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Estudo genotóxico e carcinogênico da exposição ao pó de cromo trivalente em Rattus norvegicus / Genotoxic and carcinogenic study of the exposure of Rattus norvegicus to the trivalent chromium powderLeal, Samira Rêgo Martins de Deus 22 August 2017 (has links)
LEAL, S. R. M. D. Estudo genotóxico e carcinogênico da exposição ao pó de cromo trivalente em Rattus norvegicus. 2017. 106 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Farmacologia Pós-Graduação (posgfarmacologia@gmail.com) on 2017-11-21T12:41:30Z
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Previous issue date: 2017-08-22 / Chromium-like metals are naturally occurring elements and in view of their multiple industrial, domestic, agricultural, medical and technological applications have led to their widespread distribution, raising concerns about their potential effects on human health and environment. OBJECTIVE: To evaluate the possible genotoxic and carcinogenic effects of exposure of male Rattus norvegicus to atmospheric trivalent chromium powder. METHODS: Male Rattus norvegicus were divided into acute exposure groups (250 and 500 μg/m3 for 8h, n=5/group) and subchronic (500 μg/m3, 1h30min/day for 45 days, n=8/group) to atmospheric trivalent chromium powder. As negative control group, animals were treated with dH2O 10 mL/kg (acute exposure) and exposed to filtered air (subchronic exposure); and as a positive, animals treated with cyclophosphamide 50 mg/kg, i.p. (acute exposure). At the end of the acute treatment, the comet assay was performed in peripheral blood and tests of micronuclei and chromosomal aberrations in bone marrow. At the end of the subchronic exposure period, histopathological analyzes of the pulmonary and hepatic tissues were performed. RESULTS: Acute exposure to trivalent chromium powder (250 and 500 μg/m3) induced (p<0.05) genotoxic damage to rat lymphocyte DNA by analysis of % of DNA in the tail, tail length and TailMoment. Mutagenic effects were also evidenced by the elevation of the micronucleus frequency in polychromatic erythrocytes, only for the group exposed to 500 μg/m3, compared to the negative control. In addition, acute treatment (500 μg/m3) induced a prominent increase in the number of chromosomal aberrations, especially dicentric chromosomes, chromosomal rings and chromosome fragments, compared to the non-exposed group. Histopathological analyzes of the subchronic exposed group revealed in the lung tissue metaplasia and epithelial desquamation in the bronchi and alveoli, accompanied by a focus of inflammatory activity in the alveoli and formation of granulomas. In hepatic tissue, mild or moderate hepatocyte lesions were observed, showing leukocyte infiltration, hydropic degeneration and/or necrosis and apoptotic hepatocytes. CONCLUSION: The data from the present study prove that exposure to atmospheric trivalent chromium powder may induce genotoxic events to cellular DNA, which in turn provoke genomic instability, which are determinant for the carcinogenesis processes. / Os metais, a exemplo do cromo, são elementos que ocorrem naturalmente e em face de suas múltiplas aplicações industriais, domésticas, agrícolas, médicas e tecnológicas levaram à sua ampla utilização, suscitando preocupações quanto aos seus potenciais efeitos na saúde humana e no meio ambiente. OBJETIVO: Avaliar os possíveis efeitos genotóxicos e carcinogênicos da exposição de Rattus norvegicus machos ao pó de cromo trivalente atmosférico. METODOLOGIA: Rattus norvegicus machos foram distribuidos em grupos de exposição aguda (250 e 500 µg/m3 por 8h, n=5/grupo) e subcrônica (500 µg/m3, 1h30min/dia durante 45 dias, n=8/grupo) ao pó de cromo trivalente atmosférico. Compuseram o grupo controle negativo, animais tratados com água destilada (exposição aguda) e expostos ao ar filtrado (exposição subcrônica); e como positivo, animais tratados com ciclofosfamida 50 mg/kg, i.p (exposição aguda). Ao final do tratamento agudo foram realizados o ensaio cometa em sangue periférico e testes de micronúcleos e aberrações cromossômicas em medula óssea. Ao final do período de exposição subcrônica foram realizadas análises histopatológicas dos tecidos pulmonar e hepático. RESULTADOS: A exposição aguda ao pó de cromo trivalente (250 e 500 µg/m3) induziu (p<0,05) danos genotóxicos ao DNA de linfócitos de ratos por meio da análise do % de DNA na cauda, comprimento da cauda e TailMoment. Foram também evidenciados efeitos mutagênicos, pela elevação da frequência de micronúcleos em eritrócitos policromáticos, apenas para o grupo exposto à 500 µg/m3, comparado ao controle negativo. Além disso, o tratamento agudo (500 µg/m3) induziu aumento proeminente do número de aberrações cromossômicas, especialmente do tipo cromossomos dicêntricos, anéis cromossômicos e fragmentos de cromossomos, comparado ao grupo não exposto. As análises histopatológicas do grupo exposto de forma subcrônica revelaram no tecido pulmonar metaplasia e descamação epitelial em brônquios e alvéolos, acompanhados de foco de atividade inflamatória em alvéolos e formação de granulomas. No tecido hepático foram evidenciadas lesões discretas ou moderadas em hepatócitos, que exibiram infiltração de leucócitos, degeneração hidrópica e/ou necrose e hepatócitos apoptóticos. CONCLUSÃO: Os dados do presente estudo demonstraram que a exposição ao pó de cromo trivalente atmosférico induz eventos genotóxicos ao DNA celular, que por sua vez suscitam instabilidade genômica, as quais são determinantes para os processos de carcinogênese.
