A toxoplasmose é uma das enfermidades parasitárias mais difundidas entre as transmissíveis. Novos aspectos parecem justificar o reaparecimento da questão da toxoplasmose, uma vez que ela vem sendo diagnosticada em um número crescente de pacientes com imunossupressão devida a várias causas tais como doenças malignas, transplantes de órgãos e principalmente, a Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). Mais de 50% da população humana mundial acha-se infectada pelo Toxoplasma gondii com variações determinadas por fatores climáticos, sócio-econômicos, tipo de contato com animais, em especial o gato e costumes alimentares relacionados ao consumo de carnes. O T. gondii é um protozoário que infecta praticamente todas as espécies animais. A caprinocultura é uma atividade bastante exercida no Estado, sendo que representa 0,4% de sua atividade pecuária total. O objetivo deste trabalho foi avaliar o papel desempenhado pela espécie caprina na transmissão do T.gondii. A amostragem foi estratificada por idade e gênero. Foram analisadas 360 amostras de soros de caprinos, através da técnica de Hemaglutinaçao Indireta (HAI) e Imunofluorescência Indireta (IFI). Os resultados obtidos pela HAI estimam uma freqüência de 19 % de soro-positividade e pela IFI de 30%, o que representa índices elevados. Em relação a Hemaglutinação Indireta, na variável gênero, foi observada uma freqüência de 20,1% de soropositividade para os machos e 19,3% para as fêmeas, enquanto que na variável idade, os resultados demonstraram freqüências de 16,5% para os indivíduos jovens e 21,1% para os adultos. No que tange à Imunofluorescência Indireta, a variável gênero demonstrou uma freqüência de 14,44% de soropositivos para os machos e 15,56% para as fêmeas. Na variável idade, através desta mesma técnica, observou-se uma freqüência de soropositividade de 13,06% para indivíduos jovens e de 16,94% para indivíduos adultos. Ao compararem-se as duas técnicas os dados obtidos revelam uma associação significativa entre elas, com uma índice de co-positividade para a HAI de 78,6% e de co-negatividade de 81,7%. O índice Kappa utilizado para medir o grau de concordância entre as duas técnicas foi igual a 0,5% que evidencia um grau de concordância moderado entre as técnicas, recomendando, desta forma o uso cauteloso da HAI na espécie caprina. Os dados obtidos nos permitem concluir que os caprinos criados na região estudada podem ser fonte de transmissão de T. gondii.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-18Bitstream added on 2014-06-13T20:35:27Z : No. of bitstreams: 1 machado_gp_me_botfmvz.pdf: 9325259 bytes, checksum: fb35e3ab36940dcb27ffaa869d59946b (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A neosporose é uma doença parasitária causada pelo protozoário Neospora caninum sendo causadora de problemas reprodutivos e distúrbios neurológicos nos animais. Os canídeos selvagens e domésticos são hospedeiros definitivos, e os ovinos, entre os hospedeiros intermediários, se constituem uma das espécies susceptíveis. A presença de cães nas propriedades rurais é um fator de risco para a infecção nos ovinos, indicando associação entre a infecção em ambas as espécies. Este trabalho teve por objetivo verificar a soro-ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em ovinos e cães naturalmente infectados. Foram colhidas amostras de sangue de 1497 ovelhas e 42 cães que compartilhavam o mesmo ambiente, provenientes de 16 propriedades rurais localizadas na microrregião de Araraquara. Para a pesquisa de anticorpos anti- N. caninum utilizou-se a técnica de reação de imunofluorescência indireta (RIFI ≥ 25). Para o estudo epidemiológico foi aplicado um questionário aos proprietários ou responsáveis pelos animais, contendo informações ligadas a neosporose, tanto para ovinos quanto para os cães. Dos 1497 soros ovinos testados obteve-se uma ocorrência de 8,0% (LI 95%= 6,7%; LS 95%= 9,2%) e dos 42 cães 4,8% (LI 95%= 0%; LS 95%= 7,2%). Foram observadas diferenças estatísticas significativas na associação entre o resultado da sorologia dos ovinos