, no tempo de culminação da onda-b na máxima resposta OC no momento pós e no tempo de culminação da onda-b da resposta de cones no momento pré cirurgia. Não foram observados diferenças entre delta OP e delta OC dentro de cada grupo e entre os grupos. Todos os pacientes que participaram do estudo recuperaram a visão após a cirurgia, sugerindo que a inflamação pós cirúrgica foi controlada com a medicação prescrita nos 2 grupos estudados. Conclui-se que a facoemulsificação representa mínimo impacto na evolução da retinopatia diabética em cães. A remoção cirúrgica da catarata não deve ser contraindicada nesta espécie, independentemente se o animal é ou não portador de DM, por resultar em melhoria da visão. / Diabetes mellitus (DM) is a common endocrinopathy in the small animals practice and it develops as a relative or absolute insulin deficiency characterized by a chronic hyperglycemia. There are frequent complications, such as cataracts, retinopathy, resulting in visual impairment. Cataracts are dogs most frequent ophthalmic affection and, since it prevents fundoscopic examination, full-field electroretinography is used for retinal functional evaluation. Therefore, to provide a better understanding of diabetic retinopathy (DR) progression in dogs with mature and hypermature cataracts undergoing phacoemulsification surgery, this study aims to analyze the full-field electroretinogram prior and 180 days post cataracts removal. Twenty four dogs (diabetic group (DM) = 12 dogs and non-diabetic group (NDM) = 12 dogs), from different breeds were evaluated. Before the ERG, all animals were submitted to a complete ophthalmic examination and ocular ultrasonography. All dogs were sedated following the same anesthetic protocol. The full-field ERG was recorded using 2000 VERIS system and a dome stimulator (ganzfeld) according to ISCEV five response standard. The recordings were obtained using bipolar Burian Allen electrodes. Peak to peak amplitude five response and b-wave culmination time in rod responses, maximum response, cone and flicker were evaluated in scotopic and photopic conditions. The responses obtained in each eye at baseline and after 6 months were compared using the Wilcoxon test. The Mann-Whitney test was used to compare the responses of the operated eyes (OP) and the contralateral eyes (OC) as well as for comparison between groups DM and NDMAs. The effect of surgery and duration of DM was assessed by calculating the differences between the responses prior and six months after surgery, of each eye (delta delta OP and OC). There were differences between OP and OC, in the baseline values, in rod responses and maximum response (amplitude values and b-wave implicit time). After phacoemulsification, differences were observed between OP and OC in b-wave implicit time of rods and flicker, and the amplitudes of the oscillatory potentials, cone and flicker. In the NDM group, no differences were observed between pre and post evaluations between OP and OC. Comparing the responses of DM and NDM groups, there were significantly higher values in the DM group, in b-wave implicit time and in maximum response of OP after caratact removal, and also, of the b-wave implicit time in the maximum response in OC after surgery and, finally, in the b-wave implicit time of cone response prior to the surgery. No differences were observed between delta OP and delta OC within each group and between groups. All patients recovered vision after surgery, suggesting that post-surgery inflammation was controlled by the prescribed medication in both groups. The phacoemulsification surgery did not appear to have a great impact on diabetic retinopathy evolution in dogs. Cataract surgery should not be contraindicated in this species, regardless of the presence of DM, as it can result in sight improvement.

