O diagnóstico precoce de tumores e metástase constitui atualmente o elemento de maior impacto dentro das políticas de saúde públicas contra o câncer. No câncer de mama e melanoma, a técnica de biópsia de linfonodo sentinela, para o diagnostico de metástase, tem sido muito utilizada evitando a dissecção total dos nodos da região anatômica afetada, e permitindo definir com precisão o procedimento terapêutico a utilizar. O objetivo principal deste trabalho centrou-se no desenvolvimento de conjugados radiomarcados de dextran-manose para diagnóstico, utilizando o núcleo de tecnécio altamente estável, [99mTc(CO)3]+. A cisteína, ligante tridentado, foi incorporada na estrutura dos conjugados, como agente quelante do Tecnécio-99m. As condições de marcação definidas para os produtos avaliados garantiram altos valores de pureza radioquímica (>90%) e atividade específica (>59,9 MBq/nmol) assim como uma alta estabilidade in vitro. Os conjugados de dextran-cisteína-manose demonstraram uma captação superior (4 vezes maior) nos nodos linfáticos em relação aos homólogos que não possuíam manose na estrutura. O conjugado de dextran-cisteína-manose de 30 kDa radiomarcado (99mTc-DCM2) foi o traçador com melhor desempenho biológico entre os avaliados à diferentes atividades injetadas. Demonstrou-se que concentrações superiores a 1 M favorecem a retenção do produto nos nodos linfáticos. As comparações com radiofármacos já utilizados no Brasil (Dextran-500 e Fitato) para detecção de linfonodo sentinela evidenciaram a superioridade do 99mTc-DCM2. / Early diagnosis of tumors and metastasis is the current cornerstone in public health policies directed towards the fights against cancer. In breast cancer and melanoma, the sentinel lymph node biopsy has been widely used for diagnoses of metastasis. The minor impact in patient of this technique compared with total nodes dissection and the accurate definition of therapeutic strategies have powered its spreading. The aim of this work was the development of radiolabeled dextran-mannose conjugates for diagnosis using the stable technetium core [99mTc(CO)3]+. Cysteine, a trident ligand, was attached to the conjugates backbone, as a chelate for 99mTc labeling. Radiolabeling conditions established for all products considered in this study showed high radiochemical purities (> 90%) and specific activities (>59,9 MBq/nmol) as well and high stability obtained through in vitro tests. The lymphatic node uptake increased significantly (4-folds) when mannose units were added to the conjugates compared with those without this monosaccharide. The radiolabeled cysteine-mannose-dextran conjugate with 30 kDa (99mTc-DCM2) showed the best performance at different injected activities among the studied tracers. Concentrations of this radiocomplex higher than 1 M demonstrated an improvement of lymph node uptakes. Comparisons of 99mTc-DCM2 performance with commercial radiopharmaceuticals in Brazil market for lymph node detection showed its upper profile.

A radiomarcação de biomoléculas específicas com o tecnécio-99m 99mTc utilizando agentes quelantes bifuncionais é um campo em crescimento na Medicina Nuclear. Em especial, a classe de peptídeos regulatórios, como a Neurotensina, participa de processos fisiológicos essenciais no organismo, como o crescimento tumoral. O objetivo do presente trabalho foi o estudo comparativo da influência dos agentes quelantes bifuncionais 6-hidrazinonicotinamida (HYNIC) e S-acetil-mercaptoacetiltriglicina (MAG3), no comportamento in vitro e in vivo do análogo duplamente estabilizado da Neurotensina(8-13) radiomarcado com 99mTc, em células tumorais de mama da linhagem MDA-MB-231. Um elevado rendimento radioquímico (> 97%) e estabilidade frente aos agentes transquelantes foi observado para ambos análogos radiomarcados. Foram também obtidos comportamentos similares in vitro, no que diz respeito à porcentagem de ligação às proteinas plasmáticas (aproximadamente 22%), estabilidade metabólica, ligação aos receptores celulares (intervalo nM) e taxas de internalização/externalização para ambos radiocomplexos. A maior lipofilicidade encontrada para o análogo radiomarcado via MAG3 refletiu nas principais diferenças nos estudos de biodistribuição. A degradação do análogo radiomarcado via HYNIC nos estudos de estabilidade metabólica in vivo aos 90 min levou a menor retenção tumoral (0,44±0,02% DI/g), e consequentemente, às menores razões tumor/órgãos não-alvos (< 5%). Embora a superioridade do traçador marcado via MAG3 tenha sido comprovada no presente estudo, um redesenho estrutural objetivando contornar a alta captação no trato gastrointestinal deve ser realizada a fim de que sua potencial aplicabilidade não seja comprometida. / The radiolabeling of receptor specific biomolecules with 99mTc using bifunctional chelator agents represents a growing field in Nuclear Medicine, specially, regarding regulatory peptides, such as Neurotensin, which are important in several