Orientador: Maria Rita Pacheco / Coorientador: Silvana Martinez Baraldi Artoni / Banca: Daniela Oliveira / Banca: Otto Mack Junqueira / Resumo: A preocupação da indústria avícola em manter altos índices de produtividade e de segurança dos alimentos fez com que surgissem ações preventivas a fim de evitar a introdução de patógenos no sistema avícola. O uso de gentamicina associada à vacinação in ovo tem sido amplamente utilizada com essa finalidade. Neste particular, são escassas as informações disponíveis na literatura acerca da segurança clínica e alimentar da gentamicina quando aplicada in ovo. Diante disto, dois experimentos foram conduzidos para avaliar o efeito da administração da gentamicina em ovos de reprodutoras pesadas nos parâmetros físicos, hematológicos e bioquímicos, e também a permanência desse antimicrobiano nos tecidos de frangos de corte. No primeiro estudo, foram utilizados 200 ovos de matrizes da linhagem Cobb e, aos 18 dias de incubação, 100 ovos receberam apenas a vacina contra a doença de Marek (GC) e os outros 100 receberam a vacina juntamente com 0,22mg/ovo de sulfato de gentamicina (GT). Após o nascimento (D0), foram realizados exames físicos nos momentos D+3, D+6, D+10, D+14 e D+21 (3, 6, 10, 14 e 21 dias após o nascimento, respectivamente), assim como exames complementares em D+6, D+10, D+14 e D+21. Os parâmetros físicos compreenderam pesagem, avaliação da condição corpórea, comportamento, postura/marcha, respiração, apetite, excretas, penas e pele, bem como sinais de intoxicação. Quanto aos parâmetros laboratoriais, foram determinados o hemograma completo e as provas bioquímicas séricas [ureia, ácido úrico, aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase (ALT), gama glutamiltransferase (GGT), creatina quinase, albumina e proteínas plasmáticas totais]. Os resultados foram submetidos à análise estatística por meio do procedimento general Linear Models (GLM) do SAS com pós-teste de Tukey, considerando o nível de significância de 5%. Em ambos os grupos, todas as aves se apresentaram saudáveis... / Abstract: The concern of the poultry industry to maintain high levels of productivity and food security has spurred preventive actions in order to prevent the introduction of pathogens in the poultry system. The use of gentamicin associated with in ovo vaccination has been widely used for this purpose. In particular, there is little information available in the literature about the clinical and food safety of gentamicin when applied in ovo. Given this, two experiments were conducted to evaluate the effect of the administration of gentamicin in eggs of breeders in physical, hematological and biochemical parameters, as well as the permanence of this antimicrobial in broiler tissues. In the first study, 200 eggs of Cobb arrays were used and, in the 18th day of incubation, 100 eggs received only vaccination against Marek's disease (CG) and the other 100 received the vaccine with 0.22mg/egg of gentamicin sulfate (GT). After the birth (D0), physical examinations were performed at times D+3, D+6, D+10, D+14 and D+21 (3, 6, 10, 14 and 21 days after birth, respectively), as well as additional tests on D+6, D+10, D+14 to D+21. The physical parameters covered weighing, evaluation of body condition, behavior, posture/gait, breathing, appetite, feces, feathers and skin, as well as signs of intoxication. As for the laboratory parameters, the complete blood count and serum biochemical tests [urea, uric acid, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase (ALT), gamma glutamyl transferase (GGT), creatine kinase, albumin and total plasma proteins] were determined. The results were statistically analyzed using the General Linear Models Procedure (GLM) of SAS with Tukey's test, with a significance level of 5%. In both groups, all birds showed healthy throughout the study and the average body weight was not significantly different between GC and GT. In the complete blood count, despite variations within the same treatment, no significant differences between ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-23Bitstream added on 2014-06-13T20:21:52Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_am_dr_botfmvz_parcial.pdf: 86138 bytes, checksum: d515fed4a55e2525dda1d5a656ecfe36 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-02-04T11:39:27Z: carvalho_am_dr_botfmvz_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-02-04T11:40:12Z : No. of bitstreams: 1 000712006.pdf: 483818 