O presente estudo avaliou diferentes aspectos funcionais da visão de diabéticos do tipo 2 com e sem retinopatia diabética. A visão desses pacientes foi avaliada em diferentes níveis do sistema visual por meio da aplicação de uma bateria de testes psicofísicos e eletrofisiológicos de grande sensibilidade. O objetivo foi caracterizar as alterações visuais provocadas pela doença antes do aparecimento de retinopatia, e avaliar o efeito da presença da retinopatia sobre as alterações funcionais precoces. Materiais e métodos: 31 pacientes diabéticos com retinopatia não proliferativa leve (15 , 16 ; idade = 59 ± 09; tempo de diabetes = 10 ± 06 anos); 36 pacientes diabéticos sem retinopatia (16 , 20 idade = 56 ± 11; tempo de diabetes = 06 ± 04 anos) e 30 sujeitos controle (13 , 17 ; idade = 44 ± 10 anos) foram submetidos a exames de (1) eletrorretinograma multifocal - mfERG; (2) sensibilidade ao contraste acromático segregada em componentes magno (MC) e parvocelulares (PC) Teste do pedestal; (3) perimetria visual computadorizada branco/branco e azul/amarelo e (4) teste quantitativo de visão de cores Teste de cores de Cambridge. A comparação dos dados de pacientes e controles foi feita com ANOVA e a comparação da capacidade de detecção do dano funcional entre os testes foi feita por meio da análise de curvas ROC. Resultados: ambos os grupos de pacientes manifestaram perdas significantes no mfERG, sensibilidade ao contraste e visão de cores. Em ambos os protocolos de perimetria apenas os pacientes com retinopatia tiveram perdas significativas. As respostas de pacientes com e sem retinopatia não foram significantemente diferentes na maior parte das medidas. Diferenças significativas foram encontradas entre os dois grupos em parte das latências do mfERG e na visão de cores, nos limiares do eixo tritan,. Na análise entre testes, o mfERG teve os maiores índices de sensibilidade e especificidade, seguido por visão de cores, sensibilidade ao contraste e perimetria, nesta ordem. Na comparação das áreas sob as curvas ROC não houve diferença significativa apenas entre os testes 1, 2 e 4. Conclusões: foram encontradas perdas funcionais estatisticamente significativas na avaliação psicofísica e eletrofisiológica da visão de pacientes diabéticos do tipo 2 sem e com retinopatia diabética. O presente trabalho confirma e amplia o crescente corpo de evidencias de perdas funcionais observadas precocemente no curso da diabetes, na ausência de alterações morfológicas (vasculares) detectáveis na retina. A interpretação dessas perdas precoces é de que tenham origem neural. Nossos achados indicam que a presença de retinopatia leve não teve efeito significativo sobre a maior parte dos aspectos funcionais analisados, corroborando a noção de origem neural das perdas. O efeito da diabetes sobre a função neural não parece ser específico a nenhuma das vias de processamento visual, como indicado pelos testes de sensibilidade ao contraste e de visão de cores. Os achados deste trabalho confirmam a hipótese de que, para o sistema visual, a diabetes seja uma doença neurodegenerativa da retina que pode estabelecer- se mesmo na ausência de retinopatia. Assim, a avaliação dos aspectos funcionais da visão deve ser melhor que a avaliação morfológica da retina para a identificação de pacientes diabéticos sob risco de perda visual. / The present study evaluated different aspects of visual function in type 2 diabetics both with and without retinopathy. The approach was to evaluate vision at several levels of the visual system by means of application of a battery of modern, sensitive psychophysical and electrophysiological tests. The goals were to characterize the changes in visual function underlying the disease prior to the onset of retinopathy, and to verify how the early losses are affected once retinopathy has occurred. Materials and methods: 31 diabetic patients with non-proliferative retinopathy (15 , 16 ; age = 59 ± 09 years; duration of diabetes = 10 ± 06 years); 36 diabetic patients without retinopathy (16 , 20 ; age = 56 ± 11 years; duration of diabetes = 06 ± 04 years) and 30 controls (13 , 17 ; age = 44 ± 10 years) were evaluated with: (1) multifocal electroretinogram - mfERG; (2) achromatic contrast sensitivity segregated into magno- (MC) and parvocellular (PC) pathways Pedestal test; (3) white-onwhite and blue-on-yellow computerized visual perimetry and (4) quantitative computerized color vision test Cambridge Colour Test (CCT). An ANOVA was performed for the statistical comparison among groups and ROC curve analysis was used to compare the diagnostic power of the different tests. Results: both diabetic patient groups manifested significant functional losses compared to controls in the mfERG, the Pedestal test and the CCT. In the mfERG, both patient groups had significantly smaller amplitudes and longer latencies than controls in one or more of the signature mfERG waveform components. For the Pedestal Test, both patient groups manifested losses in both the M-targeting and P-targeting paradigms. The CCT chromatic discrimination test found significant losses along all three color confusion axes (protan, deutan, tritan) in both patient groups. In the visual fields, only the patients with retinopathy exhibited significant losses compared to controls. In the comparison between patients with and without retinopathy, no statistical differences between results were found, except for some of the mfERG latencies and the color discrimination in the tritan axis. The ROC analysis showed that the mfERG had the higher combined sensitivity and specificity indexes, followed by the CCT, pedestal test and perimetry with decreasing indexes in this order. Conclusions: statistically significant losses were found in psychophysical and electrophysiological assessment of visual function of type 2 diabetic patients with and without diabetic retinopathy. The present work strongly confirms the growing body of evidence that functional losses with neural etiology occur in type 2 diabetes before any vascular changes are clinically detectable in the retina. In the majority of the measures, the presence of retinopathy increased the functional losses, but did not determine significant differences in relation to the losses observed in the diabetics with normal fundus. According to our results from the Pedestal Test and the Cambridge Colour Test, the neural damage is not selective to either of the visual processing pathways. The results are consistent with the hypothesis that diabetes is a neurodegenerative disease of the retina whose establishment may occur even in the presence of retinopathy. Thus, the assessment of functional status rather than morphological examination seems a better approach to identify diabetic patients under vision threat.

Orientador: Carlos Eduardo Steiner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T13:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Assis_NilmaAlmeidade_M.pdf: 1405023 bytes, checksum: 12e3861c31dae0e759ab571d2d029476 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A retinopatia diabética é uma complicação freqüente no diabetes melito tipo 1, acometendo quase a totalidade de pacientes, em graus variados, após 20 anos de doença. A interferência de fatores ambientais como a manutenção de um estado hiperglicêmico na sua fisiopatologia já foi comprovada, mas ainda não foi esclarecido porque alguns pacientes desenvolvem essa complicação de maneira grave e precoce. Nos últimos anos, diversos estudos têm sugerido a participação de fatores genéticos nesse processo. O fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), potente indutor da angiogênese, foi associado à retinopatia diabética por alguns autores, pelo aumento da sua expressão, em virtude de mutações em sua região promotora. Neste trabalho foi realizada uma avaliação clínico-laboratorial, a análise do SNP rs833061 (- 460) e a pequisa da deleção de 18 pares de bases em -2549, ambas na região promotora do gene VEGF em 114 pacientes com diabetes melito tipo 1, de três centros de referência em diabetes no Brasil ¿ Hospital das Clínicas da Unicamp, Instituto Estadual de Diabetes e Endocrinologia Luiz Capriglione (RJ) e Santa Casa da Misericórdia de São Paulo (SP). Houve associação entre retinopatia diabética proliferativa e nefropatia, porém nenhum paciente apresentou a deleção em -2549, nem o alelo -460 C em homozigose. Tais resultados sugerem que esses polimorfismos na região promotora do gene VEGF não interferem na predisposição à retinopatia diabética na população estudada e que outros agentes