Made available in DSpace on 2014-06-12T16:31:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6048_1.pdf: 2450691 bytes, checksum: 944413fde58e15a773b3aca712198e2a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / O surgimento de cepas Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (MRSA) a partir da década de setenta teve um rápido incremento em todo mundo. Estas cepas multirresistentes são responsáveis por infecções nosocomiais e comunitária de difícil tratamento. A resistência a meticilina é produzida pela modificação de uma proteína que liga-se as penicilinas (PBP), a PBP2a codificada pelo gene mecA. Cerca de 40 a 60% das cepas de S. aureus isolados em hospitais de grande porte apresentam-se resistentes a meticilina e ainda, relatos na literatura permitem constatar que tais infecções estão associadas a clones específicos epidêmicos de Staphylococcus aureus multirresistentes, muitas vezes unicamente sensíveis ao glicopeptídeo vancomicina. No Brasil a partir de 1992 tem sido detectado um clone epidêmico designado como Clone Epidêmico Brasileiro (CEB), amplamente disseminado em hospitais de diferentes regiões do Brasil e outros países da América Latina e Europa. De outra parte a heterogenicidade de resistência que apresentam muitos desses clones, levando até mesmo a falhas no tratamento, justifica a preocupação de evidenciar sua presença. No Recife, estudos sistemáticos dessa resistência do Staphylococcus aureus não vinha ainda sendo realizados. No presente trabalho foram desenvolvidas diferentes técnicas para determinar a resistência a meticilina e estudos por biologia molecular para determinar a presença do gene mecA e detectar a existência do clone epidêmico. Foram coletados 242 isolados clínicos de Staphylococcus aureus de diferentes origens no período de janeiro de 2002 a julho de 2003 do Hospital Universitário (Hospital das Clinicas) de Recife Pernambuco. Para determinar o perfil de sensibilidade/resistência, das cepas devidamente identificadas , foi determinado um antibiograma padrão com oito antibióticos: ciprofloxacina, vancomicina, oxacilina, gentamicina, penicilina, sulfametropim, tetraciclina e eritromicina. A resistência à meticilina foi confirmada pela técnica Agar screen de oxacilina, realizando paralelamente a determinação das CMI para oxacilina mediante um multiinoculador de Steers e a técnica de Etest. Quanto a presença de gene mecA foi determinada por amplificação por PCR. Dos resultados obtidos, 57 cepas (72%) dos 79 isolados Staphylococcus aureus MRSA multirresistentes foram sensíveis apenas a vancomicina. Quarenta e sete cepas de Staphylococcus aureus MRSA multirresistentes escolhidas pelos seus padrões de resistência fenotipica foram estudadas pelo método de eletroforeses de DNA em campos alternados (PFGE) determinandose que 26 isolados eram subclones do Clone Epidêmico Brasileiro. Por outro lado foi verificada a presença de oito subclones do Clone Pediátrico. Entre estes o Staphylococcus aureus MRSA AM 824 , inicialmente considerado relacionado ao clone New York foi classificado como clone pediátrico pela determinação do mec elemento, SCCmec (tipo IV). Ainda foram detectados nove isolados relacionados com Clones Epidêmicos Esporádicos. Os resultados encontrados principalmente relativos ao CEB confirmam os dados citados na literatura para centros hospitalares, do Brasil, de paises latinoamericanos como Argentina e Uruguai, assim como países da Europa