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Exposição ocupacional e organoclorados em industria quimica de Cubatão - Estado de São Paulo : avaliação do efeito clastogenico pelo teste de MicronucleosAugusto, Lia Giraldo da Silva 27 October 1995 (has links)
Orientador: Carmino Antonio de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T08:14:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1995 / Resumo: Inicialmente se caracterizou a exposição ocupacional ao conjunto de organoclorados produzidos pela Unidade Química de Cubatão-UQC, que funcionou, de 1967 a 1993, produzindo tetracloreto de carbono e percloroetileno, cujo resíduo de fabricação era o hexaclorobenzeno-HCB. Até 1976, a empresa produziu, também, o pentaclorofenol. Em 1992, o Programa de Saúde do Trabalhador de Santos, da Secretaria de Estado da Saúde de São Paulo, avaliou clinicamente vinte e um (21) homens dessa fábrica, dos quais, cinco (5) apresentavam esteatose hepática. A partir desta constatação, iniciou-se, no HEMOCENTRO da Universidade Estadual de Campinas-UNICAMP, uma avaliação sistemática de funcionários e ex-funcionários daquela empresa, dentro do "Projeto Integrado de Estudo da Hemotoxicidade do Benzeno e Pesticidas". O ambiente da UQC foi interditado por medida judicial em junho de 1993. Nesse momento, a empresa contava com cerca de cento e cinqüenta (150) funcionários, diretamente empregados O hexaclorobenzeno, por ser bioacumulado no organismo humano e ter lenta excreção, foi utilizado como indicador biológico de exposição ao conjunto de organoclorados da UQC. Os níveis séricos de HCB foram determinados no Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, Seção de Aditivos e Pesticidas Residuais. Foram comparados os níveis séricos de HCB de cento e setenta e nove (179) funcionários e ex-funcionários, dez (10) empregados de empreiteiras na área da UQC, dezoito (18) familiares de funcionários e trinta e seis (36) empregados de outras empresas do parque industrial de Cubatão: os funcionários e ex-funcionários da UQC mostraram ter níveis séricos de HCB significativamente maior do que os não funcionários. Dos cento e setenta e nove (179) funcionários e ex-funcionários, oitenta e cinco (85) foram avaliados clínica e toxicologicamente. O nível sérico de HCB mostrou, nesses casos, uma correlação positiva significante em relação ao tempo de trabalho na empresa. Embora haja um risco generalizado de exposição aos organoclorados na UQC, os setores de produção mostraram ser os de maior risco. Foi possível definir um gradiente de risco ocupacional e ambiental dentro da empresa. Para avaliar o efeito clastogênico da exposição ocupacional aos organociorados no interior da UQC, foi realizado o teste de micronúcleos, utilizando-se linfócitos periféricos estimulados pela fitoemaglutinina, com citocinese bloqueada pela citocalasina B. O método foi padronizado no laboratório de histocompatabiüdade-HLA, do HEMOCENTRO da UNICAMP. Foram avaliados quarenta e um (41) homens expostos a organociorados da UQC e vinte e oito (28) controles, no período de 1993 a 1994 Observou-se um aumento significativo na freqüência de micronúcleos nos expostos quando comparados com os controles A freqüência de micronúcieos não variou significativamente em função da idade, tempo de trabalho e dos níveis séricos de HCB. O hábito de fumar não interferiu na freqüência de micronúcleos, tanto nos expostos como nos controles O resultado da investigação mostrou que a exposição múltipla ao tetracloreto de carbono, percloroetileno, hexaclorobenzeno e pentaclorofenol, produziu um efeito clastogênico nos linfócitos periféricos de funcionários e ex-funcionários da UQC. A International Agency for Research on Cancer-IARC classifica estes compostos químicos como cancerígenos para animais e como é conhecida a associação entre agente clastogênico e carcinogênese, o resultado obtido na presente investigação é contribuição importante para o conhecimento do efeito clastogênico dessas substâncias, em humanos. Finalmente, foram também avaliadas as queixas clínicas dos indivíduos estudados e constatou que as principais foram; as neuropsicológicas (76,4%), osteomusculares (44,7%), gastrintestinais (42,3%), dermatologicas ( 38,8%), imunológicas (27,0%) e hepáticas (17,6%), confirmando os dados da na literatura especializada, sobre o dano à saúde, prdcados por essas substâncias. / Abstract: A study of occupational exposure to organochiorinated substances was initially carried out at chemical unity of Cubatão (Unidade Química de Cubatão-UQC). This industry operated from 1967 to 1993, producing carbon tetrachloride as well as perchlroethylene It is known that the residual waste of these agents is the hexachlorobenzene. Until 1976, this industry has also produced pentachlorophenol. But only in 1992 the occupational public health service examined 23 workers from UQC which five of them suffered from fat liver. Based on such important evidences, a research involving both workers and ex-workers was made at UNICAMP University. In June of 1993 the UQC area was isolated due to judicial measures. At the time, there have been a number of 150 employers working there It is known that hexachlorobenzene produces a biocumulative effect on the human organism and it also has the characteristic of being slowly excreted. Because such peculiar characteristic this substance was used as biological indicator in the measurement of the multiple environmental exposition at UQC. The serum blood levels of hexachlorobenzene were examinated at 'Adolfo Lutz Institute' in São Paulo. (Residual Pesticides Section). There had been checked and compared the serun blood levels of both 179 workers and ex- workers as well as 10 other workers from a Restaurant Services and Construction Company in the area of UQC and 18 relatives of UQC workers and another 36 workers from different industries of the specific area. The workers and ex-workers presented higher levels of hexachlorobenzene in their blood rather than those who were not employers of the UQC as well as their relatives. From these 179 (workers and ex-workers from UQC), 85 voluntary men taken under medical and toxicological examination. In all these particular cases, it seemed to have a very close connection between serum blood levels of HCB and the lenghth of exposure. Moroever, the manufacturing realms are considered to be of great risk, it was Although all of realms are considered to be of great risk, it was possible to stablish the different of risk both on occupational and environmental exposure at UQC. In order to evaluate the clastogenical effect of occupational exposure to organochlorinated substances at UQC the 'Micronucleus Test' was emplayed Such test consist of a process involving peripherical lymphocytes which are estimulated by phitohemoaglutinine together with blocked cytokinesis bv a cytocalasin B. This process was patherned at 'Laboratório de Histocompatibilidade-HLA' of the UNlCAMP's HEMOCENTRO. From 1993 to 1994, a number of 41 men were exposed to organochlorinated substances and 28 who were