Orientador: Fernando F. Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T05:43:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Szajner_Patricia_M.pdf: 8780724 bytes, checksum: aa9936632c1e0298e53db8392b37b06a (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A hemofilia B é uma doença hemorrágica hereditária caracterizada pela deficiência ou anormalidade da atividade coagulante do fator IX (FIX:C). O gene que controla a produção do fator IX está localizado no cromossomo X, na posição Xq27.1. É constituído por oito exons e sete íntrons abrangendo uma região de aproximadamente 33,5 kb que origina um mRNA de 2,2 kb. A análise do gene do fator IX de hemofílicos indica que cerca de 95% das alterações moleculares são identificadas nas seqüências correspondentes à região promotora, regiões codificadoras e sítios de excisão de íntrons. A maioria das mutações apresenta origem independente. As mutações de ponto são as alterações moleculares descritas em aproximadamente 85% dos casos de hemofilia 8, sendo o restante devido a perdas ou inserções gênicas. A análise do polimorfismo de conformação de hélices simples de DNA (SSCP) possibilita o rastreamento rápido e eficaz de mutações. A identificação das mutações pelo seqüenciamento direto do DNA permite a determinação precisa da portadora, diagnóstico pré-natal e viabiliza o aconselhamento genético. A comparação das mutações e quadros clínicos dos pacientes estudados neste trabalho com aqueles descritos em publicações anteriores também permitem a avaliação do efeito destas alterações na atividade do fator IX. Neste estudo foi realizada a análise das alterações moleculares no gene do fator IX de 29 pacientes portadores de hemofilia 8. A metodologia consistiu na amplificação das regiões codificadoras e promotora do gene do fator IX pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e posterior análise do SSCP radioativo e não-radioativo, este último em um sistema automático de eletroforese (Phastsystem® Pharmacia), corado com nitrato de prata. A identificação das mutações foi realizada pelo seqüenciamento direto do fragmento do DNA com padrão anormal no SSCP. Com o emprego destas técnicas foi possível o reconhecimento de alterações moleculares em todos os pacientes analisados. Cinco mutações de ponto foram detectadas apenas na análise de SSCP radioativo. O seqüenciamento dos fragmentos com padrão de migração anormal permitiu a detecção de 31 mutações de ponto no gene do fator IX. Destas alterações, 22 representavam mutações diferentes, das quais 6 ainda não descritas na literatura. Em um paciente foram encontradas três alterações nucleotídicas, uma delas uma mutação silenciosa na posição 31.093. A análise dos haplótipos indica que 24 mutações identificadas neste estudo apresentam origem independente. Quatro pacientes originários do Estado do Pará apresentam mesma mutação e haplótipo idêntico evidenciando a ocorrência de um possível efeito do fundador. O estudo das mutações no gene do fator IX apresenta-se como um modelo para a determinação do padrão das alterações moleculares em linhagens de células germinativas. O padrão de mutações identificado no gene do fator IX é semelhante entre Caucasóides, Asiáticos, e pequenos grupos de Hispânicos e Negróides. A população brasileira apresenta origem étnica bastante heterogênea e é representada por imigrantes provenientes da Europa, África, Ásia e pelas populações indígenas residentes mostrando-se, desta forma, distinta das demais populações previamente analisadas. O padrão de mutação verificado neste estudo é semelhante àquele observado em outras populações o que sugere a predominância dos processos endógenos na determinação das mutações espontâneas em células germinativas / Abstract: Hemophilia B is a common hereditary bleeding disorder resulting from a deficiency of functional factor IX. The gene of factor IX spans about 33,5 kilobases and is situated on the distal portion of the long arm of X-chromosome at band Xq27.1. The gene is composed of eight exons and seven introns. Around 95% of mutations leading to hemophilia B occur in the 2,2 kilobases of the factor IX gene that included the promotor region, coding sequences, and splice junctions. Most are independent mutations. Point mutations account for about 85% of independent mutations. Deletions, insertions, and more complex gene rearrangements account for the