Thesis (MMedVet (Reproduction))--University of Pretoria, 2006. / Includes bibliographical references.

Thesis (M.Sc. (Biochemistry))--Mahidol University, 1983.

Thesis (M.Sc. (Biochemistry))--Mahidol University, 1983.

Thesis (MSc. (Veterinary Science))--University of Pretoria, 2006. / Includes bibliographical references.

Thesis (M.Inst Agrar(Animal Science)) -- University of Pretoria, 2002. / Abstract in English. Includes bibliographical references.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet. / Härtill 4 uppsatser.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-07Bitstream added on 2015-04-09T12:48:10Z : No. of bitstreams: 1 000814318.pdf: 799152 bytes, checksum: 36f7b91352463121d3390598b87e5119 (MD5) / O Brasil possui o maior rebanho bovino comercial do mundo e chegou a 212,8 milhões de cabeças em 2011. Foram comercializadas 12,3 milhões de doses de sêmen bovino em 2012. O efetivo de fêmeas bovinas em idade reprodutiva é 61,4 milhões e a utilização de duas doses de sêmen por vaca estima-se que 10% do rebanho nacional está sendo inseminado. A fertilidade é uma importante característica nos sistemas produtivos e o macho de grande importância. Utilizando a termografia infravermelha (TIV) e ultrassonografia Doppler a termorregulação e o fluxo sanguíneo foram avaliados em touros. Dois grupos de seis touros foram avaliados por um ano e os dados obtidos da termografia – temperatura global do plexo (TGP), temperatura global do escroto (TGE), temperatura do plexo esquerdo (TPE), temperatura do plexo direito (TPD), temperatura do escroto esquerdo (TEE), temperatura do escroto direito (TED) e da ultrassonografia Doppler – velocidade sistólica máxima (VSM), velocidade diastólica final (VDF), índice de pulsatilidade (IP), índice de resistência (IR) e a temperatura ambiental (TA) foram correlacionados com os espermogramas. Foram observadas correlações positivas e negativas entre as variáveis da TIV e US Doppler com as variáveis dos espermogramas e conclui-se que a TIV permite a observação de alterações precoces da temperatura do plexo e escroto; a US Doppler demonstrou correlações entre a VDF, IR e IP com qualidade do sêmen; de acordo com este estudo touros com qualidade de sêmen superior apresentaram menor impedância vascular das artérias testiculares / Brazil has the largest commercial cattle herd in the world and reached 212,8 million head in 2011. 12,3 million doses of bovine semen were sold in 2012. Effective from cows of reproductive age is 61,4 million and the use of two doses of semen per cow is estimated that 10 % of the national herd is being inseminated. Fertility is an important feature in production systems and the bull has great importance. Using infrared thermography (IRT) and Doppler ultrasonography thermoregulation and blood flow were evaluated in bulls. Two groups of six bulls were evaluated for a year and the data of thermography - global temperature plexus (GTP), global temperature of the scrotum (GTE), temperature of the left plexus (TLP), temperature of the right plexus (TRP), temperature the left scrotum (TLE), temperature of the right scrotum (TRE) and Doppler ultrasonography - peak systolic velocity (PSV ), end diastolic velocity (EDV), pulsatility index (PI), resistance index (RI) and room temperature (RT) were correlated with semen analyzes. Positive and negative correlations were found between the variables of IRT and US Doppler variables of semen analyzes and concludes that IRT allows observation of early changes of the plexus and scrotal temperature; Doppler US demonstrated correlations between EDV, RI and IP with semen quality; according to this study bulls with superior quality of semen showed lower vascular impedance of the testicular arteries

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Eunice Oba / Banca: Romildo Romualdo Weis / Resumo: Objetivou-se estudar os efeitos do extrato de lipoproteínas de baixa densidade sobre o sêmen ovino durante a refrigeração. Vinte amostras de 5 carneiros foram refrigeradas por 24 e 48 horas na geladeira para refrigeração Minitube, nos meios diluentes Glicina Gema Leite, Glicina Gema purificada Leite e Glicina Extrato Leite e submetidas a teste de exaustão (37ºC/240 minutos) sendo avaliados in vitro por meio das análises da cinética espermática computadorizada, da morfologia e da integridade da membrana plasmáticas. Após 24 e 48 horas de refrigeração, os meios Glicina Gema purificada Leite e Glicina Extrato Leite apresentaram resultados superiores ao meio Glicina Gema Leite, após o teste de exaustão, para o parâmetro de integridade de membrana plasmática. Para a integridade de acrossomo o meio Glicina Gema purificada Leite foi superior (P<0,05) em relação ao meio Glicina Gema Leite durante o teste de exaustão. Nos demais parâmetros estudados de cinética espermática e morfologia (cauda dobrada), não houveram diferenças significativas (P>0,05) entre os meios. Entre os momentos, houve diferença significativa (P<0,05) em todos os meios durante o teste de exaustão / Abstract: The objective was to study the effects of extract of low density lipoproteins on ovine semen during cooling. Twenty samples of five sheep were chilled for 24 and 48 hours in the refrigerator for cooling Minitube, in extenders Glycine Yolk Milk, Glycine purified Yolk Milk and Glycine Extract Milk and tested to exhaustion (37 ° C/240 min) were evaluated in vitro by means of computerized analysis of sperm kinetics, morphology and plasma membrane integrity. After 24 and 48 hours of refrigeration, the extenders Glycine purified Yolk Milk and Glycine Extract Milk showed better results than extender Glycine Yolk Milk, after the exhaustion test, for the parameter of membrane integrity. For the integrity of the acrosome through Glycine purified Yolk Milk was higher (P <0.05) than Glycine Yolk Milk during the exhaustion test. In other parameters of sperm kinetics and morphology, there were no significant differences (P> 0.05) among extenders. Between times, significant difference (P <0.05) in all extenders during the exhaustion test / Mestre