essential physiological functions, particularly in tumor growth. The aim of the study was the comparative radiolabeling evaluation of the double-stabilized NT(8-13) analog with 99mTc, via the bifunctional chelating agents 6- hydrazinonicotinamide (HYNIC) and S-acetyl-mercaptoacetyltriglycine (MAG3) in MDA-MB-231 breast cancer cell line. High radiochemical yields (> 97%) and stability toward transchelant agents was observed for both radiolabeled analogs. Also, comparable in vitro behaviour regarding the percentage of plasma protein binding (nearby 22%), metabolic stability, receptor binding affinity (nM range), and internalization/externalization rates were obtained. The greater lipophilicity found for the analog radiolabeled via MAG3, reflected in the major differences in biodistribution studies. The in vivo metabolic stability studies suggested that the degradation observed in the later time point (90 min) for the conjugate radiolabeled via HYNIC, leads not only to lower tumor uptake accumulation (0,44±0,02% ID/g), but also to lower tumor-to-non-tumor ratios (< 5%). Although the superiority of the tracer radiolabeled via MAG3 had been confirmed in the present study, a strucutural re-design aiming the reduction of the high gastrointestinal uptake must be done in order to guarantee the potential applicability of MAG3-radiocomplex.

Nos últimos 15 anos a utilização do complexo [[99mTc](H2O)3(CO)3]+ como intermediário para obtenção de radiofármacos de [99mTc]tecnécio, para aplicações em cardiologia, neurologia e oncologia tem se tornado mais intensa devido a facilidade de obtenção a partir de soluções aquosas e a facilidade de substituição das moléculas de H2O por átomos ligantes de outras moléculas. Neste projeto preparamos novos complexos do tipo [[99mTc](CMNS001-3)(H2O)(CO)3]+, onde (CMNS001) = N-[(4-metoxi)benzil]-1,2- diaminoetano e (CMNS003)= N,N\'-bis-[(4-metoxi)benzil]-1,2-diaminoetano e avaliamos a captação desses complexos, mais o radiofármaco [[99mTc](MIBI)6]+, utilizado como referência, em linhagens tumorais de melanoma (B16F10) e de mama (MCF-7 e MDA-MB-231). A captação in vitro de ambos derivados [[99mTc](CMNS001-3)(H2O)(CO)3]+ atingiu valores próximos a 5 % do total da dose inoculada, tendo sido superior ao 1 % obtidos com o [[99mTc](MIBI)6]+. A avaliação da distribuição subcelular mostrou concentração de dos novos complexos ocorre na fração da membrana, para a linhagem MDA-MB-231, enquanto para a linhagem B16F10 observamos uma concentração semelhante entre membrana celular e citoplasma, a concentração do [[99mTc](MIBI)6]+ em maior proporção no citoplasma. Estudo de biodistribuição em camundongos permitiram observar a captação máximo de 1,6 % da dose administrada por grama de tecido tumoral, para o complexo [[99mTc](CMNS001)(H2O)(CO)3]+, enquanto que outros órgão como coração, pulmão e músculo, apresentaram captação da ordem de 5,6 %, 6,4% e 2 %, respectivamente. Os complexos desenvolvidos neste trabalho mostraram alta taxa de captação in vitro, mas que não foi reproduzida no modelo in vivo, o qual pode estar relacionado à baixa concentração dos complexos no interior das células e a menor vascularização do tecido tumoral, com menor aporte dos complexos através do sistema sanguíneo. / Over least 15 years the complex [[99mTc](H2O)3(CO)3]+ has been used as an intermediary to obtain technetium radiopharmaceuticals for applications in cardiology, neurology and oncology. Two important characteristics of this molecule are the easily that compound is obtained from aqueous solutions and the ease of substitution of H2O molecules by atoms of other ligand molecules. In this project we prepared new complexes [[99mTc](CMNS001-3)(H2O)(CO)3]+, where (CMNS001) = N-[(4-methoxy) benzyl]-1,2-diaminoethane, (CMNS003) = N,N\'- bis-[(4-methoxy)benzyl]-1,2-diaminoethane, and assessed the uptake of these complexes in murine melanoma cancer cell B16F10 and breast cells MCF-7 and MDA-MD-231, and compared with [[99m](MIBI)6]+ uptake. In vitro uptake for both new technetium complex reached values close to 5%, for all cell lines, whereas the [[99mTc](MIBI)6]+ uptake was close to 1 %. The assessment of subcellular distribution showed high accumulation of the new complex in the membrane fraction, for MDAMB- 231, while for B16F10 accumulation occurred both in membrane and cytoplasm; the concentration of [[99mTc](MIBI)6]+ was mainly in the cytoplasm portion. Biodistribution study in mice allowed to observe the capture of up to 1.6% of the administered dose per gram of tumor tissue for the complex [[99mTc](CMNS001)(H2O)(CO)3]+, whereas other organs such as heart, lung and muscle, showed uptake of about 5.6%, 6.4% and 2%, respectively. The complexes in this work showed a high rate of uptake in vitro, but was not reproduced in vivo model, which can be related to low concentration of the complexes inside the cells and reduced vascularity of tumor tissue, with lower intake of complex through the blood system.

