Orientador: Fernanda Ramos Gadelha / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-29T00:46:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Chiavegatto_CamilaWhonrathMorisco_M.pdf: 6305800 bytes, checksum: d06eeff5b5078e4a1fd37a8c2c30a3b3 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Em resposta a invasão pelo Trypanosoma cruzi (T.cruzi) a célula libera uma série de espécies reativas de oxigênio e ao mesmo tempo ocorre um aumento de concentração de cálcio no citosol indispensável para a penetração do parasita. O T.cruzi apresenta uma capacidade limitada em lidar com o estresse oxidativo, levando esta área a ser de grande interesse para a terapêutica. A triparedoxina peroxidase (TXNPx) é uma enzima antioxidante que participa de uma cascata enzimática para a detoxificação de hidroperóxidos descrita em T.cruzi que oferece novas opções para o desenvolvimento de agentes tripanossomicidas mais específicos. Duas cepas com diferentes resistências ao estresse oxidativo gerado pelo peróxido de hidrogênio foram utilizadas nesse trabalho. A cepa Tulahuen 2 apresenta menor tempo de geração e uma maior resistência ao estresse oxidativo, além de um maior índice de crescimento e concentração de TXNPx em relação a cepa Y. Correlacionando o número de células com o conteúdo protéico total, a cepa Tulahuen 2 apresenta uma relação maior do que a outra cepa estudada. Durante a fase lag, em ambas as cepas, ocorre um aumento da expressão da TXNPx. Nas condições testadas, as duas cepas metabolizaram o H2O2 na mesma velocidade. Baixas concentrações de H2O2, levaram a um estímulo da proliferação celular (cepa Y) dando suporte a idéia que este agente pode agir como segundo mensageiro. Essas células são capazes de se adaptar ao estresse oxidativo quando tratadas inicialmente com uma concentração citotóxica e depois desafiadas com uma dose citostática. Esta adaptação é temporária, induzindo a resistência até l h 30min após o pré- tratamento. A triparedoxina peroxidase está envolvida na adaptação ao estresse oxidativo de células epimastigotas de T. cruzi uma vez que tratando-se as células com baixas e altas concentrações de H2O2 observa-se um aumento da expressão desta proteína / Abstract: In response to invasion by T. cruzi, cells generate reactive oxygen species (ROS), occurring at the same time an increase in cytosolic calcium concentration that is essential for invasion. T. cruzi has a limited capacity to deal with oxidative stress, being this area of great interest for therapeutics. Typaredoxin peroxidase (TXNPx) is an antioxidant protein that participates in an enzymatic cascade for hydroperoxide detoxyfication in T. cruzi offering new options for the development of more specific drugs. Two T. cruzi strains with different resistance to the oxidative stress generated by H2O2, were used in this study. Tulahuen 2 strain has a smaller doubling time and a higher growth index, tryparedoxin peroxidase expression and resistance to oxidative stress. The correlation between cell number and total protein content was also higher in this strain. During the lag phase, for both strains, there is a higher expression of TXNPx. In the conditions used, both strains metabolized H2O2 at the same rate. Low concentrations of H2O2 were able to stimulate cell growth in T. cruzi (Y strain) giving support to the idea that it can act as a second messenger. These cells were also able to adapt to oxidative stress when treated with atoxic H2O2 concentrations and then challenged with citostatic concentrations. This adaptation is transient inducing resistance to challenging for a maximum of 1 h 30 min. Tryparedoxin peroxidase is involved in the adaptation of T. cruzi (Y strain) to oxidative stress since treatment with lower and higher H2O2 doses induced an increase in its expression / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Fernanda Ramos Gadelha / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T14:12:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Finzi_JaneKelly_M.pdf: 6305136 bytes, checksum: 87b01b7f1ab85cfe5a3aa5ec4bef04bc (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O Trypanosoma cruzi (T cruzi) está exposto a espécies reativas de oxigênio (EROs) produzidas pelo sistema imunológico do hospedeiro, assim como pelo metabolismo de drogas e pelo seu próprio metabolismo. Este parasita apresenta uma capacidade limitada em lidar com esse estresse oxidativo, sendo esta área de grande interesse para fins terapêuticos. Uma cascata enzimática para detoxificação de hidroperóxidos foi descrita