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-26T17:32:19Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Carolina de Oliveira Luz.pdf: 4326874 bytes, checksum: 63dc00a616c9960ee4e6e303435634c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-26T17:32:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Carolina de Oliveira Luz.pdf: 4326874 bytes, checksum: 63dc00a616c9960ee4e6e303435634c1 (MD5) Previous issue date: 2015-03-09 / CNPQ / FACEPE / Staphylococcus aureus é considerado o patógeno mais importante de seu gênero, responsável por diversas infecções, variando desde infecção de pele e tecidos moles, até pneumonia, endocardite e sepse. Uma das causas da diversidade patogênica desta bactéria é a grande variedade de fatores de virulência que podem ser produzidos. O presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de melhor compreender o perfil de virulência de S. aureus, e a possível relação destes com os clones epidêmicos circulantes na região estudada. Para tal, foram estudados 89 isolados clínicos de S. aureus provenientes de diferentes hospitais de Recife/PE, obtidos de diversas fontes de infecção e com diferentes perfis genéticos. Foram realizadas investigações dos genes fnbA e fnbB (ligação à fibronectina), cna (ligação ao colágeno), clfA e clfB (fatores clumping, ligação ao fibrinogênio), icaA e icaD (produção de biofilme), lukF-PV e lukS-PV (leucocidina Panton Valentine), cap5 e cap8 (cápsula polissacarídica), genes do cluster gênico de enterotoxinas (seg, sei, sem, sen e seo), e análise do proteoma e secretoma de dois clones amplamente distribuídos. Todos os isolados apresentaram no mínimo oito fatores de virulência. Foram estabelecidos 39 genótipos, dos quais nenhum se mostrou clone específico. Analisando-se o padrão protéico, diversas proteínas, em especial três fatores de virulência, mostraram-se diferencialmente expressos. Como conclusão, pode-se sugerir que os isolados clínicos estudados possuem alto potencial virulento, possuindo um arcabouço genético capaz de desenvolver quadros clínicos graves. / Staphylococcus aureus is considered the most important pathogen within its genre, responsible for a variety of infections, ranging from skin and soft tissue infections to pneumonia, endocarditis and sepsis. One of the causes for this bacterium’s pathogenic diversity is the great variety of virulence factors that can be produced. The present study was developed aiming a better comprehension the virulence profile of S. aureus, and the possible relationship between them and current epidemic clones in the study area. To do so, we studied 89 clinical isolates of S. aureus from various sources of infection and with different genetic backgrounds. Investigations were conducted for the genes fnbA and fnbB (fibronectin binding proteins), cna (collagen binding protein), clfA and clfB (clumping factors, fibrinogen binding proteins), icaA and icaD (biofilm formation), lukF-PV and lukS-PV (leucocidin Panton Valentine), cap5 and cap8 (capsule polyssacharides), genes from the enterotoxin gene cluster (seg, sei, sem, sen and seo), and proteome and secretome analysis of two widely spread epidemic clones. All isolates showed positive for, at least, eight virulence factors. Thirty-nine genotypes were stablished, none of which showed itself as clone specific. Analysing the proteic pattern, several proteins, in special three virulence factors, were differentially expressed. As conclusion, we can suggest that the clinical isolates studied have a high virulence potential, possessing a genetic background capable of developing severe clinical syndromes.