remainder of the molecular mechanisms responsible for hemophilia B. The Single Strand Conformation Polymorphism (SSCP) analysis is a rapid and sensitive technique that can be used to detect single base substituions. Direct Sequencing of amplified genomic DNA defines the location and nature of any mutation and is a necessary final step of any detection method. The SSCP analysis followed by DNA sequencing allows accurated carrier detection and prenatal diagnosis, eliminating the need for informative segregetion of markers. Hemophilia B is a good model for deducing the underlying pattern of spontaneous germ-line mutation in humans. In addition, the study of naturally occurring mutations, combined with the study of genetically engineered mutant recombinant proteins, has yielded a wealth of information regarding structure-function relationships of factor IX. The pattern of mutation is similar among .Caucasians, Asians, and small groups of Blacks and Hispanics. The ethnic origin of Brazilian population is highly. heterogeneous (imigrants from Europe, Africa, Asia and, also, Indigenous) and different from previous populations studied. In order to elucidate the genetic basis of a distinct population and to perform a precise carrier detection, we carried out a study of 29 patients with hemophilia B of Brazilian origino The screening protocol consisted of amplification of coding and promoter regions of factor IX gene by PCR, followed by a radioactive and non-radiactive analysis of single-strand conformation polymorphisms (SSCP) on the PhastSystem Df Pharmacia®. The confirmation of the molecular defect was done by sequencing of the exon with abnormal electrophoretic mobility on SSCP. The results of SSCP revealed abnormal mobility in ali 29 patients and 31 point mutations were determined by direct sequencing of DNA. Twenty-two diferent single base pairs were identified: fifteen in exon 8, three in exon 6, and two in exon 4. Six non previously described point mutation were identified. Three point mutations were found in patient HB31, one of them silent. Haplotype analysis determined that at least twenty-four point mutations could be considered of indenpendent origino Our results shown that this methodology has the potential of detecting ali genetic defects in patients of Brazilian origin with hemophilia B. A large number of recurrent mutations described here is in accordance with data from distinct patients from around world and suggest that the mutation in the factor IX gene is likely the result of endogenous process rather than enviromental mutagens / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T18:50:22Z : No. of bitstreams: 1 utsunomia_ek_me_botfm.pdf: 415505 bytes, checksum: 904bb5b0f94628384d4ffd205f0db712 (MD5) / A doença de von Willebrand (DvW) é decorrente da deficiência qualitativa ou quantitativa do Fator de von Willebrand (FvW) e é considerada a coagulopatia hereditária mais comum na população com uma prevalência de 1,1% na população geral. Para o seu diagnóstico são utilizados diversos métodos como o teste do cofator da ristocetina, que é amplamente utilizado na rotina laboratorial por ser considerado padrão-ouro na avaliação da função do fator de von Willebrand e por estar diminuído em todos os casos da doença. O kit comercial de plaquetas liofilizadas é importado, de elevado custo e possui uma validade de 30 dias após sua reconstituição se conservado de 2C a 8C. Devido à baixa prevalência da DvW na população, muitas vezes não há uma grande quantidade de exames a serem realizados, fazendo com que os plasmas desses pacientes sejam congelados e armazenados até o momento onde apareça um número mínimo de pacientes. O estudo teve como objetivo padronizar uma técnica como alternativa na utilização de plaquetas fixadas em formalina e o seu teste em indivíduos saudáveis e com a suspeita da doença, onde foram avaliados a porcentagem de atividade expressa considerando o montante de aglutinação induzida pela ristocetina, que se relaciona proporcionalmente com a concentração do FvW e o percentual de atividade normal medido através do agregômetro. O estudo possui um caráter preliminar e apresentou-se viável à rotina laboratorial, e se faz necessário não só a coleta de um número amostral maior, mas também da análise de diversas variáveis (grupo sanguíneo, idade, hormônios, estresse, uso de medicamentos) para se estabelecer