para T cruzi, sendo diferente de qualquer sistema análogo no organismo hospedeiro. O estudo deste sistema e das enzimas envolvidas, incluindo a triparedoxina peroxidase (TXNPx), poderão levar ao desenvolvimento de agentes tripanossomicidas mais específicos e portanto menos tóxicos para o hospedeiro. Este trabalho explorou o comportamento de células de Tcruzi mutantes que possuem o gene da TXNPx citosólica superexpresso. Observou-se um grande aumento de rnRNA (158%) para as células transformadas com o vetor pTEX-TXNPx, sem o acompanhamento do aumento de produção da proteína TXNPx, evidenciado por Westem blotting. Possivelmente a regulação da expressão deste gene deve ocorrer a nível pós transcricional, como na maioria dos genes em tripanossomatídeos. Quando as células que superexpressam a TXNPx foram tratadas com peróxido de hidrogênio (H2O2) durante 30 min, observou-se um grande aumento dos níveis de rnRNA, mas a quantidade de proteína traduzida não aumentou na mesma proporção. Altos níveis de rnRNA correlacionados aos níveis de proteína, foram observados em períodos de incubação maiores (1h - 2hs), demonstrando que a proteína é traduzida de acordo com a necessidade do parasita. As células que superexpressam a TXNPx apresentaram um maior índice de crescimento, menor tempo de duplicação e uma maior resistência ao estresse oxidativo gerado pelo H2O2 (50% de inibição do crescimento foi alcançada com 104JlM para as células selvagens e 125JlM para as células mutantes). A superexpressão de uma única proteína da cascata de detoxificação de hidroperóxidos dos tripanossomatídeos, neste caso a TXNPx, leva a um aumento na produção de nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato reduzida (NADPH) (aproximadamente 23%). A enzima responsável por este efeito, foi a glicose 6-fosfato desidrogenase (G6PD), primeira enzima da Via das Pentoses Fosfato, que produz NADPH. Assim, como para as células de mamíferos existe uma correlação entre a atividade aumentada da G6PD e a proliferação, o mesmo pode ocorrer para o T. cruzi, uma vez que as células que superexpressam a TXNPx citosólica apresentaram um índice de crescimento maior, provavelmente devido a uma maior atividade da G6PD / Abstract: Trypanosoma cruzi (T cruzi) is exposed to reactive oxigen species (ROS) produced by the host immunological system, drugs metabolism and :/iom its own metabolismo This parasite has a limited capacity to cope with oxidative stress, which is of great interest to terapeutic. A hydroperoxide detoxification cascade, different :/iom any similar system in the host organism, was described for Tcruzi. The study of this system and the involved enzymes, inc1uding tryparedoxin peroxidase (TXNPx), can lead to the development of more specific trypanosomicid agents less toxic to the host. This work explored the behavior of T cruzi mutant cells, that have the cytosolic TXNPx gene overexpressed. It was observed a great increase on mRNA (158%) levels in pTEX-TXNPx transformed cells, without going along with the same increase on TXNPx protein production, as detected by Westem blotting. This result could be explained by the regulation at the post-transcriptionallevel of this gene, as the majority of trypanosomatids genes. When TXNPx overexpressed cells were treated with hydrogen peroxide (HzOz) for 30 min, a great increase on mRNA levels was observed, but protein translation did not increase at the saroe proportion. Higher mRNA levels correlated to protein levels were observed when the incubation period was longer (lh -2hs), inferring that protein translation occurs according to the parasite needs. Cells that overexpress TXNPx had a greater growing index, a smaller duplication time and a higher resistance to oxidative stress generated by HzOz (50 % of growth inhibtion was achieved at 1O4/lM for wild type and 125/lM for mutant celIs). The overexpression of on1y one protein :/iom the trypanosomatid hydroperoxide detoxification cascade, in this case TXNPx, led to an increase in reduced nicotinamide adenine dinuc1eotide phosphate (NADPH) production (23% approximately). The enzyme responsible for this effect, was glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD), the first enzyme of the Pentose Phosphate Pathway, that produces NADPH. Once in mammalian celIs there is a correlation between increased G6PD activity and proliferation, the same could occur in T. cruzi since the celIs that overexpress TXNPx had a greater growth index / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Ruberval Armando