Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2017-09-29T17:43:14Z No. of bitstreams: 1 camilamontoromfelicio_tese.pdf: 3396879 bytes, checksum: 0568a8c449b9fa50634fd25925b2f3e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-29T17:43:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 camilamontoromfelicio_tese.pdf: 3396879 bytes, checksum: 0568a8c449b9fa50634fd25925b2f3e7 (MD5) Previous issue date: 2016-09-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Background: The use of kidneys from extended criteria donors (ECD) is associated with organs of inferior quality and, therefore, a high discarding rate. Clinical and histological tools available to assess non-ideal organs and predict outcomes of ECD have conflicting results. Objectives: To evaluated differences in the intragraft cytokine genes expression in ECD and SCD (standard criteria donors) kidney biopsies (Bx) pre and post-transplant (Tx) and sought possible changes induced by immunosuppressive regimens (ISS). Methodology: SCD and ECD recipients (RTx) were randomized to tacrolimus (Tac) or everolimus (Eve) and Bx were collected pre-implantation (T0 Bx; n = 80) and after 15 (T15 Bx; n = 64) and 90 days (T90 Bx; n = 51) post-Tx. Subgroups SCD-Tac, ECD-Tac, SCD-Eve and ECD-Eve were analyzed for clinical outcomes and clinical data were correlated with intragraft gene expression. Results: Overall, ECD-Eve and ECD-Tac had inferior one-year patient survival and ECD-Tac had lower graft survival than other groups while cytomegalovirus and de novo diabetes pos-Tx were higher in patients with Tac. After one year ECD-Eve patients had higher serum creatinine than ECD-Tac (p = 0.03). Acute rejection rates were higher in Eve group regardless donor type. T0 Bx of ECD showed higher expression of MCP-1, RANTES, TGF-β1 and IL-10 when compared with SCD. TGF-β1 related to the serum creatinine at harvesting the organ while length of donor hospitalization and ECD donor type were associated with upregulation of MCP-1 and RANTES. T15 Bx of patients from both groups taking Eve had increased FOXP3 and MCP-1. RANTES were upregulated only in the SCD-Eve group. Eve was the only variable associated with upregulation of FOXP3, MCP-1 and RANTES. Molecular profiling at T90 was similar except by an increase in FOXP3 transcripts restrict to SCD-Eve group. Positive expression of FOXP3 was associated with the use of Eve and delayed graft function (DGF) with the increased expression of MCP-1 and IL -10. We subtracted from Bx T15 and T90 gene expression values obtained in Bx T0 and two distinct types of molecular profile were found to SCD and ECD. SCD kidneys showed upregulation for all molecules, except TGF-β1 regardless of the ISS system, and ECD kidneys showed negative regulatory molecules for the same, except for slight positive FOXP3 and RANTES expressions. Conclusion: Pre-implantation Bx of ECD kidneys had an inflammatory molecular profile clearly distinct from SCD, with higher expression of RANTES, MCP-1, TGF-β1 and IL-10. Post-Tx, the ISS given modifies the initial cytokine expression pattern at different time points. / Introdução: O uso de rins de doadores com critérios estendidos (DCE) está associado com órgãos de qualidade inferior e, por isso acabam gerando alta taxa de descarte desses órgãos. Os métodos clínicos e histológicos usados como ferramentas para avaliar os órgãos “não ideais” e prever os desfechos dos DCE têm resultados conflitantes. Objetivos: Avaliar as diferenças na expressão gênica de biópsias (Bx) renais em DCE e doadores com critérios padrões (DCS) no pré e pós-transplante (Tx) e buscar possíveis alterações induzidas pelos regimes de imunossupressão (ISS). Metodologia: Receptores (RTx) de DCS e DCE foram randomizados para tacrolimo (Tac) ou everolimo (Eve) e as Bx foram coletadas no pré-transplante (T0 Bx; n = 80) e após 15 (T15 Bx; n = 64) e 90 dias (T90 Bx; n = 51) pós-Tx. Os subgrupos DCS-Tac, DCE-Tac, DCS-Eve e DCE-Eve foram analisados para os desfechos clínicos e os dados foram correlacionados com a expressão gênica intra-enxerto. Resultados: Receptores de DCE-Eve e DCE-Tac tiveram menor sobrevida em um ano pós-Tx. Infecção por citomegalovírus e diabetes mellitus pós-Tx foram