para N. caninum e as variáveis: abastecimento de água (P=0,0004; OR=2,15), presença de outros canídeos selvagens ou domésticos (P=0,0013; OR=2,38) e presença ou ausência de problemas reprodutivos (P=0,0031; OR=1,75). A ingestão de água de represa, a presença de canídeos selvagens ou de propriedades vizinhas e presença de problemas reprodutivos apresentaram associação positiva com a ocorrência de neosporose em ovinos / The neosporosis is a parasitic disease caused by protozoan Neospora caninum that is considered a cause of reproductive problems and neurological disorders in animals. Domestic and wild canids are definitive hosts, and sheep, among the intermediate hosts, constitute one of the susceptible species may occur reproductive problems. The presence of dogs in the farms is a risk factor for infection in sheep, indicating an association between infection in both species. This study aimed to verify the serum-occurrence of antibodies in sheep and dogs naturally infected by N. caninum. We collected 1497 blood samples from sheep and 42 samples from dogs that lived with the sheep from 16 farms located in the microregion of Araraquara. For the detection of N. caninum antibodies was performed the technique of reaction of indirection immunofluorescence (IFAT ≥ 25). Epidemiological study was applied as a questionnaire for sheep and dogs with information related to neosporosis. Of 1497 sheep sera tested, the occurrence obtained was 8.0% (LL 95% = 6.7%; UL 95% = 9.2%) and of 42 dogs, 4.8% (LL 95% = 0%; UL 95% = 7.2%). Were statistically significant differences in the association between seropositivity for N. caninum in sheep and the variables: water supply (P=0.0004; OR=2.15), presence of other wild or domestic canids (P=0.0013; OR=2.38) and presence or absence of reproductive problems (P=0.0031; OR=1.75). Ingestion of water from dams, the presence of wild dogs or wild canids of neighboring properties and the presence of reproductive problems were positively associated with the occurrence of neosporosis in sheep

Orientador: Aramis Augusto Pinto / Banca: José Antonio Jerez / Banca: Ricardo Luiz Moro de Sousa / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Resumo: O presente trabalho teve o objetivo de realizar o diagnóstico sorológico de Chlamydophila felis utilizando duas técnicas sorológicas: imunofluorescência indireta, nas modalidades de kit comercial (RIFI COMERCIAL), e ensaio in house (RIFI OVO), e ELISA, sendo estes testes de RIFI OVO e ELISA preparados com antígeno de Chlamydophila abortus produzidos em ovos embrionados SPF de galinha. Adicionalmente, objetivou-se a realização do diagnóstico molecular de C. felis e estabelecimento do diagnóstico diferencial da clamidiose felina em relação à infecção pelo herpesvírus felino tipo 1 (HVF-1), vírus da Imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV). Anticorpos anti-Chlamydiaceae foram detectados pela RIFI COMERCIAL em 81% dos animais (162/201), pela RIFI OVO em 55% (111/201) e pelo ELISA em 31% (69/201) das amostras. Verificou-se que o antígeno de Chlamydophila abortus inoculado em ovos embrionados não é indicado para utilização em técnicas imunológicas, devido à baixa sensibilidade, especificidade e correlação entre os testes estudados. Das amostras de suabes de conjuntiva submetidas à PCR, em 5,1% (12/235) foi amplificado o gene MOMP de C. felis e três amostras (1,3%) foi detectado DNA de herpesvírus. Houve coinfecção para os dois agentes em 0,4% (1/235) das amostras analisadas. Ademais, 150 amostras de soro foram avaliadas, sendo anticorpos anti-FIV detectados em 8 amostras (5,3%) e o antígeno de FeLV detectado em 11 amostras (7,3%). Não houve coinfecção por C. felis e HVF-1 com os vírus imunossupressores, demonstrando não haver correlação entre a infecção de FIV e/ou FeLV e o complexo respiratório felino / Abstract: This study aimed at perfoming the serological diagnosis of Chlamydophila felis by three serological approaches, using a commercial kit for Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT COMMERCIAL), and Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT EGG) and ELISA prepared with Chlamydophila abortus with antigen produced in SPF embryonated chicken eggs. Additionally, our study aimed at performing the molecular diagnosis of C. felis and establishing the differential diagnosis of feline chlamydiosis in relation to Feline Herpesvirus type-1 (HVF-1) in cat conjunctival swab samples, as well as investigate the presence of antibodies to Feline Immunodeficiency Virus (FIV) and presence of Feline Leukemia Virus (FeLV) antigen in cat serum samples. IgG antibodies to Chlamydophila sp. were detected by in 81% (162/201), 55% (111/201), and 31% (69/201) of serum samples, by IFA Chlamydiaceae COMMERCIAL, IFA EGG and ELISA, respectively. The use of Chlamydophila spp antigen produced in embryonated eggs is not indicated for serological tests due to its low sensitivity, specificity and correlation with other serological tests. Twelve (5.1%) out of 235 conjunctival swab samples were positive to C. felis- MOMP gene PCR; three samples (1.3%) were positive to herpesvirus PCR. Co-infection for both agents (C. felis and Herpesvirus) was found in 1 cat (0.4%). Furthermore, 150 serum samples were evaluated by commercial ELISA kit-Snap ® Combo FeLV-FIV. IgG antibodies to FIV were detected in 8 samples (5.3%), and FeLV antigen was detected in 11 samples (7.3%). The presence of co-infection for C. felis and HVF-1 with immunosuppressive viruses was not observed, showing no correlation between FIV infection and / or FeLV and upper respiratory tract disease / Doutor

Orientador: Luis Antonio Mathias / Coorientador: Raymundo Rizaldo Pinheiro / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Luís Guilherme de Oliveira / Banca: Darci Lara Perecin Nociti / Banca: Anna Monteiro Correia Lima / Resumo: A brucelose e a leptospirose são doenças infectocontagiosas de ampla distribuição geográfica que acometem animais domésticos, silvestres e o homem. Devido a isso, possuem importância econômica, por perdas advindas de transtornos reprodutivos e para a saúde pública, devido ao fato de serem zoonoses. Tendo em vista a importância da caprinovinocultura para a região Nordeste, este trabalho teve como objetivo avaliar a presença de aglutininas anti-Leptospira e de reação anti-Brucella lisa em pequenos ruminantes de quatro Estados da região nordeste, bem como avaliar os sorovares de Leptospira spp mais prevalentes e os fatores associados à infecção. Foram obtidas 6.431 amostras de pequenos ruminantes. No Estado do Ceará foram 931 amostras de ovinos e 817 de caprinos, na Paraíba foram 443 ovinos e 1.215 caprinos, em Sergipe foram 923 ovinos e 499 caprinos e na Bahia 918 ovinos e 685 caprinos. O diagnóstico sorológico para leptospirose foi feito por meio do teste de soroaglutinação microscópica, para brucelose foi feito o antígeno acidificado tamponado como teste de triagem, e, como confirmatórios foram realizados os testes de polarização fluorescente e de fixação de complemento. A leptospirose encontra-se amplamente distribuída na região estudada, com frequências de 27,15% (IC95%: 25,62-28,69) em ovinos e 34,34% (IC95%: 32,69-35,97) em caprinos. No Estado da Paraíba, as frequências foram 28,89% (IC95%: 24,67%-33,11%) em ovinos e 34,65% (IC95%: 31,97%-37,33%) em caprinos. Em Sergipe, a prevalência em ovinos foi 12,89% (IC95%: 10,73-15,05), e 32,67% (IC95%: 28,55-36,78) em caprinos. No Ceará, 29,22% (IC95%: 26,29-32,13) em ovinos e 28,52% (IC95%: 25,42-31,62) em caprinos; e na Bahia, 38,56% (IC95%: 35,41-41,71) em ovinos e 41,90% (IC95%: 38,20-45,59) em caprinos. A prevalência em rebanhos na região foi 93,26% (IC95%: 89,57-96,94) em rebanhos ovinos e 97,16% (IC95%: 93,52-98,78) em rebanhos... / Abstract: Brucellosis and leptospirosis are infectious diseases widely geographically distributed that affect domestic and wild animals, as well humans. Because of this, they have economic importance, for losses arising from reproductive disorders and production loss, and also to the public health due to be a zoonosis. Seen the goat importance to the Northeast region, this