Lopes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T14:06:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Albuquerque_Sergiode_D.pdf: 13647855 bytes, checksum: a72a328ce528c3b8a9d4dea9e32dd8d1 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: o curso da infecção chagásica, em animais experimentais, está associado diretamente às variações morfológicas das formas tripomastigotas sangüícolas de Trypanosoma cruz i, como já tem sido demonstrado por vários autores, principalmente ao serem considerados o período pré-patente, o pico parasitêmico, a duração da fase aguda e a taxa de mortalidade. Assim, formas fmas são reticulotrópicas enquanto que as largas apresentam miotropismo e tropismo glandular. Com relação ao tropismo glandular, existem ainda várias controvérsias sobre o assunto. Considerando-se todos os aspectos abordados, verificou-se no presente trabalho as alterações e o nível de destruição das glândulas salivares de animais infectados com a cepa RAL de T.cruzi. Foram utilizados como modelo experimental camundongos albinos (Mus musculus) de ambos os sexos, uma vez que existe nestes animais, em nível de glândulas salivares, dimorfismo sexual. O inóculo empregado foi de 2x104 tripomastigotas sangüícolas e os animais foram sacrificados no 122 dia da infecção, data equivalente ao pico da parasitemia. Foram colhidas as glândulas salivares maiores (parótida, submandibular e sublingual) e as menores (von Ebner e Weber), sendo as mesmas processadas histologicamente. Os parâmetros avaliados foram a parasitemia comparaliva entre ambos os sexos dos arlimais, a histopatologja, a morfómetHa (cariometria e análise de superficie) e a estereologia dos ór~os coletados. Dos resultados obtidos, verificou-se, de uma maneira fal, um parasitismd 11Í~l1so nas glândulas maiores ~ desorgab.izaç,ão eS / Abstract: The course of Chagas' disease infection is associated to the morphological variations of Trypanosoma cruzi blood tripomastigotes forms, in experimental animaIs. Several authors have been demonstred this association considering as parameters the papatent period,parasitemic peak, acute phase period and the rate of mortality. Therefore, slender forms have been considered as reticulotropic whereas the broad ones are miotripic and glandular tropic. There are still several controversies conceming the glandular tropism of T.cruzi. In the present work alterations and tissue disorganization levels of male and female Mus musculus salivary glands infected with 2 x 104 blood tripomastigotes of T.cruzi strain were studied. The animals were killed on 12th day after infection, corresponding to the parasitemic peak. The major salivary glands (parotid, submandibular and sublingual) and the minor ones (von Ebner and Weber) were isolated for histopathological study. The tissue fragments were ineluded in paraphin and stained with hematoxilin -eosin. Parasitemia, histopathology, morphometry and stereology of the male and female animal groups were compareted. Intense parasitism in the major salivary glands and structure disorganization with a general atrophy in ductular and acinar levels with higher incidence in female than in male groups were observed. Our results in RAL strain athypical behaviour when compareted to the other strains prior studied. The higher incidence of parasit loads and tissular demage in the female group seens to be related to several aspects, likCl ~; intrinsic strain behaviour, susceptibility of the animal model and the flutua~n of the hormonallevels during the estral cyele. Since these parasites cause by themelfes an immunosupression during the acute phase of infection, further investigations have to be performed in order to clarify the role of the steroid hormones and the magnitude of the immune response against T.cruzi infection / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Ciências

Doctor en Bioquímica / La calreticulina de Trypanosoma cruzi (TcCRT), una chaperona pleiotrópica de 47 kDa, se transloca desde el retículo endoplásmico (RE) a la zona de emergencia flagelar, donde actúa como un factor de virulencia principal, además de sus roles funcionales intracelulares. La TcCRT extracelular media la infectividad del parásito en virtud de su capacidad para interactuar con los componentes del complemento C1 y MBL. La inhibición de las vías del complemento clásica y de las lectinas también son consecuencias de estas interacciones. No se ha reportado respecto a la localización y funciones de TcCRT una vez que el parásito se encuentra en el interior de la célula hospedera. Aquí proponemos