not exposed to the same substances were taken under examination. During that period it was observed an increase in the amount of micronucleus on those men who had been exposed to harmful substances. On the other hand, those men who hadn't been exposed, presented small amounts of micronucleus. The frequency of micronucleus didn't changed a lot despite the age, period of work or serum biood levels of hexachlorobenzene,. The habit of smoking didn't interfer with the occurrence of micronucleus in both exposed and not exposed workers. This research showed that a multiple exposure to carbon tetrachloride, perchloroethylene, hexachlorobenzene and pentachlorophenol, produced a clastogenical effect on peripheral lymphocytes of workers at UQC area. These industrial agents are classified by IARC (International Agency for Research on Cancer), as being carcinogenic to animals Il's also important to remember that clatogenicity is surely linked to carcinogenic effect.That is why this research should be considered as a useful contribution to the acknowlegment of the genetoxic effect of these compounds, concerning human beings. As a final step, the author assessed the main clinical complaints of all individuals taken under research were: neuropsychologic (76,4%); muscular-skeletal (44,7%); gastroentestinal (42,3%); dermatologic (38,8%), immunologic (27,0%), hepatic (17,6%) reinforcing the known data from the toxic effect from these substances. / Doutorado / Doutor em Clínica Médica
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Avaliação dos possíveis efeitos citogenéticos, hematológicos e bioquímicos de profissionais ocupacionalmente expostos a quimioterápicos em Teresina – PI / Evaluation of possible effects cytogenetic, hematological and professional biochemists occupationally exposed to chemotherapy in Teresina-PICosta, Ronaldo 14 March 2014 (has links)
COSTA, R. Avaliação dos possíveis efeitos citogenéticos, hematológicos e bioquímicos de profissionais ocupacionalmente expostos a quimioterápicos em Teresina – PI. 2014. 124 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-20T13:42:43Z
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Previous issue date: 2014-03-14 / Chemotherapy are cytotoxic substances used to cause cellular damage that is not only selective for tumor cells, affecting every cell in the body, resulting in adverse effects, including causing occupational hazards. This study evaluated the genotoxic and mutagenic effects in 22 professionals who handle and administer these drugs in oncology services in the city of Teresina (PI) by micronucleus test in buccal mucosa, chromosomal aberrations in peripheral blood lymphocytes and laboratory evaluation. Applied a questionnaire recommended by the International Commission for Protection Against Environmental Mutagens and Carcinogens-ICPEMC, and collected up the biological material for analysis. The control group consisted of 22 administrative workers. The exposed population had an average age of 35.2 years and working time of 6.0 years, smoking time of 1.1 years, alcoholism time of 3.7 years, the use of prescription drugs and 2,7anos all wear PPE. The results showed a significant increase in genotoxicity level in workers who are exposed to a significant micronucleus induction in comparison with the control group (2.27 versus 0.68) and (0.15 versus 0.36); P <0.05. Found up nuclear changes in the group of subjects exposed showing a induction in nuclear abnormalities such as karyorrhexis (689.18 to 484.13) and frequency cariorrex (34.29 against 25.32). The frequency karyorrhexis was significant (P <0.05). For chromosomal aberrations test were analyzed in all metaphases 1171 and the main structural types of AC were observed rings, acentric rings, dicentric chromosomes and tricêntricos, the latter two being the most common. The average structural aberrations Chromosomal in exposed subjects was (2.000 ± 0.4699) and unexposed subjects was (1.178 ± 0.3770). In our study we found that the exposed group showed decreased values of total protein (7.50 ± 1.00) to (7.58 ± 0.70) compared to the control group, as well as albumin (3.74 ± 0, 46) in the exposed group versus (4.30 ± 0.38) in the control group. On hematological analysis it was observed that some workers in the exposed group had mild thrombocytopenia (14%) and lymphocytosis (32%). The parameters of genotoxicity and mutagenicity indicated a genetic instability in exposed workers, before that, it is necessary occupational biomonitoring of these professionals. / Os quimioterápicos são substâncias citotóxicas utilizadas para causar um dano celular que não é seletivo apenas para as células tumorais, afetando todas as células do organismo, resultando em efeitos adversos, ocasionando inclusive riscos ocupacionais. O presente estudo avaliou os efeitos genotóxicos e mutagênicos em 22 profissionais que manipulam e administram essas drogas nos serviços de oncologia do município de Teresina (PI) pelo teste de micronúcleos em mucosa bucal, aberrações cromossômicas em linfócitos de sangue periférico e avaliação laboratorial. Aplicou-se um questionário recomendado pela International Comission for Protection Against Environmental Mutagens and Carcinogens-ICPEMC, e coletou-se o material biológico para as análises. O grupo controle foi formado por 22 trabalhadores administrativos. A população exposta apresentou uma média de idade de 35,2 anos, e tempo de trabalho de 6,0 anos, tempo de tabagismo de 1,1 anos, tempo de etilismo de 3,7 anos, uso de medicamentos prescritos 2,7anos e todos usam EPIs. Os resultados mostraram um aumento significante nos níveis de genotoxicidade em trabalhadores que estão expostos com uma indução significante de Micronúcleo quando comparado com o controle (2,27 contra 0,68) e (0,15 contra 0,36); P <0,05. Constataram-se alterações nucleares no grupo de sujeitos expostos mostrando uma indução nas anormalidades nucleares como cariorrexe (689,18 contra 484,13) e freqüência de cariorrex (34,29 contra 25,32). A frequência de cariorrexe foi significativa, (P<0,05). Para o teste de Aberrações cromossômicas foram analisadas ao todo 1171 metáfases e os principais tipos de AC estruturais observadas foram anéis, anéis acêntricos, cromossomos dicêntricos e tricêntricos, sendo estes dois últimos os mais frequentes. A média de Aberrações Cromossômicas estruturais nos indivíduos expostos foi de (2,000 ± 0,4699) e nos indivíduos não expostos foi de (1,178 ± 0,3770). Em nosso estudo verificamos que o grupo exposto apresentou valores de proteínas totais diminuídos (7,50 ± 1,00) contra (7,58 ± 0,70) em relação ao grupo controle, assim como para albumina (3,74 ± 0,46) no grupo exposto contra (4,30 ± 0,38) do grupo controle. Na análise hematológica pôde-se verificar que no grupo exposto alguns trabalhadores apresentaram discreta plaquetopenia (14%) e linfocitose (32%). Os parâmetros de genotoxicidade e mutagenicidade indicaram uma instabilidade genética nos trabalhadores expostos, diante disso, faz-se necessário o biomonitoramento ocupacional dessesprofissionais.