bytes, checksum: c5b2ca06d97c52e38a0b52ec53856bd6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A lesão do tendão flexor digital superficial (TFDS) é uma importante causa de claudicação em equinos. Embora existam diversos tratamentos descritos, poucos são eficazes na melhora significativa da qualidade da matriz extracelular. Recentemente, diversos experimentos vêm focando no potencial terapêutico das células-tronco mesenquimais (CTMs) e do plasma rico em plaquetas (PRP) em casos de lesões de difícil cicatrização. O objetivo geral deste estudo foi a obtenção, cultivo e caracterização das células tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (AdCTMS), a adoção de uma nova técnica de indução de lesão tendínea utilizando colagenase em gel e a avaliação da reparação tendínea após terapia com a associação terapêutica de AdCTMs e PRP através da análise clínica, ultrassonográfica, histopatológica, imunoistoquímica (colágeno tipo III e fator VIII) e da expressão gênica (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX). Foi possível isolar e cultivar as AdCTMs, concluir sua caracterização através da diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica, além da confirmação da expressão destas células aos marcadores CD44, CD90 e CD105 na citometria de fluxo. A indução da lesão do TFDS foi realizada com sucesso, sendo observado na avaliação clínica e ultrassonográfica o desenvolvimento de tendinite focal similar a lesão de ocorrência natural. O uso das AdCTMs associadas ao PRP demonstrou ser viável e resultou na prevenção da progressão da área da lesão no grupo tratado na avaliação ultrassonográfica, maior fluxo sanguíneo do grupo tratado na avaliação com Power Doppler, e melhora da organização cicatricial, com diminuição do infiltrado inflamatório na avaliação histopatológica. Não foram observadas diferenças entre os grupos... / Superficial digital flexor tendon (SDFT) lesion is an important cause of lameness in horses. Although there are many treatments described, few are effective in maintain the quality of the extracellular matrix. Recently several studies have focused on the therapeutic potential of mesenchymal stem cells (MSCs) and platelet-rich plasma (PRP) in some damage tissues. The aim of this study was to perform the isolation, cultivation and characterization of mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (AdMSCs), the adoption of a new tendon lesion induction technique using collagenase in gel, and evaluation of tendon repair after treatment with the AdMSCs and PRP association by clinical, ultrasonographic, histopathological, immunohistochemical (collagen type III and factor VIII) and gene expression (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX) analysis. It was possible to isolate, cultivate and perform the characterization of AdMSCs by adipogenic, osteogenic, chondrogenic differentiation, and to confirm the expression of CD44, CD90 and CD105 cell markers on flow cytometry. The SDFT injury induction was successful observed in clinical and ultrasonographic evaluation, with development of focal lesion similar to naturally occurring. The use of AdMSCs and PRP association proved to be feasible and resulted in preventing the progression of the lesion area in the treated group on ultrasound evaluation, increased blood flow on the Power Doppler evaluation and decreased inflammatory infiltrate and improved the organization on histopathological evaluation. No differences were observed between the groups regarding the immunohistochemistry evaluation and the expression of the tested genes. It can be concluded based on the results observed: (1) that the AdMSCs were properly processed and characterized with the methods employed; (2) tendon.. (Complete abstract click electronic access below)

O pericárdio bovino é um tecido biológico utilizado na fabricação de vários produtos para a saúde e também em válvulas cardíacas desde o início da década de setenta, porém, ainda requer estudos mais aprofundados no que diz respeito às mudanças que os tratamentos químicos utilizados para confecção das válvulas ocasionam. Atualmente a engenharia de tecidos estuda a descelularização do pericárdio bovino como um processo para retirar os componentes celulares, mantendo intacta a matriz extracelular (MEC), preservando a integridade do colágeno e também pode atuar como anticalcificante. Porém, é necessário saber qual o impacto que o tratamento químico trará nas propriedades mecânicas do tecido, como