que, durante la infección por T. cruzi, y mediante el uso de anticuerpos específicos, es posible detectar TcCRT, una vez que el parásito se encuentra el interior de la célula hospedera de mamífero. También proponemos que la expresión de TcCRT en la célula hospedera se correlaciona inversamente con la expresión de antígenos MHC-I. Al abordar experimentalmente estos temas queremos contribuir al conocimiento de los términos moleculares que regulan la interacción células hospederas-T.cruzi, centrándose en el papel de TcCRT en particular, dentro de la célula hospedera infectada. Para alcanzar este objetivo apuntamos a la validación de la especificidad de los anticuerpos para ser utilizados como sondas detectoras de TcCRT, con ello identificar TcCRT interior de los macrófagos murinos infectados y, por último, evaluar las variaciones en la superficie de las moléculas de MHC- I en los macrófagos murinos infectados. Por lo tanto, específica y topográficamente se monitoreó la presencia de TcCRT en los parásitos que infectan a una línea celular de macrófagos murinos, en comparación con tripomastigotes libres y epimastigotes no infecciosos. Para ello, se probaron tres anticuerpos diferentes como sondas detectoras para procedimientos inmunocitoquímicos. Anticuerpos anti-TcCRT policlonales y monoclonales se validaron como sondas detectoras, ya que mostraron poca o nula reactividad cruzada. En inmunocitoquímica, el anticuerpo policlonal de conejo, y los anticuerpos monoclonales murinos anti-TcCRT, detectan TcCRT con diferentes sensibilidades y especificidades, cuando son revelados con inmunosondas conjugadas con oro coloidal, seguido por microscopía electrónica de transmisión. Con los anticuerpos policlonales de conejo, se observaron partículas de CRT, tanto en parásitos libres como en aquellos que se encuentran dentro del interior de células hospederas infectadas, principalmente en el núcleo y kinetoplasto del parásito. Con un anticuerpo monoclonal murino anti-TcCRT, y el uso de partículas de oro de tamaño más grande, se obtuvo una mejora drástica en la sensibilidad y especificidad para la detección TcCRT. Se detectaron moléculas de TcCRT principalmente en el kinetoplasto del tripomastigote. Proponemos que este organelo puede representar una escala para TcCRT, generada en el RE, previo a su translocación a la zona de emergencia flagelar. Esta movilización puede estar influenciada por las nuevas condiciones ambientales con las que el parásito se encuentra en el interior de la célula hospedera. Queda por determinar las consecuencias funcionales de la presencia acumulada de TcCRT en el kinetoplasto. La posibilidad de que TcCRT regule la transcripción en el ADN del kinetoplasto, según lo propuesto anteriormente para la CRT de mamífero en el núcleo, podría ser considerada, aunque la organización de ADN en el kinetoplasto es diferente. Además, TcCRT podría regular vías de transducción de señales dependientes de Ca+2. Finalmente, por mecanismos desconocidos, la infección por T. cruzi disminuye el número de células positivas MHC de clase I, tan temprano como 2 horas después de la infección. Queda por determinar si TcCRT accede al RE de la célula huésped e interfiere en el proceso de plegamiento de moléculas MHC clase I / Trypanosoma cruzi calreticulin (TcCRT), a 47 kDa pleiotropic chaperone, besides its intracellular functional roles, is translocated from the endoplasmic reticulum (ER) to the area of flagellum emergence where it acts as a main virulence factor. Extracellular TcCRT mediates parasite infectivity by virtue of its capacity to interact with complement components C1 and MBL. Both inhibitions of the classical and lectin complement pathways are also consequences of these interactions. The localization and functions of TcCRT once the parasite is inside the host cell has not been reported. Herein we hypothesize that, during T. cruzi infection, and using specific antibodies, it is possible to detect TcCRT, once the parasite is inside the mammalian host cell. We also propose that TcCRT expression in the host cell inversely correlates with the MHC-I antigen expression. By experimentally addressing these issues we expect to contribute to the knowledge of the molecular terms governing the T. cruzi-host cell interplay, focusing on the role of TcCRT in particular inside the infected host cell. To reach this goal we will aim at validating the specificity of the antibodies to be used as TcCRT detector probes to identify TcCRT inside infected murine macrophages and, finally, to evaluate variations in