Diagnóstico precoce e tratamento de melanoma, um tumor cutâneo com o pior prognóstico, é extremamente importante para um resultado clínico favorável. A biblioteca de peptídeos phage display é um recurso útil de triagem para identificar peptídeos bioativos que interagem com alvos em cânceres. O objetivo desse estudo foi a avaliação de dois traçadores de tecnécio-99m com sequências peptídicas RGD e NGR, conjugados com o quelante bifuncional MAG3. Os conjugados peptídicos (10 &mu;L de uma solução &mu;g/&mu;L) foram marcados com tecnécio-99m usando tampão de tartarato de sódio. A avaliação radioquímica foi feita por ITLC e confirmada por CLAE. O coeficiente de partição foi determinado e ensaios de internalização foram realizados em duas linhagens celulares de melanoma (B16F10 e SKMEL28). A avaliação da biodistribuição dos traçadores foi realizada em animais sadios em diferentes tempos e também em camundongos portadores de células tumorais aos 120 min após a sua administração. Estudos de bloqueamento também foram conduzidos pela co-injeção de peptídeo frio. O desempenho dos conjugados peptídicos mostraram-se bastante parecidos em diversas avaliações. Eles foram radiomarcados com alta pureza radioquímica (>97%). Ambos são hidrofílicos, com excreção renal preferencial. A captação tumoral foi maior para células SKMEL28 do que para as células B16F10, especialmente para o 99mTc-MAG3-PEG8-c(RGDyK) (7,85±2,34 %DI/g) aos 120 min pós-injeção. O desempenho do 99mTc-MAG3-PEG8-c(RGDyk) foi superior que o do traçador com NGR, quanto à captação no melanoma humano podendo ser considerado como um promissor radiofármaco para diagnóstico de melanoma. / Early diagnosis and treatment of melanoma, a cutaneous tumor with a serious prognosis, is extremely important for optimal clinical outcome. Phage display peptide libraries are a useful screening resource for identifying bioactive peptides that interact with cancer targets. The aim of this study was the evaluation of two technetium-99m tracers for angiogenesis detection in melanoma model, using cyclic peguilated pentapeptide with RGD and NGR motifs conjugated with bifunctional chelator MAG3. The conjugated peptides (10 &mu;L of a &mu;g/&mu;L solution) were labeled with technetium-99m using a sodium tartrate buffer. Radiochemical evaluation was done by ITLC and confirmed by HPLC. Partition coefficient was determined and internalization assays were performed in two melanoma cells (B16F10 and SKMEL28). Biodistribution evaluation of the tracers was done in healthy animals at different times and also in mice bearing the tumor cells at 120 min post injection. Blocking studies were also conducted by co-injection of cold peptides. The conjugated showed the same profile in many evaluations. They were radiolabeled with high radiochemical purity (>97%). Both were hydrophilic, with preferential renal excretion. Tumor uptake was higher for human melanoma cells than for murinic melanoma cells, specially for 99mTc-MAG3-PEG8-c(RGDyK) (7.85±2.34 %ID/g) at 120 min post injection. The performance of 99mTc-MAG3-PEG8-c(RGDyk) was much better than NGR tracer concerning human melanoma uptake and might be considered in future investigations focusing radiotracers for melanoma diagnosis.

