O laser de baixa potência tem sido utilizado após procedimentos cirúrgicos visando acelerar o processo de reparo tecidual. No entanto, embora esse tipo de tratamento ofereça pouco ou nenhum risco à saúde do paciente, sua eficácia ainda é controversa na literatura. Este estudo foi desenvolvido para avaliar o efeito do laser de baixa potência (100 mW) sobre o processo de reparo de incisões cutâneas em dorso de ratos. Incisões de 2 cm de extensão foram confeccionadas no dorso de cinquenta e seis ratos Wistar. Após a sutura, metade dos animais recebeu laser de baixa potência em 3 pontos de aplicação, um no centro e um em cada extremidade da ferida. Em cada ponto, foi administrada uma dose de 35 J/cm2 (laser de InGaAlP, 660 nm, vermelho visível). A outra metade dos animais serviu como controle. Os tecidos incisados foram avaliados microscopicamente, de forma descritiva, em períodos de 6 horas, 2, 7 e 14 dias, levando em consideração o aspecto do revestimento epitelial e do tecido conjuntivo e a magnitude da resposta inflamatória, quando presente. Para os dois primeiros períodos, foi feita também uma avaliação morfométrica, que mensurou a densidade de fibroblastos, fibras colágenas, vasos sanguíneos e células inflamatórias no tecido conjuntivo. Na análise descritiva, as maiores diferenças foram encontradas no período de 6 horas, seguido pelo de 2 dias. Em 6 horas, o grupo tratado com laser apresentou menor resposta inflamatória que o controle e, em alguns espécimes, foi possível evidenciar início de proliferação das células do epitélio nas bordas da ferida. Em 2 dias, alguns espécimes do grupo controle ainda apresentavam células inflamatórias remanescentes, não evidenciadas no grupo laser. Nesse período, foi possível evidenciar também, em alguns espécimes do grupo laser, proliferação de fibroblastos junto às bordas da ferida. Nos períodos de 7 e 14 dias, não foram encontradas diferenças entre os grupos. Na análise morfométrica, a densidade de fibras colágenas e vasos sanguíneos foi maior para o grupo laser do que para o grupo controle em ambos os períodos avaliados, com diferença estatisticamente significante. Com base nos resultados obtidos, concluiu-se que o laser de baixa potência foi capaz de controlar a resposta inflamatória e estimular o processo de reparo tecidual em feridas cutâneas em dorso de ratos. / Low-power laser therapy has been used after surgical procedures to improve wound healing. However, although such kind of treatment offers little or no risk to the patient\'s health, its effectiveness remains controversial. This study was developed to evaluate the effect of low-power laser (100 mW) on the healing of skin incisions in rats. Two centimeters incisions were made on the back of fifty-six Wistar rats. After suturing, half of the animals received low-power laser application on three points, one on center and one on each end of the wound. For each point, a dose of 35 J/cm2 (InGaAIP laser, 660 nm, visible red) was administered. The other half of the animals served as control. The incised tissues were evaluated microscopically in a descriptive way in periods of 6 hours, 2, 7 and 14 days, considering the aspects of epithelium and connective tissue and the magnitude of inflammatory response, when present. For the first two periods, it was also done a morphometric evaluation, which measured the density of fibroblasts, collagen fibers, blood vessels and inflammatory cells in the connective tissue. In descriptive analysis, the greatest differences were found in the period of 6 hours, followed by the period of 2 days. In 6 hours, the laser-treated group showed less inflammatory response than control and, in some specimens, it was possible to see the beginning of epithelium proliferation on the edges of the wound. In two days, some specimens of the control group still showed remaining inflammatory cells, not observed in the laser group. In this period, it was also possible to see, in some specimens of the laser group, proliferation of fibroblasts along the edges of the wound. In the periods of 7 and 14 days, no differences were found between the groups. In morphometric analysis, density of collagen fibers and blood vessels was higher for the laser group in both evaluated periods, with statistically significant difference. Based on these results, it was concluded that low-power laser was able to control inflammatory response and stimulate tissue repair in skin wounds in rats.