tensão máxima, deformação específica e alongamento. Nos trabalhos observados, os testes mecânicos realizados nos pericárdios bovinos descelularizados foram feitos no tecido sem serem submetidos a uma pré-tensão, a qual é necessária na maioria das vezes, para formação das cúspides durante a confecção das válvulas cardíacas ou outro dispositivo médico. Por essa razão, foi realizado um estudo do efeito na propriedade mecânica que uma determinada pressão exerce sobre o pericárdio bovino, que passou pelo processo de descelularização. Em paralelo também foi feito uma avaliação histológica do tecido para verificar a ausência de células e a preservação das fibras de colágeno no tecido descelularizado. Foram preparados quatro grupos diferentes para a realização dos testes. O grupo I chamado de grupo controle. O grupo II, onde os pericárdios foram descelularizados com o método PUC I. O grupo III foi tratado como o grupo I, porém sob pressão de 240 mmHg. Já o grupo IV, os pericárdios foram descelularizados e em seguida submetidos à mesma pressão utilizando solução de glutaraldeído 0,2% e 0,5%. Após os tratamentos dos grupos, todas as amostras foram tingidas em solução de azul de metileno 0,03% para melhor visualização das fibras do tecido. Em seguida os tecidos foram cortados a laser para obtenção dos corpos de prova e submetidos ao ensaio de tração. Obteve-se a partir do ensaio, a tensão máxima das amostras, a deformação específica e o alongamento na ruptura. Foi observado que nos grupos onde foram submetidos à pressão tiveram uma tensão máxima menor do que os grupos sem pressão e um maior alongamento. Verificou-se que o efeito da pressão diminuiu a espessura dos tecidos. O processo de descelularização se mostrou eficaz uma vez que foi demonstrada a ausência de células e a preservação das fibras de colágeno após técnica utilizada. / The pericardium is a biological tissue used in the manufacture of various products for medical advices and manufacture of heart valves since the early seventies, however, it still requires further study with regard to the changes that the chemical treatments used to manufacture the valves cause. Several studies show that the tissue often undergoes a process of calcification generated by mechanical stress of opening and closing of the leaflets, damaging the hydrodynamics making valvular replacement necessary. Currently tissue engineering study decellularization process of the bovine pericardium to remove cellular components while preserving the extracellular the matrix (ECM), preserving the integrity of collagen it and can also act as anti-calcification. However, one must know the impact that chemical treatment will bring on the mechanical properties of the tissue, such as tensile strength, strain and elongation percentage. In examined studies, the mechanical tests performed on bovine pericardium decellularized tissue was made without being subjected to a pre-tension which is necessary in most cases for formation of the leaflets during the manufacturing of heart valves. For this reason, a study of the effect on mechanical property that a certain pressure exerts on the pericardium, which passed the decellularization process was made. In parallel it was also made a histological evaluation of the tissue to verify the absence of cells and preservation of collagen fibers in decellularized tissue. Four different groups were prepared for test. The group I was called a control group. In group II, the pericardia were decellularized with the PUC method I. Group III was treated as group I, but under pressure of 240 mmHg. The group IV, the pericardia were decellularized and then subjected to pressure using glutaraldehyde 0.2% and 0.5%. After treatment of the groups, all samples were stained in a solution of blue methylene 0.03% for better visualization of the fibers of the tissue. Then the tissues were cut by laser to obtain the specimens and subjected to tensile test. It was obtained from the test, the tensile strength of the samples, the strain and elongation percentage at break. It is observed that the groups which underwent pressure had a lower tensile strength than those without pressure and on the other hand showed a greater elongation percentage. Thus, it can be verified that the effect of the pressure decreased the thickness of the tissues. The decellularization process has show efficient since it has demonstrated the absence of cells and preservation of collagen fibers after technique.

