Recent research efforts in the field of forensic biology include development of a confirmatory one-step testing methodology for biological fluids. Such techniques that have been shown to be promising include the analysis of deoxyribonucleic acid (DNA) or messenger ribonucleic acid (mRNA) contained within the specialized cells of specific body fluids. In current forensic practice, the possible biological origin of an evidentiary item or stain is often evaluated using protein-based presumptive testing. Ribonucleic acid (RNA) is an effective marker for the identification of body fluids because it codes for those specific proteins within the particular cells that make up each fluid. LGC has developed the ParaDNA® Body Fluid ID test that detects specific RNA markers allowing discrimination of six different body fluids. This research focuses on PRM2 and SEMG1, indicative of spermatozoa and seminal fluid, respectively. The ParaDNA® Body Fluid ID test was investigated to evaluate its performance with forensic semen samples and to determine if it is advantageous over current conventional semen screening methodology. Factors such as sensitivity, PRM2 and SEMG1 stability in aged stains at room temperature and in semen subjected to multiple freeze-thaw cycles, and performance on post-coital swabs were evaluated. Both spermatozoa and seminal fluid were detected in one of six 1:10 diluted stains tested and zero of six 1:50 diluted stains. Conventional semen screening methodology detected both components in six trials of 1:10 and 1:50 stains. PRM2 and SEMG1 were detected in stains prepared with neat liquid semen subjected up to 10 freeze-thaw cycles, in room temperature stains stored for up to 101 days, as well as in three different post-coital swabs. Of the 82 samples run on the instrument, 22 were false negatives, with a majority of them occurring during the sensitivity study with diluted stains, indicating the ParaDNA® Body Fluid ID Test is not yet suitable to replace current conventional screening methods. Upon further validation it could serve as a valuable tool for forensic laboratories.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Gradução em Aquicultura, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T04:48:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 286311.pdf: 489748 bytes, checksum: e7f84ddc700363c28b3417a19fc409a5 (MD5) / O dourado Salminus brasiliensis é um peixe nativo que tem despertado interesse para aquicultura. A reprodução induzida é dominada, mas as baixas taxas de fertilização dos ovos são constantes. Desta forma, objetivou-se desenvolver um protocolo para a fertilização de ovócitos de dourado durante a sua reprodução. Foram testados diferentes volumes de água na ativação dos gametas com distintas concentrações de oxigênio dissolvido, tempo de estocagem dos ovócitos após a extrusão e de contato de diferentes soluções ativadoras. Também foram avaliadas diferentes relações entre sêmen (fresco e criopreservado), ovócitos e soluções ativadoras. O volume da água de ativação influenciou significativamente os resultados, onde 10 g de ovócitos fertilizados utilizando 10 mL de água resultou em uma taxa de fertilização quatro vezes inferior onde se utilizou 50 mL ou mais. As diferentes concentrações de oxigênio dissolvido da água de ativação não afetaram a fertilização já a concentração de espermatozóides no meio fecundante afetou, sendo os melhores resultados obtidos quando a concentração foi de 7,10x106 espermatozóides.mL-1, que foi conseguida quando se utilizou 0,05 mL de sêmen, 100 mL de água e 10 gramas de ovócitos. As taxas de fertilização caíram quando os ovócitos foram estocados por mais de 30 min e com o aumento do tempo de contato das soluções ativadoras por mais de 3 min para sêmen fresco e 1 minuto criopreservado. A metodologia para congelamento e descongelamento do sêmen foi eficiente para manter a motilidade espermática, no entanto, as taxas de fertilização obtidas com sêmen criopreservado foram inferiores ao sêmen fresco.