surface MHC-I molecules on infected murine macrophages. Thus, we specifically and topographically monitor the TcCRT presence in parasites infecting a murine macrophage cell line, as compared to free trypomastigotes and non-infective epimastigotes. For that purpose, three different antibodies were tested as detector probes for immunocytochemical procedures. Polyclonal and monoclonal anti-TcCRT antibodies were validated as detector probes, as they showed minimal or null cross reactivity. In immunocytochemistry, polyclonal rabbit, and monoclonal murine anti- TcCRT antibodies, detected TcCRT with different sensitivities and specificities, when revealed with immune probes conjugated to colloidal gold, followed by transmission electron microscopy. With the rabbit polyclonal antibodies, CRT particles were observed, both in free parasites and infected host cells, mainly in the parasite nucleus and kinetoplast. With a murine monoclonal anti-TcCRT antibody, and using larger size gold particles, a drastic improvement in sensitivity and specificity for TcCRT detection, was obtained. TcCRT molecules were detected mainly in the trypomastigotes kinetoplast. We propose that t his organelle may represent a stopover for TcCRT, generated in the ER, previous its translocation to the area of flagellum emergence. This mobilization may be influenced by the new environmental conditions that the parasite meets inside the host cell. It remains to be determined the functional consequences of TcCRT cumulative presence in the kinetoplast. The possibility that TcCRT regulates transcription in kinetoplast DNA, as previously proposed for mammalian CRT in the nucleus, could be considered, although the DNA organization in the kinetoplast is different. Also, TcCRT may regulate Ca+2-dependent transduction signalling pathways. Finally, by unknown mechanisms, T. cruzi infection seems to decrease the number of MHC class I positive cells, as early as 2h post-infection. It remains to be determined whether TcCRT accesses to the host cell ER and interferes in the MHC class I molecule-folding process / Conicyt Fondecyt

Orientador: Irineu Jose Barsanti de Camargo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T19:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_SaradeJesus_M.pdf: 5123580 bytes, checksum: 565df21d4a810796dd5900117b5e60e8 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: A resistência precoce é um processo através do qual o hospedeiro, previamente sensibilizado por estoques de baixa virulência do T. cruzi, responde em um curto período de tempo, com diminuição da parasitemia e maior sobrevida, ao desafio com formas e doses altamente virulentas do parasita. As investigações sobre a indução da resistência precoce demonstraram que se trata de um mecanismo de caráter específico. Isto porque, essa forma de resistência é mais eficiente quando induzida por cepas homólogas do que por cepas heterólogas, e não altera o curso de infecções provocadas por outros grupos de microorganismos. O estudo da patogenia dos estoques envolvidos na resistência precoce, mostrou que além de apresentarem diferentes graus de virulência, essas cepas são capazes de induzir diferentes graus de alterações, nas proporções das células do sangue periférico e dos órgãos linfóides do hospedeiro vertebrado. O estoque da cepa Y mantido em cultura de células induz baixa parasitemia e 100% de sobrevida no hospedeiro, não provocando alterações histopatológicas nos primeiros 3 dias da infecção. O estoque de T. cruz; provenientes de animais SPF, mantidos isolados de outros patógenos, induz um nível de parasitemia maior que os estoques de cultura, sobrevida de 15 ± 2 dias, e poucas alterações no baço dos animais infectados. Já o estoque de parasitas provenientes de animais mantidos em biotério convencional, induz parasitemia elevada, linfopenia e alterações na estrutura do timo e baço, induzindo a morte dos animais em aproximadamente 10 dias. O estudo comparativo dos efeitos da administração do plasma filtrado desses três tipos de estoques, em camundongos normais, mostrou que somente o plasma de animais infectados com parasitas mantidos em biotério convencional é capaz de induzir alterações histopatológicas no hospedeiro. Esses dados sugerem a presença de outro microorganismo, agindo conjuntamente com o T. cruzi, provavelmente um coronavírus relacionado ao M.H.V3 / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Paulo Maria Ferreira de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T12:19:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gomes_Laurecir_M.pdf: 