Orientador: Luiz de Souza Corrêa / Banca: Kuniko Iwamoto Haga / Banca: Heloiza Ferreira Alves do Prado / Banca: Fabiano Guimarães Silva / Banca: Flávia Dionísio Pereira / Resumo: A figueira (Ficus carica L.), pertencente à família Moracea, é uma frutífera de grande expansão mundial, constitui-se numa das mais importantes frutíferas cultivadas, elevando o Brasil à condição de décimo produtor e exportador de figos do mundo. Porém, a ficicultura tem alguns problemas fitossanitários como insetos pragas e doenças como nematóides e viroses, patógenos esses que se encontram presentes em grande parte dos plantios comerciais e, juntamente com a propagação exclusivamente vegetativa, pelo método da estaquia, contribuem para disseminação dos mesmos, reduzindo a qualidade final das mudas, as quais contribuem de modo marcante para a redução da produção por área, bem como da área plantada. A utilização de mudas de alta qualidade é um dos requisitos mais importantes para implantação de pomares com maior longevidade e elevada produtividade. Assim, a propagação in vitro pode auxiliar na produção eficiente de mudas de figueira com alta qualidade fitossanitária e genética. Entretanto, para a cultura da figueira, são escassos os trabalhos realizados in vitro, conhecendo-se pouco sobre o comportamento da planta, e principalmente como é realizado o estabelecimento desta, de forma que a maioria dos trabalhos já realizados por outros autores utilizam plantas já estabelecidas in vitro, tornandose necessários outros ensaios, buscando a otimização de um protocolo para micropropagação da figueira. Objetivou-se com este trabalho estabelecer um protocolo de propagação in vitro por meio de gemas apicais, envolvendo as etapas de desinfestação, multiplicação e enraizamento in vitro da figueira (Ficus carica L.) / Abstract: The fig (Ficus carica L.) belonging to the Moraceae family, is a fruit of great global expansion, it constitutes one of the most important fruit crops, bringing Brazil to the position of the tenth largest producer and exporter of figs in the world. However, ficicultura presents some problems as plant diseases and insect pests as nematodes and viruses, these pathogens that are present in most commercial crops, and together with exclusively vegetative propagation by the method of cutting, contributing to the spread of these, reducing the final quality of seedlings, which contribute markedly to the reduction of production per hectare and area planted. The use of high quality seedlings is one of the most important requirements for implementation of orchards with greater longevity and high productivity. Thus, in vitro propagation can assist in efficient production of fig seedlings with high quality and plant genetics. However, for the cultivation of the fig tree, there are few studies performed in vitro, knowing little about the plant behavior, and especially how this is done setting so that most of the work already done by other authors using already established plants in vitro, making it required further testing, trying to optimize a protocol for micropropagation of fig. This study aimed to establish a protocol for in vitro propagation through apical buds, involving the steps of disinfection, in vitro multiplication and rooting of fig (Ficus carica L.) / Doutor

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-10-09T11:45:21Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 9861287 bytes, checksum: d1920707baa642d6539a70010fd3dadd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-09T11:45:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 9861287 bytes, checksum: d1920707baa642d6539a70010fd3dadd (MD5) Previous issue date: 1997-02-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Três meios de cultivo foram testados com o objetivo de avaliar o mais indicado para o desenvolvimento e crescimento das variedades Baraka, Bintje e Contenda. Utilizaram-se o meio MS suplementado com sacarose 3% e vitaminas, o meio MS com sacarose 3%, vitaminas e ácido giberélico 1,4 umol/ L e o meio MS modificado. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, com seis repetições e cinco plantas por parcela. Plãntulas no meio MS + GAs apresentaram a maior média de número de folhas definitivas e também maior média de comprimento de parte aérea para todas as variedades. Para determinar a concentração ideal de picloram à indução de calejamento, um experimento foi realizado, testando-se as seguintes concentrações: 0,0; 0,0165; 0,165; e 1,65 pmol/L por 32 dias. O melhor resultado foi obtido com 1,65 pmol/ L. Calos foram induzidos, usando-se folha e caule como explantes das variedades comerciais Baraka, Bintje, Contenda, Baronesa e Achat em meio MS suplementado tanto com picloram 1,65 “mol/L quanto com 2,4-D 11,5 umol/L. Após 70 e 90 dias de calejamento, os DNAs das 40 amostras de calos foram analisados num estudo comparativo entre as duas fontes de explantes das cinco variedades e de ambos os reguladores de crescimento. Para isso, 20 “primers” de sequência