Este trabalho teve três objetivos principais: a) Estabelecer valores de referência para os parâmetros bioquímicos e hematológicos do jundiá cultivado em açude; b) Determinar a CL50 da cipermetrina ao jundiá, bem como verificar o efeito nos parâmetros sangüíneos; c) Determinar as características físicas e químicas do sêmen do jundiá. Os animais foram obtidos de açudes de um Produtor de Peixes em Rolante, RS e conduzidos ao Laboratório do ICBS, UFRGS, onde permaneceram em tanques de 500l. O sangue era obtido por punção do vaso caudal através de seringa descartável, transferidos a tubos com e sem EDTA 10%, e os testes bioquímicos e hematológicos realizados no HCPA. Para a avaliação da CL50 da cipermetrina no jundiá grupos (n ≥10) de animais foram tratados com a exposição a 8 diferentes concentrações de cipermetrina (ppm) (0:controle; 0,08; 0.1; 0,12; 0,16; 0,2; 0,24; 0,36). Os peixes foram observados após 24, 48, 72 e 96h do início do tratamento para avaliar o percentual de mortalidade. No estudo do estresse metabólico, grupos (n ≥6) receberam os tratamentos: ausência de exposição ao pesticida (controle) e duas doses (0.08 e 0.12 ppm) de cipermetrina. Foram feitas coletas de sangue antes, após 2, 4 e 8 dias da aplicação do pesticida para análise no HCPA. Para o estudo do sêmen, este foi obtido em diferentes períodos durante as 4 estações. A densidade espermática foi medida pela técnica do espermatócrito e pela contagem microscópica. A duração da motilidade espermática foi observada num microscópio, usando para interpretação uma escala arbitrária variando de 0 a 5. Parte do sêmen foi centrifugado para a obtenção do fluido seminal, o qual foi imediatamente congelado a –200C até análise no HCPA Com a concentração 0,12 ppm as variações bioquímicas foram incrementadas e já se observaram alterações nos movimentos e no equilíbrio. Em estações de aqüicultura, produtores podem realizar avaliação periódica em uma pequena população de seus peixes, quantificando o grau de estresse metabólico. Esses indicadores de estresse podem ser precocemente detectados apesar da aparência exterior e comportamentos normais dos peixes. A técnica para a medida da densidade espermática através do espermatócrito apresentou correlação com a contagem celular por microscópio, com a vantagem de ser mais simples, rápida e econômica. As características que foram encontradas no sêmen parecem ser bons indicadores da qualidade espermática e podem auxiliar na seleção de machos doadores de gametas de alta qualidade em sistemas de cultivo deste peixe.

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Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-06-26T01:22:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317337.pdf: 259329 bytes, checksum: 1a8f47df4108c45f0c9a3aea157ec3af (MD5) / O dourado Salminus brasiliensis é um peixe migrador que desperta interesse para piscicultura. Os procedimentos para a reprodução induzida são dominados, contudo, o uso de sêmen criopreservado continua apresentando uso restrito. Apesar da criopreservação ser eficiente para manter a motilidade espermática, as taxas de fertilização obtidas com sêmen criopreservado são inferiores às do sêmen fresco. Este trabalho visa contribuir para o conhecimento no uso de sêmen criopreservado na reprodução induzida do dourado. Os gametas foram obtidos da primeira geração de dourados provenientes do cruzamento de reprodutores selvagens. Foram realizados experimentos de descongelamento (ambiente x água), soluções ativadoras (água destilada, NaCl 0,45% ou NaHCO3 1%), motilidade espermática e fertilização com sêmen criopreservado de dourado comparando a solução crioprotetora ACP®-104 350 mOsm e metilglicol com a solução comumente utilizada para dourado, que consiste na mistura de dimetilsulfóxido, glicose, gema de ovo e água destilada. Para ambas as soluções foi avaliada a diluição do sêmen, sendo testadas diferentes proporções de sêmen:solução crioprotetora. O maior tempo de motilidade foi obtido com NaCl 0,45% e o descongelamento com água possibilitou maiores taxas de fertilização, sendo que a solução crioprotetora à base de glicose propiciou os melhores resultados. A motilidade e a taxa de fertilização do sêmen criopreservado com a solução à base de glicose não foram alteradas pela diluição sêmen:crioprotetor, porém, com o uso do ACP®-104 a motilidade espermática e a fertilização foram maiores com o aumento da diluição.