3268440 bytes, checksum: d4b25825e8a31c5f2d0652db7afc3823 (MD5) Previous issue date: 1984 / Resumo: As imunoglobulinas humanas IgG e IgM séricas e IgA de colostro foram submetidas à ação da proteinase de padrões do extrato de epimastigotas (Araújo, 1979) foi purificada 56 vezes e contendo 1825 unidades/mg. As preparações de imunoglobulinas resultantes do tratamento enzimático em condições ótimas de pH (pH 7.0 e pH 3.1) e os controles adequados, foram analisados em eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS (SDS 1% e DTT 100 mM), imunoeletroforese simples e bidimensional frente a imunessoros específicos. A degradação da molécula de IgG foi observada na eletroforese em gel de poliacrilamida, na comparação entre a preparação controle e a tratada com a enzima, onde a banda correspondente à cadeia pesada desaparece, havendo concentração de fragmentos de baixo peso molecular em nova banda de proteínas. A imunoeletroforese com os soros anti-IgG e anti-'delta¿, comprovam o comprometimento da molécula, pois desaparece a reatividade da cadeia pesada com o soro ant-'delta¿. Com as preparações de IgA, tratadas ou não com a enzima, não foi detectada fragmentação da molécula de imunoglobulina, nem nos testes de eletroforese em gel de poliacrilamida, nem nas reações de precipitação das imunoeletroforeses. Pouca ou nenhuma ação da proteinade sobre a IgA secretória ter ocorrido. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : H. A. Rangel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T05:57:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tamashiro_WirlaMariadaSilvaCunha_M.pdf: 4127929 bytes, checksum: 783c48ca0a83d22578a152d32a515763 (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: Foram realizadas experiências com o sentido de verificar a possibilidade de se extrair determinantes antigênicos da superfície do Trypanosoma cruzi, através da ação da proteinase existente no sedimento dos lisados das formas epimastigotas do parasito. Os resultados mostraram que pode ser extraída uma fração antigênica (FAD), quando esses sedimentos são incubados em condições propícias à ação da proteinase (PBS, pH 7.2; 37ºCº por 1 hora). O teor de proteína e de polissacáride da fração antigênica era aumentado quando se utilizava ativadores da ação enzimática (37ºC; 2-Me) e se encontrava diminuído quando se utilizava inibidores dessa ação (0ºC; IAc), indicando que a enzima facilita a obtenção dos constituintes da superfície. Através de provas de imunoeletroforese cruzada, foi demonstrado que a enzima presente nesses sedimentos é antigenicamente idêntica à anteriormente isolada por Araújo (1979). A análise em gel de poliacrilamida, mostrou que as frações obtidas em condições que favoreciam a ação da proteinase, eram constituídas por três componentes de baixo PM (Rm : 0.5, 0.6, e 0.9, respectivamente), ao passo que as frações obtidas na presença do inibidor ou a 0ºC eram constituídas principalmente por componentes de alto PM. Em ambos os casos, as frações obtidas inibiam as reações de aglarinação dos soros anti-epimastigotas (a-EL), indicando que as diferentes molecular, de alto e de baixo PM, encaminham os mesmos determinantes antigênicos... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : H. A. Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T02:55:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Repka_Daria_D.pdf: 8987286 bytes, checksum: 382ff82aac2532f1828348852943bd5b (MD5) Previous issue date: 1973 / Resumo: Os lisados das formas de cultivo de T. cruzi contêm um material insolúvel, contendo proteínas, polissacárides e lípides. Este material é capaz de absorver anticorpos aglutinantes das forma de cultivo do T. cruzi. Os lípedes extraídos dos sedimentos insolúveis floculam e fixam complemento com imune-soros anti T. cruzi. O sedimento delipidado contém determinantes antigênicos presentes na superfícies das formas de cultivos do T. cruzi. Não foram observadoas diferenças apreciáveis na com posição antigênica e química dos estratos obtidos quer pela ação do desoxicolato de sódo quer pela ação do congelamento e descongelamento sucessivos, sugerindo que ambos os processos estraem os mesmos componentes.Os EBC e EBD contêm antígenos de superfície das forma de cultivo do T. cruzi. O fracionamento desses estratos por ultrafiltração, cromatografia de exclusão e precipitação no ponto iso-elétrico permite obter frações ricas desses antígenos / Abstract: Not informed. / Doutorado / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador : Paulo