maiores em pacientes tratados com Tac. Após um ano, receptores de DCE-Eve apresentaram creatinina sérica (sCr) mais elevada do que DCE-Tac. As taxas de rejeição aguda foram maiores no grupo Eve, independente do tipo de doador. Bx T0 de rins de DCE mostraram maior expressão de MCP-1, RANTES, TGF-β1 e IL-10 quando comparado com rins de DCS. TGF-β1 foi relacionado com a sCr na retirada do órgão, enquanto que o tempo de hospitalização de DCE foi associado com maior expressão de MCP-1 e RANTES. Bx T15 de pacientes dos grupos Eve apresentaram aumento de FOXP3 e MCP-1. A expressão de RANTES foi mais elevada no grupo DCS-Eve. O uso de Eve foi à única variável associada com maior expressão de FOXP3, MCP-1 e RANTES. O perfil das Bx após 90 dias foi similar exceto pelo aumento dos transcritos de FOXP3 restritos ao grupo DCS-Eve. A maior expressão de FOXP3 foi associada com o uso de Eve e a função tardia do enxerto com o aumento na expressão de MCP-1 e IL-10. Foram subtraídos das Bx T15 e T90, os valores de expressão gênica obtidos nas Bx T0, e dois tipos distintos de perfil molecular foram encontrados para DCS e DCE. Rins de DCS apresentaram maior expressão para todas as moléculas, exceto TGF-β1, independentemente do regime de ISS. Os rins de DCE mostraram menor expressão para as mesmas moléculas, exceto por aumento discreto na expressão de FOXP3 e RANTES. Conclusão: Bx pré-implantação de rins de DCE tiveram um perfil molecular inflamatório diferente de rins de DCS, com maior expressão de RANTES, MCP-1, TGF-β1 e IL-10. No pós-Tx, a ISS modificou o padrão inicial de expressão de citocinas nos tempos estudados.

O uso de órgãos provindos de doadores com critérios estendidos tem-se tornado bastante comum em transplante hepático (TxH). Com freqüência, os doadores encontram-se agudamente desnutridos ou apresentam critérios sugestivos de síndrome metabólica e, conseqüentemente, esteatose hepática. Há sugestões de que estados nutricionais alterados possam se refletir na qualidade do enxerto, e são necessárias medidas para contrabalançar estes efeitos. A solução da Universidade de Wisconsin (UW) é o padrão para TxH, e alguns estudos experimentais sugerem que a frutose-1,6-bisfosfato (FBP) possa ser útil na preservação de órgãos. O presente estudo tem o objetivo de comparar a influência do estado nutricional sobre o dano de isquemia a frio, utilizando soluções de preservação distintas. Foram utilizados ratos 35 Wistar machos, divididos em 3 grupos, de acordo com a dieta: I: dieta normal; II: dieta restrita e III: dieta hiperlipídica (dieta Lieber-De Carli modificada). Os animais foram aleatoriamente alocados e receberam dieta padronizada por 4 semanas, de acordo com o grupo. Foi realizada hepatectomia, sob anestesia inalatória, e os fígados foram preservados durante 8 horas em solução de FBP ou de UW. O dano de preservação foi estimado através de alíquotas do líquido de preservação (LP), com dosagem de AST, ALT e LDH, lipoperoxidação (através de TBARS), geração de antioxidantes endógenos e exame anatomopatológico. O estado nutricional teve influência na qualidade da preservação. Os fígados de ratos submetidos à dieta restrita foram os que tiveram a menor lesão de isquemia a frio, enquanto que os submetidos à dieta hiperlipídica, a pior (p<0,05). Nos ratos submetidos à dieta normal e restrita, a lesão de isquemia a frio foi menos intensa por todos os critérios nos ratos preservados com FBP (p<0,05). Nos ratos submetidos à dieta hiperlipídica, não houve diferença entre as soluções. / Donor shortage is becoming a huge problem in the last years, and this fact indeed stimulates the use of organs from extended criteria donors for liver transplant (LT). These donors are submitted to the risks of acute malnutrition and, often, there are metabolic syndrome and liver steatosis. Nutritional donor status may influence graft quality after harvesting. Most of LT centers use to adopt University of Wisconsin (UW) solution for preservation, and some experimental studies suggest that in this scenario FBP also could be used. This study aims to evaluate the influence of donor nutritional status on ischemic injury of UW or FBP preserved rat livers. There were studied 35 male Wistar rats, randomly assigned into 3 groups, accordingly to the diet: I- normal diet; II: restricted diet; III: high-fat liquid diet (Lieber-De Carli modified diet), offered by 4 weeks. Livers were preserved after hepatectomy during 8 hours either with FBP or UW. Ischemic injury was assessed by AST, ALT, LDH, TBARS, catalase and also by histopathological study. Nutritional donor status does affected graft quality. Livers from rats submitted to restricted diet had lower ischemic injury, while those from high-fat diet got worse results (p<0.05). Regarding preservation solution, ischemic injury was less pronounced in livers from rats that received normal or restricted diets, and were preserved with FBP (p<0.05). There was no difference between both solutions on the ischemic injury of livers from high-fat diet fed rats.

O uso de órgãos provindos de doadores com critérios estendidos tem-se tornado bastante comum em transplante hepático (TxH). Com freqüência, os doadores encontram-se agudamente desnutridos ou apresentam critérios sugestivos de síndrome metabólica e, conseqüentemente, esteatose hepática. Há sugestões de que estados nutricionais alterados possam se refletir na qualidade do enxerto, e são necessárias medidas para contrabalançar estes efeitos. A solução da Universidade de Wisconsin (UW) é o padrão para TxH, e alguns estudos experimentais sugerem que a frutose-1,6-bisfosfato (FBP) possa ser útil na preservação de órgãos. O presente estudo tem o objetivo de comparar a influência do estado nutricional sobre o dano de isquemia a frio, utilizando soluções de preservação distintas. Foram utilizados ratos 35 Wistar machos, divididos em 3 grupos, de acordo com a dieta: I: dieta normal; II: dieta restrita e III: dieta hiperlipídica (dieta Lieber-De Carli modificada). Os animais foram aleatoriamente alocados e receberam dieta padronizada por 4 semanas, de acordo com o grupo. Foi realizada hepatectomia, sob anestesia inalatória, e os fígados foram preservados durante 8 horas em solução de FBP ou de UW. O dano de preservação foi estimado através de alíquotas do líquido de preservação (LP), com dosagem de AST, ALT e LDH, lipoperoxidação (através de TBARS), geração de antioxidantes endógenos e exame anatomopatológico. O estado nutricional teve influência na qualidade da preservação. Os fígados de ratos submetidos à dieta restrita foram os que tiveram a menor lesão de isquemia a frio, enquanto que os submetidos à dieta hiperlipídica, a pior (p<0,05). Nos ratos submetidos à dieta normal e restrita, a lesão de isquemia a frio foi menos intensa por todos os critérios nos ratos preservados com FBP (p<0,05). Nos ratos submetidos à dieta hiperlipídica, não houve diferença entre as soluções. / Donor shortage is becoming a huge problem in the last years, and this fact indeed stimulates the use of organs from extended criteria donors for liver transplant (LT). These donors are submitted to the risks of acute malnutrition and, often, there are metabolic syndrome and liver steatosis. Nutritional donor status may influence graft quality after harvesting. Most of LT centers use to adopt University of Wisconsin (UW) solution for preservation, and some experimental studies suggest that in this scenario FBP also could be used. This study aims to evaluate the influence of donor nutritional status on ischemic injury of UW or FBP preserved rat livers. There were studied 35 male Wistar rats, randomly assigned into 3 groups, accordingly to the diet: I- normal diet; II: restricted diet; III: high-fat liquid diet (Lieber-De Carli modified diet), offered by 4 weeks. Livers were preserved after hepatectomy during 8 hours either with FBP or UW. Ischemic injury was assessed by AST, ALT, LDH, TBARS, catalase and also by histopathological study. Nutritional donor status does affected graft quality. Livers from rats submitted to restricted diet had lower ischemic injury, while those from high-fat diet got worse results (p<0.05). Regarding preservation solution, ischemic injury was less pronounced in livers from rats that received normal or restricted diets, and were preserved with FBP (p<0.05). There was no difference between both solutions on the ischemic injury of livers from high-fat diet fed rats.

O uso de órgãos provindos de doadores com critérios estendidos tem-se tornado bastante comum em transplante hepático (TxH). Com freqüência, os doadores encontram-se agudamente desnutridos ou apresentam critérios sugestivos de síndrome metabólica e, conseqüentemente, esteatose hepática. Há sugestões de que estados nutricionais alterados possam se refletir na qualidade do enxerto, e são necessárias medidas para contrabalançar estes efeitos. A solução da Universidade de Wisconsin (UW) é o padrão para TxH, e alguns estudos experimentais sugerem que a frutose-1,6-bisfosfato (FBP) possa ser útil na preservação de órgãos. O presente estudo tem o objetivo de comparar a influência do estado nutricional sobre o dano de isquemia a frio, utilizando soluções de preservação distintas. Foram utilizados ratos 35 Wistar machos, divididos em 3 grupos, de acordo com a dieta: I: dieta normal; II: dieta restrita e III: dieta hiperlipídica (dieta Lieber-De Carli modificada). Os animais foram aleatoriamente alocados e receberam dieta padronizada por 4 semanas, de acordo com o grupo. Foi realizada hepatectomia, sob anestesia inalatória, e os fígados foram preservados durante 8 horas em solução de FBP ou de UW. O dano de preservação foi estimado através de alíquotas do líquido de preservação (LP), com dosagem de AST, ALT e LDH, lipoperoxidação (através de TBARS), geração de antioxidantes endógenos e exame anatomopatológico. O estado nutricional teve influência na qualidade da preservação. Os fígados de ratos submetidos à dieta restrita foram os que tiveram a menor lesão de isquemia a frio, enquanto que os submetidos à dieta hiperlipídica, a pior (p<0,05). Nos ratos submetidos à dieta normal e restrita, a lesão de isquemia a frio foi menos intensa por todos os critérios nos ratos preservados com FBP (p<0,05). Nos ratos submetidos à dieta hiperlipídica, não houve diferença entre as soluções. / Donor shortage is becoming a huge problem in the last years, and this fact indeed stimulates the use of organs from extended criteria donors for liver transplant (LT). These donors are submitted to the risks of acute malnutrition and, often, there are metabolic syndrome and liver steatosis. Nutritional donor status may influence graft quality after harvesting. Most of LT centers use to adopt University of Wisconsin (UW) solution for preservation, and some experimental studies suggest that in this scenario FBP also could be used. This study aims to evaluate the influence of donor nutritional status on ischemic injury of UW or FBP preserved rat livers. There were studied 35 male Wistar rats, randomly assigned into 3 groups, accordingly to the diet: I- normal diet; II: restricted diet; III: high-fat liquid diet (Lieber-De Carli modified diet), offered by 4 weeks. Livers were preserved after hepatectomy during 8 hours either with FBP or UW. Ischemic injury was assessed by AST, ALT, LDH, TBARS, catalase and also by histopathological study. Nutritional donor status does affected graft quality. Livers from rats submitted to restricted diet had lower ischemic injury, while those from high-fat diet got worse results (p<0.05). Regarding preservation solution, ischemic injury was less pronounced in livers from rats that received normal or restricted diets, and were preserved with FBP (p<0.05). There was no difference between both solutions on the ischemic injury of livers from high-fat diet fed rats.

INTRODUÇÃO: No Brasil, os doadores de sangue são submetidos à triagem clinica antes da doação através de um questionário padronizado que segue recomendações do Ministério da Saúde. Apesar de não ser obrigatório, os serviços de hemoterapia brasileiros costumam perguntar aos candidatos sobre o número de parceiros sexuais nos doze meses que precederam aquela doação de sangue. Os candidatos que referem um número de parceiros acima do limite permitido em cada hemocentro são recusados na triagem clínica pré-doação. Este estudo analisa as características demográficas, o número de parceiros heterossexuais e marcadores sorológicos em 689.868 doações de três hemocentros brasileiros, participantes do REDS-II, entre 1 de julho de 2007 a 31 de dezembro de 2009. MÉTODOS: Os doadores foram classificados de acordo com o número máximo declarado de parceiros sexuais nos últimos doze meses permitidos em cada hemocentro. Os valores de corte para Belo Horizonte, Recife e São Paulo são dois, três e seis parceiros, respectivamente. Foram realizados os testes de qui-quadrado e regressão logística a fim de examinar associações entre características demográficas, número de parceiros sexuais em doze meses e taxas de marcadores sorológicos individuais e globais positivas para o vírus da imunodeficiência adquirida (HIV), vírus linfotrópico humano (HTLV) tipo 1 e 2, hepatite B, hepatite C e sífilis. RESULTADOS: Doadores de primeira vez, jovens e com maior nível educacional foram associados a maior número de parceiros sexuais recentes, assim como o gênero em São Paulo e Recife (p < 0, 001). Marcadores sorológicos globais, para HIV e sífilis foram associados com maior número de parceiros em São Paulo e Recife (p < 0, 001), mas não em Belo Horizonte. Na análise de regressão logística, o número de parceiros sexuais foi associado com marcadores sorológicos positivos [razão de chance ajustada (AOR) 1,2-1,5], especialmente no HIV (AOR 1,9-4,4). Em conclusão, o número de parceiros sexuais nos doze meses antes da doação de sangue, foi associado com positividade para HIV e taxas globais de marcadores sorológicos para doenças transmissíveis por transfusão. A associação não foi consistente entre os centros, tornando difícil definir um valor de corte uniforme para todos os hemocentros brasileiros. Estes achados corroboram que o uso da informação dos contatos heterossexuais recentes é um importante critério de inaptidão e de melhora na segurança transfusional no Brasil / INTRODUCTION: In Brazil, blood donors undergo medical screening before donation through a standardized questionnaire that follows recommendations from the Ministry of Health. Although not required, most of the Brazilian blood centers routinely ask candidates about the number of sexual partners in the twelve months preceding that blood donation. Candidates who refer a number of partners over the limit allowed in each blood center are refused at the predonation clinic screening. This study analyzes the demographic characteristics, the number of heterosexual partners and serological markers in 689,868 donations from three Brazilian blood center, participants in the REDS-II, from 1 July 2007 to December 31, 2009. METHODS: Donors were classified according to the stated maximum of the number of sexual partners in the last twelve months, allowed at each blood center. The cutoff values for Belo Horizonte, Recife and Sao Paulo are two, three and six partners, respectively. We conducted the chi-square and logistic regression to examine associations between demographic characteristics, number of sexual partners in twelve months and rates of individual and global serological markers positive for human immunodeficiency virus (HIV), human lymphotropic virus (HTLV) type 1 and 2, hepatitis B, hepatitis C and syphilis. RESULTS: First time donors, young and better educated were associated with increased number of recent sexual partners, as well as gender in São Paulo and Recife (p < 0.001). Global serological markers for HIV and syphilis were associated with greater number of partners in Sao Paulo and Recife (p < 0.001), but not in Belo Horizonte. In logistic regression analysis, the number of sexual partners was associated with positive serological markers [adjusted odds ratio (AOR) 1.2 to 1.5], especially HIV (AOR 1.9 to 4.4). In conclusion, the number of sexual partners in the twelve months before blood donation was associated with HIV positivity and overall rates of serologic markers for transfusion-transmissible diseases. The association was not consistent among the Brazilian blood centers, making it difficult to set a uniform cut off value for all blood banks in Brazil. These findings confirm that, the use of information from recent heterosexual contacts is an important criterion of disability and improvement in transfusion safety in Brazil

INTRODUÇÃO: No Brasil, os doadores de sangue são submetidos à triagem clinica antes da doação através de um questionário padronizado que segue recomendações do Ministério da Saúde. Apesar de não ser obrigatório, os serviços de hemoterapia brasileiros costumam perguntar aos candidatos sobre o número de parceiros sexuais nos doze meses que precederam aquela doação de sangue. Os candidatos que referem um número de parceiros acima do limite permitido em cada hemocentro são recusados na triagem clínica pré-doação. Este estudo analisa as características demográficas, o número de parceiros heterossexuais e marcadores sorológicos em 689.868 doações de três hemocentros brasileiros, participantes do REDS-II, entre 1 de julho de 2007 a 31 de dezembro de 2009. MÉTODOS: Os doadores foram classificados de acordo com o número máximo declarado de parceiros sexuais nos últimos doze meses permitidos em cada hemocentro. Os valores de corte para Belo Horizonte, Recife e São Paulo são dois, três e seis parceiros, respectivamente. Foram realizados os testes de qui-quadrado e regressão logística a fim de examinar associações entre características demográficas, número de parceiros sexuais em doze meses e taxas de marcadores sorológicos individuais e globais positivas para o vírus da imunodeficiência adquirida (HIV), vírus linfotrópico humano (HTLV) tipo 1 e 2, hepatite B, hepatite C e sífilis. RESULTADOS: Doadores de primeira vez, jovens e com maior nível educacional foram associados a maior número de parceiros sexuais recentes, assim como o gênero em São Paulo e Recife (p < 0, 001). Marcadores sorológicos globais, para HIV e sífilis foram associados com maior número de parceiros em São Paulo e Recife (p < 0, 001), mas não em Belo Horizonte. Na análise de regressão logística, o número de parceiros sexuais foi associado com marcadores sorológicos positivos [razão de chance ajustada (AOR) 1,2-1,5], especialmente no HIV (AOR 1,9-4,4). Em conclusão, o número de parceiros sexuais nos doze meses antes da doação de sangue, foi associado com positividade para HIV e taxas globais de marcadores sorológicos para doenças transmissíveis por transfusão. A associação não foi consistente entre os centros, tornando difícil definir um valor de corte uniforme para todos os hemocentros brasileiros. Estes achados corroboram que o uso da informação dos contatos heterossexuais recentes é um importante critério de inaptidão e de melhora na segurança transfusional no Brasil / INTRODUCTION: In Brazil, blood donors undergo medical screening before donation through a standardized questionnaire that follows recommendations from the Ministry of Health. Although not required, most of the Brazilian blood centers routinely ask candidates about the number of sexual partners in the twelve months preceding that blood donation. Candidates who refer a number of partners over the limit allowed in each blood center are refused at the predonation clinic screening. This study analyzes the demographic characteristics, the number of heterosexual partners and serological markers in 689,868 donations from three Brazilian blood center, participants in the REDS-II, from 1 July 2007 to December 31, 2009. METHODS: Donors were classified according to the stated maximum of the number of sexual partners in the last twelve months, allowed at each blood center. The cutoff values for Belo Horizonte, Recife and Sao Paulo are two, three and six partners, respectively. We conducted the chi-square and logistic regression to examine associations between demographic characteristics, number of sexual partners in twelve months and rates of individual and global serological markers positive for human immunodeficiency virus (HIV), human lymphotropic virus (HTLV) type 1 and 2, hepatitis B, hepatitis C and syphilis. RESULTS: First time donors, young and better educated were associated with increased number of recent sexual partners, as well as gender in São Paulo and Recife (p < 0.001). Global serological markers for HIV and syphilis were associated with greater number of partners in Sao Paulo and Recife (p < 0.001), but not in Belo Horizonte. In logistic regression analysis, the number of sexual partners was associated with positive serological markers [adjusted odds ratio (AOR) 1.2 to 1.5], especially HIV (AOR 1.9 to 4.4). In conclusion, the number of sexual partners in the twelve months before blood donation was associated with HIV positivity and overall rates of serologic markers for transfusion-transmissible diseases. The association was not consistent among the Brazilian blood centers, making it difficult to set a uniform cut off value for all blood banks in Brazil. These findings confirm that, the use of information from recent heterosexual contacts is an important criterion of disability and improvement in transfusion safety in Brazil