nessa população um valor de referência para essa técnica / The von Willebrand disease (VWD) is caused by a qualitative or quantitative deficiency of von Willebrand Factor (vWF) and is considered the most common hereditary bleeding disorder in the population with a prevalence of 1.1% in the general population. For its diagnosis, several methods are used to test the ristocetin cofactor, which is widely used in laboratories because it is considered the gold standard in assessing the function of von Willebrand factor and to be decreased in all cases of the disease. The imported commercial kit of lyophilized platelets is costly and expires 30 days after reconstitution if stored from 2C to 8C. Due to the low prevalence of v WD in the population, usually there are not enough tests to be done, making it necessary to freeze and store the plasma of these patients until there is a minimum number of patients for testing. This study aimed to standardize a technique as an alternative to the use of formalin-fixed platelets and to test it in healthy subjects with suspected disease. Thus, the percentage of expressed activity was evaluated considering the amount of agglutination induced by ristocetin proportionally related to the concentration of vWF and the percentage of normal activity measured by an aggregometer. The study has a preliminary character and showed to be feasible for laboratory routine, and it is necessary not only to collect a larger sample size, but also to analyze several variables (blood group, age, hormones, stress, use of drugs) to establish a reference value for this technique in the population

Orientador: Izolete Aparecida Thomazini Santos / Banca: Regina K. Takahira / Banca: Michele Janegitz Acorse Valerio / Resumo: A doença de von Willebrand (DvW) é decorrente da deficiência qualitativa ou quantitativa do Fator de von Willebrand (FvW) e é considerada a coagulopatia hereditária mais comum na população com uma prevalência de 1,1% na população geral. Para o seu diagnóstico são utilizados diversos métodos como o teste do cofator da ristocetina, que é amplamente utilizado na rotina laboratorial por ser considerado padrão-ouro na avaliação da função do fator de von Willebrand e por estar diminuído em todos os casos da doença. O kit comercial de plaquetas liofilizadas é importado, de elevado custo e possui uma validade de 30 dias após sua reconstituição se conservado de 2C a 8C. Devido à baixa prevalência da DvW na população, muitas vezes não há uma grande quantidade de exames a serem realizados, fazendo com que os plasmas desses pacientes sejam congelados e armazenados até o momento onde apareça um número mínimo de pacientes. O estudo teve como objetivo padronizar uma técnica como alternativa na utilização de plaquetas fixadas em formalina e o seu teste em indivíduos saudáveis e com a suspeita da doença, onde foram avaliados a porcentagem de atividade expressa considerando o montante de aglutinação induzida pela ristocetina, que se relaciona proporcionalmente com a concentração do FvW e o percentual de atividade normal medido através do agregômetro. O estudo possui um caráter preliminar e apresentou-se viável à rotina laboratorial, e se faz necessário não só a coleta de um número amostral maior, mas também da análise de diversas variáveis (grupo sanguíneo, idade, hormônios, estresse, uso de medicamentos) para se estabelecer nessa população um valor de referência para essa técnica / Abstract: The von Willebrand disease (VWD) is caused by a qualitative or quantitative deficiency of von Willebrand Factor (vWF) and is considered the most common hereditary bleeding disorder in the population with a prevalence of 1.1% in the general population. For its diagnosis, several methods are used to test the ristocetin cofactor, which is widely used in laboratories because it is considered the gold standard in assessing the function of von Willebrand factor and to be decreased in all cases of the disease. The imported commercial kit of lyophilized platelets is costly and expires 30 days after reconstitution if stored from 2C to 8C. Due to the low prevalence of v WD in the population, usually there are not enough tests to be done, making it necessary to freeze and store the plasma of these patients until there is a minimum number of patients for testing. This study aimed to standardize a technique as an alternative to the use of formalin-fixed platelets and to test it in healthy subjects with suspected disease. Thus, the percentage of expressed activity was evaluated considering the amount of agglutination induced by ristocetin proportionally related to the concentration of vWF and the percentage of normal activity measured by an aggregometer. The study has a preliminary character and showed to be feasible for laboratory routine, and it is necessary not only to collect a larger sample size, but also to analyze several variables (blood group, age, hormones, stress, use of drugs) to establish a reference value for this technique in the population / Mestre