Maria Ferreira Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T15:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PingeFilho_Phileno_M.pdf: 4443293 bytes, checksum: 2d161c84c7494e33b03cab3324fa693c (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: O estudo da atividade imunológica sob a ótica de um sistema fisiológico tem sido pouco explorado e isto fica mais evidente com respeito ao papel do tecido linfoíde associado as mucosas, que já se demonstrou ser o maior produtor espontâneo de imunoglobulinas dos mamíferos e as placas de Peyer, agregados linfóides distribuídos ao longo do intestino delgado e grosso, tomam importante papel neste processo. Paradoxalmente em ruminantes existem dois tipos de placas de Peyer; placas do jejuno e do íleo, distinguidas pela sua arquitetura, composição de linfócitos e ontogenia. Um aspecto central na abordagem de Jerne ao sistema imunológico, é que um distúrbio desencadeado pelo antígeno afeta muito mais linfócitos que aqueles capazes de interagir diretamente com o antígeno, e a ativação policlonal é um bom exemplo disso. A ativação policlonal de células B e T é muito freqüente em diferentes processos infecciosos. Este fenômeno já está bem estabelecido na infecção experimental pelo Trypanosma cruzi, onde se observa uma maciça proliferação de células B no baço e nos linfonodos. Neste trabalho, camundongos C57BL/6 infectados com T. cruzi ou não, tiveram suas placas de Peyer analisadas quanto ao número, tamanho e distribuição; submetidas a análise histológica e processadas para a determinação do número de PFC reverso, com hemácias sensibilizadas com proteína A. Os resultados do número de PFC reverso, realizado no sétimo dia de infecção, utilizando linfócitos de placas de Peyerdo duodeno - jejuno e de placas do íleo, demonstraram que estes estão aumentados e ativados, possivelmente de natureza policlonal no sétimo dia de infecção. A análise histológica deplacas de Peyer de camundongos normais não evidenciaram a existência de diferenças na arquitetura entre as mesmas, como descrito em ruminantes, embora os centros germinativos e as áreas foliculares de placas localizadas no íleo, possuam quantidade maior de grandes linfócitos em comparação aos centros germinativos e áreas foliculares das placas de Peyer do duodeno-jejuno. Os animais infectados apresentaram os centros germinativos, as áreas foliculares e parafoliculares, tanto de placas do duodeno-jejuno como do íleo, alteradas em sua citoarquitetura. As placas de Peyer destes animais apresentaram ainda, uma redução significativa no número / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Apesar de todo o avanço científico nas últimas décadas, a doença de Chagas ainda é um importante problema em saúde pública. A expectativa de vida no Brasil tem aumentado a cada ano e esse crescimento permite o surgimento de uma população idosa em risco de contrair essa doença. Diante disso, os objetivos deste trabalho foram avaliar a resposta imune em ratos Wistar senescentes, infectados pela cepa Y de T. cruzi. O presente estudo mostrou alterações na imunidade inata, quando avaliamos a população de macrófagos peritoneais, bem como a sinalização (expressão de RT1B) e da molécula coestimulatória (CD80) das células APC nos animais senis. A imunidade celular também foi reduzida, uma vez que os animais senis apresentaram uma diminuição significativa na porcentagem de linfócitos T CD4+ e T CD8+, quando comaprados aos jovens. Além disso, foi observado que o envelhecimento reduz a expressão da principal molécula de sinalização, o CD28+, responsável pela ativação de células T. Nos nossos estudos, o envelhecimento foi associado a um aumento no percentual de linfócitos CD4+CD25lowFOXP3+, que representam as células T regulatórias instáveis. Por outro lado, os animais senis não infectados apresentaram uma redução significante no percentual de linfócitos CD4+CD25highFOXP3+, as células T regulatórias estáveis. A senesescência, bem como, o processo infeccioso ocasionaram um aumento nos níveis de corticosterona e no percentual de esplenócitos em apoptose inicial e tardia em animais senis infectados. O envelhecimento também regulou negativamente a transição DN1-DN2, bem como, as subpopulações de timócitos DN3 e DN4 em animais senis, infectados ou não. Observou-se uma redução no percentual de timócitos viáveis nos animais senis, tanto controles quanto infectados. Com relação aos parâmetros do estresse oxidativo, a senilidade elevou os níveis de TBARS, reduziu a atividade da principal enzima antioxidante SOD e na