ambientais e/ou genéticos devem ser significativos / Abstract: Diabetic retinopathy is a frequent complication of diabetes mellitus type 1 and almost all patients develop it after twenty years of disease. The causes of these complications are not clear, but several environmental factors such as chronic hyperglicaemia may act in this predisposition, however, it is not clearly understood why some individuals develop it in a severe and precocious way. The participation of genetic factors as the vascular endothelial growth factor (VEGF), a potent angiogenic mediator, was already confirmed for some authors. In this study we investigate whether polymorphisms in VEGF gene are associated with proliferative diabetic retinopathy. One hundred-fourteen patients with diabetes mellitus type 1 underwent a clinical and laboratorial study, as well as the analysis of two polymorphisms: rs833061 and the deletion of 18 bp at -2549 both on the promoter region of the VEGF gene. There was an association between nephropathy and retinopathy in our patients but none of the individuals presented the deletion at -2549 or the allele C in rs833061 in homozygous state. These results suggest that such polymorphisms in the promoter region of the VEGF gene do not interfere in the predisposition to diabetic retinopathy in our population and that other environmental and/or genetic factor may be more relevant / Mestrado / Genetica Medica / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Jacqueline Mendonça Lópes de Faria, José Butori Lopes de Faria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T10:41:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosales_MarianaAparecidaBrunini_D.pdf: 28953374 bytes, checksum: e9a2824bad639c7cbd3628c24c4308ad (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A patogênese da retinopatia diabética (RD) está associada ao estresse nitrosativo. Alterações na barreira hemato-retiniana (BHR) externa, formada pelas células do epitélio pigmentar da retina (EPR), estão associadas às fases precoces da RD e podem acarretar no desequilíbrio da manutenção dos fotorreceptores e consequentemente promoverem mudanças nas células neuronais da retina. O estresse nitrosativo como conseqüência do aumento da produção de óxido nítrico (NO¿) produzido pela super expressão da óxido nítrico sintetase induzida (iNOS) esteve presente em todas as camadas da retina, inclusive no EPR em condições de RD experimental in vivo precoce ou na linhagem celular humana do EPR (ARPE-19) expostas à alta concentração de glicose. O tratamento com agentes químicos como a S-nitrosoglutationa (GSNO), ou naturais (cacau enriquecido com polifenol) atuaram em diferentes vias de inibição da iNOS, prevenindo o estresse nitrosativo. Para o estudo in vivo com o colírio de GSNO (artigo I) foram utilizados animais espontaneamente hipertensos (SHR) com 4 semanas de idade. O diabetes (DM) foi induzido por STZ. Após a confirmação do DM (48 horas), os animais foram divididos em 6 grupos: controles (CTs) veículo; GSNO 900nm e GSNO 10?m ou DMs veículo; GSNO 900nm e GSNO 10?m. O efeito do tratamento com colírio de GSNO foi dependente da presença ou ausência da condição do DM. Nos animais CT, o GSNO atuou como um agente nitrosativo e nos animais DM preveniu o aumento da expressão da iNOS, preservando a retina funcional. Os estudos in vitro, demonstraram que o efeito do GSNO foi deletério ou protetor dependente da concentração de glicose. Nas células ARPE-19 expostas a condições normais de glicose, o tratamento promoveu um aumento na produção de NO¿ sem aumentar a expressão de iNOS e nas células sob alta glicose induziu uma modificação pós-translacional de proteína, a S-glutationilação da iNOS prevenindo o estresse nitrosativo. No estudo do cacau (artigo II), foi avaliado in vitro (ARPE-19 exposta a alta concentração de glicose) o seu efeito protetor dependente da concentração de polifenóis. Para isso foram testadas duas formulações de cacau que diferiram somente na concentração de polifenol: 0,5% para o cacau com baixo teor de polifenol e 60,5% para o cacau com alto teor de polifenol. A epicatequina (EC), encontrada na concentração de 12% no cacau com alto teor de polifenol foi tão eficaz quanto o próprio e esteve envolvida no controle da expressão da iNOS através da estimulação do receptor ?