La thrombose est souvent liée à la survenue d’une rupture de la plaque d’athérosclérose qui expose le tissu sous endothélial thrombogène aux plaquettes sanguines circulantes. L’un des problèmes actuels est l’identification des mécanismes qui sont à l’origine de la fracture. Nous avons testé l’hypothèse que la vasoconstriction, induite par le LTC4 ou le thromboxane A2 (TXA2), joue un rôle dans la rupture de plaques d’athérosclérose et dans la formation de l’athérothrombose. Dans ce travail nous avons adapté la technique classique de la microscopie électronique pour observer les ruptures survenues sur une plaque d’athérosclérose. Avec cette méthode, nous avons montré qu’une vasoconstriction peut engendrer des ruptures de plaques, mais seulement lorsque ces plaques sont fragilisées (dites ‘vulnérables’) soit par un régime riche en graisse ou après exposition de la souris à un lipopolysaccharide extrait de membranes bactériennes. Nous avons montré aussi que la plaque produit du TXA2, et que l’absence de son récepteur chez les souris apoE-/- déficientes en TP prévient la rupture des plaques vulnérabilisées. La vasoconstriction constitue donc un élément déterminant dans la rupture des plaques vulnérables. Les résultats de ce travail identifient le TXA2 comme étant une éventuelle cible thérapeutique pour prévenir les ruptures des plaques. D’autre part, les analyses par microscopie électronique à balayage de la thrombose in vivo, et les analyses en microscopie électronique en transmission (MET) de l’ultrastructure des plaquettes agrégées in vitro, ont montré que les plaquettes activées fusionnent entre elle permettant ainsi la cicatrisation de l’endothélium lésé. / Rupture of atherosclerotic plaques exposes sub-endothelial thrombogenic material to circulating platelets, frequently leads to thrombus formation. At present, the mechanisms behind plaque ruptures are not well understood. We studied the hypothesis that vasoconstriction induced by LTC4 or thromboxane A2 (TXA2) plays an important role in plaque rupture and formation of atherothombosis. We used scanning electron microscopy to study rupture of the plaque in detail. We were able to show that vasoconstriction leads to plaque rupture, but only after plaques have been vulnerabilized by high fat diet, or by exposure of mice to lipopolysaccharide extracted from bacterial membranes. We could also show that plaques produce TXA2. As consequence the absence of TP, a receptor for TXA2 in apoE-/- mice prevented rupture of vulnerable plaques. Vasoconstriction is hence a determining factor in the rupture of vulnerable plaques. Our work has identified TXA2 as a potential therapeutic target in preventing plaque rupture. Moreover, analysis of the thrombosis in vivo by scanning electron microscopy, and the in vitro study of the ultra structure of aggregated platelets by transmission electron microscopy, showed that activated platelets fuse together to heal the injured endothelium.

Le traitement antiplaquettaire à l’aspirine (ASA) est moins efficace chez certains patients coronariens, ce qui augmente leur risque de développer une thrombose. Des taux sanguins élevés de médiateurs thrombo-inflammatoires, tels que le sCD40L, peuvent expliquer de telles variabilités. Nous avons émis l’hypothèse que, en présence de taux élevés de sCD40L, l’efficacité de l’ASA peut être réduite. Ainsi, nous avons viser à déterminer les effets de l’ASA sur la signalisation et l’agrégation des plaquettes en présence de sCD40L. Les effets de l'ASA sur les plaquettes humaines traitées par le sCD40L, en réponse à des concentrations sub-optimales de collagène ou de thrombine, ont été évalués sur l'agrégation, la sécrétion de thromboxane A2 (TxA2) et la phosphorylation de la p38- « Mitogen-activated protein kinase » (MAPK), le facteur nucléaire-κB (NF-κB), la kinase activée par le TGF-β 1 (TAK-1) et la chaîne légère de la myosine (MLC). Le sCD40L a significativement augmenté la sécrétion de TxA2 dans les plaquettes, en réponse à des doses sub-optimales de collagène et de thrombine, ce qui a été inversé par l'ASA. L'ASA n'a pas inhibé la phosphorylation de p38-MAPK, NF-KB, TAK-1, que ce soit avec une stimulation par le sCD40L seul ou en présence des agonistes plaquettaires. Cependant, Le sCD40L a potentialisé l'agrégation plaquettaire, un effet complètement inversé et partiellement réduit par l'ASA en réponse au collagène et à la thrombine, respectivement. Les effets de l'ASA sur les plaquettes traitées par le sCD40L et stimulées par le collagène étaient liés à l'inhibition du changement de forme des plaquettes et la phosphorylation de la MLC. L'ASA n'affecte pas la signalisation du sCD40L dans les plaquettes, mais empêche son effet sur la sécrétion de TXA2 et l'agrégation plaquettaire en réponse au collagène, via un mécanisme impliquant l'inhibition de la MLC. Le ciblage de l'axe sCD40L dans les plaquettes peut avoir un potentiel thérapeutique chez les patients, présentant des taux élevés de sCD40L, qui ne répondent pas ou moins à l'ASA. / Antiplatelet therapy with Aspirin (ASA) is less efficient in some coronary patients, which increases their risk of developing thrombosis. Elevated blood levels of thrombo-inflammatory mediators, like sCD40L, may explain such variabilities. We hypothesized that in the presence of elevated levels of sCD40L, the efficacy of ASA may be reduced. Accordingly, this study was designed to determine the effects of ASA on sCD40L signalling and aggregation of platelets. The effects of ASA on sCD40L-treated human platelets, in response to suboptimal concentrations of collagen or thrombin, were assessed on aggregation, thromboxane A2 (TxA2) secretion, and phosphorylation of p38-MAPK, NF-κB, TGF-β-activated kinase 1 (TAK-1), and myosin light chain (MLC). sCD40L significantly elevated TxA2 secretion in platelets, in response to suboptimal doses of collagen and thrombin, which was reversed by ASA. ASA did not inhibit phosphorylation of p38-MAPK, NF-κB, TAK-1, either with sCD40L stimulation alone or with platelet agonists. However, sCD40L potentiated platelet aggregation, an effect completely reversed and partially reduced by ASA in response to collagen and thrombin, respectively. The effects of ASA in sCD40L-treated platelets with collagen were related to inhibition of platelet shape change and MLC phosphorylation. ASA does not affect platelet sCD40L signalling, but prevents its effect on TXA2 secretion and platelet aggregation in response to collagen, via a mechanism implying inhibition of MLC. Targeting sCD40L axis in platelets may have therapeutic potential in patients with elevated levels of sCD40L that are none or less responding to ASA.