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2017-04-03T17:25:23Z No. of bitstreams: 1 Oliveira, Hanna Lara da Cruz Dinéas de [Dissertação, 2013].pdf: 1766254 bytes, checksum: 30cf8e6b52cfd32b623ecf94d3cee01b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-03T17:25:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira, Hanna Lara da Cruz Dinéas de [Dissertação, 2013].pdf: 1766254 bytes, checksum: 30cf8e6b52cfd32b623ecf94d3cee01b (MD5) / Os estafilococos coagulase negativos emergem como importantes patógenos nosocomiais, frequentemente isolados em bacteremias humanas, fato intimamente relacionado com o aumento do uso de dispositivos médicos ao longo dos últimos anos. Sua capacidade de aderir a superfícies poliméricas e produzir biofilmes constitui o principal fator de virulência associado a estes dispositivos. A fim de minimizar esta possibilidade, antissépticos são largamente utilizados para desinfecção de pele e mucosas na rotina hospitalar, no entanto, tem-se observado uma diminuição da susceptibilidade bacteriana a estes agentes. A diminuição da susceptibilidade dos microrganismos a antissépticos, associados a sua capacidade de formar biofilmes tem elevado a morbidade, mortalidade, período de internação e os custos relativos ao cuidado com a saúde. No estudo aqui apresentado, foram analisadas 81 cepas de Staphylococcus epidermidis resistentes a meticilina (MRSE) e 55 cepas de Staphylococcus haemolyticus resistentes a meticilina (MRSHa), todas resistentes a meticilina, isoladas de pacientes internados em hospital Universitário localizado na cidade de Niterói-RJ nos anos de 2008 e 2010. A determinação do perfil de susceptibilidade aos biocidas triclosan, clorexidina e cloreto de benzalcônio mostrou que frente ao triclosan, as amostras apresentaram as menores taxas de susceptibilidade bacteriana. Papaína não apresentou atividade antibacteriana. Entretanto, foi capaz de reduzir expressivamente a formação de biofilme (p<0,06) em ambas as espécies, mostrando-se a mais eficiente entre os produtos analisados. Foi capaz também de desintegrar biofilmes maduros formados por Staphylococcus epidermidis. Os biocidas não levaram à redução significante de biofilmes, exceto a clorexidina, que foi capaz de reduzir a formação do biofilme pelas MRSE. Foi possível verificar que cepas de MRSHa tratadas com cloreto de benzalcônio têm 40% menos probabilidade de formar biofilme se comparada às tratadas com triclosan e clorexidina. A análise estatística nos mostrou que a expressão do gene qacA/B influenciou significativamente a formação de biofilme e confirmou a relação existente entre os valores de concentração mínima inibitória (CMI) e a formação de biofilme (p< 0,001) / Coagulase negative staphylococci have emerged as important nosocomial pathogens, commonly isolated in human bacteremia, a fact closely related to the increased use of medical devices over the last few years. Its ability to adhere to polymer surfaces and produce biofilms is the main virulence factor associated with these devices. To minimize this possibility, antiseptics are widely used for disinfection of skin and mucosa in routine hospital, however, there has been an increase in bacterial resistance to these agents. Decreased susceptibility of microorganisms to antiseptics, associated with its ability to form biofilms has high morbidity, mortality, length of stay and costs related to health care. In the study presented here, we analyzed 81 strains of methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis (MRSE) and 55 strains of methicillin-resistant Staphylococcus haemolyticus (MRSHa), all meticillin- resistant, isolated from patients hospitalized at University Hospital in the city of Niterói, Rio de Janeiro in 2008 and 2010. The determination of the susceptibility profile of biocides triclosan, chlorhexidine and benzalkonium chloride demonstrated that front of triclosan, the strains have the biggest rates of bacterial susceptibility. Papain showed no antibacterial activity. However, it was able to significantly reduce biofilm formation (p <0.06) in both species, being the most efficient among the analyzed products. It was also able to degrade established biofilms formed by Staphylococcus epidermidis. Biocides showed no significant reduction of biofilms, except chlorhexidine, which was able to reduce biofilm formation by MRSE. We noticed that strains MRSHa treated with benzalkonium chloride are 40% less likely to form biofilm compared to those treated with chlorhexidine and triclosan. Statistical analysis showed that the gene expression qacA/B was significantly influential to biofilm formation and confirmed positive relationship between the values of MIC and biofilm formation (p <0.001)