arbitrária foram testados. Para a variedade Baraka, caule como explante, picloram e 90 dias de calejamento foram os tratamentos que induziram a maior variação somaclonal. Para Bintje, os tratamentos foram folha, picloram e 70 dias. Dos 20 “primers” testados, 14 apresentaram polimorfismo para a variedade Contenda quando submetida ao tratamento que utilizou caule como explante, picloram e 70 dias de calejamento. Dentre os genótipos analisados, a variedade Baronesa apresentou o maior número de fragmentos polimórficos para todos os tratamentos. A variedade Achat mostrou-se mais suscetível a variação somaclonal quando submetida aos tratamentos que utilizaram 2,4-D, 90 dias de calejamento e tanto caule e folha como explante. O maior tempo de cultivo não teve grande influência na variação somaclonal da maioria das variedades, exceto “Baraka” e “Achat'. O fator genótipo foi o mais importante, pois cada variedade teve desempenho distinto do das outras, no que concerne à taxa de variação somaclonal. / No sumario consta o abstract, mas a pagina não esta na tese.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2007 / Bibliografia: p. 81-90 / A reparação tecidual consiste em uma das características mais importantes dos seres vivos. Alguns fatores podem reduzir, retardar ou impedir este processo. Recursos como o LASER e a estimulação elétrica são indicados na aceleração do processo de cicatriza / The tissue repairing consists of one of the most important characteristics of the livings beings. Some factors can reduce, delay or hinder this process. Resources as LASER and electrical stimulation are indicated in the acceleration of the tissue repairin

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-21Bitstream added on 2014-06-13T19:46:24Z : No. of bitstreams: 1 palu_eg_dr_ilha.pdf: 415663 bytes, checksum: c997c1abd6761572ffe769e2c15fcb03 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A figueira (Ficus carica L.), pertencente à família Moracea, é uma frutífera de grande expansão mundial, constitui-se numa das mais importantes frutíferas cultivadas, elevando o Brasil à condição de décimo produtor e exportador de figos do mundo. Porém, a ficicultura tem alguns problemas fitossanitários como insetos pragas e doenças como nematóides e viroses, patógenos esses que se encontram presentes em grande parte dos plantios comerciais e, juntamente com a propagação exclusivamente vegetativa, pelo método da estaquia, contribuem para disseminação dos mesmos, reduzindo a qualidade final das mudas, as quais contribuem de modo marcante para a redução da produção por área, bem como da área plantada. A utilização de mudas de alta qualidade é um dos requisitos mais importantes para implantação de pomares com maior longevidade e elevada produtividade. Assim, a propagação in vitro pode auxiliar na produção eficiente de mudas de figueira com alta qualidade fitossanitária e genética. Entretanto, para a cultura da figueira, são escassos os trabalhos realizados in vitro, conhecendo-se pouco sobre o comportamento da planta, e principalmente como é realizado o estabelecimento desta, de forma que a maioria dos trabalhos já realizados por outros autores utilizam plantas já estabelecidas in vitro, tornandose necessários outros ensaios, buscando a otimização de um protocolo para micropropagação da figueira. Objetivou-se com este trabalho estabelecer um protocolo de propagação in vitro por meio de gemas apicais, envolvendo as etapas de desinfestação, multiplicação e enraizamento in vitro da figueira (Ficus carica L.) / The fig (Ficus carica L.) belonging to the Moraceae family, is a fruit of great global expansion, it constitutes one of the most important fruit crops, bringing Brazil to the position of the tenth largest producer and exporter of figs in the world. However, ficicultura presents some problems as plant diseases and insect pests as nematodes and viruses, these pathogens that are present in most commercial crops, and together with exclusively vegetative propagation by the method of cutting, contributing to the spread of these, reducing the final quality of seedlings, which contribute markedly to the reduction of production per hectare and area planted. The use of high quality seedlings is one of the most important requirements for implementation of orchards with greater longevity and high productivity. Thus, in vitro propagation can assist in efficient production of fig seedlings with high quality and plant genetics. However, for the cultivation of the fig tree, there are few studies performed in vitro, knowing little about the plant behavior, and especially how this is done setting so that most of the work already done by other authors using already established plants in vitro, making it required further testing, trying to optimize a protocol for micropropagation of fig. This study aimed to establish a protocol for in vitro propagation through apical buds, involving the steps of disinfection, in vitro multiplication and rooting of fig (Ficus carica L.)