O diagnóstico precoce de tumores e metástase constitui atualmente o elemento de maior impacto dentro das políticas de saúde públicas contra o câncer. No câncer de mama e melanoma, a técnica de biópsia de linfonodo sentinela, para o diagnostico de metástase, tem sido muito utilizada evitando a dissecção total dos nodos da região anatômica afetada, e permitindo definir com precisão o procedimento terapêutico a utilizar. O objetivo principal deste trabalho centrou-se no desenvolvimento de conjugados radiomarcados de dextran-manose para diagnóstico, utilizando o núcleo de tecnécio altamente estável, [99mTc(CO)3]+. A cisteína, ligante tridentado, foi incorporada na estrutura dos conjugados, como agente quelante do Tecnécio-99m. As condições de marcação definidas para os produtos avaliados garantiram altos valores de pureza radioquímica (>90%) e atividade específica (>59,9 MBq/nmol) assim como uma alta estabilidade in vitro. Os conjugados de dextran-cisteína-manose demonstraram uma captação superior (4 vezes maior) nos nodos linfáticos em relação aos homólogos que não possuíam manose na estrutura. O conjugado de dextran-cisteína-manose de 30 kDa radiomarcado (99mTc-DCM2) foi o traçador com melhor desempenho biológico entre os avaliados à diferentes atividades injetadas. Demonstrou-se que concentrações superiores a 1 M favorecem a retenção do produto nos nodos linfáticos. As comparações com radiofármacos já utilizados no Brasil (Dextran-500 e Fitato) para detecção de linfonodo sentinela evidenciaram a superioridade do 99mTc-DCM2. / Early diagnosis of tumors and metastasis is the current cornerstone in public health policies directed towards the fights against cancer. In breast cancer and melanoma, the sentinel lymph node biopsy has been widely used for diagnoses of metastasis. The minor impact in patient of this technique compared with total nodes dissection and the accurate definition of therapeutic strategies have powered its spreading. The aim of this work was the development of radiolabeled dextran-mannose conjugates for diagnosis using the stable technetium core [99mTc(CO)3]+. Cysteine, a trident ligand, was attached to the conjugates backbone, as a chelate for 99mTc labeling. Radiolabeling conditions established for all products considered in this study showed high radiochemical purities (> 90%) and specific activities (>59,9 MBq/nmol) as well and high stability obtained through in vitro tests. The lymphatic node uptake increased significantly (4-folds) when mannose units were added to the conjugates compared with those without this monosaccharide. The radiolabeled cysteine-mannose-dextran conjugate with 30 kDa (99mTc-DCM2) showed the best performance at different injected activities among the studied tracers. Concentrations of this radiocomplex higher than 1 M demonstrated an improvement of lymph node uptakes. Comparisons of 99mTc-DCM2 performance with commercial radiopharmaceuticals in Brazil market for lymph node detection showed its upper profile.

Diagnóstico precoce e tratamento de melanoma, um tumor cutâneo com o pior prognóstico, é extremamente importante para um resultado clínico favorável. A biblioteca de peptídeos phage display é um recurso útil de triagem para identificar peptídeos bioativos que interagem com alvos em cânceres. O objetivo desse estudo foi a avaliação de dois traçadores de tecnécio-99m com sequências peptídicas RGD e NGR, conjugados com o quelante bifuncional MAG3. Os conjugados peptídicos (10 &mu;L de uma solução &mu;g/&mu;L) foram marcados com tecnécio-99m usando tampão de tartarato de sódio. A avaliação radioquímica foi feita por ITLC e confirmada por CLAE. O coeficiente de partição foi determinado e ensaios de internalização foram realizados em duas linhagens celulares de melanoma (B16F10 e SKMEL28). A avaliação da biodistribuição dos traçadores foi realizada em animais sadios em diferentes tempos e também em camundongos portadores de células tumorais aos 120 min após a sua administração. Estudos de bloqueamento também foram conduzidos pela co-injeção de peptídeo frio. O desempenho dos conjugados peptídicos mostraram-se bastante parecidos em diversas avaliações. Eles foram radiomarcados com alta pureza radioquímica (>97%). Ambos são hidrofílicos, com excreção renal preferencial. A captação tumoral foi maior para células SKMEL28 do que para as células B16F10, especialmente para o 99mTc-MAG3-PEG8-c(RGDyK) (7,85±2,34 %DI/g) aos 120 min pós-injeção. O desempenho do 99mTc-MAG3-PEG8-c(RGDyk) foi superior que o do traçador com NGR, quanto à captação no melanoma humano podendo ser considerado como um promissor radiofármaco para diagnóstico de melanoma. / Early diagnosis and treatment of melanoma, a cutaneous tumor with a serious prognosis, is extremely important for optimal clinical outcome. Phage display peptide libraries are a useful screening resource for identifying bioactive peptides that interact with cancer targets. The aim of this study was the evaluation of two technetium-99m tracers for angiogenesis detection in melanoma model, using cyclic peguilated pentapeptide with RGD and NGR motifs conjugated with bifunctional chelator MAG3. The conjugated peptides (10 &mu;L of a &mu;g/&mu;L solution) were labeled with technetium-99m using a sodium tartrate buffer. Radiochemical evaluation was done by ITLC and confirmed by HPLC. Partition coefficient was determined and internalization assays were performed in two melanoma cells (B16F10 and SKMEL28). Biodistribution evaluation of the tracers was done in healthy animals at different times and also in mice bearing the tumor cells at 120 min post injection. Blocking studies were also conducted by co-injection of cold peptides. The conjugated showed the same profile in many evaluations. They were radiolabeled with high radiochemical purity (>97%). Both were hydrophilic, with preferential renal excretion. Tumor uptake was higher for human melanoma cells than for murinic melanoma cells, specially for 99mTc-MAG3-PEG8-c(RGDyK) (7.85±2.34 %ID/g) at 120 min post injection. The performance of 99mTc-MAG3-PEG8-c(RGDyk) was much better than NGR tracer concerning human melanoma uptake and might be considered in future investigations focusing radiotracers for melanoma diagnosis.