O presente estudo visou verificar o efeito sobre alguns parâmetros da seleção por gradiente de Percoll® e da adição de plasma seminal do sêmen eqüino preservado a +4oC. O primeiro experimento avaliou a taxa de recuperação de espermatozóides após seleção por Percoll® em diferentes protocolos de centrifugação. Foram realizadas 5 coletas de sêmen de um garanhão. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração. Foram retiradas duas amostras de 4 mL, diluídas em leite desnatado UHT com concentrações de 50 e 100 x 106 espermatozóides por mL cada. Cada uma destas amostras foi dividida em 4 alíquotas de 1 mL, que foram então colocadas sobre Percoll® e submetidas a diferentes tempos e velocidades de centrifugação. V1 - 200 g (5 min) + 800 g (10 min); V2 - 800 g (10 min); V3 - 800 g (15 min); V4 - 800 g (20 min). Após esse processo, o sobrenadante foi desprezado e o pellet de cada alíquota ressuspendido com 0,5 mL de leite UHT. As 8 amostras foram novamente avaliadas para concentração, motilidade e vigor. O segundo experimento estudou o efeito da adição de plasma seminal de diferentes qualidades ao sêmen eqüino selecionado por gradiente de Percoll® e resfriado a +4°C por até 72 horas. Foram utilizados 40 ejaculados de 4 garanhões, sendo dois com boa qualidade de sêmen e dois com baixa qualidade de sêmen. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração e preparadas cinco frações de 100x106 espermatozóides, diluídas 1:1 (v/v) em EDTA-Glicose. Quatro delas, constituídas por 1mL a 2mL, foram depositadas sobre Percoll®. A fração restante foi centrifugada em tubo de vidro de 10 mL, sob as mesmas condições de tempo e velocidade das demais amostras. Foi realizada centrifugação por 5 minutos em 200 g, seguida de 10 minutos em 800 g. O sobrenadante foi descartado e o pellet ressuspendido com leite UHT desnatado compondo os seguintes tratamentos: Sp: 1,5 mL de leite UHT desnatado sem adição de plasma seminal; Hp: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal homólogo; Ap: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal do pool de alta qualidade; Bp: 1,425mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L plasma seminal do pool de baixa qualidade; Cc: foi centrifugada sem seleção por Percoll®, teve seu sobrenadante descartado e ressuspendida com 2 mL de leite UHT; C : uma amostra de sêmen diluído em leite UHT foi mantida como controle no processo de armazenamento. As amostras foram resfriadas a +4°C e examinadas a cada 24h até as 72 horas em relação à motilidade, funcionalidade de membrana (teste hiposmótico) e integridade de membrana (CFDA/PI). A seleção por gradiente descontínuo de Percoll® 90/45% mostrou-se efetiva na recuperação de espermatozóides com motilidades progressiva e total. A adição de 5% de plasma seminal ou a ausência de plasma não influenciaram os valores da motilidade das amostras selecionadas por gradiente de Percoll®. A seleção por Percoll não influenciou na percentagem de células com membrana plasmática funcional. Concentrações superiores a 2% de plasma seminal resultaram em decréscimo do número de células com membrana funcional, enquanto que as amostras sem plasma seminal apresentaram os melhores resultados e o grupo controle, que apresentava a maior percentagem de plasma, os piores. A utilização de Percoll® não separou células com alteração de membrana. A percentagem de células com membrana completamente íntegra foi significativamente maior nas amostras que sofreram processo de centrifugação, independentemente da seleção. O processo de seleção por Percoll® foi efetivo na recuperação de espermatozóides de eqüino com motilidade progressiva, mas não selecionou espermatozóides quanto à funcionalidade nem à integridade de membrana. Concentrações inferiores a 2% de plasma seminal melhoraram a funcionalidade de membrana. A ausência de plasma seminal melhorou os resultados de integridade das membranas plasmática e acrossomal; e a adição de plasma de alta qualidade não melhorou a motilidade de espermatozóides selecionados por Percoll®.