A reabsorção radicular inflamatória induzida pela movimentação dentária é uma consequência da lesão dos cementoblastos devido à aplicação da força sobre o dente deixando a raiz exposta à ação dos osteoclastos. Estudos vêm sendo feitos a fim de se desenvolver um meio de evitar, controlar ou reduzir este tipo de reabsorção. A fototerapia com laser tem demonstrado efetividade como agente antiinflamatório e, considerando a origem inflamatória desta patologia este estudo se propôs a avaliar a ação do laser sobre as reabsorções radiculares. Para isto realizou-se uma análise histomorfométrica da raiz disto-vestibular dos primeiros molares superiores de ratos após a indução da sua movimentação mecânica, sendo irradiados ou não com laser de baixa potência. Para a fototerapia foi utilizado um laser diodo, calibrado com comprimento de onda de 808 nm, potência de saída de 100mW, energia total de 2,1J ou 96J e área de 0,0028cm2. A aplicação foi contínua, pontual e com contato. Foram utilizados 54 ratos Wistar, machos, com aproximadamente 80 dias, pesando entre 280±40g. Para a movimentação utilizou- se uma mola fechada super-elástica, com força constante, pré-calibrada em 25g. Os espécimes foram irradiados a cada 48 horas conforme o grupo a que pertenciam. O sacrifício se procedeu no sétimo ou décimo dia após o início da movimentação. O exame histológico foi realizado com cortes de 6 μm corados em HE. Os resultados revelaram que, com as dosimetrias estudadas, o laser de baixa potência, não teve efeito estatisticamente significante sobre as reabsorções radiculares. Concluindo-se que não há diferença na área reabsorvida, espessura ou extensão da reabsorçãoradicular entre os grupos controle e experimental. / Inflammatory root resorption induced by tooth movement is a consequence of the cementoblasts injury due to application of force on the tooth leaving the root exposed to the action of osteoclasts. Studies have been made to develop a means of preventing, controlling or reducing this kind of resorption. Phototherapy by laser has demonstrated effectiveness as an antiinflammatory and considering the inflammatory origin of this pathology this study evaluated the effects of laser on root resorption. For this we carried out a histomorphometric analysis of maxillary first molars distobuccal root of rats after being moved, irradiated or not with low-level laser. Order to phototherapy it was used a diode laser, calibrated with a wavelength of 808 nm, output power of 100mW, 2.1J or 96J of energy and area of 0.0028 cm2. The application was continuous, punctual and with contact. It was used 54 male Wistar rats, approximately 80 days, weighing 280 ± 40g. For tooth movement, it was used a super elastic closed spring, with pre-calibrated and constant force of 25g. The specimens were irradiated every 48 hours depending on the group they belonged to. The sacrifice was made in the seventh or tenth day after the onset of movement. Histological examination was performed with sections of 6 μm stained with HE. The results revealed that, considering the dosimetry studied, low-level laser, has no effect statistically significant on the root resorption. Concluding it does not have difference in the root reabsorption area, thickness or extension, between the control and the experimental groups.

Analisou-se a velocidade de movimentação ortodôntica e sensibilidade dolorosa de caninos superiores e inferiores submetidos à irradiação com o laser de baixa intensidade (LBI) em dose única mensal, comparados aos caninos contralaterais não irradiados (controle). Foram selecionados 11 indivíduos, portadores de má oclusão de Classe I com indicação de extração dos primeiros pré-molares superiores e inferiores. O laser de baixa intensidade foi aplicado após a ativação da retração inicial dos caninos, realizada através de mola Niti com uma força de 150g. A aplicação do laser foi realizada em 10 pontos (5 por vestibular e 5 por lingual) nos caninos superiores e inferiores, utilizando o seguinte protocolo: Canino inferior por vestibular e lingual e canino superior por vestibular: Potência de 40mW; densidade de energia de 10J/cm2; 10 segundos por ponto; energia por ponto de 0,4J, uma energia total de aplicação de 4J para o canino inferior e 2J por vestibular dos caninos superiores e para o canino superior por palatino o protocolo foi: Potência de 70mW; densidade de energia de 35J/cm2; 20 segundos por ponto; 1,4J de energia por ponto, energia total de 7J. A retração durou 3 meses, num total de 3 aplicações de laser. Foi obtido um par de modelo de gesso inicial após as extrações dentárias e mensalmente antes da aplicação do laser que posteriormente foram escaneados com scanner 3Shape Ortho SystemTM \"(3ShapeTM Copenhagen, Dinamarca) e as imagens tridimensionais avaliadas por meio do software OrthoAnalyzer (3Shape) para mensuração da quantidade de movimentação dos caninos retraídos. Os pacientes preencheram uma escala visual após 12, 24, 48 e 72 horas da ativação da retração inicial dos caninos para avaliação da sensibilidade dolorosa. Para comparação da velocidade da movimentação ortodôntica e o nível de dor entre os lados irradiado e não irradiado nos três períodos avaliados, foi utilizado a Análise de Variância a um critério de medidas repetidas. Em todos os testes adotou-se nível de significância de 5%. Os resultados demonstraram diferença estatisticamente significante entre a quantidade de retração dos caninos irradiados comparados aos caninos não irradiados somente para os caninos inferiores no primeiro mês de aplicação do LBI. Em relação à sensibilidade dolorosa o LBI não foi efetivo em nenhum dos tempos avaliados. Concluiu-se assim que o LBI no protocolo utilizado só foi eficiente na aceleração da movimentação dentária dos caninos inferiores no primeiro mês de aplicação, porém não gerou redução da dor experimentada pelos pacientes frente às forças ortodônticas. / It was analyzed the orthodontic tooth movement and painful sensibility of maxilary and mandibular canine teeth submitted to irradiation with low-level laser (LLL) in an only monthly dose, compared to the non-irradiated contralateral canines (control). Eleven individuals with Class I malocclusion with indication of extraction of the first maxillary and mandibular premolars were selected. The low-level laser was applied after the activation of initial retraction of the canine teeth, performed with Niti coil springs with force of 150g. The laser application was performed in 10 points (5 buccal and 5 lingual) in the maxillary and mandibular canines, using the following protocol: Mandibular canine buccal and lingual and maxillary canine buccal: 40mW power; an energy density of 10 J/cm2; 10 seconds per point; energy per point 0,4J, a total energy of 4J applying to the mandibular canine and 2J the buccal of the maxillary canines and maxillary canine palatally: 70mW of power; an energy density of 35J/cm2; 20 seconds per point; 1,4J energy per point, the total energy 7J. The retraction lasted three months, a total of three laser applications. It was obtained a couple of dental casts after dental extractions and monthly model before applying the laser which were subsequently scanned with scanner \"3Shape\'s Ortho SystemTM\" (3ShapeTM - Copenhagen, Denmark) and three-dimensional images evaluated through OrthoAnalyzer software (3Shape) to measure the amount of movement of canines retracted. Patients completed a visual scale after 12, 24, 48 and 72 hours of initial activation of canine retraction for evaluation of pain sensitivity. To compare the speed of orthodontic tooth movement and the level of pain between the irradiated and non-irradiated sides at the three movement stages, repeated measures one-way analysis of variance was used. In all tests we adopted a significance level of 5%. The results showed statistically significant difference between the amount of retraction of the irradiated canines compared to the non-irradiated ones only for the mandibular canines in the first month of application of LLL. Regarding the soreness LLL was not effective in anytime evaluated. It was therefore concluded that LLL in the protocol used was effective only in the acceleration of tooth movement of the mandibular canines in the first month of application, but it did not cause reduction of pain experienced by patients ahead to orthodontic forces.