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:17:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9491_1.pdf: 3715021 bytes, checksum: 5467ecffe19f4234a02c9fd42e40d60a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Ao longo dos séculos, técnicas de preservação de alimentos foram se aprimorando com o aumento do desenvolvimento científico. Estes métodos incluem a salga, o congelamento, a secagem, o enlatamento, a pasteurização e a irradiação que estão sendo empregados e bem aceitos em alguns países, visando tornar os alimentos os mais estáveis possíveis por mais tempo, e evitar as doenças de origem alimentar que são um dos principais problemas de saúde em todo o mundo. Em todas as fases do processamento tecnológico do Jerked beef a carne é exposta a contaminações. Objetivou-se verificar quais das doses de radiação entre 2, 4 e 6kGy seria eficaz na descontaminação do produto comercializado em uma grande rede de supermercados do Recife. Foram adquiridas amostras de Jerked beef sendo estas divididas em três lotes. Em condições estéreis, a carne foi cortada e pesada. Sub-amostras foram destinadas ao grupo controle e a irradiação com fonte de cobalto-60. As sub-amostras foram adicionadas em um Erlenmeyer com água destilada esterilizada e foram agitadas gerando uma água de lavagem, e outras ficaram em repouso havendo a formação de uma água de dessalga. Alíquotas dessas águas foram semeadas em placas e as mesmas incubadas para contagem da população microbiana. Usando a metodologia da água de lavagem não houve observação de crescimento em nenhuma placa. Para a água de dessalga os resultados foram: Para o primeiro lote o grupo controle apresentou contagens variando de 5,0x105 -9,6x108 UFC/g e as amostras irradiadas apresentaram crescimento variando de 1,7x105-3,3x105 UFC/g para a dose de 2kGy, 0 a 6x104 UFC/g para a dose de 4kGy e não apresentou crescimento para a dose de 6kGy. Do lote dois obtiveram-se as seguintes contagens 2,3x109- 4,1x109 UFC/g para o controle, 6,6x107- 1,1x109 UFC/g; 1,8x105-1,7x106 UFC/g; 0 a 1,3x105 UFC/g para as doses de 2kGy, 4 kGy, 6 kGy respectivamente. O lote três apresentou um maior índice de contaminação, apresentando contagens no grupo controle variando de 5x1011-5x1016UFC/g , na dose de 2kGy a variação foi de 8,1x109-1,1x1012 UFC/g , para a dose de 4kGy foram 2,0x106-9,0x1010 UFC/g e a dose de 6kGy apresentou a variação de 5,5104 a 1,3x105. As provas de susceptibilidade a antibióticos foram realizadas segundo o CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute). Os resultados revelaram contaminação em todos os lotes de jerked beef analisados mesmo irradiados, sendo as doses de 4kGy e 6kGy as que se apresentaram mais eficazes na redução microbiana

Bacterial contamination of platelet concentrates (PCs) poses the major transfusion-associated infectious risk. Coagulase negative staphylococci (CoNS), the predominant platelet contaminants, are recognized as one of the leading causes of hospital-acquired infections due to their ability to form biofilms (surface-attached aggregates). In this study, 29 CoNS strains were characterized for their growth and biofilm formation abilities in media and PCs. Twenty-five strains were aerobic including Staphylococcus epidermidis, S. capitis, and S. chromogenes, while four were identified as the anaerobe S. saccharolyticus. Biofilm-associated icaA and icaD genes were amplified from eight strains. Interestingly, only six of those strains were biofilm-positive. Sequencing of S. capitis icaD revealed no mutations that could explain differences in biofilm phenotypes. Growth of CoNS in PCs varied significantly between strains. This study provides preliminary evidence that slow-growing biofilm-positive S. epidermidis are more likely to be missed during platelet culture, highlighting the need for improved screening methods.

