RABELO, E. M. Avaliação do potencial antimicrobiano do extrato etanólico e frações obtidas de guettarda sericea müll. arg.(rubiaceae). 2013. 83 f. Dissertação ( Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2013. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-28T15:44:12Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_emrabelo.pdf: 10038342 bytes, checksum: 035c474be4424e0dddff689c31e484ba (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T12:17:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_emrabelo.pdf: 10038342 bytes, checksum: 035c474be4424e0dddff689c31e484ba (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T12:17:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_emrabelo.pdf: 10038342 bytes, checksum: 035c474be4424e0dddff689c31e484ba (MD5) Previous issue date: 2013 / The genus Guettarda (Rubiaceae) comprises plants widely distributed in tropical areas. Regarding the Guettarda sericea species, the literature shows that there is a lack of botanical and phytochemicals studies. Thus, the present study aimed to evaluate the antibacterial effect of ethanol extract of leaves of G. sericea (EEFGS) and its fractions on the growth of Streptococcus oralis ATCC 10557 and S. salivarius ATCC 7073 in both the planktonic and biofilms states. Different methods were employed to verify the antimicrobial potential. Among these are the determination of minimum inhibitory concentration (MIC) determination of the death curve and evaluation of minimum bactericidal concentration (MBC). Furthermore, quantification of biomass and the number of viable cells of the biofilm were performed, respectively, by staining with crystal violet and counting colony forming units (CFU). The negative and positive controls used in all assays were respectively 4% DMSO and chlorhexidine gluconate with concentration adjusted according to the data of the MIC of each microorganism. To determine the toxicity of EEFGS, it was used the toxicity test on Artemia nauplii. The data showed that the extract and subfractions 13 to 17 of the chloroform fraction show a remarkable antimicrobial effect, able to inhibit the growth of planktonic and development of biofilms of S. oralis strain until the concentration of 62.5 μg.mL-1. With respect to S. salivarius, only subfraction 12 interfered on bacterial growth. Regarding the toxicity, it was observed that death of Artemia nauplii occurred at higher concentrations than those that exhibited antibacterial effect. From these results it can be concluded that EEFGS and subfractions 13-17 can be used as agents for the control of biofilm formation of S. oralis. In addition, complementary methodologies that seek purification of the active compounds and their cytotoxic effects on eukaryotic cells need to be held, aiming its use as an herbal agent. / O gênero Guettarda (Rubiaceae) compreende plantas extensamente distribuídas em áreas tropicais. Com relação à espécie Guettarda sericea, a literatura demonstra que existe uma ampla carência acerca de estudos botânicos e fitoquímicos. Assim, o presente trabalho buscou avaliar o efeito antibacteriano do extrato etanólico das folhas de G. sericea (EEFGS) e suas frações sobre o crescimento de Streptococcus oralis ATCC 10557 e S. salivarius ATCC 7073, nas formas planctônicas e de biofilmes. Diferentes metodologias foram empregadas para a verificação do potencial antimicrobiano. Dentre estas estão a determinação da concentração inibitória mínima (MIC), a determinação da curva de morte e a avaliação da concentração bactericida mínima (MBC). Além disso, a quantificação da biomassa e do número de células viáveis do biofilme foi realizada, respectivamente, através da coloração pelo cristal violeta e contagem de unidades formadoras de colônia (UFC). Os controles, negativo e positivo utilizados em todos os ensaios foram, respectivamente, DMSO 4% e Gluconato de Clorexidina com concentração ajustada de acordo com os dados da CIM de cada micro-organismo. Para a determinação da toxicidade do EEFGS utilizou-se o ensaio de toxicidade sobre náuplios de Artemia. Os dados mostraram que o extrato e as subfrações 13 a 17 da fração clorofórmio apresentaram um marcante efeito antimicrobiano, sendo capazes de inibir o crescimento planctônico, bem como o desenvolvimento de biofilmes da cepa de S. oralis até a concentração de 62,5 µg.mL-1. Com relação a S. salivarius, apenas a subfração 12 interferiu sobre o crescimento bacteriano. No tocante à toxicidade, foi observado que a morte dos náuplios de Artemia ocorreu em concentrações mais elevadas do que aquelas que apresentaram efeito antibacteriano. A partir de tais resultados pode-se concluir que EEFGS e as subfrações 13 a 17 podem ser utilizados como insumos para o controle da formação de biofilmes de S. oralis. Em adição, metodologias complementares que busquem a purificação dos compostos ativos e seus efeitos citotóxicos sobre células eucarióticas necessitam ser realizadas, visando sua utilização como um agente fitoterápico.

