O genótipo e a carga parasitária constituem dois dos principais fatores associados à patogênese na toxoplasmose congênita. Na Europa e nos EUA, o genótipo II é o mais prevalente em infecções congênitas, enquanto que na América do Sul existem evidências apontando uma maior frequência de genótipos atípicos ou recombinantes, associados a casos mais graves. A carga parasitária também parece atuar como fator de risco independente associado ao prognóstico fetal. Os objetivos do estudo foram padronizar uma amplificação quantitativa (qPCR) com iniciadores do gene B1 para avaliar a carga parasitária; determinar o genótipo parasitário por multiplex-nested-PCR-RFLP dos marcadores 5\'-SAG2, 3\'-SAG2, SAG3 e GRA6, seguido de sequenciamento para confirmação da RFLP e análise de mutações; e verificar se existiria associação entre a carga parasitária e os genótipos parasitários nas mesmas gestações. Foram analisadas 76 amostras de líquido amniótico de gestações com toxoplasmose e 31 amostras controle. A qPCR apresentou LOD de 10 parasitos/mL, detectou as 76 amostras de estudo e nenhum controle. As cargas parasitárias variaram de 222 a 808.328 parasitos/mL. Houve duas amostras com valores acima de 104 parasitos/mL, apesar de todas as gestantes serem tratadas. Na genotipagem, SAG3 amplificou 55 amostras (54 tipo III e uma tipo II); 5\' e 3\'-SAG2 amplificaram 54 amostras (todas tipo I), e GRA6, amplificou 20 amostras (todas tipo III). A única amostra com genótipo parasitário SAG3-tipo II foi a que apresentou mais mutações (n=4), carga parasitária de 958 parasitos/mL, porém o recém-nascido foi assintomático. Houve diferença do número de amostras amplificadas por SAG3, e 5\' e 3\'-SAG2 em relação a GRA6 (McNemar, p<0,001). Os sequenciamentos confirmaram 100% dos resultados de RFLP, e foram encontradas 24 amostras com e 52 sem mutações, não existindo diferenças entre as cargas parasitárias dos dois grupos (Mann-Whitney, p= 0,085). Mais de uma mutação foi observada em cinco amostras. Foram detectadas 37 mutações no estudo: 26 heterozigotas/sinônimas e 11 homozigotas/sinônimas, não havendo regiões hot spot. Quanto à correlação clínico-laboratorial, dos 76 recém-nascidos, todos apresentaram IgM positiva ao nascimento, e 75 eram assintomáticos. O único recém-nascido sintomático apresentava tríade de Sabin e uma das duas cargas parasitárias mais elevadas do estudo (309.574 parasitos/mL), porém o genótipo não foi discriminante e não havia mutações. A outra amostra com carga parasitária acima de 104 parasitos/mL pertencia a recém-nascido assintomático, com genótipo não discriminante, e sem mutações. O estudo concluiu que a técnica de Real Time PCR (qPCR) foi padronizada com sucesso, usando os iniciadores B22 e B23 do gene B1 do parasito, podendo ser empregada na rotina diagnóstica. Além disso, foi possível realizar a genotipagem das amostras incluídas no estudo, com melhor desempenho de SAG3 e 5\' e 3\'-SAG2. O sequenciamento confirmou a confiabilidade da técnica de RFLP, e encontrou frequência elevada de mutações, todas sinônimas, sem regiões hot spot, e aparentemente sem associação com a carga parasitária. Houve elevada variabilidade das cargas parasitárias, porém grande homogeneidade dos genótipos parasitários, não tendo sido observada associação entre a carga parasitária e os genótipos de T. gondii no estudo. / The genotype and the parasite load are two of the main factors associated with pathogenesis in congenital toxoplasmosis. In Europe and the USA, genotype II is the most prevalent in congenital infections, while in South America there is evidence pointing to a higher frequency of atypical or recombinant genotypes associated with more severe cases. The parasite load also appears to act as an independent risk factor associated with fetal prognosis. The study objectives were to standardize a quantitative amplification (qPCR) with B1 gene primers to assess the parasite load; determine the genotype by multiplex-nested-PCR-RFLP of 5\' and 3\'-SAG2, SAG3 and GRA6 markers, followed by sequencing to confirm RFLP and analyze mutations, verifying whether there is association between parasite load and parasite genotypes in the same pregnancies. We analyzed 76 amniotic fluid samples from pregnancies with toxoplasmosis and 31 controls. The qPCR presented LOD of 10 parasites/mL, detected the 76 study samples and no control. Parasite loads ranged from 222 to 808,328 parasites/mL. There were two samples with values above 104 parasites/mL, despite all pregnant women be treated. In genotyping, SAG3 amplified 55 samples (54 type III and 1 type II); 5 \'and 3\'-SAG2 amplified 54 samples (all type I); and GRA6, amplified 20 samples (all type III). The only sample with genotype SAG3-type II showed the highest number of mutations (n=4), parasite load of 958 parasites/mL, but the newborn was asymptomatic. There were differences in the number of samples amplified by SAG3, and 5 \'and 3\'-SAG2 over GRA6 (McNemar test, p <0.001). Sequencing confirmed 100% of the RFLP results; and found 24 samples with and 