Este estudo é um ensaio clínico randomizado duplo-cego que avaliou a influência do laser de baixa intensidade (LBI) na movimentação ortodôntica de caninos superiores e inferiores, comparando-os aos caninos contralaterais não irradiados (controle). Foram selecionados 11 pacientes, portadores de má oclusão de Classe I com indicação de extração dos primeiros pré-molares superiores e inferiores. O laser infravermelho de baixa intensidade foi aplicado após a ativação da retração inicial dos caninos, realizada através de mola NiTi com uma força de 150g. A aplicação do laser foi realizada em 10 pontos (5 por vestibular e 5 por lingual) nos caninos superiores e inferiores, utilizando o seguinte protocolo, em dose única mensal: canino inferior por vestibular e lingual e canino superior por vestibular Comprimento de onda de 780nm; Potência de 40mW; densidade de energia de 10J/cm2; 10 segundos por ponto; energia por ponto de 0,4J, uma energia total de aplicação de 4J para o canino inferior e 2J por vestibular dos caninos superiores e para o canino superior por palatino o protocolo foi - Potência de 70mW; densidade de energia de 35J/cm2; 20 segundos por ponto; 1,4J de energia por ponto, energia total de 7J por palatino e total de 9J para o canino superior. A retração durou 3 meses, num total de 3 aplicações de laser. Para mensuração da quantidade de movimentação dos caninos retraídos, medições clínicas mensais foram realizadas com paquímetro digital, logo após as extrações dentárias e antes de cada aplicação do laser. Para comparação da velocidade da movimentação ortodôntica entre os lados irradiado e não irradiado nos três períodos avaliados, foi empregada a Análise de Variância a um critério de medidas repetidas, seguida do Teste de Tukey. Para verificação da integridade tecidual, foram efetuadas radiografias periapicais iniciais e finais dos caninos retraídos, nas quais foram avaliados uma possível reabsorção na crista alveolar, por meio da distância da crista óssea alveolar até a junção cementoesmalte e os níveis de reabsorção radicular, por meio do índice de Levander e Malmgreen. Para isto, foi empregado o teste não paramétrico de Wilcoxon. Em todos os testes adotou-se nível de significância de 5%. Os resultados demonstraram que não houve diferença estatisticamente significante na velocidade de retração dos caninos irradiados comparados aos não irradiados, em nenhum dos períodos avaliados. Em relação à influência do LBI nos níveis de reabsorções radiculares e ósseas, não foram encontradas diferenças significantes entre os grupos estudados. Concluiu-se assim que o LBI, no protocolo utilizado, não foi eficiente na aceleração da movimentação dentária e não promoveu danos aos tecidos de suporte do dente. / This study is a double-blind randomized clinical trial that evaluated the influence of low-intensity laser on orthodontic movement of upper and lower canine teeth, compared to the non- irradiated contralateral canines (control). Eleven patients with Class I malocclusion with indication of extraction of the first upper and lower premolars were selected. The infrared low-level laser was applied after the activation of initial retraction of the canine teeth, performed with NiTi coil springs with force of 150g. The laser application was performed in 10 points (5 buccal and 5 lingual) in the upper and lower canines, using the following protocol, in an only monthly dose: Lower canine buccal and lingual and upper canine buccal 780 nm wavelength; 40mW power; an energy density of 10 J/cm2; 10 seconds per point; energy per point 0,4J, a total energy of 4J applying to the lower canine and 2J the buccal of the upper canines and upper canine palatally - 70mW of power; an energy density of 35J/cm2; 20 seconds per point; 1,4J energy per point, the total energy 7J and total 9J to the upper canine. The retraction lasted three months, a total of three laser applications. To measure the amount of movement of canines retracted, monthly clinical measurements were made with a digital caliper (Mitutoyo - Japan), after tooth extractions and before each laser application. To compare the speed of orthodontic tooth movement between the irradiated and non- irradiated sides at the three movement stages, repeated measures one-way analysis of variance was used, followed by the Tukey test. For evaluation of tissue integrity, initial and final periapical radiographs of retracted canines were obtained, to evaluate a possible alveolar crest resorption by assessment of the distance from the alveolar bone crest to the cementoenamel junction, as well as the level of root resorption by the Levander and Malmgreen index, which was evaluated only on retracted canines. The nonparametric Wilcoxon test was applied for that purpose. In all tests we adopted a significance level of 5%. The results showed no statistically significant difference between the amount of retraction of the irradiated canines compared to the nonirradiated ones, in all evaluated periods. Regarding the influence of LLL in the levels of root and bone resorption, no significant differences between groups were found. It was therefore concluded that LLL in the protocol used was not effective in the acceleration of tooth movement and did not cause damage to the supporting tissues of the tooth.