Orientador: Hamilton Almeida Rollo / Coorientador: Marcone Lima Sobreira / Resumo: Pentasaccharides para o tratamento da trombose venosa profunda Questão da revisão: Os novos anticoagulantes da classe dos pentasaccharides podem ser uma alternativa eficaz e segura aos anticoagulantes convencionais utilizados na terapia padrão do tratamento da trombose venosa profunda? Visão geral: Trombose venosa profunda (TVP) é uma doença grave e potencialmente fatal que se caracteriza pela formação aguda de um coágulo de sangue nas veias profundas. Sua incidência aumenta exponencialmente com a idade e estima-se que na população geral, sua incidência seja de 5 casos em 10,000 habitantes. O tratamento padrão se faz por meio de medicamentos anticoagulantes, inicialmente pela administração de medicamentos injetáveis, as heparinas, por 5 a 7 dias e em seguida pelo uso prolongado de medicamentos de uso oral, os antagonistas da vitamina K. Entretanto, o alto risco de sangramento e a necessidade de um rigoroso controle laboratorial, permanecem como importantes limitações à terapia padrão. Os pentasaccharides são anticoagulantes sintéticos que podem apresentar vantagens em relação ao tratamento convencional como um efeito mais previsível, um regime de dosagem mais conveniente, a ausência da necessidade de controle laboratorial, ausência de interações com medicamentos e/ou alimentos, ausência da temida diminuição das plaquetas induzida pela heparina e em muitos casos melhor custo-benefício. Características chaves e resultados: Nossas buscas, realizadas até julho de 2015, iden... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background: Deep vein thrombosis (DVT) is a severe disorder caused by acute formation of a clot or thrombus in the deep vein system. The incidence of DVT increases with age: from 2 to 3/10,000 in adults aged 30 to 49 years to 20/10,000 in adults aged 70 to 79 years. If left untreated, the clot can travel up to the lungs and cause a potentially life-threatening pulmonary embolism (PE). Standard treatment is based on antithrombotic therapy, initially with parenteral administration of unfractionated heparin or low molecular weight heparins (LMWH) for five to seven days, then subsequent long-term oral vitamin K antagonists (e.g. warfarin) therapy. However, hemorrhagic complications are a major concern associated with warfarin treatment. Indeed, the hemorrhagic risk of warfarin and the required laboratory control remain the Achilles' heel of vitamin K antagonist management. The pentasaccharides have characteristics that may be favourable over conventional treatment, including a predictable effect, lack of frequent monitoring or re-dosing and few known drug interactions and absence of heparin-induced thrombocytopenia. To date, no systematic review has measured the effectiveness and safety of these drugs in the treatment of DVT. Objectives: To assess the efficacy and harms of pentasaccharides for the treatment of deep venous thrombosis. Search strategy: 1 The Cochrane Peripheral Vascular Diseases Group Trials Search Co-ordinator searched the Specialised Register (last searched... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Joyce Maria Annichinno-Bizzacchi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T02:29:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mello_TayanaBezerraTeixeira_D.pdf: 2343820 bytes, checksum: be3d8e4b057cd84ec6771c67b8b1407d (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Nos últimos anos tem sido demonstrada uma associação entre níveis elevados de certos fatores da coagulação e risco de tromboembolismo venoso (TEV). Entretanto, o número de estudos é pequeno e a maioria estão restritos a populações caucasóides. Neste estudo caso-controle emparelhado por idade, sexo e etnia investigamos os níveis plasmáticos do fibrinogênio, FVII, FVIII, FIX, FX, FXI, FvW e grupo sanguíneo (GS) ABO no risco trombótico. Foram analisados 175 pacientes com TEV (122 mulheres e 53 homens), com idade mediana de 36 anos (13-63), acompanhados no Ambulatório de Hemostasia da Unicamp no período de julho de 2002 a julho de 2005. Na análise univariada, níveis elevados de FVIII (OR: 5,3 IC95% 2,9-9,6), FvW (OR: 4,9 IC95% 2,7-8,9), FIX (OR: 2,4 IC95% 1,3-4,4), FXI (OR: 2,1 IC95% 1,1-4,0) e GS não O (OR: 3,0 IC95% 1,9-4,6) foram fatores de risco para TEV. O FVIII, FvW e GS não O foram associados ao risco tanto em membro inferior como em sítio incomum da doença. A análise de todas estas variáveis, segundo critério de seleção ¿stepwise¿, mostrou o FVIII (OR: 3,1 IC95% 1,6-6,0), FvW (OR:2,8 IC95% 1,4-5,4) e o GS não-O (OR:2,2 IC95% 1,3-3,5) como fatores de risco independentes para TEV e que o FIX e FXI agiram sinergicamente a estas variáveis no acréscimo do risco trombótico. Risco de recorrência foi conferido por elevações do FIX (OR: 4,7 IC95% 1,8-11,9) e FXI (OR: 3,4 IC95% 1,8-8,7). Os determinantes dos níveis plasmáticos do FVIII não estão totalmente esclarecidos. Como a LRP (Low density lipoprotein receptor related protein) tem um papel no catabolismo do FVIII, foram pesquisados os polimorfimos C200T, o A775P e o D2080N no gene codificador dessa proteína, como fator de risco para TEV e a influência dos mesmos sobre os níveis do FVIII e FvW. Não houve diferença nas prevalências destes polimorfismos entre pacientes e controles. No entanto, no grupo-controle, o genótipo DN, do polimorfismo D2080N, foi associado a menores concentrações do FVIII (77,4 UI/dl) e FvW (70,2 UI/dl), quando comparado ao genótipo DD (127 UI/dl e 108,4 UI/dl, respectivamente p<0,05). Em conclusão, nesta população brasileira miscigenada, o FVIII, FvW , FIX, FXI e GS não O foram associados ao risco de TEV e o polimorfismo D2080N, no gene da LRP, interferiu com os níveis plasmáticos de FVIII e FvW / Abstract: During the last years an association between high levels of certain coagulation factors and the risk for venous thromboembolism (VTE) has been demonstrated. The number of studies, however, is small, and most of them are restricted to Caucasian populations. In this case control study, matched for age, sex and ethnicity, we investigated the plasma levels of fibrinogen, FVII, FVIII, FIX, FX, FXI, vWF and the ABO blood group (BG) in the thrombotic risk. It was analyzed 175 patients with VTE (122 women and 53 men), median age 36 years (13-63), followed at the hemostasis outpatient clinic at the State University of Campinas ¿ UNICAMP, between July 2002 and July 2005. In univariate analysis, elevated levels of FVIII (OR: 5.3 95%CI 2.9-9.6), FvW (OR: 4.9 95%CI 2.7-8.9), FIX (OR: 2.4 95%CI 1.3-4.4), FXI (OR: 2.1 95%CI 1.1-4.0) and non O BG (OR: 3.0 95%CI 1.9-4.6) were risk factors for VTE. FVIII, FvW and non O BG were associated with the risk both in lower limbs and unusual sites of disease. Analysis of all these variables by stepwise selection criteria showed FVIII (OR:3.1 95%CI 1.6-6.0), FvW (OR:2.8 95%CI 1.4-5.4) and non O BG (OR:2.2 95%CI 1.3-3.5) as independent risk factors for VTE, and FIX and FXI increased synergistically the risk of thrombosis of these variables. Risk of recurrence was conferred by FIX (OR:4.7 IC95% 1.8-11.9) and FXI (OR:3.4 IC95% 1.8-8.7). The FVIII plasma levels determinants are not well established. Since LRP (Low density lipoprotein receptor related protein) has a role in the catabolism of FVIII, we evaluated the C200T, A775P and, D2080N polymorphisms in the gene coding of this protein, as risk factor for VTE and their influence upon the levels of FVIII and vWF. There was no difference regarding the prevalence of these polymorphisms between patients and controls. However, in the control group, the DN genotype, of the D2080N polymorphism, was associated with lower concentrations of FVIII (77.4 UI/dl) and vWF (70.2 UI/dl), when compared to DD genotype (127 UI/dl e 108.4 UI/dl, respectively p<0.05). In conclusion, in these Brazilian miscigenous population, increased levels of FVIII, FvW, FIX, FXI and non O BG were associated with VTE risk and the D2080N polymorphism, in the LRP gene, influenced plasma levels of FVIII and vWF / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica