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Ping-kuen Lam. / "May 1998." / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 1998. / Includes bibliographical references (p. 109-121). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Mode of access: World Wide Web. / Abstracts in English and Chinese.

Diss. Stockholm : Karolinska institutet, 2006.

Extensas lesões na pele expõem o organismo a uma série de agentes agressores, dificultando a reparação espontânea da pele e muitas vezes levando o paciente a óbito. Nesse caso, se não houver áreas doadoras de autoenxertos, pode se utilizar aloenxertos. Neste tipo de enxerto, os tecidos são processados em Bancos de Tecidos, onde se pode empregar a radiação ionizante como método de esterilização. De acordo com estudos in vitro, a radiação gama, em doses acima de 25 kGy, provoca desestruturação das fibrilas de colágeno I da derme conservada em glicerol na concentração de 85%, reduzindo significativamente a resistência à tração dos tecidos irradiados. Observações clínicas sugerem, ainda, integração mais rápida da derme humana, conservada em glicerol e submetida à radiação ionizante, com os tecidos do receptor, quando comparada à derme somente conservada em glicerol. Para verificar se essas alterações relatadas in vitro, comprometeriam o emprego in vivo, de amostras de pele humana, submetidas à radiação gama, foram realizados transplantes de peles humanas, irradiadas ou não, em camundongos Nude. A pele dos camundongos foi submetida à análise macroscópica, imagens de tomografia de coerência óptica, histologia e ensaios biomecânicos. Foi possível concluir que os enxertos irradiados a 25 kGy promoveram uma contração inicial maior, mas essa alteração não interferiu na dimensão da área final de reparação, ainda, os animais que receberam esses enxertos apresentaram mais rápido fechamento da ferida em comparação com os demais, além disso o emprego de enxertos irradiados (25 e 50 kGy) promoveu a formação de um processo de reparação mais organizado e sem efeitos significantes nas propriedades biomecânicas. / Extensive skin lesions expose the body to damaging agents, which makes spontaneous regeneration difficult and, in many cases, leads patient to death. In such cases, if there are no donating areas for autograft, allografts can be used. In this type of graft, tissue is processed in tissue banks, where it can be subjected to radiosterilization. According to in vitro studies, gamma radiation, in doses higher than 25 kGy, induces alterations in skin preserved in glycerol at 85%, reducing the tensile strength of irradiated tissue. Clinical observation also suggests faster integration of such graft with the receptors tissue. In order to assess if the alterations observed in vitro, would compromise in vivo use, transplants of human tissue, irradiated or not, were performed in Nude mice. The skin of the mice was subjected to macroscopic analysis, optical coherence tomography imaging, histological and biomechanical assays. It was possible to conclude that grafts irradiated with 25 kGy promoted greater initial contraction, without alteration of the final dimensions of the repair area, also displaying a faster closing of the wound. Moreover, the use of irradiated grafts (25 and 50 kGy) enabled the formation of a more organized healing process without significant effects on biomechanical properties.

O presente estudo foi realizado para esclarecer o surgimento de vesículas subepidérmicas em enxertos de pele comumente descritos como áreas enxertadas. Devido à discrepância existente entre a literatura, que afirma surgirem vesículas nessas áreas, e a nossa experiência clínica, onde não observamos tal fato, decidimos investigar o problema. Para isso, estudamos a transição dermoepidérmica (TDE), em 23 pacientes submetidos à enxertia de pele, para verificar se há ou não alteração dessa estrutura que pudesse justificar a formação de vesículas. Nos 23 pacientes estudados foram feitas duas biópsias: a primeira, imediatamente antes da excisão do enxerto, na área doadora - pele sã, considerada como amostra