study aimed to evaluate the presence of antibodies to Leptospira and antibodies to smooth Brucella in small ruminants in the states of Sergipe, Bahia, Ceará and Paraíba, and to assess the more prevalent sorovars of Leptospira spp and the factors associated with the infection. We obtained 6,431 samples of small ruminants, 931 sheep samples and 817 goat samples from Ceará, 443 sheep samples and 1,215 goat samples from Paraíba, from Sergipe 923 sheep samples and 499 goat samples, and 918 sheep samples and 499 goat samples from Bahia. The leptospirosis serologic diagnosis was made through the microscopic agglutination test. To brucellosis the buffered acidified antigen test was used as a screen test and then confirmed using the fluorescence polarization and the complement fixation tests. Leptospirosis was found widely distributed in the studied area, with frequencies of 27.15% (95% CI 25.62 to 28.69) in sheep and 34.34% (95% CI 32.69 to 35.97) in goats. In the state of Paraíba, the frequency was 28.89% (95% CI: 24.67% -33.11%) in sheep and 34.65% (95% CI: 31.97% -37.33%) in goats. In Sergipe, the prevalence in sheep was 12.89% (95% CI 10.73 to 15.05) and 32.67% (95% CI 28.55 to 36.78) in goats. In Ceará, the prevalence was 29.22% (95% CI 26.29 to 32.13) in sheep and 28.52% (95% CI 25.42 to 31.62) in goats, and in Bahia it was 38.56% (95% CI 35.41 to 41.71) in sheep and 41.90% (95% CI 38.20 to 45.59) in goats. The prevalence in herds in the region was 93.26% (95% CI 89.57 to 96.94) in sheep flocks and 97.16% (95% CI 93.52 to 98.78) in goat herds. All municipalities analyzed ... / Doutor

A toxoplasmose é uma das enfermidades parasitárias mais difundidas entre as transmissíveis. Novos aspectos parecem justificar o reaparecimento da questão da toxoplasmose, uma vez que ela vem sendo diagnosticada em um número crescente de pacientes com imunossupressão devida a várias causas tais como doenças malignas, transplantes de órgãos e principalmente, a Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). Mais de 50% da população humana mundial acha-se infectada pelo Toxoplasma gondii com variações determinadas por fatores climáticos, sócio-econômicos, tipo de contato com animais, em especial o gato e costumes alimentares relacionados ao consumo de carnes. O T. gondii é um protozoário que infecta praticamente todas as espécies animais. A caprinocultura é uma atividade bastante exercida no Estado, sendo que representa 0,4% de sua atividade pecuária total. O objetivo deste trabalho foi avaliar o papel desempenhado pela espécie caprina na transmissão do T.gondii. A amostragem foi estratificada por idade e gênero. Foram analisadas 360 amostras de soros de caprinos, através da técnica de Hemaglutinaçao Indireta (HAI) e Imunofluorescência Indireta (IFI). Os resultados obtidos pela HAI estimam uma freqüência de 19 % de soro-positividade e pela IFI de 30%, o que representa índices elevados. Em relação a Hemaglutinação Indireta, na variável gênero, foi observada uma freqüência de 20,1% de soropositividade para os machos e 19,3% para as fêmeas, enquanto que na variável idade, os resultados demonstraram freqüências de 16,5% para os indivíduos jovens e 21,1% para os adultos. No que tange à Imunofluorescência Indireta, a variável gênero demonstrou uma freqüência de 14,44% de soropositivos para os machos e 15,56% para as fêmeas. Na variável idade, através desta mesma técnica, observou-se uma freqüência de soropositividade de 13,06% para indivíduos jovens e de 16,94% para indivíduos adultos. Ao compararem-se as duas técnicas os dados obtidos revelam uma associação significativa entre elas, com uma índice de co-positividade para a HAI de 78,6% e de co-negatividade de 81,7%. O índice Kappa utilizado para medir o grau de concordância entre as duas técnicas foi igual a 0,5% que evidencia um grau de concordância moderado entre as técnicas, recomendando, desta forma o uso cauteloso da HAI na espécie caprina. Os dados obtidos nos permitem concluir que os caprinos criados na região estudada podem ser fonte de transmissão de T. gondii.