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Lesão no DNA, alterações cromossômicas e sua correlação com polimorfismos genéticos em pacientes com anemia falciforme tratados com hidroxiuréia / Injury in DNA, chromosome changes and their correlation with genetic polymorphisms in patients with sickle cell disease treated with hydroxyureaRocha, Liliane Brito da Silva January 2014 (has links)
ROCHA, Liliane Brito da Silva. Lesão no DNA, alterações cromossômicas e sua correlação com polimorfismos genéticos em pacientes com anemia falciforme tratados com hidroxiuréia. 2014. 95 f. Tese (Doutorado em Desenvolvimento e Inovação Tecnológica em Medicamentos) – Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-22T15:27:04Z
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Previous issue date: 2014 / Introduction: The sickle cell anemia is the result of a point mutation in the β-globin gene, leading to a substitution of glutamic acid by valine at the sixth position of the polypeptide chain. The Hydroxyurea (HU) is the chemotherapeutic agent considered as the main pharmacologic agent capable of preventing the complications and improving the quality of life of sickle cell anemia (SCA) patients. Although HU has been associated with an increased risk of neoplasia in some patients with myeloproliferative disorders and SCA, the mutagenic and carcinogenic potential of HU has not been established. Objective: Investigate the levels of DNA damage in peripheral blood leukocytes and possible chromosomal abnormalities of bone marrow cells and correlate with the therapy with HU and with the genetic polymorphisms in patients with SCA in Fortaleza, Ceara. Methods: We analyzed 41 patients with SCA. In a second step, we selected 10 patients who had the highest levels of DNA damage. The control group was composed of 26 healthy individuals. All patients were adults of both sexes. The presence of HbS and the analysis of the haplotypes of the beta S gene cluster were done by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP); to measure levels of DNA damage was done by comet assay; and the analysis of possible chromosomal abnormalities was done by G banding cytogenetics. The significance level was 0.05 for all tests, and data were presented as mean ± standard error of the mean (SEM). Results: The damage index (DI) in the group of patients with sickle cell anemia treated with hydroxiurea (SCAHU) was significantly higher than in controls (p < 0,001). Gender and age were not associated DNA damage in controls or SCAHU patients. In the group of SCAHU patients, DI was significantly influenced by length of HU treatment (p=0,0039) and BMI (p= 0.001). Patients with length of HU treatment ≥ 20 months and BMI ≤ 20 kg/m2 had a significantly greater DI than those with length of HU treatment < 20 months and BMI > 20 kg/m2. No influence significant of mean dose of HU was observed on DI (p=0,950), however patients who received a mean HU dose ≥ 20,0 mg/kg/day showed a higher DI than those who received < 20.0 mg/kg/day. Futhermore, an association was observed between DI damage and beta-globin gene haplotypes. DI values for the Bantu/Bantu haplotype was greater when compared to the Benin/Benin haplotype; and the Bantu/Benin haplotype had a less DI than Bantu/Bantu haplotype and greater than Benin/Benin haplotype. Any chromosomal abnormality was identified in 10 patients who showed higher levels of DNA damage. Conclusions: The result shows that the DNA damage in SCA is not only associated to treatment with HU, but in addition to genetic polymorphisms. Furthermore, was found that the presence of genotoxicity and favorable genetic polymorphism do not mean the presence of mutagenicity. / Introdução: A anemia falciforme é o resultado de uma mutação pontual (GAGGTG) no códon do gene da globina β, conduzindo a uma substituição de ácido glutâmico por valina na sexta posição da cadeia polipeptídica. A Hidroxiuréia (HU) é o quimioterápico considerado como principal agente farmacológico capaz de prevenir as complicações e aumentar a qualidade de vida dos pacientes com anemia falciforme (AF). Embora a HU tenha sido associada com um aumento do risco de neoplasias em alguns pacientes com doenças mieloproliferativas e AF, seu potencial mutagênico e carcinogênico ainda não está bem estabelecido. Objetivo: Investigar os níveis de lesão no DNA em leucócitos de sangue periférico e possíveis alterações cromossômicas em células de medula óssea e correlacioná-los com o tratamento com HU e com os polimorfismos genéticos em pacientes com AF em Fortaleza, Ceará. Metodologia: Foram analisadas amostras de 41 pacientes com AF. Em um segundo momento, foram selecionados os 10 pacientes que apresentaram os maiores níveis de lesão no DNA. O grupo controle foi composto por 26 indivíduos saudáveis. Todos os pacientes eram adultos e de ambos os sexos. A presença de HbS e a análise dos haplótipos do cluster do gene da beta-globina foram realizadas por meio da técnica da reação em cadeia mediada pela polimerase para polimorfismo dos comprimentos dos fragmentos de restrição (PCR-RFLP); a determinação dos níveis de lesão no DNA foi realizada pelo teste do cometa; e a análise de possíveis alterações cromossômicas foi realizada pela técnica de citogenética por bandeamento G. O nível de significância foi de 0,05 para todos os testes, e os dados foram apresentados como média ± erro padrão da média (EPM). Resultados: O índice de dano (ID) no grupo dos pacientes com anemia falciforme tratados com hidroxiuréia (AFHU) foi significantemente maior do que no grupo controle (p < 0,001). Sexo e idade não foram associados à lesão no DNA nos controles ou pacientes com AFHU. No grupo de pacientes com AFHU, o ID foi significantemente influenciado pelo tempo de tratamento com HU (p=0,0039) e índice de massa corporal (IMC) (p= 0.001). Pacientes com tempo de tratamento ≥ 20 meses e IMC ≤ 20 kg/m2 tiveram um ID significantemente maior do que aqueles com tempo de tratamento < 20 meses e IMC > 20 kg/m2. Nenhuma diferença significante em relação à dose média diária de HU foi observada sobre o ID (p=0,950), contudo pacientes que receberam uma dose de HU ≥ 20,0 mg/kg/dia mostraram um maior ID do que aqueles que receberam < 20.0 mg/kg/dia. Além disso, foi observada uma associação entre ID e haplótipos do gene da beta-globina. Os valores de ID para o haplótipo Bantu/Bantu foram maiores quando comparados ao haplótipo Benin/Benin; e o haplótipo Bantu/Benin teve um menor ID do que o haplótipo Bantu/Bantu e maior do que o haplótipo Benin/Benin. Nenhuma alteração cromossômica foi identificada nos 10 pacientes que apresentaram os maiores níveis lesão no DNA. Conclusões: O resultado mostra que a lesão no DNA na AF não está somente associada ao tratamento com HU, mas também a polimorfismos genéticos. Além disso, foi encontrado que a presença de genotoxicidade e polimorfismo genético favorável não significam a presença de mutagenicidade.
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Aplicação dos ensaios Salmonella/microssoma e MTT para avaliação da mutagenicidade e citotoxicidade de águas submetidas à cloração e fotocatálise.Souza, Cássia Cabral e January 2014 (has links)
Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental. PROÁGUA, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-10-15T20:21:10Z
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Previous issue date: 2014 / Diversas classes de fármacos têm sido detectadas no ambiente em baixas concentrações (ng/L a μg/L), e mais recentemente em amostras de água tratada. A maioria das ETAs no Brasil opera com tratamento convencional da água sem a implantação de etapas específicas para a remoção de microcontaminantes. Quando fármacos entram em contato com o cloro, como o hipoclorito de sódio, na desinfecção podem ser oxidados e transformados em subprodutos com estrutura química e potencial tóxico algumas vezes desconhecidos. Os Processos Oxidativos Avançados (POA) como a fotocatálise com TiO2/UV-C têm sido pesquisados como alternativa à cloração para aumentar a eficiência de remoção de tais compostos. Neste trabalho foi padronizada e implementada a técnica Salmonella/microssoma (teste de Ames) para avaliação da mutagenicidade e aplicado o ensaio colorimétrico do MTT em células HepG2 para verificar a citotoxicidade dos fármacos captopril (CPT), diclofenaco (DCF) e sulfametoxazol (SMX) e dos seus possíveis subprodutos formados após cloração e fotocatálise com TiO2/UV-C. As concentrações dos fármacos testadas foram 1, 0,75, 0,50, 0,25 e 0,01 mg/L e os tempos de contato de 5 e 30 min para a cloração e 120 min para a fotocatálise. A dose de cloro foi 1mg/L para o DCF e SMX e para o CPT 10 mg/L. A concentração de TiO2 foi 120 mg/L. Os resultados do ensaio de mutagenicidade foram avaliados adotando três variáveis para interpretação dos dados (ANOVA, relação dose-resposta e razão de mutagenicidade). Com base nestas variáveis, os três fármacos e suas amostras cloradas e após fotocatálise não induziram mutações do tipo deslocamento do quadro de leitura e substituição dos pares de base nas cepas TA98 e TA100 da bactéria S. typhimurium com (+S9) e sem (-S9) metabolização (mistura S9) nas doses testadas. Estes resultados estão de acordo com os dos testes de viabilidade celular por MTT em que os tratamentos da água com cloro e TiO2/UV-C não causaram efeito tóxico para os fármacos CPT e DCF. Após o tratamento da água com estes fármacos observou-se um aumento da viabilidade celular sugerindo que ambos não induzem ação tóxica às células nas doses investigadas (0,8, 20, 40, 60, 80 ng/poço). Os resultados da citotoxicidade do SMX foram inconclusivos uma vez que apenas a dose intermediária (40 ng/poço) mostrou diminuição da viabilidade celular, o que indicaria um possível efeito tóxico após o tratamento com cloro. ________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Several classes of drugs have been detected in the environment at low concentrations (ng/L a μg/L), and more recently in samples of treated water. Most Brazilian Water Treatment Plant (WTP) operates with conventional water treatment without the deployment of specific steps for removing microcontaminants. When drugs come into contact with chlorine as sodium hypochlorite for disinfection, they can be oxidized and transformed into products wich sometimes have unknown structure and toxic potential. The Advanced Oxidative Processes (AOP) as TiO2/UV-C photocatalysis have been tested by different research groups to increase the efficiency of removal of such compounds. For this work was standardized and implemented Salmonella / microsome assay (Ames test) for evaluation of mutagenicity and applied the MTT colorimetric assay in HepG2 cells to verify the cytotoxicity of drugs captopril (CPT), diclofenac (DCF) and sulfamethoxazole (SMX) and the possible products formed after chlorination and photocatalysis with TiO2/UV-C. The concentrations of the drugs tested were 1, 0,75, 0,50, 0,25 and 0,01 mg/L and contact time 5 and 30 min for chlorination and 120 min for photocatalysis. The dosage of chlorine was 1mg/L for DCF and SMX and for CPT was 10 mg/L. The concentration of TiO2 was 120 mg/L. The results of the mutagenicity test were evaluated taking three variables for the interpretation of the data (ANOVA, dose-response relationship and mutagenicity ratio). Based on this approach, drugs and their chlorinated samples and after photocatalysis did not induce frameshift and base-pair substitution mutations in TA98 and TA100 strains of S. typhimurium bacteria with (+S9) and without (-S9) metabolic activation system (mix S9) at the doses tested. These results are in agreement with tests of cell viability by MTT in the treatment of water with chlorine and TiO2/UV-C did not cause toxic effects to the cells for CPT and DCF drugs. After the water treatment with these drugs it was observed an increase in cell viability suggesting that both contaminant do not induce toxic effect to the cells at the doses investigated (0,8, 20, 40, 60, 80 ng/well). The results of the cytotoxicity of SMX were not conclusive since only the intermediate dose (40 ng/well) showed a decreased cell viability, which would indicate a possible toxic effect after treatment with chlorine.