O crescimento anual no número de procedimentos realizados em Medicina Nuclear se deve em primeiro lugar à vantagem de não serem invasivos. Cerca de 80% dos diagnósticos realizados em Medicina Nuclear utilizam radiofármacos preparados com tecnécio-99m devido a suas características físicas ideais, disponibilidade e baixo custo. Dentre os radiofármacos utilizados para identificar processos de infecção e inflamação estão os leucócitos marcados com tecnécio-99m, considerado o padrão ouro e o citrato de gálio (67 Ga), atualmente comercializado no Brasi. Os leucócitos marcados possuem a desvantagem da técnica laboriosa de marcação nem sempre disponível nos centros de Medicina Nuclear, enquanto o citrato de gálio (67 Ga) não é específico e possui energias desfavoráveis para a dosimetria do paciente e para a aquisição de imagens. Neste cenário, novas moléculas para diagnóstico de focos de infecção têm sido pesquisadas, particularmente envolvendo biomoléculas, como os peptídeos antimicrobianos. Nesta categoria, a Ubiquicidina na forma de um fragmento sintético (UBI 29-41) despertou o interesse de pesquisadores que estudaram a marcação com tecnécio-99m utilizando métodos direto e indireto. Um reagente liofilizado de UBI 29-41descrito na literatura demonstrou eficácia no diagnóstico de focos de infecção utilizando-se imagens cintilográficas, porém o produto não está disponível no Brasil. O objetivo deste trabalho foi estudar a marcação do fragmento de UBI 29-41 com tecnécio-99m por método direto e avaliar a utilização de soluções tampão no procedimento de marcação, de modo a flexibilizar o volume da solução de pertecnetato de sódio a ser utilizado, o que constitui aspecto de ineditismo deste trabalho. O fragmento foi radiomarcado com diferentes volumes de soluções tampão alcalinas (carbonato e fosfato) e a utilização dos tampões em substituição à solução de hidróxido de sódio possibilitou realizar a marcação com diferentes volumes da solução de pertecnetato de sódio, sem comprometimento do rendimento de marcação. Uma formulação liofilizada foi avaliada, demonstrando estabilidade por período de 12 meses, viabilizando a produção rotineira do agente de marcação. Os estudos de biodistribuição das preparações efetuadas com os diferentes tampões demonstraram que os complexos formados apresentam características gerais de biodistribuição semelhantes ao composto padrão descrito na literatura, incluindo rápido clareamento sanguíneo e alta captação renal, condizente com a eliminação do produto por esta via. Entretanto, as preparações estudadas apresentaram captação hepática maior e captação renal menor que o composto padrão. As preparações estudadas captaram no foco de infecção provocado por S.aureus e demonstraram potencial para aplicação clínica no diagnóstico em Medicina Nuclear. Como pré-requisito para a realização de estudos clínicos de um novo composto foi realizado estudo de cito e genotoxicidade, cujos resultados demonstraram a segurança das preparações estudadas. / The annual growth in the number of Nuclear Medicine procedures is directly related to the fact that they are non invasive techniques. About 80% of diagnostic procedures in Nuclear Medicine use technetium-labelled radiopharmaceuticals, because of ideal physics characteristics of this radionuclide, disponibility and low cost. Some radiopharmaceuticas employed in the diagnostic of infection and inflammation is technetium labeled leukocytes, considered the gold standard, and gallium citrate (67 Ga) that are commercialized in Brazil. The procedures for labeling leukocytes are laborious and not always aviable in the Nuclear Medicine Centers, that constitutes a disadvantage of this radiopharmaceutical. On the other hand, galium citrate (67 Ga) is not specific and its energies are not favourable for patient dosimetry and image. In this context, new molecules for diagnostic of infection have been studied, particularly biomolecules, as the antimicrobians peptides. In this category, the Ubiquicidine, as a synthetic fragment (UBI 29-41), was particularly investigated by many researchers for labeling with technetium-99m by direct and indirect methods. A liophylized kit described in the literature showed good results in the diagnostic of infection focous by scintilographic images, but this product is not aviable in Brazil. The objective of this work was to study the labeling of the UBI 29-41 fragment with technetium-99m by direct method using buffer solutions on labeling procedure, that results in a less restrictive labeling technique concerning the volume of sodium pertechnetate solution employed, that constitutes in the originality of this work. UBI fragment was labeled with different volumes of alkaline