Resumo:A raiva é uma importante zoonose que acomete os mamíferos e tem os morcegos como reservatórios, tanto em áreas urbanas quanto rurais. Desde 1998 a região Noroeste do Estado de São Paulo tem registrado casos de raiva em morcegos, predominantemente em áreas urbanas. O objetivo deste trabalho foi investigar a circulação do vírus da raiva em morcegos da região noroeste do Estado de São Paulo por meio da pesquisa do vírus em diversas espécies e da pesquisa de anticorpos neutralizantes em morcegos hematófagos. Um total de 1490 amostras de cérebro de morcegos encaminhadas ao Laboratório de Raiva e de 125 amostras de soros obtidos de morcegos vampiros capturados de quatro abrigos da região foi avaliado durante o período de 2008 a 2012. O vírus da raiva foi detectado em 26 (1,97%) dos 1314 morcegos não-hematófagos, por meio da imunofluorescência direta (IFD) e inoculação intracerebral em camundongos (ICC) e em nenhum dos 176 morcegos vampiros examinados. Por outro lado, 7% (9/125) dos morcegos vampiros apresentaram título de anticorpos neutralizantes acima de 0,5UI/mL, 65% (81/125) tinham títulos baixos (0,10 a 0,5UI/mL) e 28% (35/125) foram negativos pela técnica de microneutralização simplificada (SFIMT) em células BHK21. O índice de positividade observado foi de 1,74% o que está acima do percentual médio de 1,3% registrado anteriormente nesta região. A alta percentagem de morcegos vampiros com anticorpos neutralizantes para o vírus da raiva indica uma exposição recente ao vírus o que confirma que, medidas de vigilância devem ser implementadas para evitar um aumento na ocorrência da doença / Abstract:Rabies is a major zoonosis which affects mammals from all over the world and has bats as reservoirs of, both urban and rural areas. Since 1998 cases of rabies in bats have been recorded in the northwest region of São Paulo State, predominantly in urban areas. The objective of this study was to investigate the circulation of rabies in bats in the northwestern region of São Paulo by searching of the virus in different species and the presence of rabies neutralizing antibodies in vampire bats. A total of 1,490 brain samples from bats were sent to the Laboratory of Rabies and 125 serum samples of vampire bats from four shelters in the region were examined from 2008 to 2012. The virus presence was determined by fluorescent antibodies test (FAT) and mouse inoculation test (MIT) while neutralizing antibodies were determined by the simplified microneutralization (SFIMT) in BHK21 cells. Rabies virus was detected in 26 (1.97%) out of 1,314 non-hematophagous bats and in none of the 176 vampire bats examined. Only 7% (9/125) of vampire bats had antibody titers above 0.5UI/ml, 65% (81/125) had low titers (0.10 to 0.5UI/ml) and 28% (35/125) were negative. The positivity rate observed was 1.74% which is above the average rate of 1.3% recorded previously in this region. The high percentage of vampire bats with neutralizing antibodies to rabies virus indicates a recent exposure to the virus which confirms that surveillance measures must be in place to avoid an increase in disease occurrence / Orientador:Luzia Helena Queiroz / Banca:Silvana Regina Favaretto Lazarini / Banca:Avelino Albas / Mestre

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Estevam Guilherme Lux Hoppe / Banca: José Eduardo Tolezano / Resumo: O objetivo do presente estudo foi determinar a presença de anticorpos anti-Leishmania sp. no soro e de DNA de Leishmania infantum chagasi no sangue periférico das diversas espécies de animais domésticos, residentes em um raio de 250 metros de distância de seres humanos portadores de leishmaniose visceral (LV), bem como avaliar as características ambientais, em uma região da cidade de Juazeiro (BA), na tentativa de determinar os possíveis fatores de risco para a ocorrência da doença. Para tanto, após a seleção de 21 casos humanos de LV distribuídos em seis bairros do município, realizou-se a sorologia e a reação em cadeia de polimerase em tempo real (qPCR) de soro e sangue total, respectivamente, de 498 animais, sendo 383 (76,91%) da espécie canina, 84 (16,87%) felina, 15 (3,00%) caprina, 12 (2,42%) equídea e 4 (0,80%) ovina. A prevalência de LV, considerando-se