concentração de 8-isoprostano. O substrato da enzima glutationa peroxidase GSH aumentou nesses animais senis, comparados aos jovens. A análise da produção de citocinas evidenciou um aumento nos níveis de TGF-? em animais senis. No 16° dia após a infecção, um aumento nos níveis de IL-12 foram observados apenas nos animais senis infectados. Entretanto, este mesmo grupo apresentou uma redução na produção de IL-2 no 9º dia após a infecção. As concentrações de IL-17 foram maiores nos animais senis infectados e controles, quando comparados aos animais jovens. Tanto a infecção por T. cruzi quanto o envelhecimento ocasionaram um aumento nos níveis de TNF-? nos animais jovens e senis infectados. Com o presente estudo, conseguimos avançar na compreensão dos mecanismos celulares e moleculares envolvidos nas modificações da imunidade ao longo da vida e seus reflexos frente à doença de Chagas. Inúmeras alterações foram observadas, incluindo resposta imune ineficiente, aumento do estresse oxidativo, bem como diminuição da atividade de enzimas antioxidantes e comprometimento no processo de maturação celular intratímica, os quais afetam etapas essenciais no desenvolvimento dos timócitos e exportação de células T para a periferia. Foi observado um desequilíbrio funcional do eixo neuroendócrino, bem como a diminuição da viabilidade celular. Além disso, as mudanças no perfil da produção de citocinas promoveram implicações diretas na competência imunológica desses animais. / Despite all the scientific advances in the last decades, Chagas disease is still an important public health problem. Every year, the life expectancy in Brazil has increased and this growth tops with the emergence of an elderly population at risk of contracting this disease. Therefore, the objectives of this study were to evaluate the immune response in senescent Wistar rats, infected with T. cruzi Y strain. Changes in innate immunity was observed in the population of peritoneal macrophages, as well as signaling (RT1B expression) and the costimulatory molecule (CD80) of APC cells in senile animals. Cellular immunity was also reduced, since senile animals showed a significant decrease in the percentage of CD4+ T and CD8+T lymphocytes when compared to young counterparts. A reduced expression of the major signaling molecule, CD28+, responsible for T cell activation was also observed as long as animals age. Aging was associated with an increase in the percentage of CD25+ CD25lowFOXP3+ lymphocytes, which represent T regulator cells. On the other hand, the uninfected senile animals presented a significant reduction in the percentage of CD4+ CD25highFOXP3+ lymphocytes. Senescence as well as the infectious process triggered an increase in corticosterone levels and in the percentage of splenocytes in early and late apoptosis in senile infected animals. Aging also negatively regulated the DN1-DN2 transition, as well as the subpopulations of thymocytes DN3 and DN4 in senile animals, infected or not. A reduction in the percentage of viable thymocytes was observed in control and infected senile animals. Regarding to oxidative stress, aging increased the levels of TBARS, reduced the activity of the main antioxidant enzyme SOD and the concentration of 8-isoprostane. Oppositely, aged animals displayed increased levels of the enzyme glutathione peroxidase GSH as compared to the young ones. The analysis of cytokine production evidenced an increase in TGF-? levels in senile animals. On the 16th day after infection, enhanced concentrations of IL-12 was observed only in senile infected animals. However, this same group showed a reduction in IL-2 production on the 9th day after infection. Senile and control animals displayed higher IL-17 concentrations when compared to young animals. Both T. cruzi infection and aging caused an increase in TNF-? levels in young and senile infected animals. The present study allowed us to better understand the cellular and molecular mechanisms involved in the immune response throughout life and its actions on Chagas\' disease. For that, several alterations were observed such as an inefficient immune response, increased oxidative stress, decreased antioxidant enzyme activity and impairment in the intratymic cell maturation process, impairing thymocyte development and the export of T cells to the periphery, as well decreased cell viability. A functional imbalance of the neuroendocrine axis was also observed, as well as changes in the profile of cytokine production directly impairing the immune competence in these animals.