-opióide (DOR) diminuindo os níveis de TNF-?. A modulação da iNOS, preveniu a S-nitrosilação da caveolina-1 (CAV-1) e diminuição da expressão das junções intercelulares claudina-1 e ocludina através da prevenção da interação CAV-1?junções. Em ambos os estudos, o alvo terapêutico foi a iNOS em duas diferentes modalidades: modificação pós-translacional de proteína e modulação do TNF-? via DOR no EPR em modelos experimentais de RD. Os tratamentos apresentados neste trabalho demonstraram a iNOS como alvo terapêutico e mostraram-se eficaz em conter danos funcionais e morfológicos promovidas pela situação de mimetismo do DM no EPR demonstrando o importante papel da iNOS no desenvolvimento da RD / Abstract: The pathogenesis of diabetic retinopathy (DR) is associated with nitrosative stress. Changes in outer blood-retinal barrier (BRB), formed by retinal pigment epithelium cells (RPE) are associated in the early stages of DR and can cause imbalance in the maintenance of photoreceptors and thereby cause changes on retinal neuronal cells. The nitrosative stress as a result of increased production of nitric oxide (NO) produced by overexpression of nitric oxide synthase (iNOS) was present in all layers of the retina and mainly in RPE cells in early in vivo experimental DR or in human RPE cell line (ARPE-19) exposed to high glucose condition. Therapy with chemical agents such as S-Nitrosoglutathione (GSNO) or natural compounds (enriched cocoa polyphenol) acted in different pathways of iNOS inhibition, preventing nitrosative stress. For the in vivo study with GSNO eye drops (article I), it were used spontaneously hypertensive rats (SHR) rats with 4 week old. Diabetes (DM) was induced by streptozotocin (STZ). After DM confirmation (48 hours), the animals were divided into 6 groups: controls (CTs) vehicle; GSNO 900nm and GSNO 10?m or DMs vehicle; GSNO 900nm e GSNO 10?m. The effects of treatments were dependent on glucose concentration. In CT animals, GSNO acted as a nitrosative agent and in DM rats prevented iNOS overexpression, preserving the retina function. In vitro study showed that GSNO protective or deleterious effects were dependent on the glucose concentration. In ARPE-19 cells exposed to normal glucose, the treatment promoted an increase of NO¿ production without increase iNOS expression and in cells under high glucose (HG) condition induced post-translational protein modification, S-glutationylation of iNOS, preventing nitrosative stress. In the study with cocoa (article II), it was evaluated its protective effect dependent on concentration of polyphenols in ARPE-19 cells under HG condition. For this study, the composition of cocoa was the same in both preparations with the only difference in the amounts of polyphenol, 0.5% for low polyphenol cocoa (LPC) and 60.5% for high polyphenol cocoa (HPC). Epicatechin (EC), found in 12% of HPC was similarly protective compare to HPC and it was involved in controlling iNOS expression by stimulation of the delta opioid receptor decreasing TNF- ? levels. The modulation of iNOS prevented S-nitrosylation of caveolin-1 (CAV-1) and decreased expression of claudin-1 and occluding tight junctions by preventing CAV-1/junctions interactions. The treatments presented here showed iNOS as a therapeutic target containing functional and morphological changes promoted by DM milieu in RPE showing the important role of iNOS in the development of DR / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:25:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Rosana Zacarias Honnouche.pdf: 1939926 bytes, checksum: d4fdb3cd4d741d0cf72b9b9269fceb63 (MD5) Previous issue date: 2011-11-29 / Diabetic macular edema (DME) is the main cause of visual loss in diabetic patients and is characterized by retinal thickening, whose evaluation is important for the diagnosis and management of diabetic retinopathy. The aim of this research was to measure the central subfield thickness (CST), the best-corrected visual acuity (BCVA) and the macular volume, and compare these data to those of diabetic patients without DME, using spectral-domain optical coherence tomography (SD-OCT), for quantitative analysis of DME.Two hundred patients with nonproliferative diabetic retinopathy (NPDR) were enrolled in