Simplex optimization was used to maximize the production of Maillard reaction compounds which inhibit the growth of Staphylococcus aureus. The simultaneous factor shift and mapping procedures of the optimization program enabled the optimization to be completed with a minimum number of experiments. The reaction conditions likely to have the greatest effect on the production of these compounds were chosen as: (1) molar ratio of amino acid to sugar, (2) total concentration of reactants, (3) pH, (4) temperature and (5) time of heating. Inhibition of the test organism was quantified as the radius of no growth, by the concurrent use of the variable and uniform cams of the spiral plating system. Twenty nine experiments were required to reach the optimum of model system A, glucose + lysine, while model system B, xylose + lysine, was optimized after 28 experiments. The minimum inhibitory concentration (MIC) of the optimum glucose + lysine reaction mixture was 5.78 x 10⁻⁴ μg/cfu, while that of the xylose + lysine reaction mixture was 8.94 x 10⁻⁴ μg/cfu. Multiple regression analysis of the data indicated that pH and total concentration were the two most significant factors in determining the inhibitory compounds produced by the glucose + lysine mixture. Molar ratio, temperature and time were not significant for this combination of reactants. The most significant factors for the xylose + lysine combination were pH and temperature, whereas molar ratio and total concentration were not significant. Calculation of the contributing proportion (Pⅰ) of each variable to the response, supported the results of the regression analysis. Separation of the optimized Maillard reaction mixtures according to molecular weight, using ultrafiltration, failed to provide any information about the molecular weight range of the inhibitory compounds. / Land and Food Systems, Faculty of / Graduate

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-10T19:40:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Hugo Marcelo Nascimento Carvalho.pdf: 2938358 bytes, checksum: dc9e907fcd01cb44e73cb41b3d2676d2 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-21T20:49:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Hugo Marcelo Nascimento Carvalho.pdf: 2938358 bytes, checksum: dc9e907fcd01cb44e73cb41b3d2676d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-21T20:49:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Hugo Marcelo Nascimento Carvalho.pdf: 2938358 bytes, checksum: dc9e907fcd01cb44e73cb41b3d2676d2 (MD5) Previous issue date: 2012-09-28 / O surgimento de cepas bacterianas cada vez mais resistentes vem ganhando força através do uso indiscriminado de antimicrobianos para a prevenção ou tratamento de infecções. Diversas drogas já disponíveis no mercado não são suficientemente eficazes contra os microrganismos resistentes, aumentando a necessidade do estudo e desenvolvimento de novos fármacos para atuação na terapeutica. Fármacos semi-sintéticos e sintéticos já são a maioria dos utilizados, estando em torno de 75% dos disponíveis para terapeutica. Nosso objetivo com esse trabalho foi explorar a atividade biológica dessas estruturas, sintetizando através de uma hibridação molecular, derivados de hidrazona, que na literatura há vários estudos que mostram queesses compostos possuem diversas atividades biológicas como antividade antimicrobiana, antichagásica, antiepileptica dentre outras. Através de metodologias já dominadas em nosso laboratorio, obtivemos o cicloaduto isoxazolínico em quantidade multi-gramas, conforme descrito em trabalhos anteriores, a partir do enecarbamatoendocíclico N(carbobenziloxicarbonil)-2-óxido de pirrolina e carboetoxiformonitrila (CEFNO), através de uma reação de cicloadição 1,3-dipolar. Após reação de uma hidrogenólise, para remoção do grupamento protetor, fizemos uma reação de N-benzoilação, utilizando o cloreto 4-clorobenzoila e o cloreto 4-fluorobenzoila. Em seguida, Através de uma condensação com o 5-nitro-2-tiofeno benzaldeido, 2-tiofeno benzaldeido e 2-Piridina benzaldeido foram formadas as 06 novas hidrazonas isoxazolínicas. Esses compostos foram avaliados preliminarmente quanto a sua atividade antimicrobiana através do método de difusão em disco contra os microrganismos de Staphylococcus aureus, Enterococus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Candida albicans, Candida krusei, Micrococcus luteus, e Bacillus subtilis, apresentando atividade apenas para staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e micrococcus luteus com halos inferiores a 15mm, não sendo considerados bons agentes antibacterianos contra esses microorganismos, ficando a perspectiva da avaliação biológica quanto as outras atividades relatadas. / The emergence of bacterial strains resistant increasingly been gaining strength through the indiscriminate use of antibiotics for prevention or treatment of infections. Several drugs already on the market are not sufficiently effective against resistant microorganisms, increasing the need for the study and development of new drugs for the therapeutic action. Drugs semi-synthetic and synthetic already are most used, with about 75% of available for therapy. Our intention with this study was to explore the biological