buffers (carbonate and phosphate) and the use of buffers instead sodium hydroxide solution resulted in labeling procedures that employed different volumes of sodium pertechnetate solution without loss in the labeling yield. A liophylized kit was prepared, showing stability for 12 months, that supports a rotine production of this labeling agent. The biodistribution studies using the radiopharmaceutical prepared with different buffers showed that the resulted complexes presented biodistribution characteristics similar to the standard preparation described in the literature, including fast blood clearance and renal excretion. However, the studied preparations showed higher liver uptake and lower renal uptake when compared to the standard preparation. The studied preparations presented good uptake on infection focus produced by inoculation of S.aureus and showed potential for application in clinical procedures in Nuclear Medicine. Citotoxicity and genotoxicity studies were conducted with the peptide fragment as prerequisit for future clinical studies and the results showed the security of the compound for clinical application.

O objetivo deste experimento foi avaliar as variações da permeabilidade dentinária do sistema endodôntico produzidas pelo protocolo de irrigação intracanal: ácido cítrico a 15%, EDTA-T a 17%, MTAD, Smear Clear e NaCl 0,9% e a influência de diferentes lasers: Diodo, Er:YAG, Nd:YAG, utilizando para isso o radioisótopo Tecnécio-99m (99m Tc) (PARTE a) e o polietilenoglicol 400 (PEG 400) marcado 99m Tc (PARTE b). Foram selecionadas 150 raízes palatinas de molares superiores, divididas em 5 grupos, com 10mL/amostra para realizar a irrigação. Inicialmente analisou-se 10 raízes de cada grupo, introduzindo-se 5?L de 99m Tc no canal radicular, sendo então imersos em NaCl 0,9%, com exceção da superfície da entrada do canal para realizar a contagem da quantidade de radioisótopo dissociado para o meio externo (salina), sendo que se realizou os mesmos procedimentos com a introdução de PEG marcado (5?ci) no canal radicular. Posteriormente, cada um dos grupos experimentais foram subdivididos em outros 3 para irradiação com os diferentes lasers: Diodo (1,5W, modo contínuo, fibra de 300?m de diâmetro); Er:YAG [100mJ (42mJ output),1W, 10Hz, fibra com 0,375?m]; Nd:YAG (100mJ, 1,5Hz, 15W, fibra com 300?m). Repetindo-se os mesmos procedimentos primeiramente com 99m Tc livre e posteriormente o PEG400 marcado com 99m Tc para a realização para a contagem do radioisótopo dissociado na solução salina. Os dados obtidos foram tabulados e a analisados estatisticamente pelo teste Tukey com 95% de confiança. Pôde-se concluir que a irradiação com laser Nd:YAG + irrigação com ácido cítrico, ou com EDTA-T apresentaram os melhores índices de permeabilidade, enquanto que a irrigação com NaCl 0,9% e o MTAD apresentaram os piores índices pe permeabilidade independente da aplicação do laser. O ácido cítrico e o EDTA-T apresentaram os melhores resultados na ausência de irradiação e também no grupo irradiado pelo Er:YAG. E ao irradiar com Diodo a irrigação com EDTA-T apresentou maior permeabilidade. / Assess the variation of root canal dentin permeability produced by intracanal irrigation protocol: 15% citric acid, 17% EDTA-T, MTAD,Smear Clear and 0,9% NaCl and irradiation with different lasers: Diodo, Er:YAG, Nd:YAG using radioisotope technetium-99m (99mTc ) (PART a) and polietileneglycol 400 (PEG) marked with 99mTc (PART b) was the aim of this study. Hundred fifty palatin roots of molar were selected and divided in 5 groups to carry out the irrigation with 10 mL/sample of the solutions. Ten roots of each group were analyzed, introducing 5?L of the 99mTc dissolved in distilled water, with aproximatly 5?L in the root canal and imersed in 0,9% NaCl to carry out the count of amount of 99mTc dissociated to the external enviroment and after introducing 5?L of PEG marked with 99m Tc (5mci). Later, the groups were (PART b) divided to other 3 to irradiate with the folowing parameters: Diodo (1,5W, continuous, 300?m filament); Er:YAG [100mJ (42mJ output),1W, 10Hz, 0,375?m fiber]; Nd:YAG (100mJ, 1,5Hz, 15W, 300?m fiber). The same procedures were repeted to count and the obteined datas were analyzed statistically by the tukey test with 95% reliance. It was concluded that Nd:YAG laser + irrigation with citric acid or EDTA-T have presented the best scores of permeability, while the NaCl and the MTAD presented the worst scores independent of the laser irradiation. The citric acid and the EDTA-T have presented the best results in absence of laser and also, in the group irradiated by Er:YAG laser. Additionaly, if we irradiate with Diode, the EDTA-T group presented higher permeability.