El presente trabajo consta de 3 experimentos y tuvo como objetivo principal evaluar el efecto de 2 antioxidantes análogos de superóxido dismutasa (Tempo y Tempol) durante los procesos de criopreservación y vitrificación de espermatozoides de alpaca sobre parámetros de funcionalidad espermática. En el Experimento 1, 15 muestras espermáticas obtenidas de la cola del epidídimo y 5 muestras de semen de alpaca fueron vitrificadas en medios Tris base y HTF utilizando diferentes azúcares (fructosa, sacarosa y trehalosa) en 3 concentraciones diferentes (0.25, 0.5 y 1.0 M). Se obtuvo menos de 1% de motilidad y menos de 5% de viabilidad utilizando el medio HTF. En el Experimento 2, 6 muestras de espermatozoides frescos de alpaca fueron incubados durante 3 horas a 37 °C en un medio Tris-base junto con polimorfos nucleares (PMN) activados con 100 nM de PMA (Phorbol myristate acetate) para inducir la formación de ROS. Se demostró que la motilidad espermática se reduce significativamente (p< 0.05) en el grupo con polimorfos activados (13.67%) en comparación con el grupo control (22.42%). En el Experimento 3, se evaluó el efecto de 2 antioxidantes análogos de superóxido dismutasa (Tempo y Tempol) durante el proceso de criopreservación en un medio en base a leche descremada y etilenglicol, encontrando que con la adición de Tempo y Tempol se obtiene una mayor (p<0.05) motilidad espermática en comparación al grupo control (19.63% y 22.57% vs. 10.62%), mayores porcentajes (p<0.05) de integridad de membrana (14.31% y 13.08% vs. 10.38%) y se obtiene (p<0.05) mayores porcentajes de espermatozoides con ADN no fragmentado (74.20% y 83.76% vs. 63.68%). La variable espermática de vitalidad/integridad acrosomal no fue afectada significativamente por la adición de los antioxidantes Tempo y Tempol. Se concluye que la incubación de espermatozoides de alpaca incubados con PMN activados con PMA tienen un efecto nocivo en la motilidad espermática, y que durante la criopreservación de semen la pérdida de motilidad espermática, pérdida de integridad funcional de membrana y aumento de la fragmentación de ADN espermático pueden ser prevenidos parcialmente mediante la utilización delos antioxidantes Tempo ó Tempol como parte del dilutor de semen. -- Palabras clave: Espermatozoides, alpaca, criopreservación, ROS, antioxidante, tempo, tempol. / -- The present study had 3 experiments and the main objective were to evaluate the effect of two superoxide dismutase mimics (Tempo and Tempol) during semen sperm cryopreservation and vitrification on alpaca sperm function. In Experiment 1, vitrification of alpaca sperm was evaluated using extenders based on Tris solution and HTF, with different sugars as cryoprotectants (fructose, sucrose, and trehalose) in different concentrations (0.25, 0.5 y 1.0 M). Only few spermatozoa motile (<1%) and viable (<5%) were found in group HTF.In Experimental 2, six samples of fresh alpaca sperm were incubated during 3 hours at 37 °C on a medium based on Tris with polymorphonuclear activated by 100 mM PMA (phorbol myristate acetate) to induce ROS production. Sperm motility was significantly reduced (p< 0.05) when sperm were incubated on a medium con high levels of ROS (13.67%) in comparison with control group (22.42%). In Experiment 3, two superoxide dismutaseanalogues (antioxidants Tempo and Tempol) were evaluated during cryopreservation process on an extender based on skim milk and ethylene glycol. Addition of Tempo or Tempol result in higher (p< 0.05) sperm motility in comparison than control group (19.63% and 22.57% vs. 10.62%). Functional sperm membrane integrity were also higher (p<0.05) in groups Tempo (14.31%) and Tempol (13.08) than control group (10.38%). In the same way, DNA integrity washigher (p< 0.05) in groups Tempo (74.20%) and Tempol (83.76%) than control group (63.68%). Viability and acrosomal integrity were not affected by cryopreservation with superoxide dismutase analogues. We conclude that alpaca sperm incubation on PMN activated by PMA had a detrimental effect on alpaca sperm motility, and that motility, functional sperm membrane integrity and DNA integrity could be partially protected by administration of Tempo or Tempol as components of extender for cryopreservation alpaca semen. -- Key words: Sperm, alpaca, cryopreservation, ROS, antioxidant, tempo, tempol / Tesis