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:39:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2024686 bytes, checksum: 927a0cecb4bcec1327a0e0c20f95445e (MD5) Previous issue date: 2011-07-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Somatic embryogenesis is the process of development of embryos from somatic cells. The aim of this study was to evaluate the efficiency of growth regulators at different stages of somatic embryogenesis of three cultivars of sugarcane, RB 867515, RB928064 e RB925345, and characterize the effects of in vitro treatments of the anatomical development of somatic embryos. Embryogenic calluses were obtained after inoculation of immature leaves arising from lateral buds on MS medium plus 30g.L sucrose, 2.5 g.L agar and different concentrations of 2,4-D, Dicamba and CPA (5,10,15 and 20 mM). After 30 days of induction it showed that the dose of 20μM 2, 4-D was the concentration that induced the highest percentage of callus, 36.95%, and callus were compact and whitish. The calluses were subcultured in the same medium for 30 days and after this period, the callus were transferred to medium with low concentration of 2,4-D (0.5 mg.L-1) to obtain globular pro-embryos. The globular pro-embryos were transferred to multiplication medium and after 30 days were transferred to maturation medium. osmotic regulators were tested, mannitol and sucrose (30, 60 and 90 gL) and ABA (0 and 5 mM). The embryos were transferred to regeneration medium containing 1 mg. L-1 BAP and GA3. The embryos that were in the medium with 30g. L-1, with ABA when transferred to regeneration medium formed healthy and vigorous plants. The histochemical Blue Evans test and Carmine Acetic confirmed the embryogenic of the material. The anatomical study of the process of somatic embryogenesis in leaf explants of sugar cane showed the emergence of callus from the epidermis, which in more advanced stages (globular embryos) easily detached from the explant. It was evident the presence of a well-defined protoderms, isodiametric cells with prominent nuclei and nucleoli and high nucleus / cytoplasm ratio. In the later stages were observed the basal and apical meristem well defined, bounded by a protoderm and immersed in a mass of vacuolated cells, assuming one is in the process of somatic embryo formation. At the end of 30 days in maturation, it was observed a bipolar structure, consisting of stem and root apices, which had a closed vascular system, without connection to the adjacent tissue, confirming the presence of the somatic embryo. / A embriogênese somática é o processo de desenvolvimento de embriões a partir de células somáticas. O objetivo desse trabalho foi avaliar a eficiência de reguladores de crescimento nas diferentes fases da embriogênese somática de três cultivares de cana-de- açúcar, RB 867515, RB928064 e RB925345, e caracterizar os efeitos dos tratamentos in vitro no desenvolvimento anatômico dos embriões somáticos. Foram obtidos calos embriogênicos após inoculação de folhas imaturas advindas de gemas laterais em meio MS acrescido de 30g.L de sacarose, 2,5g.L de ágar e diferentes concentrações de 2,4-D, Dicamba e CPA (5,10,15 e 20 μM). Aos 30 dias após indução verificou-se que a dose de 20μM de 2,4-D foi a dose que induziu maior porcentagem de calos embriogênicos, 36,95%, sendo que estes calos tinham aspecto compacto e eram de coloração esbranquiçada. Os calos foram subcultivados no mesmo meio por mais 30 dias e após esse período, os calos embriogênicos obtidos foram transferidos para meio com baixa concentração de 2,4-D (2,26μM) para obtenção de embriões globulares. Os embriões globulares foram transferidos para meio de multiplicação composto do memso meio de indução, acrescido de três diferentes doses de AIA (6, 12 e 24 μL/placa) e foi observada diferença significativa entre as variedades testadas, sendo que na maior dose ocorreu maior multiplicação de calos embriogênicos. Após 30 dias foram transferidos para meio de maturação, onde foram testados os reguladores osmóticos, manitol e sacarose (30, 60 e 90 g.L) e o ABA (0 e 5 μM). Os embriões viáveis foram transferidos para meio de regeneração, contendo 1mg. L-1 de BAP e GA3. Os embriões somáticos que estavam em meio com 30g. L-1, com ABA quando transferidos para meio de regeneração formaram plântulas sadias e vigorosas. O teste