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-27Bitstream added on 2014-06-13T20:26:10Z : No. of bitstreams: 1 lopes_bv_dr_botfmvz.pdf: 1496519 bytes, checksum: 66727a17c8bb9d049c65239284863d62 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo desse projeto foi determinar a eficiência do uso de antioxidantes na prevenção de efeitos deletérios da congelação de sêmen em cães férteis e subférteis. Para isso foram executados dois experimentos: O primeiro teve como objetivo comparar os resultados da congelação do sêmen de cães férteis e subférteis, utilizando meio diluente a base de TRIS/gema de ovo/glicerol, com a adição ou não de antioxidantes (Catalase, Superóxido Dismutase e suas associações, ácido ascórbico, tocoferol e suas associações). O segundo experimento teve como objetivo comparar os resultados da congelação do sêmen de cães férteis e subférteis, suplementados com 500mg de vitamina C e E, por via oral, durante 60 dias. Foram utilizados 13 cães, sendo 7 considerados férteis e 6 classificados com subférteis. Os cães férteis apresentavam exame andrológico dentro dos padrões recomendados pelo CBRA; os subférteis apresentavam baixa concentração espermática (< 20x10 6 sptz/mL) e/ ou alto índice de patologias espermáticas (> 30%). O sêmen foi congelado em três momentos, antes do início da suplementação (M1), 30 (M2) e 60 dias (M3) após o início da suplementação oral. O sêmen foi coletado por manipulação digital do pênis e analisado para: motilidade, vigor, concentração e morfologia espermática. A congelação do sêmen foi realizada pelo método descrito por Chirinéa et al. (2006). A descongelação foi realizada a 70ºC por 8 segundos. Logo após as amostras foram avaliadas na análise computadorizada (CASA) e avaliação de integridade de membrana acrossomal e plasmática. Também foi analisada a taxa de peroxidação lipídica e antioxidantes: SOD, catalase, vitaminas C e E no plasma seminal. Pode-se concluir que a suplementação oral, no meio diluente ou a sua associação pode trazer benefícios para o processo de congelação/descongelação de cães... / The aim of this project was to determine the efficiency of antioxidants in preventing the deleterious effects of freezing semen in fertile and subfertile dogs. For this purpose two experiments were performed: The first aim was to compare the results of frozen semen of fertile and subfertile dogs, using the TRIS diluent / egg yolk / glycerol extender, with or without addition of antioxidants (Catalase, Superoxide dismutase and their associations, ascorbic acid, tocopherol and their associations). The second experiment aimed to compare the results of frozen semen of fertile and subfertile dogs supplemented with 500mg of vitamin C and E, orally for 60 days. We used 13 dogs, 7 were considered fertile and 6 classified as subfertile. The dogs had been considered fertile breeding soundness examination within the standards recommended by CBRA; the subfertile had lower sperm concentration (<20x10 6 sptz / mL) and / or high rate of sperm pathologies (> 30%). Semen was frozen in three stages, before the start of supplementation (M1), 30 (M2) and 60 days (M3) after the initiation of supplementation. Semen was collected by digital manipulation of the penis and analyzed for: motility, vigor, concentration and morphology. The frozen semen was performed by the method described by Chirinea et al. (2006). Thawing was performed at 70 ° C for 8 seconds. Soon after the samples were evaluated in the computerized analysis (CASA) and assessment of membrane integrity and acrosomal plasma. We also analyzed the rate of lipid peroxidation and antioxidants: SOD, catalase, vitamins C and E in seminal plasma. It can be conclude that oral supplementation, in the extender or your association can benefit the process of freezing / thawing of dogs. Especially for those with reproductive problems and may even, with oral therapy to reduce or eliminate this feature

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-18Bitstream added on 2015-01-26T13:30:36Z : No. of bitstreams: 1 000792285.pdf: 363368 bytes, checksum: bfcb9b7c5a5d2b307fa8df344ff91ccf (MD5) / Muitas biotecnologias estão sendo desenvolvidas visando a conservação do material genético de garanhões de alto valor zootécnico. Dentre estas pode-se destacar a colheita de espermatozoides do epidídimo de animais que sofreram algum trauma ou enfermidade que impossibilitem a colheita do sêmen, óbito ou eutanásia. Porém essas células espermáticas não entram em contato com o plasma seminal, importante por conter proteínas que participam de processos relacionados à proteção e ligação dos espermatozoides aos reservatórios espermáticos na tuba uterina. Neste sentido, sugere-se que haja importantes alterações bioquímicas nas células espermáticas do epidídimo, objetivando-se assim com esta revisão, estudar as principais diferenças morfofuncionais entre os espermatozoides provenientes do epidídimo e do ejaculado / Several biotechnologies are being developed aiming genetic material conservation of stallions with high zootechnical value, as we can highlight the harvest epididymis’s sperm of animals who suffered trauma or illness that makes impossible the semen collection, death or euthanasia. However these sperm cells do not get in touch with seminal plasma, important whereas it has proteins that participate in processes related to the protection and binding of sperm to the sperm reservoir in the oviduct. In this sense, it suggests that there is significant biochemical changes in epididymal sperm, aiming with this review to study the main morphological and functional differences between the sperm from the epididymis and ejaculated