a transversal study, from which 55 eyes with macular edema were detected by fundus biomicroscopy. Twenty seven diabetic patients without DME and with normal ophthalmological exam served as control group. Measurements of CST (main variable), BCVA and macular volume were taken, considering the variables age, gender, NPDR classification, external limitant membrane (ELM) integrity and type of DME. Biomicroscopy with noncontact lens, fluorescein angiography and spectral optical coherence tomography were performed using Cirrus SD-OCT. Besides descriptive statistics, additional tests were applied to analyze the results, such as variance analysis, t-Student, chisquare, Fischer s exact test, Mann-Whitney and Kruskall-Wallis. The relation between CST and BCVA was studied by linear regression, with logarithmic scale of minimal angle of resolution (logMAR). It was found that there is no significant difference between case and control groups for the variables age and gender. However, there was significant difference for variables CST, BCVA and macular volume. It was found significant correlation between retinopathy severity according to NPDR classification and the mean value of CST,which is the greater the retinopathy severity, the greater the CST. Most of the patients presented moderate NPDR. A strong correlation between macular volume and CST was found. Patients with serous retinal detachment presented higher mean value of CST, and those with CME presented worse BCVA. Patients with disrupted ELM showed greater mean value of CST and worse BCVA. It was concluded that SD-OCT allows quantitative measurement of CST in DME and, for identifying the retinal layers individually, also detects retinal structural changes and correlates them to visual functions. / O edema macular diabético é a principal causa de perda visual em diabéticos e é caracterizado pelo espessamento retiniano, cuja avaliação é importante para o diagnóstico e conduta da retinopatia diabética. O objetivo deste trabalho foi comparar as medidas da espessura do subcampo central (ESCC), a acuidade visual e o volume macular de pacientes com edema macular diabético (EMD) com diabéticos sem EMD, usando tomografia de coerência óptica de domínio espectral (SD-OCT) para análise quantitativa do EMD. Foi realizado um estudo transversal em que foram avaliados 55 pacientes com EMD, selecionados pela biomicroscopia de fundo, de um grupo de 200 pacientes com retinopatia diabética não proliferativa (RDNP). Um grupo de 27 pacientes diabéticos sem edema macular e com exame oftalmológico normal serviu como controle. Mediu-se a espessura do subcampo central (principal variável), a acuidade visual , o volume macular e avaliou-se a idade, o sexo, a classificação RDNP, a integridade da membrana limitante externa (MLE) e a morfologia do edema macular. Realizou-se biomicroscopia com lente de não contato, angiofluoresceinografia e tomografia de coerência óptica de domínio espectral com Cirrus SD-OCT. Além da estatística descritiva, utilizou-se testes para análise dos resultados: análise de variância, t-Student, qui-quadrado, teste exato de Fisher, Mann-Whitney e Kruskall-Wallis. A relação entre a ESCC e a acuidade visual foi estuda da através de análise de regressão linear com escala logarítmica de mínimo ângulo de resolução (logMAR). Registrou-se não haver diferença significativa entre casos e controles nas variáveis idade e sexo. Entretanto, houve diferença significativa para as variáveis ESCC, acuidade visual e volume macular. Foi encontrada correlação significativa entre a gravidade da retinopatia na classificação RDNP e a média da ESCC, sendo que quanto maior a gravidade da retinopatia, maior a ESCC. A maior parte dos pacientes apresentou RDNP moderada. Foi encontrada correlação significativa entre o volume e a ESCC. Pacientes com descolamento seroso apresentaram maior média da ESCC; e aqueles com EMC apresentaram pior acuidade visual. Pacientes com MLE descontínua apresentaram maior média da ESCC e pior acuidade visual. Concluiu-se que o SD-OCT mede quantitativamente a ESCC no EMD e, por identificar individualmente as camadas retinianas, detecta suas mudanças estruturais. Estas medidas podem ser correlacionadas com a função visual e auxiliar na conduta de pacientes com retinopatia diabética.