activity of these structures, synthesizing through a molecular hybridization, hydrazones derivatives, in the literature there are several studies that show that compounds have diverse biological activities such as antimicrobial activity, Chagas, among other antiepileptic. Through methodologies have dominated In our laboratory, we obtained the isoxazoline cycloaduct in multi-gram quantity, as described in previous works, from enecarbamate N-(carbobenziloxicarbonile)-2-pyrroline oxide and carboetoxiformonitrile through a reaction of 1,3-dipolar cycloaddition. After a hydrogenolysis reaction, to remove the grouping protector, made a reaction of N-benzoylation, using the 4-clorobenzoila chloride and chloride 4-fluorobenzoil. Then through condensation with a 5-nitro-2-thiophene benzaldeide, 2-thiophene benzaldeide and 2-pyridine benzaldeide were formed six new hydrazones isoxazolines. These compounds were preliminarily evaluated as to their antimicrobial activity by disc diffusion method against the microorganisms Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Candida albicans, Candida krusei, Micrococcus luteus, and Bacillus subtilis, showing activity only for staphylococcus aureus, micrococcus luteus and Bacillus subtilis halos with less than 15mm, not being considered good antibacterial agents against these microorganisms, leaving the prospect of biological evaluation as other activities reported

Staphylococcus aureus, pathogène opportuniste de l’Homme, est un réel problème de santé publique du fait de l’émergence de souches virulentes résistantes à différentes classes d’antibiotiques. La compréhension des mécanismes moléculaires impliqués dans sa virulence est indispensable pour la mise au point de nouveaux agents anti-infectieux. Il est apparu récemment que certains ARN régulateurs (ARNrég) de S. aureus sont impliqués dans l’expression de facteurs de virulence. Mon projet de thèse a porté sur l’étude d’un ARNrég de fonction inconnue, SprB. Des expériences préliminaires à ce travail ont montré une variation du niveau d’expression de la protéine SasG en absence de l’ARN SprB. Dans une première partie de ce travail, j’ai cherché à confirmer expérimentalement le lien entre l’ARN SprB et la protéine SasG. Les niveaux d’expression de la protéine SasG ont été observés dans différents contextes génétiques mutants pour SprB et/ou différents facteurs de régulation de S. aureus. L’ensemble des résultats obtenus suggère le rôle indirect de SprB sur l’expression de SasG. SprB semble impliqué dans un réseau global de régulations qui gouverne l’expression de la protéine SasG. La deuxième partie de cette étude qui porte sur l’identification des cibles directes de SprB a été appréhendée à l’aide d’outils prédictifs. Parmi les cibles potentielles révélées par ce criblage in silico, notre intérêt s’est porté sur la sous-unité Opp4F du transporteur ABC Opp4. J’ai montré que l’ARN SprB empêche, in vitro, la fixation du ribosome sur l’ARN Opp4F et diminuerait potentiellement la synthèse de la sous unité Opp4F. Cela pourrait avoir un impact dans la régulation du métabolisme énergétique de S. aureus. L’ensemble de ces résultats suggère une implication de l’ARN SprB dans plusieurs processus physiologiques de S. aureus aussi cruciaux que la régulation de l’expression de gènes de virulence et le métabolisme énergétique de la bactérie. / Staphylococcus aureus is a major human opportunist pathogen causing a wide spectrum of nosocomial and community-associated infections. The emergence of strains resistant to most currently available antibiotics presents a serious public health threat. Therefore, there is an urgent need for new treatment. The development of such arsenal requires the elucidation of the molecular mechanisms involved in bacterial virulence. sRNA, represent a new and promising field of investigation, because of its implication in main cellular processes such as virulence factor regulation. My PhD thesis focused on the study of SprB : a small regulatory RNA (sRNA) of unknown function. Preliminary results have shown that the absence of SprB leads to differences in the of SasG protein level. First, I investigate the link between SprB RNA and SasG protein. Therefore, SasG protein levels have been studied in several genetic backgrounds, parental or mutant for SprB and/or global regulation factors. Taken together, our findings suggest an indirect effect of SprB on SasG regulation. In addition, SprB seems to be implicated in global bacterial regulation network which governs SasG protein expression. In the second part of my thesis, we tried to identify direct targets of SprB through in silico screening. Among a list of the potential targets revealed, we focused on Opp4F, sub-unit of the ABC transporter Opp4. We demonstrated, in vitro, that SprB RNA is able to inhibit the binding of the ribosome on Opp4F mRNA, potentially decreasing the synthesis of Opp4F sub-unit. Therefore, Opp4F is not or less produced which could have serious impact on the regulation of energetic metabolism. Altogether, the results obtained highlighted the potential role of SprB in several crucial physiological processes such as regulation of energetic metabolism and regulation of bacterial virulence.