histoquímico azul de Evans e carmim acético confirmaram a natureza embriogênica do material. O estudo anatômico do processo de embriogênese somática em explantes foliares de cana-de-açúcar evidenciou o surgimento de calos embriogênicos a partir da epiderme, que em estágios mais avançados (embriões globulares) se desprendiam facilmente do explante. Era evidente a presença de uma protoderme bem definida, células isodiamétricas, com núcleo e nucléolo proeminentes e alta relação núcleo/citoplasma. Nos estágios posteriores foi possível observar uma estrutura apresentando meristema apical e basal bem definido, delimitada por uma protoderme e imersa em uma massa de células vacuolizadas, supondo ser um embrião somático em processo de formação. Ao final dos 30 dias em meio de maturação foi observada uma estrutura bipolar, constituída de ápices caulinar e radicular, que apresentava um sistema vascular fechado, sem conexão com os tecidos adjacentes, confirmando ser um embrião somático.

Orientador: Ana Liz Garcia Alves / Coorientador: Carlos Alberto Hussni / Banca: Alexandre Secorun Borges / Banca: Elenice Deffune / Banca: Anna Paula Balesdent Barreira / Banca: Rafael Resende Faleiros / Resumo: A lesão do tendão flexor digital superficial (TFDS) é uma importante causa de claudicação em equinos. Embora existam diversos tratamentos descritos, poucos são eficazes na melhora significativa da qualidade da matriz extracelular. Recentemente, diversos experimentos vêm focando no potencial terapêutico das células-tronco mesenquimais (CTMs) e do plasma rico em plaquetas (PRP) em casos de lesões de difícil cicatrização. O objetivo geral deste estudo foi a obtenção, cultivo e caracterização das células tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (AdCTMS), a adoção de uma nova técnica de indução de lesão tendínea utilizando colagenase em gel e a avaliação da reparação tendínea após terapia com a associação terapêutica de AdCTMs e PRP através da análise clínica, ultrassonográfica, histopatológica, imunoistoquímica (colágeno tipo III e fator VIII) e da expressão gênica (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX). Foi possível isolar e cultivar as AdCTMs, concluir sua caracterização através da diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica, além da confirmação da expressão destas células aos marcadores CD44, CD90 e CD105 na citometria de fluxo. A indução da lesão do TFDS foi realizada com sucesso, sendo observado na avaliação clínica e ultrassonográfica o desenvolvimento de tendinite focal similar a lesão de ocorrência natural. O uso das AdCTMs associadas ao PRP demonstrou ser viável e resultou na prevenção da progressão da área da lesão no grupo tratado na avaliação ultrassonográfica, maior fluxo sanguíneo do grupo tratado na avaliação com Power Doppler, e melhora da organização cicatricial, com diminuição do infiltrado inflamatório na avaliação histopatológica. Não foram observadas diferenças entre os grupos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Superficial digital flexor tendon (SDFT) lesion is an important cause of lameness in horses. Although there are many treatments described, few are effective in maintain the quality of the extracellular matrix. Recently several studies have focused on the therapeutic potential of mesenchymal stem cells (MSCs) and platelet-rich plasma (PRP) in some damage tissues. The aim of this study was to perform the isolation, cultivation and characterization of mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (AdMSCs), the adoption of a new tendon lesion induction technique using collagenase in gel, and evaluation of tendon repair after treatment with the AdMSCs and PRP association by clinical, ultrasonographic, histopathological, immunohistochemical (collagen type III and factor VIII) and gene expression (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX) analysis. It was possible to isolate, cultivate and perform the characterization of AdMSCs by adipogenic, osteogenic, chondrogenic differentiation, and to confirm the expression of CD44, CD90 and CD105 cell markers on flow cytometry. The SDFT injury induction was successful observed in clinical and ultrasonographic evaluation, with development of focal lesion similar to naturally occurring. The use of AdMSCs and PRP association proved to be feasible and resulted in preventing