Objetivo: Avaliação funcional (acuidade visual e sensibilidade ao contraste) e morfológica da retina de pacientes com edema macular diabético (EMD) tratados com bevacizumabe intravítreo e controle glicêmico optimizado durante 24 semanas de acompanhamento. Projeto: Estudo prospectivo intervencionista, randomizado e controlado. Métodos: Quarenta e um olhos de 34 pacientes com diabetes mellitus tipo 2 e EMD com Hemoglobina glicada (HbA1c) <= 11% receberam injeções de bevacizumabe intravítreo (BIV) com controle glicêmico optimizado nas semanas 0, 6, 12 e 18 (grupo 1; n=21); ou receberam simulação de BIV com controle glicêmico optimizado na semana 0 e 6 e, posteriormente, BIV com controle glicêmico optimizado na semana 12 e 18 (Grupo 2; n=20). Mudanças na sensibilidade ao contraste (SC), na acuidade visual (AV) e na espessura foveal (EF) medida por Tomografia de coerência óptica (TCO) foram comparadas antes do início do tratamento e nas semanas 2, 6, 12, 14, 18 e 24. A análise laboratorial do controle sistêmico foi comparada também no início e nas semanas 12 e 24. Resultados: O estudo mostrou AV e EF significativamente melhores em 24 semanas em ambos os grupos. Na 24ª semana, a média da SC melhorou no grupo 1 de 1,14±0,36logCS para 1,33±0,24logCS (P=0,002) e, também, no grupo 2 de 1,11±0,29 para 1,26±0,23logCS (P = 0,004) em 24 semanas, sem diferença significativa entre eles (P = 0,52). Houve uma redução média de 0,78% nos níveis de HbA1c (8,28±1,29% para 7,5±1,20%; P < 0,001) em 24 semanas. As maiores diferenças entre os grupos foram detectadas entre o pré-tratamento e a segunda semana, onde a EF diminuiu rapidamente no grupo 1 em comparação ao grupo 2 (116±115 vs. 17±71?m, respectivamente; P < 0,01). Em 12 semanas, as medidas já não foram estatisticamente significativas (variação da EF = grupo 1 91±184?m vs. grupo 2 62±152?m; P = 0.72). No pré-tratamento, houve correlação significativa entre SC e AV (r = -0,70; P < 0,001) e também entre SC e EF (r = -0,63; P < 0,001) que se manteve em 24 semanas. Conclusão: O uso do bevacizumabe intravítreo associado ao controle glicêmico optimizado melhorou significativamente a função visual, incluindo a sensibilidade ao contraste dos olhos com EMD. No entanto, o controle glicêmico optimizado isolado também se mostrou eficiente durante 12 semanas / Purpose: Functional (visual acuity and contrast sensitivity) and morphological evaluation of the retina of patients with diabetic macular edema (DME) treated with intravitreal bevacizumab and optimized glycemic control on 24-week followup. Project: Prospective, interventional, randomized controlled trial. Methods: Forty-one eyes of 34 patients with type 2 diabetes mellitus and DME with hemoglobin A1c (HbA1c) <= 11% received injections of intravitreal bevacizumab (IVB) with optimized glycemic control (group 1; n=21) at week 0, 6, 12 and 18; or received IVB simulation with optimized glycemic control at week 0 and 6 and, after three months, IVB with optimized glycemic control at week 12 and 18 (Group 2; n=20). Mean Change in contrast sensitivity (CS), best corrected visual acuity (BCVA) and central foveal thickness (CFT) - as measured by optical coherence tomography (OCT) were compared at baseline, and at weeks 2, 6, 12, 14, 18 and 24. A laboratory analysis of systemic control was also compared at baseline and at weeks 12 and 24. Results: The study showed that BCVA and CFT were significantly better in both groups at 24 weeks. Mean CS also improved significantly in group 1 from 1.14±0.36 to 1.33±0,24logCS (P=0,002) and also in group 2 from 1.11±0.29 to 1.26±0.23logCS (P=0,004) at 24 weeks, with no significant difference between them (P = 0.52). There was a mean reduction of 0.78% in HbA1c levels (8,28±1,29 to 7,5±1,20%; P < 0,001) at 24 weeks. The major differences between both groups were detected between the baseline and the second week, whem CFT promptly decreased in group 1 compared to group 2 (116±115 ?m vs. 17±71 ?m; P < 0,01). At 12 weeks, the measures were no longer statistically significant (variation of CFT = group 1 91±184 ?m vs. group 62±152 ?m, P = 0.72). At baseline, there was meaningful correlation between CS and BCVA (r = -0,70; P < 0,001) and also between CS and CFT (r = -0.63; P < 0.001) that remained at 24 weeks. Conclusion: The use of intravitreal bevacizumabe associated with optimized glycemic control improved significantly the visual function, including contrast sensitivity in eyes with DME. However, optimized glycemic control alone also shown to be efficient at 12 weeks