padrão normal da TDE - Amostra Padrão AD. Após 10 dias, realizou-se uma segunda biópsia, com o mesmo vazador, próxima à área da primeira biópsia - Amostra Teste - ENX. Cada amostra foi dividida em 2 partes iguais (46 amostras) e estudadas por microscopia de luz e por imunofluorescência direta (imunomapeamento), pesquisando-se a possível alteração da zona da membrana basal (ZMB) na TDE através dos antígenos penfigóide bolhoso, laminina, colágeno IV e colágeno VII. Na microscopia de luz estudou-se, em cada biópsia, a relação entre a medida linear do relevo da trasição dermoepidérmica e a medida linear do relevo da superfície da camada granulosa, logo abaixo da camada córnea, equivalente a medida linear da superfície da pele. Nas 46 amostras as análises por microscopia de luz e de imunomapeamento para os quatro antígenos evidenciou-se a manutenção do mesmo padrão morfológico. Não houve diferença no imunomapeamento. Observou-se relações lineares das medidas com médias de 1,17 para a amostra AD e 1,44 para a amostra ENX, diferença que foi estatisticamente significativa, porém conservando a manutenção do padrão da TDE em relação à pele normal. Foi observada a manutenção do padrão do relevo da TDE no enxerto, em relação à pele sã, doadora. / SUMMARY: The present study has been done to elucidate the onset of subepidermal blisters in skin grafts, usually mistaken as grafted sites. Due to the discrepancy between literature - assigning this onset of blisters in grafts and our experience opposite we have decided to carry out this study. To do so we have studied the dermal-epidermal junction in 23 burned patients who underwent skin grafting so that we could verify whether or not there could be any alteration in the dermal-epidermal junction structure that may explain this fact. Among the 23 studied patients, two biopsies were carried out: the first one just before harvesting the skin graft from donor site healthy skin. The so called sample was regarded as an ordinary standard one of the dermal-epidermal junction STANDARD SAMPLE - DS. After graft take, by ten days, a second biopsy was performed with the same punch, close to the first biopsy TEST SAMPLE GS. Both samples were split into two equal parts (46 samples) and studied using light microscopy and direct immunofluorescence (immune mapping), searching for possible alterations in basement membrane zone in the dermal-epidermal junction through bullous pemphigoid, laminin and types IV and VII collagen antigens. On light microscopy, relation between the linear measure of dermal-epidermal junction projection and that of stratum granulosum surface, just underneath the stratum corneum, corresponding to skin surface, was studied in each biopsy. The four analyses of the antigens by light microscopy and direct immunofluorescence in the 46 samples clearly showed the keeping of the same pattern, either for STANDARD SAMPLE DS or TEST SAMPLE GS. There were no differences on the immune mapping. Regarding the relation of the linear measures it was noted a mean of 1.17 for STANDARD SAMPLE DS and a mean of 1.44 for TEST SAMPLE GS. Such difference was statistically significant. Nevertheless, it maintained the keeping of the same pattern of dermal-epidermal junction when compared to healthy skin.

INTRODUÇÃO: Os ferimentos descolantes nos membros inferiores frequentemente se apresentam como lesões graves. Há dificuldade na decisão sobre o tratamento mais adequado, o reposicionamento e sutura do retalho ou o emagrecimento e enxertia da pele avulsionada. Este estudo avaliou os pacientes com ferimentos descolantes nos membros inferiores, analisando o perfil epidemiológico e a evolução dos pacientes de acordo com o tratamento realizado. Após a análise dos dados e a revisão da literatura, propõe-se um protocolo para padronização do atendimento. MÉTODOS: Foram avaliados retrospectivamente 42 pacientes vitimas de ferimentos descolantes em membros inferiores atendidos no HC-FMUSP entre julho de 2003 e junho de 2007. Os pacientes foram divididos de acordo com o tratamento em 2 grupos: grupo 1 (n = 21; reposicionamento do retalho) e grupo 2 (n = 21; ressecção do retalho e enxertia imediata). Os pacientes do grupo 1 foram atendidos inicialmente em outros serviços e referenciados ao HC-FMUSP com mais de 24 horas após o trauma (16 pacientes) ou foram atendidos pela cirurgia do trauma do HC-FMUSP (5 pacientes) sem a participação da cirurgia plástica nas primeiras 24 horas. Os pacientes do grupo 1 foram tratados com limpeza, reposicionamento e sutura do retalho avulsionado à posição original. Os pacientes do grupo 2 tiveram como tratamento limpeza e desbridamento da ferida, ressecção do retalho avulsionado e emagrecimento do retalho até a espessura de pele e enxertia desta pele no atendimento inicial. RESULTADOS: Dezenove pacientes do grupo 1 (90%) apresentaram necrose e perda total do retalho reposicionado, necessitando tratamento adicional com desbridamento da necrose e enxertia de pele. Dois pacientes (10%) do grupo 1 tiveram evolução favorável, não necessitando de tratamento adicional. Os pacientes dos grupos 1 e 2 apresentaram dados estatisticamente similares em relação à enxertia de pele (G1 = 81%; G2 = 86%; p > 0,999), enxertia de pele complementar (G1 = 48%; G2 = 71%; p = 0,208), cobertura com retalho cirúrgico (G1 = 14%; G2 = 19%; p > 0,999), complicações clínicas (G1 = 33%; G2 = 24%; p = 0,734), complicações cirúrgicas (G1 = 14%; G2 = 33%; p = 0,277), taxa de amputação (G1 = 10%; G2 = 29%; p = 0,238) e taxa de óbito (G1 = 0; G2 = 14%; p = 0,232). Houve diferença estaticamente significativa no tempo de internação, com os pacientes do grupo 1 permanecendo mais tempo internados (G1 = 46,2 dias; G2 = 32,5 dias; p < 0,001). CONCLUSÕES: Houve alto índice de necrose do retalho avulsionado ! nos pacientes que receberam o tratamento de reposicionamento e sutura do retalho ao leito de origem (90%; grupo 1). O tratamento de ressecção do retalho avulsionado, emagrecimento até a espessura de pele e enxertia imediata (grupo 2) proporcionou melhor evolução com relação ao tempo de permanência hospitalar. / INTRODUCTION: Lower extremity degloving injuries are often characterized as serious injuries. There is difficulty in deciding on the most appropriate treatment, whether flap repositioning and suturing or converting the avulsed flap to split-thickness skin grafting. This study assessed patients with degloving injuries in lower extremities, reviewing the epidemiological profile and patient outcome related to the performed treatment. After data analyzing and literature reviewing, a treatment protocol is proposed for standardization of care. METHODS: Forty-two patients were retrospectively evaluated, grouped in 2 groups according with the treatment performed: group 1 (n = 21; flap repositioning) and group 2 (n = 21; flap resection and skin grafting). Group 1 was cared initially in other hospitals (16 patients) or by trauma surgery team in our hospital (5 patients) and it had treatment with washing, repositioning and suturing of avulsed flap to the original position. Group 2 had treatment with washing, debridement, resection of avulsed flap and converting the flap to split-thickness graft in the first care. RESULTS: Nineteen patients in the group 1 (90%) followed necrosis and total flap loss. These patients had additional surgery for skin grafting. Patients of groups 1 and 2 had similar finds with relation to skin grafting (G1 = 81%; G2 = 86%; p > 0,999), complementary skin grafting (G1 = 48%; G2 = 71%; p = 0,208), surgical flap (G1 = 14%; G2 = 19%; p > 0,999), clinical complications (G1 = 33%; G2 = 24%; p = 0,734), surgical complications (G1 = 14%; G2 = 33%; p = 0,277), amputation rate (G1 = 10%; G2 = 29%; p = 0,238) and death rate (G1 = 0; G2 = 14%; p = 0,232). There was statistical significant difference in length of hospital stay, with patients of group 1 staying longer inhospital (G1 = 46,2 days; G2 = 32,5 days; p < 0,001). CONCLUSIONS: There was high rate of flap necrosis in group 1 (90%) that had repositioning and suturing of avulsed flap. Group 2, with resection, defatting and immediate skin grafting, had better outcome in relation to inhospital stay.

A leptina é um mediador tanto de respostas neuroendócrinas como imunes, e tem sido associada a diversas autoimunidades. O nosso objetivo foi estudar a importância da leptina na modulação da resposta imunológica no transplante experimental, com ênfase em seu papel na plasticidade de linfócitos T e de células dendríticas (DC). Observamos que os animais deficientes em leptina têm uma sobrevida aumentada do enxerto de pele e uma menor frequência de células Th1 e maior T reguladoras (Treg), Th2 e Th17. Ademais, células T CD4+ naive diferenciam-se mais eficientemente em células Treg e Th17 tanto com DC como sem DC, na ausência de leptina. Nossos dados indicam que BMDC, imaturas e maduras, é comprometida na ausência de leptina, induzindo menor proliferação de linfócitos CD4+ e maior geração/expansão de células Treg, Th17 e Th2. Assim, a ausência de leptina resultou num predomínio de células Treg um padrão Th2 que, em conjunto com o perfil tolerogênico das DC, poderiam ser um dos mecanismos responsáveis pelo aumento da sobrevida do enxerto alogenêico de pele. / Leptin is a mediator of both neuroendocrine and immune responses, and has been associated with several autoimmune diseases. Our objective was to study the importance of leptin in modulating the immune response in experimental transplantation, with emphasis on its role in the plasticity of T lymphocytes and dendritic cells (DC). We observed that animals leptin deficient had an increased skin graft survival and lower frequency of Th1 and increased regulatory (Treg), Th2 and Th17 T cells. Furthermore, naive CD4+ T cells differentiate more efficiently in Treg and Th17 cells, with DC and without DC, in the absence of leptin. Our data indicate that BMDC, mature and immature, is compromised in the absence of leptin, leading to less proliferation of CD4+ and increased generation / expansion of Treg cells, Th2 and Th17. Thus, the lack of leptin resulted in a predominance of Th2 and Treg T cells, which together with the profile of tolerogenic DC could be one of the mechanisms responsible for increased survival of allograft skin.

Extensas lesões na pele expõem o organismo a uma série de agentes agressores, dificultando a reparação espontânea da pele e muitas vezes levando o paciente a óbito. Nesse caso, se não houver áreas doadoras de autoenxertos, pode se utilizar aloenxertos. Neste tipo de enxerto, os tecidos são processados em Bancos de Tecidos, onde se pode empregar a radiação ionizante como método de esterilização. De acordo com estudos in vitro, a radiação gama, em doses acima de 25 kGy, provoca desestruturação das fibrilas de colágeno I da derme conservada em glicerol na concentração de 85%, reduzindo significativamente a resistência à tração dos tecidos irradiados. Observações clínicas sugerem, ainda, integração mais rápida da derme humana, conservada em glicerol e submetida à radiação ionizante, com os tecidos do receptor, quando comparada à derme somente conservada em glicerol. Para verificar se essas alterações relatadas in vitro, comprometeriam o emprego in vivo, de amostras de pele humana, submetidas à radiação gama, foram realizados transplantes de peles humanas, irradiadas ou não, em camundongos Nude. A pele dos camundongos foi submetida à análise macroscópica, imagens de tomografia de coerência óptica, histologia e ensaios biomecânicos. Foi possível concluir que os enxertos irradiados a 25 kGy promoveram uma contração inicial maior, mas essa alteração não interferiu na dimensão da área final de reparação, ainda, os animais que receberam esses enxertos apresentaram mais rápido fechamento da ferida em comparação com os demais, além disso o emprego de enxertos irradiados (25 e 50 kGy) promoveu a formação de um processo de reparação mais organizado e sem efeitos significantes nas propriedades biomecânicas. / Extensive skin lesions expose the body to damaging agents, which makes spontaneous regeneration difficult and, in many cases, leads patient to death. In such cases, if there are no donating areas for autograft, allografts can be used. In this type of graft, tissue is processed in tissue banks, where it can be subjected to radiosterilization. According to in vitro studies, gamma radiation, in doses higher than 25 kGy, induces alterations in skin preserved in glycerol at 85%, reducing the tensile strength of irradiated tissue. Clinical observation also suggests faster integration of such graft with the receptors tissue. In order to assess if the alterations observed in vitro, would compromise in vivo use, transplants of human tissue, irradiated or not, were performed in Nude mice. The skin of the mice was subjected to macroscopic analysis, optical coherence tomography imaging, histological and biomechanical assays. It was possible to conclude that grafts irradiated with 25 kGy promoted greater initial contraction, without alteration of the final dimensions of the repair area, also displaying a faster closing of the wound. Moreover, the use of irradiated grafts (25 and 50 kGy) enabled the formation of a more organized healing process without significant effects on biomechanical properties.

INTRODUÇÃO: Os ferimentos descolantes nos membros inferiores frequentemente se apresentam como lesões graves. Há dificuldade na decisão sobre o tratamento mais adequado, o reposicionamento e sutura do retalho ou o emagrecimento e enxertia da pele avulsionada. Este estudo avaliou os pacientes com ferimentos descolantes nos membros inferiores, analisando o perfil epidemiológico e a evolução dos pacientes de acordo com o tratamento realizado. Após a análise dos dados e a revisão da literatura, propõe-se um protocolo para padronização do atendimento. MÉTODOS: Foram avaliados retrospectivamente 42 pacientes vitimas de ferimentos descolantes em membros inferiores atendidos no HC-FMUSP entre julho de 2003 e junho de 2007. Os pacientes foram divididos de acordo com o tratamento em 2 grupos: grupo 1 (n = 21; reposicionamento do retalho) e grupo 2 (n = 21; ressecção do retalho e enxertia imediata). Os pacientes do grupo 1 foram atendidos inicialmente em outros serviços e referenciados ao HC-FMUSP com mais de 24 horas após o trauma (16 pacientes) ou foram atendidos pela cirurgia do trauma do HC-FMUSP (5 pacientes) sem a participação da cirurgia plástica nas primeiras 24 horas. Os pacientes do grupo 1 foram tratados com limpeza, reposicionamento e sutura do retalho avulsionado à posição original. Os pacientes do grupo 2 tiveram como tratamento limpeza e desbridamento da ferida, ressecção do retalho avulsionado e emagrecimento do retalho até a espessura de pele e enxertia desta pele no atendimento inicial. RESULTADOS: Dezenove pacientes do grupo 1 (90%) apresentaram necrose e perda total do retalho reposicionado, necessitando tratamento adicional com desbridamento da necrose e enxertia de pele. Dois pacientes (10%) do grupo 1 tiveram evolução favorável, não necessitando de tratamento adicional. Os pacientes dos grupos 1 e 2 apresentaram dados estatisticamente similares em relação à enxertia de pele (G1 = 81%; G2 = 86%; p > 0,999), enxertia de pele complementar (G1 = 48%; G2 = 71%; p = 0,208), cobertura com retalho cirúrgico (G1 = 14%; G2 = 19%; p > 0,999), complicações clínicas (G1 = 33%; G2 = 24%; p = 0,734), complicações cirúrgicas (G1 = 14%; G2 = 33%; p = 0,277), taxa de amputação (G1 = 10%; G2 = 29%; p = 0,238) e taxa de óbito (G1 = 0; G2 = 14%; p = 0,232). Houve diferença estaticamente significativa no tempo de internação, com os pacientes do grupo 1 permanecendo mais tempo internados (G1 = 46,2 dias; G2 = 32,5 dias; p < 0,001). CONCLUSÕES: Houve alto índice de necrose do retalho avulsionado ! nos pacientes que receberam o tratamento de reposicionamento e sutura do retalho ao leito de origem (90%; grupo 1). O tratamento de ressecção do retalho avulsionado, emagrecimento até a espessura de pele e enxertia imediata (grupo 2) proporcionou melhor evolução com relação ao tempo de permanência hospitalar. / INTRODUCTION: Lower extremity degloving injuries are often characterized as serious injuries. There is difficulty in deciding on the most appropriate treatment, whether flap repositioning and suturing or converting the avulsed flap to split-thickness skin grafting. This study assessed patients with degloving injuries in lower extremities, reviewing the epidemiological profile and patient outcome related to the performed treatment. After data analyzing and literature reviewing, a treatment protocol is proposed for standardization of care. METHODS: Forty-two patients were retrospectively evaluated, grouped in 2 groups according with the treatment performed: group 1 (n = 21; flap repositioning) and group 2 (n = 21; flap resection and skin grafting). Group 1 was cared initially in other hospitals (16 patients) or by trauma surgery team in our hospital (5 patients) and it had treatment with washing, repositioning and suturing of avulsed flap to the original position. Group 2 had treatment with washing, debridement, resection of avulsed flap and converting the flap to split-thickness graft in the first care. RESULTS: Nineteen patients in the group 1 (90%) followed necrosis and total flap loss. These patients had additional surgery for skin grafting. Patients of groups 1 and 2 had similar finds with relation to skin grafting (G1 = 81%; G2 = 86%; p > 0,999), complementary skin grafting (G1 = 48%; G2 = 71%; p = 0,208), surgical flap (G1 = 14%; G2 = 19%; p > 0,999), clinical complications (G1 = 33%; G2 = 24%; p = 0,734), surgical complications (G1 = 14%; G2 = 33%; p = 0,277), amputation rate (G1 = 10%; G2 = 29%; p = 0,238) and death rate (G1 = 0; G2 = 14%; p = 0,232). There was statistical significant difference in length of hospital stay, with patients of group 1 staying longer inhospital (G1 = 46,2 days; G2 = 32,5 days; p < 0,001). CONCLUSIONS: There was high rate of flap necrosis in group 1 (90%) that had repositioning and suturing of avulsed flap. Group 2, with resection, defatting and immediate skin grafting, had better outcome in relation to inhospital stay.

O presente estudo foi realizado para esclarecer o surgimento de vesículas subepidérmicas em enxertos de pele comumente descritos como áreas enxertadas. Devido à discrepância existente entre a literatura, que afirma surgirem vesículas nessas áreas, e a nossa experiência clínica, onde não observamos tal fato, decidimos investigar o problema. Para isso, estudamos a transição dermoepidérmica (TDE), em 23 pacientes submetidos à enxertia de pele, para verificar se há ou não alteração dessa estrutura que pudesse justificar a formação de vesículas. Nos 23 pacientes estudados foram feitas duas biópsias: a primeira, imediatamente antes da excisão do enxerto, na área doadora - pele sã, considerada como amostra padrão normal da TDE - Amostra Padrão AD. Após 10 dias, realizou-se uma segunda biópsia, com o mesmo vazador, próxima à área da primeira biópsia - Amostra Teste - ENX. Cada amostra foi dividida em 2 partes iguais (46 amostras) e estudadas por microscopia de luz e por imunofluorescência direta (imunomapeamento), pesquisando-se a possível alteração da zona da membrana basal (ZMB) na TDE através dos antígenos penfigóide bolhoso, laminina, colágeno IV e colágeno VII. Na microscopia de luz estudou-se, em cada biópsia, a relação entre a medida linear do relevo da trasição dermoepidérmica e a medida linear do relevo da superfície da camada granulosa, logo abaixo da camada córnea, equivalente a medida linear da superfície da pele. Nas 46 amostras as análises por microscopia de luz e de imunomapeamento para os quatro antígenos evidenciou-se a manutenção do mesmo padrão morfológico. Não houve diferença no imunomapeamento. Observou-se relações lineares das medidas com médias de 1,17 para a amostra AD e 1,44 para a amostra ENX, diferença que foi estatisticamente significativa, porém conservando a manutenção do padrão da TDE em relação à pele normal. Foi observada a manutenção do padrão do relevo da TDE no enxerto, em relação à pele sã, doadora. / SUMMARY: The present study has been done to elucidate the onset of subepidermal blisters in skin grafts, usually mistaken as grafted sites. Due to the discrepancy between literature - assigning this onset of blisters in grafts and our experience opposite we have decided to carry out this study. To do so we have studied the dermal-epidermal junction in 23 burned patients who underwent skin grafting so that we could verify whether or not there could be any alteration in the dermal-epidermal junction structure that may explain this fact. Among the 23 studied patients, two biopsies were carried out: the first one just before harvesting the skin graft from donor site healthy skin. The so called sample was regarded as an ordinary standard one of the dermal-epidermal junction STANDARD SAMPLE - DS. After graft take, by ten days, a second biopsy was performed with the same punch, close to the first biopsy TEST SAMPLE GS. Both samples were split into two equal parts (46 samples) and studied using light microscopy and direct immunofluorescence (immune mapping), searching for possible alterations in basement membrane zone in the dermal-epidermal junction through bullous pemphigoid, laminin and types IV and VII collagen antigens. On light microscopy, relation between the linear measure of dermal-epidermal junction projection and that of stratum granulosum surface, just underneath the stratum corneum, corresponding to skin surface, was studied in each biopsy. The four analyses of the antigens by light microscopy and direct immunofluorescence in the 46 samples clearly showed the keeping of the same pattern, either for STANDARD SAMPLE DS or TEST SAMPLE GS. There were no differences on the immune mapping. Regarding the relation of the linear measures it was noted a mean of 1.17 for STANDARD SAMPLE DS and a mean of 1.44 for TEST SAMPLE GS. Such difference was statistically significant. Nevertheless, it maintained the keeping of the same pattern of dermal-epidermal junction when compared to healthy skin.