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Desenvolvimento de um método de análise digital para o teste do cometa corado pela prataBrianezi, Gabrielli [UNESP] 24 February 2011 (has links) (PDF)
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brianezi_g_me_botfm.pdf: 2870031 bytes, checksum: 61bf38a3fd318eca76bd3e6eab217c9f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O teste do cometa é utilizado para estimativa de dano ao DNA nos protocolos de avaliação do risco toxicológico. É rápido, de baixo custo, de fácil realização, seguro e pode ser aplicado em diversos tecidos. Corantes fluorescentes são os mais empregados para o ensaio. É também descrita a utilização de sais de prata com vantagens operacionais, carecendo de sistemas automatizados validados para esta análise. Neste trabalho, desenvolveram-se dois algoritmos automatizados para a análise do cometa corado pela prata. Foram realizados ensaios do cometa para sete grupos com dois camundongos Balb/c machos cada, submetidos ao tratamento intraperitoneal com soro fisiológico (G1), e três doses crescentes de genotóxicos conhecidos: MNU (N-nitroso-N-metilurea) (G2 – 5 μg/g, G3 – 25 μg/g, G4 – 50 μg/g) e DEN (N-nitrosodietilamina) (G5 – 20 μg/g, G6 – 80 μg/g, G7 – 180 μg/g). As lâminas dos testes do cometa foram confeccionadas a partir do sangue total e coradas pela prata e SYBR Gold. As coradas pela prata foram analisados por três avaliadores e pelos algoritmos automatizados. Aqueles corados pela fluorescência foram analisados pelo software Comet IV®. Os avaliadores apresentaram alta correlação de suas estimativas. Os algoritmos se correlacionaram fortemente com a análise dos avaliadores, principalmente com os escores obtidos pela classificação visual. Houve alta concordância na avaliação da sua repetitividade. Os algoritmos apresentaram resultados semelhantes, não indicando superioridade entre si para a análise do teste. Todos os métodos avaliados se mostraram capazes de diferenciar as concentrações dos genotóxicos utilizados. Porém, os algoritmos desenvolvidos não apresentaram correlação com os resultados obtidos pelo sistema do teste do cometa corado pela fluorescência, sugerindo que os métodos de coloração discriminem diferentes estruturas... / The comet assay is used to estimate DNA damage in the protocols for toxicological risk assessment. It's fast, inexpensive, easily performed, safe and can be applied in most tissues. Fluorescent dyes are frequently used for testing. Silver salts have been reported with some operational advantages; however automated systems for its analysis were not sufficiently validated for this staining. In this study, we have developed two algorithms for automated analysis of the comet assay silver stained. The assay was performed for seven groups of two (Balb/c) mice each, treated with intraperitoneal saline (G1) and three different genotoxic doses: MNU (N-nitroso-N-methylurea) (G2 - 5 μg/g, G3 - 25 μg/g, G4 - 50 μg/g) and DEN (N-nitrosodiethylamina) (G5 - 20 μg/g, G6 - 80 μg/g, G7 - 180 μg/g). The slides of the comet assay were made with total blood and were stained with silver and SYBR Gold. The silver stained slides were analyzed by three evaluators and the automated algorithms. Those stained by fluorescence were analyzed through software Comet IV®. Evaluators showed high correlation of their estimates. Both algorithms were correlated strongly with the evaluators' analysis mainly on the scores obtained by visual classification. Moreover, their agreement was high when assessed by repetitivity. The algorithms showed similar results, demonstrating no superiority to each other for the analysis of the test. All methods evaluated proved able of differentiating genotoxic concentrations used. However, the algorithms were not correlated with the results obtained by the automated system of comet assay fluorescence stained, suggesting that the staining methods linkage different genomic structures or with different affinities. The automated algorithms developed proved valid for the direct analysis of comet assay silver stained, allowing their use in genotoxicity research
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Avaliação da atividade mutagenica de extratos organicos de corpos d'agua do estado de São Paulo atraves do teste de AmesUmbuzeiro, Gisela de Aragão, 1957- 22 October 1990 (has links)
Orientador : Renato Bonatelli Jr / Tese (doutorado) - Universidade Estadualde Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:55:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1990 / Doutorado / Genetica / Doutor em Ciências Biológicas
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Avaliação do potencial mutagênico, genotóxico, estrogênico e modulação da expressão gênica pelo nemorosone, isolado da resina de Clusia rosea /Camargo, Mariana Santoro de. January 2012 (has links)