A radiomarcação de biomoléculas específicas com o tecnécio-99m 99mTc utilizando agentes quelantes bifuncionais é um campo em crescimento na Medicina Nuclear. Em especial, a classe de peptídeos regulatórios, como a Neurotensina, participa de processos fisiológicos essenciais no organismo, como o crescimento tumoral. O objetivo do presente trabalho foi o estudo comparativo da influência dos agentes quelantes bifuncionais 6-hidrazinonicotinamida (HYNIC) e S-acetil-mercaptoacetiltriglicina (MAG3), no comportamento in vitro e in vivo do análogo duplamente estabilizado da Neurotensina(8-13) radiomarcado com 99mTc, em células tumorais de mama da linhagem MDA-MB-231. Um elevado rendimento radioquímico (> 97%) e estabilidade frente aos agentes transquelantes foi observado para ambos análogos radiomarcados. Foram também obtidos comportamentos similares in vitro, no que diz respeito à porcentagem de ligação às proteinas plasmáticas (aproximadamente 22%), estabilidade metabólica, ligação aos receptores celulares (intervalo nM) e taxas de internalização/externalização para ambos radiocomplexos. A maior lipofilicidade encontrada para o análogo radiomarcado via MAG3 refletiu nas principais diferenças nos estudos de biodistribuição. A degradação do análogo radiomarcado via HYNIC nos estudos de estabilidade metabólica in vivo aos 90 min levou a menor retenção tumoral (0,44±0,02% DI/g), e consequentemente, às menores razões tumor/órgãos não-alvos (< 5%). Embora a superioridade do traçador marcado via MAG3 tenha sido comprovada no presente estudo, um redesenho estrutural objetivando contornar a alta captação no trato gastrointestinal deve ser realizada a fim de que sua potencial aplicabilidade não seja comprometida. / The radiolabeling of receptor specific biomolecules with 99mTc using bifunctional chelator agents represents a growing field in Nuclear Medicine, specially, regarding regulatory peptides, such as Neurotensin, which are important in several essential physiological functions, particularly in tumor growth. The aim of the study was the comparative radiolabeling evaluation of the double-stabilized NT(8-13) analog with 99mTc, via the bifunctional chelating agents 6- hydrazinonicotinamide (HYNIC) and S-acetyl-mercaptoacetyltriglycine (MAG3) in MDA-MB-231 breast cancer cell line. High radiochemical yields (> 97%) and stability toward transchelant agents was observed for both radiolabeled analogs. Also, comparable in vitro behaviour regarding the percentage of plasma protein binding (nearby 22%), metabolic stability, receptor binding affinity (nM range), and internalization/externalization rates were obtained. The greater lipophilicity found for the analog radiolabeled via MAG3, reflected in the major differences in biodistribution studies. The in vivo metabolic stability studies suggested that the degradation observed in the later time point (90 min) for the conjugate radiolabeled via HYNIC, leads not only to lower tumor uptake accumulation (0,44±0,02% ID/g), but also to lower tumor-to-non-tumor ratios (< 5%). Although the superiority of the tracer radiolabeled via MAG3 had been confirmed in the present study, a strucutural re-design aiming the reduction of the high gastrointestinal uptake must be done in order to guarantee the potential applicability of MAG3-radiocomplex.