VERAS, I. N. Análise do perfil morfológico de candida tropicalis durante a formação do biofilme sob influência de metabólitos extracelulares de bactérias do gênero Streptococcus. 2014. 77 f. Dissertação ( Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2014. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T14:58:00Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_insveras.pdf: 2042523 bytes, checksum: adf18ca2b4b9df61f42a9d6cff04ce95 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T14:58:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_insveras.pdf: 2042523 bytes, checksum: adf18ca2b4b9df61f42a9d6cff04ce95 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T14:58:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_insveras.pdf: 2042523 bytes, checksum: adf18ca2b4b9df61f42a9d6cff04ce95 (MD5) Previous issue date: 2014 / Bacteria and fungi are found together in a multitude of environments, and particularly in the form of biofilm adherent species which interact through various signaling mechanisms. In the oral cavity, Candida species coexist with numerous bacterial species, and evidence suggests that bacteria can modulate biofilm formation as well as induce the formation of hyphae. Thus, to characterize such interactions are essential to the understanding of pathogenesis of diseases and possibly the discovery of new therapeutic strategies. In this sense, the main objective of this study was to evaluate, in vitro, the mechanisms involved in the interaction between bacteria Streptococcus oralis, Streptococcus sanguinis, and Streptococcus parasanguinis yeast Candida tropicalis. In the study the effect of extracellular metabolites present in the supernatant of C. tropicalis (SCT) on the pre-formed biofilm (6H) S. oralis, S. sanguinis and S. parasanguinis was analyzed. The effect of extracellular metabolites of S. oralis (SSO), S. sanguinis (SSS) and S. parasanguinis (SSP) on planktonic growth and biofilm / Bactérias e fungos são encontrados juntos em uma infinidade de ambientes e, particularmente, na forma de biofilme, onde as espécies aderentes interagem através de diversos mecanismos de sinalização. Na cavidade oral, espécies de Candida coexistem com inúmeras espécies bacterianas, e evidências sugerem que bactérias podem modular a formação de biofilme, bem como induzir a formação de hifas e pseudo-hifas. Assim, caracterizar tais interações é essencial para o entendimento da patogênese das doenças e, possivelmente, a descoberta de novas estratégias terapêuticas. Nesse sentido, o objetivo principal deste trabalho foi avaliar, in vitro, os mecanismos envolvidos na interação entre as bactérias Streptococcus oralis, Streptococcus sanguinis, Streptococcus parasanguinis e a levedura Candida tropicalis. No estudo foi analisado o efeito dos metabólitos extracelulares presentes no sobrenadante de C. tropicalis (SCT) sobre o biofilme pré-formado (6h) de S. oralis, S. sanguinis e S. parasanguinis. Também foi avaliado o efeito dos metabólitos extracelulares de S. oralis (SSO), S. sanguinis (SSS) e S. parasanguinis (SSP) sobre o crescimento planctônico, formação de biofilme e capacidade de filamentação de C. tropicalis, utilizando apenas o sobrenadante da cultura de cada um dos estreptococos em diferentes concentrações (100, 50 e 25%). Além disso, foi analisado o efeito dos metabólitos extracelulares dos estreptococos sobre o biofilme pré-formado (6h) de C. tropicalis. Para verificar o efeito dos metabólitos extracelulares foram utilizados dois métodos: o método turbidimétrico que se baseia na leitura da densidade óptica (OD) das suspensões celulares e a coloração cristal violeta (CV) que permite a quantificação indireta da formação de biofilme através da coloração com cristal violeta. Em seguida, foram examinadas as características dos biofilmes, formados por 24 horas, através da análise por microscopia óptica comum. Os resultados referentes ao biofilme foram submetidos ao ANOVA com pós-teste Bonferroni, com diferença estatística de p<0,01. Nossos resultados sugerem que substâncias solúveis produzidas por S. oralis, S. sanguinis e S. parasanguinis induzem a formação de hifas de C. tropicalis sem interferir no crescimento planctônico. Além de diminuir drasticamente o desenvolvimento do biofilme dessa levedura quando em contato com SSS e SSP. Tal fato reforça a ideia de que existe grande heterogeneidade dentro de biofilmes polimicrobianos, especialmente entre leveduras e bactérias. E que o resultado dessa interação depende das condições as quais estes micro-organismos serão submetidos.