Analisou-se a velocidade de movimentação ortodôntica e sensibilidade dolorosa de caninos superiores e inferiores submetidos à irradiação com o laser de baixa intensidade (LBI) em dose única mensal, comparados aos caninos contralaterais não irradiados (controle). Foram selecionados 11 indivíduos, portadores de má oclusão de Classe I com indicação de extração dos primeiros pré-molares superiores e inferiores. O laser de baixa intensidade foi aplicado após a ativação da retração inicial dos caninos, realizada através de mola Niti com uma força de 150g. A aplicação do laser foi realizada em 10 pontos (5 por vestibular e 5 por lingual) nos caninos superiores e inferiores, utilizando o seguinte protocolo: Canino inferior por vestibular e lingual e canino superior por vestibular: Potência de 40mW; densidade de energia de 10J/cm2; 10 segundos por ponto; energia por ponto de 0,4J, uma energia total de aplicação de 4J para o canino inferior e 2J por vestibular dos caninos superiores e para o canino superior por palatino o protocolo foi: Potência de 70mW; densidade de energia de 35J/cm2; 20 segundos por ponto; 1,4J de energia por ponto, energia total de 7J. A retração durou 3 meses, num total de 3 aplicações de laser. Foi obtido um par de modelo de gesso inicial após as extrações dentárias e mensalmente antes da aplicação do laser que posteriormente foram escaneados com scanner 3Shape Ortho SystemTM \"(3ShapeTM Copenhagen, Dinamarca) e as imagens tridimensionais avaliadas por meio do software OrthoAnalyzer (3Shape) para mensuração da quantidade de movimentação dos caninos retraídos. Os pacientes preencheram uma escala visual após 12, 24, 48 e 72 horas da ativação da retração inicial dos caninos para avaliação da sensibilidade dolorosa. Para comparação da velocidade da movimentação ortodôntica e o nível de dor entre os lados irradiado e não irradiado nos três períodos avaliados, foi utilizado a Análise de Variância a um critério de medidas repetidas. Em todos os testes adotou-se nível de significância de 5%. Os resultados demonstraram diferença estatisticamente significante entre a quantidade de retração dos caninos irradiados comparados aos caninos não irradiados somente para os caninos inferiores no primeiro mês de aplicação do LBI. Em relação à sensibilidade dolorosa o LBI não foi efetivo em nenhum dos tempos avaliados. Concluiu-se assim que o LBI no protocolo utilizado só foi eficiente na aceleração da movimentação dentária dos caninos inferiores no primeiro mês de aplicação, porém não gerou redução da dor experimentada pelos pacientes frente às forças ortodônticas. / It was analyzed the orthodontic tooth movement and painful sensibility of maxilary and mandibular canine teeth submitted to irradiation with low-level laser (LLL) in an only monthly dose, compared to the non-irradiated contralateral canines (control). Eleven individuals with Class I malocclusion with indication of extraction of the first maxillary and mandibular premolars were selected. The low-level laser was applied after the activation of initial retraction of the canine teeth, performed with Niti coil springs with force of 150g. The laser application was performed in 10 points (5 buccal and 5 lingual) in the maxillary and mandibular canines, using the following protocol: Mandibular canine buccal and lingual and maxillary canine buccal: 40mW power; an energy density of 10 J/cm2; 10 seconds per point; energy per point 0,4J, a total energy of 4J applying to the mandibular canine and 2J the buccal of the maxillary canines and maxillary canine palatally: 70mW of power; an energy density of 35J/cm2; 20 seconds per point; 1,4J energy per point, the total energy 7J. The retraction lasted three months, a total of three laser applications. It was obtained a couple of dental casts after dental extractions and monthly model before applying the laser which were subsequently scanned with scanner \"3Shape\'s Ortho SystemTM\" (3ShapeTM - Copenhagen, Denmark) and three-dimensional images evaluated through OrthoAnalyzer software (3Shape) to measure the amount of movement of canines retracted. Patients completed a visual scale after 12, 24, 48 and 72 hours of initial activation of canine retraction for evaluation of pain sensitivity. To compare the speed of orthodontic tooth movement and the level of pain between the irradiated and non-irradiated sides at the three movement stages, repeated measures one-way analysis of variance was used. In all tests we adopted a significance level of 5%. The results showed statistically significant difference between the amount of retraction of the irradiated canines compared to the non-irradiated ones only for the mandibular canines in the first month of application of LLL. Regarding the soreness LLL was not effective in anytime evaluated. It was therefore concluded that LLL in the protocol used was effective only in the acceleration of tooth movement of the mandibular canines in the first month of application, but it did not cause reduction of pain experienced by patients ahead to orthodontic forces.

A reabsorção radicular inflamatória induzida pela movimentação dentária é uma consequência da lesão dos cementoblastos devido à aplicação da força sobre o dente deixando a raiz exposta à ação dos osteoclastos. Estudos vêm sendo feitos a fim de se desenvolver um meio de evitar, controlar ou reduzir este tipo de reabsorção. A fototerapia com laser tem demonstrado efetividade como agente antiinflamatório e, considerando a origem inflamatória desta patologia este estudo se propôs a avaliar a ação do laser sobre as reabsorções radiculares. Para isto realizou-se uma análise histomorfométrica da raiz disto-vestibular dos primeiros molares superiores de ratos após a indução da sua movimentação mecânica, sendo irradiados ou não com laser de baixa potência. Para a fototerapia foi utilizado um laser diodo, calibrado com comprimento de onda de 808 nm, potência de saída de 100mW, energia total de 2,1J ou 96J e área de 0,0028cm2. A aplicação foi contínua, pontual e com contato. Foram utilizados 54 ratos Wistar, machos, com aproximadamente 80 dias, pesando entre 280±40g. Para a movimentação utilizou- se uma mola fechada super-elástica, com força constante, pré-calibrada em 25g. Os espécimes foram irradiados a cada 48 horas conforme o grupo a que pertenciam. O sacrifício se procedeu no sétimo ou décimo dia após o início da movimentação. O exame histológico foi realizado com cortes de 6 μm corados em HE. Os resultados revelaram que, com as dosimetrias estudadas, o laser de baixa potência, não teve efeito estatisticamente significante sobre as reabsorções radiculares. Concluindo-se que não há diferença na área reabsorvida, espessura ou extensão da reabsorçãoradicular entre os grupos controle e experimental. / Inflammatory root resorption induced by tooth movement is a consequence of the cementoblasts injury due to application of force on the tooth leaving the root exposed to the action of osteoclasts. Studies have been made to develop a means of preventing, controlling or reducing this kind of resorption. Phototherapy by laser has demonstrated effectiveness as an antiinflammatory and considering the inflammatory origin of this pathology this study evaluated the effects of laser on root resorption. For this we carried out a histomorphometric analysis of maxillary first molars distobuccal root of rats after being moved, irradiated or not with low-level laser. Order to phototherapy it was used a diode laser, calibrated with a wavelength of 808 nm, output power of 100mW, 2.1J or 96J of energy and area of 0.0028 cm2. The application was continuous, punctual and with contact. It was used 54 male Wistar rats, approximately 80 days, weighing 280 ± 40g. For tooth movement, it was used a super elastic closed spring, with pre-calibrated and constant force of 25g. The specimens were irradiated every 48 hours depending on the group they belonged to. The sacrifice was made in the seventh or tenth day after the onset of movement. Histological examination was performed with sections of 6 μm stained with HE. The results revealed that, considering the dosimetry studied, low-level laser, has no effect statistically significant on the root resorption. Concluding it does not have difference in the root reabsorption area, thickness or extension, between the control and the experimental groups.

The photobiomodulation therapy (PBMT) has many demonstrated applications in the health area including anti-inflammatory and wound healing effects. The main objective of this work is to verify if the PBMT causes measurable changes in the mechanical properties of cells, specifically in red blood cells, epithelial cells and fibroblasts. In addition, to contribute to the knowledge of the action mechanisms of the PBMT, this study intends to support applications of the PBMT during invasive procedures, such as the direct photo-treatment of the blood in surgical procedures with cardiopulmonary bypass, regarding security of the cellular integrity. For this analysis, three experimental techniques were used: optical magnetic twisting cytometry (OMTC), defocusing microscopy and confocal laser-scanning microscopy. Human bronchial epithelial cells were evaluated with OMTC. The epithelial cell culture was either photo-treated or not, with red laser (lambda=660 nm), and fixed power and time (power density of 153 mW/cm2, time 300 s). It was not possible to observe significant differences between photo-treated and control epithelial cells, for the hysteresivity (ratio between the cell loss and elastic shear moduli). The defocusing microscopy, similar to a phase contrast microscopy, was used to study human red blood cells from fresh blood. The red blood cells were either photo-treated or not, with red laser (lambda=660 nm), and different powers and times (power densities from 0 to 510 mW/cm2, times from 0 to 180 s). Some morphological and mechanical characteristics of individual red blood cells were evaluated, such as volume, radial profile of cell thickness, lateral and vertical membrane fluctuations, for the photo-treated and control red blood cells. It was not possible to detect differences between the two groups, for any of the parameters analyzed. For both techniques, the absence of detectable differences might be due to several factors, such as the non-action of the PBMT, with the parameters used, in the epithelial cells and red blood cells or to the small sensitivity of each technique. Confocal laser-scanning microscopy was used to evaluate the actin filaments of mouse fibroblasts. The fibroblast cell culture was either photo-treated or not, with red (lambda=625 nm) or infrared (lambda=808 nm) light and fixed power and time (power density from 113 to 158 mW/cm2, time 300 s). The nucleus and cell areas increased slightly when comparing photo-treated and control cells. On the other hand, the total actin, total actin density and the number of filaments decreased. These changes were detected for a short time after treatment, however, after 24 h they are not anymore detectable. The total branch length does not seem to suffer any modifications. In summary, with the data acquired with the three techniques, it was found that the PBMT, in the red range, with the parameters used, could not cause noticeable changes in red blood cells and epithelial cells, in vitro. On the other hand, the PBMT in the red and near-infrared range, with the power and times used, cause changes in actin filaments of fibroblasts, in vitro, in particular the decrease of the total actin density. / A terapia por fotobiomodulação tem muitas aplicações na área de Saúde devido a sua ação anti-inflamatória e de reparação tecidual. O objetivo geral desse trabalho é verificar se a terapia por fotobiomodulação provoca mudanças nas propriedades mecânicas de células, em particular em hemácias, células epiteliais e fibroblastos. Além de contribuir com o conhecimento dos mecanismos de ação da terapia por fotobiomodulação, este estudo pretende subsidiar aplicações da terapia por fotobiomodulação durante procedimentos mais invasivos, como a iluminação direta do sangue em procedimentos cirúrgicos com circulação extracorpórea, sob o ponto de vista da segurança quanto à integridade celular. Para essa análise foram utilizadas três técnicas experimentais: citometria óptica magnética de oscilação (OMTC), microscopia de desfocalização e microscopia confocal. Com a técnica de OMTC foram avaliadas células epiteliais brônquicas humanas em cultura, foto-tratadas com laser vermelho (lambda=660 nm), com potência e tempo fixos (densidade de potência de 153 mW/cm2, tempo 300 s). Não foi possível constatar diferenças significativas entre as células epiteliais foto-tratadas e as células controle, para a histerisividade (razão entre os módulos viscoso e elástico das células). Com a técnica de microscopia de desfocalização, semelhante a uma microscopia de contraste de fase, foram estudadas hemácias humanas de sangue recém coletado. As hemácias foram tratadas com laser vermelho (lambda=660 nm), com potências e tempos variados (densidade de potência de 0 a 510 mW/cm2, tempo de 0 a 180 s). Foram avaliadas algumas características morfológicas e mecânicas das hemácias individualmente, como o volume, perfil radial de espessura, flutuações lateral e vertical da membrana, tanto para hemácias foto-tratadas quanto para hemácias controle. Não foi possível detectar diferenças entre as hemácias foto-tratadas e controle para nenhum dos parâmetros avaliados. Para ambas as técnicas, a falta de mudanças observáveis poderia ser devida a diversos fatores, como a não ação da terapia por fotobiomodulação nas células epiteliais e nas hemácias, com os parâmetros aqui empregados, ou à falta de sensibilidade de cada uma das técnicas usadas. A microscopia confocal foi utilizada para avaliar os filamentos de actina de fibroblastos de camundongo em cultura, os quais foram foto-tratados com luz vermelha (lambda=625 nm) ou infravermelha (lambda=808 nm) e potência e tempo fixos (densidade de potência de 113 a 158 mW/cm2, tempo 300 s). Foi possível constatar ligeiro aumento nas áreas nuclear e celular das células foto-tratadas em relação aos fibroblastos controle. Também foi possível verificar a diminuição da quantidade total de actina, densidade de actina e do número de filamentos de actina nos fibroblastos foto-tratados. Essas mudanças são detectadas para tempos curtos após o tratamento, sendo que depois de 24 h elas desaparecem. O tamanho total dos filamentos parece não sofrer alterações. A partir dos dados coletados com as três técnicas, foi possível constatar que a terapia por fotobiomodulação, com os parâmetros utilizados, não consegue provocar mudanças perceptíveis em hemácias e em células epiteliais, in vitro. Porém, causa mudanças nos filamentos de actina de fibroblastos, in vitro, em particular a diminuição da densidade de actina total.

Estas células, cultivadas em meio de cultura MEMα suplementado com soro fetal bovino (SFB) 10%, entre a 10ª e 15ª passagem, foram submetidas a déficit nutricional com SFB 1% a 1 hora ou 24 horas antes da irradiação (protocolos A ou B, respectivamente). O meio foi mantido com suplementação de SFB 1% durante a irradiação e ao longo do tempo experimental nos grupos de I a IV, enquanto que para os grupos de V a VIII, o meio foi trocado para MEMα suplementado com SFB 10%. As células foram irradiadas com laser vermelho (660 nm) nas seguintes dosimetrias: 2,5 J/cm2 (grupos I e V), 5,0 J/cm2 (grupos II e VI) e 7,5 J/cm2 (grupos III e VII). As células não irradiadas constituíram os controles negativo (grupo IV) e positivo (grupo VIII). A avaliação da citotoxicidade/integridada da membrana celular foi realizada pela quantificação da desidrogenase lática (LDH) no meio de cultura após a irradiação. A viabilidade celular foi avaliada pelo método MTT 24, 48 e 72 horas após a irradiação. Os dados foram submetidos ao teste ANOVA a 2 critérios seguido pelo teste de Tukey (P<0,05). Os níveis de LDH no meio de cultura em que as SHED eram mantidas foram semelhantes quando comparados os protocolos A e B para a mesma densidade de energia e mesma concentração de SFB no momento da irradiação. No protocolo A, as células estavam mais viáveis 24 horas após a irradiação independente da densidade de energia, já no protocolo B, não houve alteração na viabilidade celular nos grupos IV (controle negativo), V, VI, VII e VIII (controle positivo) ao longo do tempo. Portanto, a indução de estresse celular por meio da suplementação do meio de cultura com SFB 1%, uma hora antes da irradiação, foi mais favorável para a manutenção da