52 without mutations, with no difference between the parasite load of these two groups (Mann-Whitney, p= 0.085). More than one mutation was observed in five samples. A total of 37 mutations were detected in this study: 26 heterozygotes/synonymous and 11 homozygous/synonyms, with no hot spot regions. Regarding the clinical-laboratory correlation, among the 76 newborns, all showed positive IgM at birth, and 75 were asymptomatic. The only symptomatic newborn presented the Sabin\'s triad and one of the two higher parasite loads in the study (309,574 parasites/mL). However, the genotype was not discriminant and no mutations were detected. The other sample with parasite load above 104 parasites/mL belonged to an asymptomatic newborn with a non-discriminating genotype, and no mutations. The study concluded that the Real Time PCR (qPCR) was successfully developed with primers B22 and B23 of the parasite B1 gene, and can be used in routine practice. Moreover, it was possible to perform the samples genotyping, with better performance of SAG3 and 5 \'and 3\'-SAG2. Sequencing results confirmed the RFLP reliability, and found a high frequency of mutations, all synonymous, with no hot spot regions, and apparently not associated with the parasite load. There was a high variability in parasite load, however great homogeneity of parasite genotypes, with no association between the parasite load and T. gondii genotypes in the study.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 liliane.pdf: 1600508 bytes, checksum: e9fcd25a4570269e3820045946b731d2 (MD5) Previous issue date: 2008-04-01 / Toxoplasmosis is a protozoosis of high incidence in the world, caused by Toxoplasma gondii, transmitted by the ingestion of food contaminated by oocysts found in feline feces, or cists in raw or underdone meat, congenitally in other instances. The disease is usually asymptomatic, but in embryos or in imunodrepessive patients it may be devastating. In this work, the experimental serologic profile has been evaluated after specific therapy in isogenies mice Balbc, infected with a cystogenic lineage ME-49 of T. gondii. Fifty animals have been intra-peritoneal inoculated with 10 cists of T. gondii (lineage ME-49) obtained from the maceration of mice brains of previously inoculated mice. The mice have been divided into three groups of 15 animals each and a negative control group (not infected and not treated) of 5 animals. All the animals have been daily accompanied, and the symptoms were verified during 20 days. After this period, two groups of 15 animals underwent specific therapy schemes in which; group A: pirimetamin (12,5mg/kg/day) + folic acid; group B: pirimetamin + folic acid + sulfadiazine (500mg/kg/day), orally administrated during 10 consecutive days. After this period, all animals have been scarified, with an interval of 5 days, and the blood has been collected by a heart puncture and the serum separated for the Indirect Immuno-fluorescence Reaction. The samples from the treated animals presented a significant diminution in the quantity of (IgG) antibodies evaluated by the two schemes by the indirect immuno-fluorescence reaction (t=3,5, and t=7,6 respectively), in relation to the control group. There have been no significant differences between the two therapeutic schemes (t=0,36). Our results have shown that the experimental precocious treatment reduces significantly the IgG levels, suggesting a diminution of antigenic stimulus, and consequently a better prognosis for toxoplasmosis. / A Toxoplasmose é uma protozoose de alta prevalência mundial, causada pelo Toxoplasma gondii. É transmitida pela ingestão de alimentos contaminados com oocistos excretados em fezes de felinos, ou cistos, em carnes cruas ou mal cozidas, congenitamente entre outros mecanismos. A doença é usualmente assintomática, mas em fetos e/ou pacientes com imunodepressão, pode ser devastadora. Neste trabalho foi avaliado o perfil sorológico experimental após terapêutica especifica em camundongos isogênicos Balb/C infectados com cepa cistogênica ME-49 de T. gondii. Cinqüenta animais foram inoculados intraperitonealmente, individualmente, com 10 cistos da cepa ME-49 obtidos de macerado de cérebros de camundongos previamente inoculados. Os camundongos foram divididos em três grupos com 15 animais em cada grupo e um grupo controle negativo de 5 animais (não infectados e não tratados). Todos os animais foram acompanhados diariamente, observando-se sintomatologia, por 20 dias. Após este período dois grupos A e B, foram submetidos a esquemas terapêuticos específicos; Grupo A: pirimetamina (12,5mg/kg/dia)+acido fólico; grupo B: pirimetamina+acido fólico+sulfadiazina (500mg/kg/dia), por um período de 10 dias consecutivos, por via oral, onde as drogas foram ministradas de acordo com o peso dos animais. Após este período eles foram sacrificados, com intervalo de 5 dias, o sangue coletado por punção cardíaca, e o soro separado para a reação de imunofluorescência indireta. As amostras provenientes dos animais tratados apresentaram diminuição significativa nos títulos de anticorpos (IgG) avaliados com os dois esquemas, pela Reação de Imunofluorescência Indireta (t=3.5, e t=7,6 respectivamente), em relação ao grupo controle. Entre os dois esquemas terapêuticos não houve diferenças significativas (t=0,36). Nossos resultados demonstraram que o tratamento experimental precoce reduz significativamente os níveis de IgG, sugerindo uma diminuição do estimulo antigênico, e conseqüentemente um melhor prognóstico para a toxoplasmose.