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O gÃnero Guettarda (Rubiaceae) compreende plantas extensamente distribuÃdas em Ãreas tropicais. Com relaÃÃo à espÃcie Guettarda sericea, a literatura demonstra que existe uma ampla carÃncia acerca de estudos botÃnicos e fitoquÃmicos. Assim, o presente trabalho buscou avaliar o efeito antibacteriano do extrato etanÃlico das folhas de G. sericea (EEFGS) e suas fraÃÃes sobre o crescimento de Streptococcus oralis ATCC 10557 e S. salivarius ATCC 7073, nas formas planctÃnicas e de biofilmes. Diferentes metodologias foram empregadas para a verificaÃÃo do potencial antimicrobiano. Dentre estas estÃo a determinaÃÃo da concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (MIC), a determinaÃÃo da curva de morte e a avaliaÃÃo da concentraÃÃo bactericida mÃnima (MBC). AlÃm disso, a quantificaÃÃo da biomassa e do nÃmero de cÃlulas viÃveis do biofilme foi realizada, respectivamente, atravÃs da coloraÃÃo pelo cristal violeta e contagem de unidades formadoras de colÃnia (UFC). Os controles, negativo e positivo utilizados em todos os ensaios foram, respectivamente, DMSO 4% e Gluconato de Clorexidina com concentraÃÃo ajustada de acordo com os dados da CIM de cada micro-organismo. Para a determinaÃÃo da toxicidade do EEFGS utilizou-se o ensaio de toxicidade sobre nÃuplios de Artemia. Os dados mostraram que o extrato e as subfraÃÃes 13 a 17 da fraÃÃo clorofÃrmio apresentaram um marcante efeito antimicrobiano, sendo capazes de inibir o crescimento planctÃnico, bem como o desenvolvimento de biofilmes da cepa de S. oralis atà a concentraÃÃo de 62,5 Âg.mL-1. Com relaÃÃo a S. salivarius, apenas a subfraÃÃo 12 interferiu sobre o crescimento bacteriano. No tocante à toxicidade, foi observado que a morte dos nÃuplios de Artemia ocorreu em concentraÃÃes mais elevadas do que aquelas que apresentaram efeito antibacteriano. A partir de tais resultados pode-se concluir que EEFGS e as subfraÃÃes 13 a 17 podem ser utilizados como insumos para o controle da formaÃÃo de biofilmes de S. oralis. Em adiÃÃo, metodologias complementares que busquem a purificaÃÃo dos compostos ativos e seus efeitos citotÃxicos sobre cÃlulas eucariÃticas necessitam ser realizadas, visando sua utilizaÃÃo como um agente fitoterÃpico. / The genus Guettarda (Rubiaceae) comprises plants widely distributed in tropical areas. Regarding the Guettarda sericea species, the literature shows that there is a lack of botanical and phytochemicals studies. Thus, the present study aimed to evaluate the antibacterial effect of ethanol extract of leaves of G. sericea (EEFGS) and its fractions on the growth of Streptococcus oralis ATCC 10557 and S. salivarius ATCC 7073 in both the planktonic and biofilms states. Different methods were employed to verify the antimicrobial potential. Among these are the determination of minimum inhibitory concentration (MIC) determination of the death curve and evaluation of minimum bactericidal concentration (MBC). Furthermore, quantification of biomass and the number of viable cells of the biofilm were performed, respectively, by staining with crystal violet and counting colony forming units (CFU). The negative and positive controls used in all assays were respectively 4% DMSO and chlorhexidine gluconate with concentration adjusted according to the data of the MIC of each microorganism. To determine the toxicity of EEFGS, it was used the toxicity test on Artemia nauplii. The data showed that the extract and subfractions 13 to 17 of the chloroform fraction show a remarkable antimicrobial effect, able to inhibit the growth of planktonic and development of biofilms of S. oralis strain until the concentration of 62.5 &#956;g.mL-1. With respect to S. salivarius, only subfraction 12 interfered on bacterial growth. Regarding the toxicity, it was observed that death of Artemia nauplii occurred at higher concentrations than those that exhibited antibacterial effect. From these results it can be concluded that EEFGS and subfractions 13-17 can be used as agents for the control of biofilm formation of S. oralis. In addition, complementary methodologies that seek purification of the active compounds and their cytotoxic effects on eukaryotic cells need to be held, aiming its use as an herbal agent.