os resultados sorológicos e da qPCR, foi de 6,43% (32/498), sendo 5,75% (22/383) na população de cães e 11,90% (10/84) na de gatos. Vinte cães (5,22%) e 10 (11,90%) gatos foram sororreagentes e as outras espécies não apresentaram anticorpos anti-Leishmania sp. Apenas dois (0,40%) dos 498 animais apresentaram DNA do parasita no sangue, ambos da espécie canina e sem a presença de anticorpos séricos anti-Leishmania sp. Os gatos apresentaram duas vezes mais chances de se tornarem portadores da LV que os cães (OR=2,21; IC=1,1-4,87; p=0,043), e os felinos domiciliados apresentaram um risco 9,57 vezes maior de se infectarem que os gatos semidomiciliados (OR=9,57; IC=2,21-41,37; p=0,0006). O acesso a rua não foi associado com a doença em cães, e o sexo e a faixa etária não constituíram um risco para os animais contraírem esta zoonose. A presença de mais de um animal por domicílio aumentou em 3,46 vezes as chances de infecção na população... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to determine the presence of antibodies anti-Leishmania sp. in serum and DNA of Leishmania infantum chagasi in peripheral blood of domestic animals living within a 250 m perimeter from human cases of visceral leishmaniasis (VL), as well as to evaluate the environmental characteristics, in the region of the city of Juazeiro, Bahia, in an attempt to determine possible risk factors for the occurrence of the disease. For this, after the selection of 21 human cases of VL distributed in six neighborhoods of Juazeiro, serology and real time polymerase chain reaction (qPCR) in whole blood were performed in 498 animals, being 383 (76.91%) dogs, 84 (16.87%) cats, 15 (3%) goats, 12 (2.42%) equids, and 4 (0.8%) sheep. The prevalence of VL, considering serological and qPCR results, was 6.43% (32/498), being 5.75% (22/383) dogs and 11.9% (10/84) cats. Twenty (5.22%) dogs and 10 (11.9%) cats were seroreactive and the others species did not present antibodies anti-Leishmania sp. Only two (0.40%) out of 498 animals presented the parasite DNA in blood, both dogs without the presence of anti- Leishmania antibodies. Cats were two times more likely to have VL than dogs (OR = 2.21; 95% CI, 1.1 - 4.87; p = 0.043), and the domiciled cats were more likely to be positive for VL than semi-domiciled (OR=9.57; 95% CI, 2.21 - 41.37; p=0.0006). Access to the street was not associated to the disease in dogs, and sex and gender did not constitute a risk factor for the development of VL. The presence of more than one animal per household increased in 3.46 times the odds of infection in the population (OR=3,46; IC=1,49-8,06; p=0,0025). No significant association was found between the number of people per household, the distance from human VL cases, the type of house walls, the number of rooms, or the presence... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Ehrlichia canis e Anaplasma platys são parasitas de células sanguíneas transmitidos por carrapatos de larga distribuição mundial. O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de E. canis e A. platys em cães naturalmente infectados no município de Porto Alegre, RS, Brasil, através de técnicas sorológicas e moleculares; realizar análise molecular dos agentes através do sequenciamento de um fragmento do gene 16S rRNA e compará-lo com sequências disponíveis no Genbank. Adicionalmente, avaliamos os parâmetros hematológicos e possíveis fatores de risco associados à infecção. Amostras de sangue foram coletadas de 146 cães residentes no Bairro Arquipélago, região suburbana de Porto Alegre e 53 cães mantidos no Centro de Controle de Zoonoses (CCZ). Dentre os animais analisados, 27 (13,56%) apresentaram resultado positivo na nPCR e 20 (10,2%) apresentaram sorologia positiva para A. platys. Através da ferramenta BLASTn, as sequências obtidas neste estudo foram comparadas e mostraram similaridade de 99,75% a 100% em relação a outras sequências de A. platys disponíveis no Genbank. Neste estudo não foi observada a presença de E. canis. DNA do agente não foi amplificado em nenhuma das amostras analisadas através de técnicas moleculares, e tampouco foram detectados cães sororreagentes, indicando a baixa prevalência do agente no município. Ao