viabilidade de SHED após a irradiação, sem alterar os níveis de LDH extracelular, em comparação com os resultados após déficit nutricional por 24 horas. / The purpose of the present study was to analyze in vitro the effects of different nutritional deficit conditions to induce the state of cellular stress, prior to irradiation with different dosimetries of Low Level Laser Therapy (LLLT), on the biomodulation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED). These cells, cultured in MEMα culture medium supplemented with 10% FBS, between the 10th and 15th passage, were subjected to nutritional deficit with 1% FBS one hour or 24 hours prior to irradiation (protocols A or B, respectively). In both protocols, cells were irradiated with red laser (660 nm) in the following dosimetries: 2.5 J/cm2 (groups I and V), 5.0 J/cm2 (groups II and VI) and 7.5 J/cm2 (groups III and VII). Non-irradiated cells constituted the negative (group IV) and positive (group VIII) controls. Evaluation of citotoxicity/integrity of cellular membrane was performed by the quantification of lactate dehydrogenase (LDH) in the culture medium after irradiation. Cell viability was assessed by MTT method 24, 48 and 72 hours after irradiation. Data were submitted to two-way ANOVA followed by Tukey test (P<0.05). The levels of LDH at the culture medium where SHED were grown were similar when compared protocols A and B for the same energy density and same concentration of FBS during irradiation. In protocol A, cells were more viable 24 hours after irradiation, irrespective of the energy density, while in protocol B, there was no alteration in cell viability in groups IV (negative control), V, VI, VII and VIII (positive control) over time. Therefore, the induction of cellular stress by culture medium supplementation with 1% FBS, one hour prior to irradiation, was more favorable for maintaining SHED viability after irradiation, with no alteration in the levels of extracellular LDH, in comparison with the results after 24-hour nutritional deficit.

A fotobiomodulação (PBM) utiliza a luz nas porções do espectro visível e infravermelho para estimular a produção de trifosfato de adenosina (ATP), síntese de ácidos nucleicos, geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) e proliferação celular, promovendo resultados teraupêuticos benéficos, como a aceleração do reparo tecidual, analgesia e ativação de células do sistema imune. Deste modo, a presente pesquisa visou elucidar os efeitos da PBM sobre monócitos humanos in vitro, a fim de possivelmente estimular o burst oxidativo e, consequentemente, potencializar a defesa imune celular contra micro-organismos, além de analisar a expressão gênica em nível de RNA mensageiro (mRNA) de CD68, CD80, CD163, CD204, IL-6, TNF-α, IL-10 e SOD1 em macrófagos derivados destas células. Neste contexto, culturas primárias de monócitos humanos foram irradiadas com o laser de diodo InGaAlP (660nm)/ GaAlAs (780nm) - Twin Flex® (MMO, São Carlos, SP, Brasil), operando com potência de 40mW, área de feixe de 0,04cm2, densidade de potência de 1W/cm2 e doses independentes de 200J/cm2, 400J/cm2 e 600J/cm2. Após isto, as células foram submetidas ao ensaio de quimioluminescência para avaliação do burst oxidativo e quantificação da produção de ROS intracelulares e extracelulares. Ensaio da atividade microbicida foi realizado contra o fungo Candida albicans. Como controles positivo e negativo, utilizou-se o forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) e o diphenyleneiodonium (DPI), respectivamente. A viabilidade celular foi verificada por meio do reagente azul de Trypan. Adicionalmente, os monócitos humanos irradiados foram cultivados por 72 horas, a fim de observar a diferenciação destas células em macrófagos mediante estímulos relacionados a macrófagos ativados pela via clássica (M1) (LPS e Candida albicans) e a macrófagos ativados pela via alternativa (M2) (M-CSF). O RNA total foi extraído de cada grupo experimental e submetido à transcrição reversa e PCR em tempo real. GAPDH foi utilizado como controle endógeno e a expressão relativa de cada gene foi calculada utilizando o método 2-ΔCt. A produção de nitrito (NO2) também foi mensurada através da reação de Griess. Os resultados obtidos foram analisados por ANOVA e teste de Tukey ao nível de significância de 5%. Para dados com variâncias desiguais, utilizou-se o Kruskal-Wallis e pós-teste de Newman-Keuls. Desta forma, os monócitos irradiados apresentaram um aumento significativo na produção de ROS intracelulares e extracelulares comparativamente ao grupo controle (P < 0,001), sendo o comprimento de onda de 660nm e a dose de 400J/cm2, os parâmetros que mais se destacaram (P < 0,001). Como consequência deste perfil funcional elevado dos monócitos irradiados, a capacidade fungicida dos mesmos contra Candida albicans mostrou-se bastante aumentada (P < 0,001). Além disso, observou-se que a PBM (660nm; 400J/cm2) não causou danos à viabilidade celular dos monócitos nos dias subsequentes à irradiação laser. A análise da expressão gênica revelou que a PBM (660nm; 400J/cm2) aumentou significativamente a expressão da citocina pró-inflamatória TNF-α pelos monócitos irradiados (P = 0,0302), aproximando-os de uma resposta imune Th1. Complementarmente, um aumento significativo na produção de NO2 pelos monócitos irradiados também foi observado (P < 0,05). Portanto, a PBM, como empregada neste estudo, foi capaz de aumentar a geração de ROS e NO2, intensificar a atividade microbicida contra Candida albicans e aumentar a expressão de TNF-α, sugerindo uma modulação da PBM na indução de agentes pró-inflamatórios relacionados ao perfil funcional de M1. Vislumbramos em um futuro próximo, a reprodução desses resultados em monócitos humanos in vivo, colaborando no