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / BactÃrias e fungos sÃo encontrados juntos em uma infinidade de ambientes e, particularmente, na forma de biofilme, onde as espÃcies aderentes interagem atravÃs de diversos mecanismos de sinalizaÃÃo. Na cavidade oral, espÃcies de Candida coexistem com inÃmeras espÃcies bacterianas, e evidÃncias sugerem que bactÃrias podem modular a formaÃÃo de biofilme, bem como induzir a formaÃÃo de hifas e pseudo-hifas. Assim, caracterizar tais interaÃÃes à essencial para o entendimento da patogÃnese das doenÃas e, possivelmente, a descoberta de novas estratÃgias terapÃuticas. Nesse sentido, o objetivo principal deste trabalho foi avaliar, in vitro, os mecanismos envolvidos na interaÃÃo entre as bactÃrias Streptococcus oralis, Streptococcus sanguinis, Streptococcus parasanguinis e a levedura Candida tropicalis. No estudo foi analisado o efeito dos metabÃlitos extracelulares presentes no sobrenadante de C. tropicalis (SCT) sobre o biofilme prÃ-formado (6h) de S. oralis, S. sanguinis e S. parasanguinis. TambÃm foi avaliado o efeito dos metabÃlitos extracelulares de S. oralis (SSO), S. sanguinis (SSS) e S. parasanguinis (SSP) sobre o crescimento planctÃnico, formaÃÃo de biofilme e capacidade de filamentaÃÃo de C. tropicalis, utilizando apenas o sobrenadante da cultura de cada um dos estreptococos em diferentes concentraÃÃes (100, 50 e 25%). AlÃm disso, foi analisado o efeito dos metabÃlitos extracelulares dos estreptococos sobre o biofilme prÃ-formado (6h) de C. tropicalis. Para verificar o efeito dos metabÃlitos extracelulares foram utilizados dois mÃtodos: o mÃtodo turbidimÃtrico que se baseia na leitura da densidade Ãptica (OD) das suspensÃes celulares e a coloraÃÃo cristal violeta (CV) que permite a quantificaÃÃo indireta da formaÃÃo de biofilme atravÃs da coloraÃÃo com cristal violeta. Em seguida, foram examinadas as caracterÃsticas dos biofilmes, formados por 24 horas, atravÃs da anÃlise por microscopia Ãptica comum. Os resultados referentes ao biofilme foram submetidos ao ANOVA com pÃs-teste Bonferroni, com diferenÃa estatÃstica de p<0,01. Nossos resultados sugerem que substÃncias solÃveis produzidas por S. oralis, S. sanguinis e S. parasanguinis induzem a formaÃÃo de hifas de C. tropicalis sem interferir no crescimento planctÃnico. AlÃm de diminuir drasticamente o desenvolvimento do biofilme dessa levedura quando em contato com SSS e SSP. Tal fato reforÃa a ideia de que existe grande heterogeneidade dentro de biofilmes polimicrobianos, especialmente entre leveduras e bactÃrias. E que o resultado dessa interaÃÃo depende das condiÃÃes as quais estes micro-organismos serÃo submetidos. / Bacteria and fungi are found together in a multitude of environments, and particularly in the form of biofilm adherent species which interact through various signaling mechanisms. In the oral cavity, Candida species coexist with numerous bacterial species, and evidence suggests that bacteria can modulate biofilm formation as well as induce the formation of hyphae. Thus, to characterize such interactions are essential to the understanding of pathogenesis of diseases and possibly the discovery of new therapeutic strategies. In this sense, the main objective of this study was to evaluate, in vitro, the mechanisms involved in the interaction between bacteria Streptococcus oralis, Streptococcus sanguinis, and Streptococcus parasanguinis yeast Candida tropicalis. In the study the effect of extracellular metabolites present in the supernatant of C. tropicalis (SCT) on the pre-formed biofilm (6H) S. oralis, S. sanguinis and S. parasanguinis was analyzed. The effect of extracellular metabolites of S. oralis (SSO), S. sanguinis (SSS) and S. parasanguinis (SSP) on planktonic growth and biofilm formation capacity filamentation of C. tropicalis was also evaluated using only the supernatant culturing each of streptococci in different concentrations (100, 50 and 25%). Furthermore, the effect of extracellular metabolites of streptococci on the pre-formed biofilm (6h) of C. tropicalis were analyzed. To verify the effect of extracellular metabolites two methods were used: The turbidimetric method based on the reading of the optical density (OD) of cell suspension and coloring crystal violet (CV) which permits indirect quantification of the biofilm formation by staining with crystal violet. Then were examined characteristics of biofilms formed by 24 hours, through the analysis simple optical microscope. The results for the biofilm were subjected to ANOVA with Bonferroni post-test, with a statistical difference of p<0.01.Our results suggest that soluble substances produced by S. oralis, S. sanguinis and S. parasanguinis induce the formation of hyphae of C. tropicalis without interfering with planktonic growth.In addition to dramatically decrease biofilm development of oral yeast when in contact with SSP and SSS. This reinforces the idea that there is great heterogeneity within polymicrobial biofilms, especially between yeasts and bacteria. And the result of this interaction depends on the conditions which these micro-organisms will be subjected.