Orientador: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Valéria Valente / Banca: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Fabio Vieira dos Santos / Banca: Raquel Alves dos Santos / Resumo: Atualmente, muitos estudos que envolvem produtos naturais são contínuos e focalizados em descobrir drogas para as mais diversas áreas terapêuticas. Grande parte dos compostos sintéticos presentes no mercado atual tem origem de produtos naturais, em especial de plantas. O nemorosone é o constituinte majoritário da resina floral de Clusia rósea Jacq., Clusiaceae, e da própolis cubana. Estudos in vitro relataram atividade citotóxica dessa substância contra várias linhagens de células tumorais incluindo aquelas resistentes a diversas drogas citostáticas, além de apresentar uma baixa citotoxicidade sobre células não-tumorais. Portanto, visando à caracterização da atividade biológica do nemorosone, uma substância com potencial atividade antitumoral e a importância dos testes de toxicidade para a avaliação da segurança pré-clínica de compostos candidatos a drogas, os objetivos desse trabalho se fundamentaram em estudar a influência do nemorosone sobre danos ao DNA pelo teste do Cometa em células mamárias normais (MCF10A) e tumorais (MCF-7 BUS), assim como a sua atividade mutagênica e antimutagênica por meio do teste de Ames, utilizando diferentes linhagens de Salmonella typhimurium. Além disso, foi caracterizada sua atividade estrogênica e antiestrogênica através do Ensaio de E-Screen, o qual determina o efeito proliferativo da substância em células MCF-7 sensíveis a estrógenos e também pelo modelo experimental que utiliza leveduras recombinantes (Recombinant Yeast Assay). Posteriormente, foi avaliada sua influência sobre o ciclo celular de MCF-7 BUS através de citometria de fluxo e análise de expressão de diferentes genes nessa mesma linhagem celular pela técnica de PCR Array, para a elucidação de possíveis mecanismos de ação do nemorosone, a fim de contribuir para sua recomendação como agente terapêutico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Currently, a wide range of research involving natural products is focused on the discovery of new drugs in many different therapeutic areas. A great number of the synthetic compounds on the market were derived from natural products, especially plants. Nemorosone is the major constituent of the floral resin of Clusia rosea Jacq., Clusiaceae, and in Cuban propolis. In vitro studies have shown cytotoxic activity in this substance against various tumor cell lines, including those resistant to various cytotoxic drugs, whereas it has low cytotoxicity to non-tumoral cells. Therefore, in order to characterize the biological activity of nemorosone, a substance with potential antitumor activity, and in view of preclinical testing of the toxicity of drug candidate compounds, the aim of this study was to determine the nemorosone capacity to induce DNA damages in normal breast cells (MCF10A) and breast cancer cells (MCF-7 BUS) by Comet Assay, as well as the mutagenic and antimutagenic activity by Ames test. Moreover, to characterize the estrogenic and antiestrogenic activity by E-Screen Assay, wich determines the proliferative effect of the compound in MCF-7 cells sensitive to estrogen and by experimental recombinant yeast model (Recombinant Yeast Assay).Subsequently, nemorosone influence on MCF-7 BUS cell cycle was assessed by flow cytometry analysis and the expression of different genes in the same cell line was evaluated by PCR Array for identification of possible mechanisms of action of the compound, in order to contribute to its recommendation as a therapeutic agent. The nemorosone did not induce damages in normal or cancer breast cells DNA after treatment during 3 and 24 hours, when evaluated by Comet Assay. The compound showed higher citotoxicity to cancer cells than to normal breast cells. In the Ames test, nemorosone presented no mutagenic potencial... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Desenvolvimento de um método de análise digital para o teste do cometa corado pela prata /Brianezi, Gabrielli. January 2011 (has links)
Orientador: Hélio Amante Miot / Banca: Paula Helena Ortiz Lima / Banca: Marco Antonio Rodrigues Fernandes / Resumo: O teste do cometa é utilizado para estimativa de dano ao DNA nos protocolos de avaliação do risco toxicológico. É rápido, de baixo custo, de fácil realização, seguro e pode ser aplicado em diversos tecidos. Corantes fluorescentes são os mais empregados para o ensaio. É também descrita a utilização de sais de prata com vantagens operacionais, carecendo de sistemas automatizados validados para esta análise. Neste trabalho, desenvolveram-se dois algoritmos automatizados para a análise do cometa corado pela prata. Foram realizados ensaios do cometa para sete grupos com dois camundongos Balb/c machos cada, submetidos ao tratamento intraperitoneal com soro fisiológico (G1), e três doses crescentes de genotóxicos conhecidos: MNU (N-nitroso-N-metilurea) (G2 - 5 μg/g, G3 - 25 μg/g, G4 - 50 μg/g) e DEN (N-nitrosodietilamina) (G5 - 20 μg/g, G6 - 80 μg/g, G7 - 180 μg/g). As lâminas dos testes do cometa foram confeccionadas a partir do sangue total e coradas pela prata e SYBR Gold. As coradas pela prata foram analisados por três avaliadores e pelos algoritmos automatizados. Aqueles corados pela fluorescência foram analisados pelo software Comet IV®. Os avaliadores apresentaram alta correlação de suas estimativas. Os algoritmos se correlacionaram fortemente com a análise dos avaliadores, principalmente com os escores obtidos pela classificação visual. Houve alta concordância na avaliação da sua repetitividade. Os algoritmos apresentaram resultados semelhantes, não indicando superioridade entre si para a análise do teste. Todos os métodos avaliados se mostraram capazes de diferenciar as concentrações dos genotóxicos utilizados. Porém, os algoritmos desenvolvidos não apresentaram correlação com os resultados obtidos pelo sistema do teste do cometa corado pela fluorescência, sugerindo que os métodos de coloração discriminem diferentes estruturas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The comet assay is used to estimate DNA damage in the protocols for toxicological risk assessment. It's fast, inexpensive, easily performed, safe and can be applied in most tissues. Fluorescent dyes are frequently used for testing. Silver salts have been reported with some operational advantages; however automated systems for its analysis were not