O crescimento anual no número de procedimentos realizados em Medicina Nuclear se deve em primeiro lugar à vantagem de não serem invasivos. Cerca de 80% dos diagnósticos realizados em Medicina Nuclear utilizam radiofármacos preparados com tecnécio-99m devido a suas características físicas ideais, disponibilidade e baixo custo. Dentre os radiofármacos utilizados para identificar processos de infecção e inflamação estão os leucócitos marcados com tecnécio-99m, considerado o padrão ouro e o citrato de gálio (67 Ga), atualmente comercializado no Brasi. Os leucócitos marcados possuem a desvantagem da técnica laboriosa de marcação nem sempre disponível nos centros de Medicina Nuclear, enquanto o citrato de gálio (67 Ga) não é específico e possui energias desfavoráveis para a dosimetria do paciente e para a aquisição de imagens. Neste cenário, novas moléculas para diagnóstico de focos de infecção têm sido pesquisadas, particularmente envolvendo biomoléculas, como os peptídeos antimicrobianos. Nesta categoria, a Ubiquicidina na forma de um fragmento sintético (UBI 29-41) despertou o interesse de pesquisadores que estudaram a marcação com tecnécio-99m utilizando métodos direto e indireto. Um reagente liofilizado de UBI 29-41descrito na literatura demonstrou eficácia no diagnóstico de focos de infecção utilizando-se imagens cintilográficas, porém o produto não está disponível no Brasil. O objetivo deste trabalho foi estudar a marcação do fragmento de UBI 29-41 com tecnécio-99m por método direto e avaliar a utilização de soluções tampão no procedimento de marcação, de modo a flexibilizar o volume da solução de pertecnetato de sódio a ser utilizado, o que constitui aspecto de ineditismo deste trabalho. O fragmento foi radiomarcado com diferentes volumes de soluções tampão alcalinas (carbonato e fosfato) e a utilização dos tampões em substituição à solução de hidróxido de sódio possibilitou realizar a marcação com diferentes volumes da solução de pertecnetato de sódio, sem comprometimento do rendimento de marcação. Uma formulação liofilizada foi avaliada, demonstrando estabilidade por período de 12 meses, viabilizando a produção rotineira do agente de marcação. Os estudos de biodistribuição das preparações efetuadas com os diferentes tampões demonstraram que os complexos formados apresentam características gerais de biodistribuição semelhantes ao composto padrão descrito na literatura, incluindo rápido clareamento sanguíneo e alta captação renal, condizente com a eliminação do produto por esta via. Entretanto, as preparações estudadas apresentaram captação hepática maior e captação renal menor que o composto padrão. As preparações estudadas captaram no foco de infecção provocado por S.aureus e demonstraram potencial para aplicação clínica no diagnóstico em Medicina Nuclear. Como pré-requisito para a realização de estudos clínicos de um novo composto foi realizado estudo de cito e genotoxicidade, cujos resultados demonstraram a segurança das preparações estudadas. / The annual growth in the number of Nuclear Medicine procedures is directly related to the fact that they are non invasive techniques. About 80% of diagnostic procedures in Nuclear Medicine use technetium-labelled radiopharmaceuticals, because of ideal physics characteristics of this radionuclide, disponibility and low cost. Some radiopharmaceuticas employed in the diagnostic of infection and inflammation is technetium labeled leukocytes, considered the gold standard, and gallium citrate (67 Ga) that are commercialized in Brazil. The procedures for labeling leukocytes are laborious and not always aviable in the Nuclear Medicine Centers, that constitutes a disadvantage of this radiopharmaceutical. On the other hand, galium citrate (67 Ga) is not specific and its energies are not favourable for patient dosimetry and image. In this context, new molecules for diagnostic of infection have been studied, particularly biomolecules, as the antimicrobians peptides. In this category, the Ubiquicidine, as a synthetic fragment (UBI 29-41), was particularly investigated by many researchers for labeling with technetium-99m by direct and indirect methods. A liophylized kit described in the literature showed good results in the diagnostic of infection focous by scintilographic images, but this product is not aviable in Brazil. The objective of this work was to study the labeling of the UBI 29-41 fragment with technetium-99m by direct method using buffer solutions on labeling procedure, that results in a less restrictive labeling technique concerning the volume of sodium pertechnetate solution employed, that constitutes in the originality of this work. UBI fragment was labeled with different volumes of alkaline buffers (carbonate and phosphate) and the use of buffers instead sodium hydroxide solution resulted in labeling procedures that employed different volumes of sodium pertechnetate solution without loss in the labeling yield. A liophylized kit was prepared, showing stability for 12 months, that supports a rotine production of this labeling agent. The biodistribution studies using the radiopharmaceutical prepared with different buffers showed that the resulted complexes presented biodistribution characteristics similar to the standard preparation described in the literature, including fast blood clearance and renal excretion. However, the studied preparations showed higher liver uptake and lower renal uptake when compared to the standard preparation. The studied preparations presented good uptake on infection focus produced by inoculation of S.aureus and showed potential for application in clinical procedures in Nuclear Medicine. Citotoxicity and genotoxicity studies were conducted with the peptide fragment as prerequisit for future clinical studies and the results showed the security of the compound for clinical application.