comparar a prevalência de infecção/exposição entre as populações estudadas, não observamos diferença significativa entre elas. Não foram observadas diferenças significativas nos parâmetros hematológicos e fatores de risco analisados nos animais infectados ou expostos, exceto a contagem de basófilos, que foi associada positivamente com infecção por A. platys. / Erlichia canis and Anaplasma platys are tick borne disease which has a worldwide geographic distribution. The aim of this study was to detect the presence of E. canis and A. platys in naturally infected dogs in Porto Alegre/RS – Brazil by serological and molecular techniques, performing molecular analysis of the agents by sequencing of a fragment of the 16S rRNA and comparing it with sequences available in Genbank. Additionally, we evaluated the hematological parameters and potential risk factors associated with infection. Blood samples were collected from 146 dogs living in the Arquipelago neighborhood, a suburban area of Porto Alegre and 53 dogs from Control Centrer of Zoonosis (CCZ). Among the examined animals, 27 (13.56%) were positive by nPCR and 20 (10.2%) were seropositive for A. platys. Through the BLASTn, the sequences obtained in this study were compared and showed similarity of 99.75% to 100% as compared to other sequences of A. platys available in Genbank. None of the dogs showed antibodies or E. canis DNA, indicating the low occurrence of the agent in Porto Alegre. There were no significant differences between positive groups and hematological parameters, or among the risk factors evaluated, except basophils count was associated with A. platys infection.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-21Bitstream added on 2014-08-13T18:00:42Z : No. of bitstreams: 1 000756392.pdf: 1529746 bytes, checksum: c695f204ec592597ec7f94c736d1b9ff (MD5) / O Coronavírus felino (FCoV) é um membro da ordem Nidovirales, família Coronaviridae, gênero Alphacoronavírus, que é responsável por causar a peritonite infecciosa felina (PIF). Dentre os testes sorológicos utilizados no auxílio ao diagnóstico da doença, o método mais sensível e recomendado é o ELISA. O FCoV apresenta características que dificultam seu cultivo celular, sendo necessário o uso de antígenos recombinantes no ELISA. A proteína de nucleocapsídeo (N) do FCoV apresenta vantagens no seu uso como antígeno recombinante em testes sorológicos, por ser conservada, altamente imunogênica, e ser uma das mais produzidas durante a infecção viral. O objetivo deste trabalho foi padronizar e aplicar o ELISA indireto com uso de proteína N recombinante para detectar anticorpos anti-FCoV em soros de gatos naturalmente infectados. Um fragmento de rim de um felino que veio a óbito com PIF foi utilizado para extração de RNA viral, amplificação pela RT-PCR e sequenciamento da proteína N. A sequência da proteína N foi sintetizada com códons otimizados para expressão em Escherichia coli e inserida no plasmídeo pGS21a. Após sua produção, a proteína foi purificada. Foi realizado o Western blott com soro de gato naturalmente infectado para a confirmação da reatividade da proteína. Na padronização do ELISA indireto foi determinada o tipo de bloqueio, concentração de antígeno e diluição dos soros. Trezentos e oitenta e duas amostras de soros felinos foram testadas. Os resultados obtidos mostraram que a proteína produzida apresentou ótima reatividade no ELISA indireto. Foram encontradas diferenças de A450 entre os soros testados, onde se demonstrou uma alta capacidade de discriminação com A450 de 0,1 a 1,8, mostrando que o teste é quantitativo. O ELISA indireto padronizado para detecção de anticorpos anti-FCoV utilizando a proteína N recombinante é um método eficiente e pode ser aplicado em amostras de campo / The Feline Coronavírus (FCoV) is a member of the Nidovirales order, Coronaviridae family, Alphacoronavírus genus, which is responsible for causing Feline Infectious Peritonitis (FIP). Among the serological tests used in the disease diagnosis, ELISA is the most sensitive and recommended assay. FCoV has characteristics that difficult their cell culture growing, requiring the use of recombinant antigens in the ELISA. The FCoV nucleocapsid protein (N) is conserved, highly immunogenic and is the most protein produced during viral infection, being a great recombinant antigen in serological tests. The aim of this study was to standardize and apply the indirect ELISA using recombinant N protein to detect anti-FCoV antibodies in sera from naturally infected cats. A kidney fragment of died feline FIP positive was used for extraction of viral RNA, amplification by RT-PCR and sequencing of the protein N. The N protein sequence was synthesized with optimized codons for expression in Escherichia coli and inserted into pGS21a plasmid. The protein was produced, purified and the Western blotting was performed with sera from naturally infected cat to confirm the reactivity of the protein. To indirect ELISA standardization, the antigen concentration, serum dilution and the blocking reagent were determined. Three hundred eighty-two cat’s sera were tested. The obtained results showed that the protein presented good reactivity in indirect ELISA. The A450 differences from 0.1 to 1.8 showed the quantitative feature of the assay. The standardized indirect ELISA for detection of anti-FCoV using recombinant N protein is efficient and can be applied in field samples

Ehrlichia canis e Anaplasma platys são parasitas de células sanguíneas transmitidos por carrapatos de larga distribuição mundial. O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de E. canis e A. platys em cães naturalmente infectados no município de Porto Alegre, RS, Brasil, através de técnicas sorológicas e moleculares; realizar análise molecular dos agentes através do sequenciamento de um fragmento do gene 16S rRNA e compará-lo com sequências disponíveis no Genbank. Adicionalmente, avaliamos os parâmetros hematológicos e possíveis fatores de risco associados à infecção. Amostras de sangue foram coletadas de 146 cães residentes no Bairro Arquipélago, região suburbana de Porto Alegre e 53 cães mantidos no Centro de Controle de Zoonoses (CCZ). Dentre os animais analisados, 27 (13,56%) apresentaram resultado positivo na nPCR e 20 (10,2%) apresentaram sorologia positiva para A. platys. Através da ferramenta BLASTn, as sequências obtidas neste estudo foram comparadas e mostraram similaridade de 99,75% a 100% em relação a outras sequências de A. platys disponíveis no Genbank. Neste estudo não foi observada a presença de E. canis. DNA do agente não foi amplificado em nenhuma das amostras analisadas através de técnicas moleculares, e tampouco foram detectados cães sororreagentes, indicando a baixa prevalência do agente no município. Ao comparar a prevalência de infecção/exposição entre as populações estudadas, não observamos diferença significativa entre elas. Não foram observadas diferenças significativas nos parâmetros hematológicos e fatores de risco analisados nos animais infectados ou expostos, exceto a contagem de basófilos, que foi associada positivamente com infecção por A. platys. / Erlichia canis and Anaplasma platys are tick borne disease which has a worldwide geographic distribution. The aim of this study was to detect the presence of E. canis and A. platys in naturally infected dogs in Porto Alegre/RS – Brazil by serological and molecular techniques, performing molecular analysis of the agents by sequencing of a fragment of the 16S rRNA and comparing it with sequences available in Genbank. Additionally, we evaluated the hematological parameters and potential risk factors associated with infection. Blood samples were collected from 146 dogs living in the Arquipelago neighborhood, a suburban area of Porto Alegre and 53 dogs from Control Centrer of Zoonosis (CCZ). Among the examined animals, 27 (13.56%) were positive by nPCR and 20 (10.2%) were seropositive for A. platys. Through the BLASTn, the sequences obtained in this study were compared and showed similarity of 99.75% to 100% as compared to other sequences of A. platys available in Genbank. None of the dogs showed antibodies or E. canis DNA, indicating the low occurrence of the agent in Porto Alegre. There were no significant differences between positive groups and hematological parameters, or among the risk factors evaluated, except basophils count was associated with A. platys infection.