the progression of the lesion area in the treated group on ultrasound evaluation, increased blood flow on the Power Doppler evaluation and decreased inflammatory infiltrate and improved the organization on histopathological evaluation. No differences were observed between the groups regarding the immunohistochemistry evaluation and the expression of the tested genes. It can be concluded based on the results observed: (1) that the AdMSCs were properly processed and characterized with the methods employed; (2) tendon.. (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-06-15T17:26:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1210635 bytes, checksum: faa77275e981ba4294b9cf265ef13720 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-15T17:26:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1210635 bytes, checksum: faa77275e981ba4294b9cf265ef13720 (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O tecido muscular é um dos tecidos de maior importância ao nível de produção animal, tendo-se em vista o fornecimento de micronutrientes e proteínas para o consumo humano. A miogênese é o processo responsável pela formação e manutenção do tecido muscular, sendo influenciado por fatores genéticos e ambientais. Nesse sentido, pesquisas nas áreas de genética e nutrição têm contribuído de forma expressiva para a produção de animais mais eficientes e, consequentemente, produtivos. A utilização de agonistas β-adrenérgicos é uma importante estratégia neste processo, uma vez que os aditivos participam da repartição energética dos nutrientes dietéticos, contribuindo para o anabolismo do tecido muscular. As vias de sinalização intracelular AMPK (proteína quinase ativada por AMP) e mTOR (proteína alvo da rapamicina em mamíferos) são sensíveis ao status energético e exercem grande influência sobre o desenvolvimento e crescimento muscular. No entanto, poucas pesquisas têm sido desenvolvidas a fim de elucidar os mecanismos moleculares pelos quais os agonistas β-adrenérgicos atuam sobre o anabolismo do tecido muscular. As técnicas de cultivo celular se caracterizam como um importante modelo de estudos dos mecanismos moleculares envolvidos na sinalização intracelular para a manifestação de um fenótipo de interesse. No presente trabalho, a utilização do agonista β-adrenérgico ractopamina aumentou a viabilidade de mioblastos C2C12, regulando o status energético via AMPK, reduzindo, dessa forma, a apoptose das células. Portanto, sugere-se que o fenótipo muscular observado na presença de ractopamina deve-se, em partes, à atuação do aditivo sobre vias de sinalização intracelular que regulam a expressão de importantes genes envolvidos no anabolismo de células miogênicas. / One of the most important tissues in animal production is muscle tissue, due to supply of micronutrients and proteins for human consumption. Myogenesis is the process involved in the development and maintenance of muscle tissue, being influenced by genetic and environmental factors. Therefore, researches in the areas of genetics and nutrition have contributed significantly to the production of more efficient and consequently, productive animals. The use of β-adrenergic agonists is an important strategy in this process, because the additives participate in energy distribution of dietary nutrients, contributing to anabolism of muscle tissue. AMPK (protein kinase AMP-activated) and mTOR (mammalian target protein of rapamycin) are important intracellular signaling pathways sensitive to energy status and exert great influence on development and growth of muscle tissue. However, few studies have been developed to elucidate the molecular mechanisms by which β-adrenergic agonists act on muscle tissue anabolism. Cell culture techniques are characterized as an important model for molecular mechanisms studies involved in the intracellular signaling to manifestation of the phenotype of interest. In the present study, the use of the β-adrenergic agonist ractopamine increased the viability of C2C12 myoblasts, regulating energetic status via AMPK, reducing, this way, cellular apoptosis. Therefore, these results suggest that the muscle phenotype observed in the presence of ractopamine is in part due to the action of the additive on intracellular signaling pathways that regulate the expression of important genes involved in myogenic anabolism.