Staphylococcus aureus encodes for a secreted hyaluronidase, hysA. Hyaluronidases are bacterial enzymes that cleave hyaluronic acid (HA) at the β-1,4 glycosidic bond, yielding unsaturated disaccharides. Initially, little was known about the regulation of this enzyme as well as its roles in S. aureus physiology and pathogenesis. The goal of this dissertation was to determine the regulation of hysA, and to determine the biological and physiological roles of this enzyme. Studies presented in Chapter II focus on determining the regulation of hysA and role of hysA in S. aureus pathogenesis. By screening the Nebraska Transposon Mutant Library (NTML) we identified 8 mutations that significantly altered HysA activity. Further analysis revealed that CodY directly represses hysA by binding to the CodY consensus binding sequence upstream of the hysA translational start site. Additionally, we found that a hysA mutant was attenuated in a neutropenic murine pneumonia model of infection and that there was reduced degradation of HA in the lungs of mice infected with the hysA mutant compared to wildtype by immunofluorescence. Studies presented in Chapter III focus on examining if HA can be incorporated into the S. aureus biofilm matrix and if HysA is involved in biofilm dispersal. We show that HA is incorporated into the biofilm matrix both in vitro and in vivo by confocal microscopy and HA ELISA. Additionally, we found that HA can enhance biofilm formation of the hysA mutant as well as other staphylococcal species in vitro. We show that induction of hysA can prevent biofilm formation in the presence of HA and that exogenous addition of purified HysA can disperse established HA containing biofilms. Finally, we found that a hysA mutant has reduced dissemination in an implant-associated infection model. Together these studies support our hypothesis that HA is incorporated into staphylococcal biofilms and that HysA is involved in dispersing S. aureus from the biofilm.

The recent realization that coagulase-negative staphylococci are of medical importance led to a number of studies which attempt to characterize them more adequately. These studies have shown that the coagulase-negative staphylococci represent a “complex” of several species. Kloos and Schleifer, who are credited with the major effort to characterize the group, list (1975b) nine species: S. epidermidis, S. saprophyticus, S. capitis, S. cohnii, S. haemolyticus, S. hominis, S. simulans, S. wylosus, and S. warneri. Hajek (1976) added a new one, S. intermedius, isolated from animals; Kloos et al. (1976b) described S. sciuri, and Deviese et al. (1978) transferred Micrococcus hyicus to the genus Staphylococcus, for a total of 12 species. Kloos and Schleifer (1975b) introduced a simplified scheme in the form of a flow chart (Figure 1) for routine identification of nine of these staphylococci. In OCtober of 1980 I began a study of this group with the purpose of conducting biochemical tests on clinical isolates from Stockton, California and, hopefully, expanding and updating the system that was introduced by Kloos and Schleifer. My system, henceforth referred to as the L-K Scheme, utilizes biochemical tests already available in clinical laboratories. Its purpose was to determine if the isolates used in this study can be placed in homogeneous groups.