sufficiently validated for this staining. In this study, we have developed two algorithms for automated analysis of the comet assay silver stained. The assay was performed for seven groups of two (Balb/c) mice each, treated with intraperitoneal saline (G1) and three different genotoxic doses: MNU (N-nitroso-N-methylurea) (G2 - 5 μg/g, G3 - 25 μg/g, G4 - 50 μg/g) and DEN (N-nitrosodiethylamina) (G5 - 20 μg/g, G6 - 80 μg/g, G7 - 180 μg/g). The slides of the comet assay were made with total blood and were stained with silver and SYBR Gold. The silver stained slides were analyzed by three evaluators and the automated algorithms. Those stained by fluorescence were analyzed through software Comet IV®. Evaluators showed high correlation of their estimates. Both algorithms were correlated strongly with the evaluators' analysis mainly on the scores obtained by visual classification. Moreover, their agreement was high when assessed by repetitivity. The algorithms showed similar results, demonstrating no superiority to each other for the analysis of the test. All methods evaluated proved able of differentiating genotoxic concentrations used. However, the algorithms were not correlated with the results obtained by the automated system of comet assay fluorescence stained, suggesting that the staining methods linkage different genomic structures or with different affinities. The automated algorithms developed proved valid for the direct analysis of comet assay silver stained, allowing their use in genotoxicity research / Mestre
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Estudo químico e atividade mutagênica e antirradicalar de caesalpinia ferreaWyrepkowski, Carlos César [UNESP] 05 September 2014 (has links) (PDF)
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000794866.pdf: 3309197 bytes, checksum: 719601c6e873cea248933afaaa2f8cf8 (MD5) / Caesalpinia ferrea Mart. pertence à familia Fabaceae ( Caesalpinioideae ) , cresce em todo o terr itório brasileiro, sendo largamente distribuída nas regiões norte e nordeste, conhecida vulgarmente como pau - ferro ou jucá. N este trabalho , foi realizado o estudo fitoquímico, a determinação quantitativa de metabólitos secundários, a avaliação das atividad es mutagênica e an tirradicalar e a determinação dos teores de fenóis totais do extrato etanólico das cascas do caule de C . ferrea . Análises por HPLC - ESI - IT - MS ( High Performance Liquid Chromatography - Electrospray Ionization - Ion Trap – Mass Spectrometry ) e FIA - ESI - IT - MS n ( Flow Injection Analysis - Electrospray Ionization - Ion Trap – Mass Spectrometry ), modo negativo , permitiram identificar vinte substâncias pela análise dos padrões de fragmentações e comparação com dados da literatura ( ácido gálico e der ivad o s , ácido elágico e derivados , galotaninos, elagitaninos, catequina e uma procianidina ) . No estudo fitoquímico, foram utilizadas técnicas cromatográficas usuais, como Cromatografia em Coluna Clássica (sílica gel e s ephadex LH - 20 ), MPLC ( Medium Pressure Liquid Chromatrography ) e HPLC , que forneceram um éster de ftalato, um açúcar, ácido gálico, dois derivados do ácido quínico e um derivado glicosilado do ácido elágico, que foram identificados por métodos espectroscópicos ( Ultra vi oleta e Ressonância Magné tica Nuclear) e espectrométricos ( Espectrometria de Massas ). Um método analítico foi desenvolvido utilizando a técnica de HPLC - PDA ( High Performance Liquid Chromatography - Photodiode Array Detector ) que permitiu a quantificação d e seis substâncias ( ácido gálico, ácido galoil quínico, galato de etila, dilactona do ácido valoneico, ácido elágico e ácido 3 - O - metilelágico - 4 ' - O - ? - D - arabinopiranosídeo ) no extrato. Nesta... / Caesalpinia ferrea Mart. belongs to the family Fabaceae (Caesalpin ioideae) grows throughout the Brazilian territory, being widely distributed in the northern and northeastern regions, known commonly as pau - ferro or jucá . In t his research describes the phytochemical study, and the determination of the quantitative seconda ry metabolites, the mutagenic evaluation and antiradical activities and the total phenol levels determination of the ethanolic extract from the C . ferrea Martius stem bark. The analyses by the HPLC - ESI - IT - MS (High Performance Liquid Chromatography – Electr ospray Ionization – Ion trap – Mass Spectometry) and FIA – ESI - IT - MS n (Flow Injection Analysis – Electrospray Ionization – Ion Trap – Mass Spectometry), negative mode, it allowed to identify twenty substances by the standard analyses of the fragmentation a nd comparison with the data that are in the literature (gallic acid and derived, ellagic acid and derivatives, gallotannins, ellagitannis, cathechin and proantocyanidin). In the phytochemical study, it was used common chromatographic technical, like the Cl assical Column Chromatography (silica gel and sephadex LH - 20), MPLC (Medium Pressure Liquid Chromatrography) and HPLC , that provided a phthalate ester, a sugar, a gallic acid, two quinic acid derived and a glycosylated ellagic acid derivative , that were id entified by spectroscopic (Ultraviolet and Nuclear Magnetic Ressonance) and spectrometric (Mass s pectrometry ). An analytical method was developed using th e HPLC - PDA (High Performance Liquid Chromatography - Photodiode Array Detector) , which permitted quant ification of six substances (gallic acid, gal l o y l quinic acid, ethyl gallate, valoneic acid dilactone, ellagic acid and 3 - O - metilel la gic acid - 4 ' - O - ? - D - arabinopyranoside) in the extract. In this quantification, ellagic acid (57.64 ± 1.22 ?g.mL - 1 ) and...
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