tratamento de candidoses orais, por exemplo. / Photobiomodulation (PBM) comprises the use of light within the visible and infrared spectrum to stimulate the production of adenosine triphosphate (ATP), nucleic acid synthesis, generation of reactive oxygen species (ROS) and cell proliferation, thus promoting beneficial therapeutical results, such as the acceleration of tissue repair, analgesia and activation of cells of the immune system. In that way, the present research aimed to elucidate the effects of PBM on human monocytes in vitro by possibly stimulating the oxidative burst of these cells and, consequently, enhancing the cellular immune defense against microorganisms, in addition to analyzing the gene expression at the messenger RNA (mRNA) level of CD68, CD80, CD163, CD204, IL-6, TNF-α, IL-10 and SOD1 in macrophages derived from these cells. Thus, primary cultures of human monocytes were irradiated with an InGaAlP (660nm)/ GaAlAs (780nm) - Twin Flex® diode laser (MMO, São Carlos, SP, Brazil), operating with power of 40mW, beam area of 0.04cm2, power density of 1W/cm2 and independent doses of 200J/cm2, 400J/cm2 e 600J/cm2. Cells were then submitted to the chemiluminescence assay for oxidative burst evaluation and quantification of intracellular and extracellular ROS production. A microbicidal activity assay was performed against the fungus Candida albicans. As positive and negative controls, phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and diphenyleneiodonium (DPI) were used, respectively. Cell viability was verified by Trypan blue reagent. Besides, irradiated human monocytes were cultured for 72 hours in order to observe the differentiation of these cells into macrophages by stimuli related to macrophages activated by the classical pathway (M1) (LPS and Candida albicans) and macrophages activated by the alternative pathway (M2) (M-CSF). Total RNA was extracted from each experimental group and submitted to reverse transcription and real-time PCR. GAPDH was used as endogenous control and the relative expression of each gene was calculated using the 2-ΔCt method. The production of nitrite (NO2) was also measured by the Griess reaction. The results obtained were analyzed by ANOVA and Tukey's test at a significance level of 5%. For data with unequal variances, Kruskal-Wallis and Newman-Keuls post-test were used. In that way, irradiated monocytes presented a significant increase in intracellular and extracellular ROS production compared to the control group (P < 0.001). The wavelength of 660nm and the dose of 400J/cm2 were the most relevant parameters (P < 0.001). As a consequence of this high functional profile of the irradiated monocytes, the fungicidal capacity of the monocytes against Candida albicans was shown to be greatly increased (P < 0.001). In addition, it was observed that PBM (660nm; 400J/cm2) did not cause damage to the cell viability of monocytes in the days following laser irradiation. Analysis of the gene expression revealed that PBM (660nm; 400J/cm2) significantly increased the expression of the proinflammatory cytokine TNF-α by the irradiated monocytes (P = 0.0302), bringing them closer to a Th1 immune response. Additionally, a significant increase in NO2 production by irradiated monocytes was also observed (P < 0.05). Therefore, PBM, as employed in this study, was able to increase ROS and NO2 generation, enhance microbicidal activity against Candida albicans and increase TNF-α expression, suggesting a modulation of PBM in the induction of related pro-inflammatory agents to the functional profile of M1. We envisage in a near future, the reproduction of these results in human monocytes in vivo, which would collaborate to the treatment of oral candidoses, for example. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Orientador: Cintia Lúcia Maniscalco / Banca: Gustavo Garkalns de Souza Oliveira / Banca: Lúcia Helena Vasques / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Gilson Helio Toniollo / Resumo: Os enxertos de pele são uma alternativa para o fechamento de lesões extensas onde a reaproximação dos bordos da ferida não é possível. A incorporação do enxerto no leito receptor depende de conexões arteriais e venosas dessas duas partes. Baseando-se em trabalhos em que a laserterapia de baixa intensidade acelera o processo de cicatrização e favorece angiogênese e, com intenção de se obter melhor resultado em enxertos cutâneos por semeadura, optou-se pela aplicação do laser HeNe. Dessa forma 20 ratos foram submetidos a esta técnica de enxertia e separados em dois grupos iguais, um tratado com laser e outro não (controle). Os resultados mostraram maior velocidade de cicatrização, menor tempo de reação inflamatória, maior número de vasos sanguíneos, epitelização e queratinização precoces nos animais tratados com laser em relação aos não tratados, sugerindo então que a laserterapia de baixa intensidade é efetiva para o uso em enxertos por semeadura / Abstract: Skin grafts are the alternative to close big lesions, when the borders approach are difficult or impossible. The graft incorporation on receptor site depends of blood vessels conection. Based on literature that low-level laser therapy acceletares the cicatricial process and favors the angiogenesis, HeNe laser was applied to accelerate the cicatricial process on island skin grafts. For this, 20 rats were submitted to this graft technique and divided in two groups with the same number of animals, one called laser and other called control. The results show faster cicatrization, short inflammatory period, larger number of blood vessels and precocious epitelization and queratinization on he laser group. These facts suggest that low-level laser therapy is effective and helps island skin grafts cicatrization / Doutor