O presente estudo visou verificar o efeito sobre alguns parâmetros da seleção por gradiente de Percoll® e da adição de plasma seminal do sêmen eqüino preservado a +4oC. O primeiro experimento avaliou a taxa de recuperação de espermatozóides após seleção por Percoll® em diferentes protocolos de centrifugação. Foram realizadas 5 coletas de sêmen de um garanhão. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração. Foram retiradas duas amostras de 4 mL, diluídas em leite desnatado UHT com concentrações de 50 e 100 x 106 espermatozóides por mL cada. Cada uma destas amostras foi dividida em 4 alíquotas de 1 mL, que foram então colocadas sobre Percoll® e submetidas a diferentes tempos e velocidades de centrifugação. V1 - 200 g (5 min) + 800 g (10 min); V2 - 800 g (10 min); V3 - 800 g (15 min); V4 - 800 g (20 min). Após esse processo, o sobrenadante foi desprezado e o pellet de cada alíquota ressuspendido com 0,5 mL de leite UHT. As 8 amostras foram novamente avaliadas para concentração, motilidade e vigor. O segundo experimento estudou o efeito da adição de plasma seminal de diferentes qualidades ao sêmen eqüino selecionado por gradiente de Percoll® e resfriado a +4°C por até 72 horas. Foram utilizados 40 ejaculados de 4 garanhões, sendo dois com boa qualidade de sêmen e dois com baixa qualidade de sêmen. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração e preparadas cinco frações de 100x106 espermatozóides, diluídas 1:1 (v/v) em EDTA-Glicose. Quatro delas, constituídas por 1mL a 2mL, foram depositadas sobre Percoll®. A fração restante foi centrifugada em tubo de vidro de 10 mL, sob as mesmas condições de tempo e velocidade das demais amostras. Foi realizada centrifugação por 5 minutos em 200 g, seguida de 10 minutos em 800 g. O sobrenadante foi descartado e o pellet ressuspendido com leite UHT desnatado compondo os seguintes tratamentos: Sp: 1,5 mL de leite UHT desnatado sem adição de plasma seminal; Hp: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal homólogo; Ap: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal do pool de alta qualidade; Bp: 1,425mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L plasma seminal do pool de baixa qualidade; Cc: foi centrifugada sem seleção por Percoll®, teve seu sobrenadante descartado e ressuspendida com 2 mL de leite UHT; C : uma amostra de sêmen diluído em leite UHT foi mantida como controle no processo de armazenamento. As amostras foram resfriadas a +4°C e examinadas a cada 24h até as 72 horas em relação à motilidade, funcionalidade de membrana (teste hiposmótico) e integridade de membrana (CFDA/PI). A seleção por gradiente descontínuo de Percoll® 90/45% mostrou-se efetiva na recuperação de espermatozóides com motilidades progressiva e total. A adição de 5% de plasma seminal ou a ausência de plasma não influenciaram os valores da motilidade das amostras selecionadas por gradiente de Percoll®. A seleção por Percoll não influenciou na percentagem de células com membrana plasmática funcional. Concentrações superiores a 2% de plasma seminal resultaram em decréscimo do número de células com membrana funcional, enquanto que as amostras sem plasma seminal apresentaram os melhores resultados e o grupo controle, que apresentava a maior percentagem de plasma, os piores. A utilização de Percoll® não separou células com alteração de membrana. A percentagem de células com membrana completamente íntegra foi significativamente maior nas amostras que sofreram processo de centrifugação, independentemente da seleção. O processo de seleção por Percoll® foi efetivo na recuperação de espermatozóides de eqüino com motilidade progressiva, mas não selecionou espermatozóides quanto à funcionalidade nem à integridade de membrana. Concentrações inferiores a 2% de plasma seminal melhoraram a funcionalidade de membrana. A ausência de plasma seminal melhorou os resultados de integridade das membranas plasmática e acrossomal; e a adição de plasma de alta qualidade não melhorou a motilidade de espermatozóides selecionados por Percoll®.