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-04-03T11:43:46Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luiza Gabriella Ferreira de Paula - 2017.pdf: 1087428 bytes, checksum: 1f44ad405fb1dfcfc89bc184e8564f5d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-03T12:06:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luiza Gabriella Ferreira de Paula - 2017.pdf: 1087428 bytes, checksum: 1f44ad405fb1dfcfc89bc184e8564f5d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-03T12:06:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luiza Gabriella Ferreira de Paula - 2017.pdf: 1087428 bytes, checksum: 1f44ad405fb1dfcfc89bc184e8564f5d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-03 / Veterinarians, teachers, students and employees of the Veterinary Hospital of the Veterinary and Zootechnical School of the Federal University of Goiás are exposed to daily occupational hazards, including zoonotic pathogens. This study is aimed at analyzing the occurrence of anti-Leptospira spp., Anti-Toxoplasma gondii antibodies and after pre-exposure rabies vaccination in the internal members of the Veterinary Hospital through the microscopic sero-agglutination technique (SAM), the simplified fluorescence inhibition microtest (SFIMT) and the indirect hemagglutination test. Response to the serovars Automnalis, Copenhageni, Grippotyphosa, Butembo, Icterohaemorrahagiae, Australis and Canícola were detected in 6,15% (8/130). Among the 130 analyzed, 96.15% (125/130) presented serum-neutralization titers for anti-rabies antibodies post-pre-exposure prophylactic vaccination for individual immunological protection and 3.85% (5/130) did not. In relation to the anti-Toxoplasma gondii antibodies, 70% (91/130) were positive. The main activities reported by the participants included clinical care, animal restraint activities, sample collection and analysis, imaging diagnosis, pharmaceutical activities, practical classes, emergency procedures, surgical activities, necropsies and environment clean-up. The reported risk factors were contact with pathogens, accidents with sharp objects, bites, pecks, scratches, recoil, direct contact with secretions and excretions, ionizing radiation, patients of unknown origin, contact with high flow of people and animals, incorrect or incomplete information provided by animal tutors, absence of auxiliaries in some procedures and biological waste. Important biosafety measures pointed out by the participants were: obtain the patient's complete history, use protective equipment correctly, be more careful when carrying out routine procedures, adequate containment of all animals, pre-exposure vaccination of team members, awareness, and proper training and disposal of waste. By demonstrating a sense of the risks and dangers to which they are exposed and by the appropriate biosafety measures, practitioners and students are closer to an adequate level of biosecurity. / Médicos veterinários, professores, estudantes e funcionários que atuam em instituições de saúde como o Hospital Veterinário da Escola de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás estão expostos a riscos ocupacionais diariamente, incluindo patógenos zoonóticos. Este estudo objetivou analisar a ocorrência de anticorpos anti-Leptospira spp., anti-Toxoplasma gondii e após vacinação antirrábica pré-exposição nos membros internos do Hospital Veterinário por meio das técnicas de soroaglutinação microscópica (SAM), do microteste simplificado de inibição de fluorescência (SFIMT), e da realização da prova de hemaglutinação indireta. Resposta aos sorovares Automnalis, Copenhageni, Grippotyphosa, Butembo, Icterohaemorra-hagiae, Australis e Canícola foram detectadas em 6,15% (8/130). Dentre as 130 analisadas, 96,15% (125/130) apresentaram títulos de soro-neutralização para anticorpos anti-rábicos pós-vacinação pré-exposição para proteção imunológica individual e 3,85% (5/130) não. Em relação aos anticorpos anti-Toxoplasma gondii, 70% (91/130) apresentaram-se positivas. As principais atividades relatadas pelos participantes incluíram atendimentos clínicos, atividades de contenção, colheita e análises de amostras, diagnóstico por imagem, atividades na farmácia, aulas práticas, atendimentos emergenciais, atividades cirúrgicas, necropsias e limpeza do ambiente. Os fatores de risco relatados foram o contato com agentes patogênicos, acidentes com perfurocortantes, mordidas, bicadas, arranhões, coices, contato direto com secreções e excreções, radiações ionizantes, pacientes de origem desconhecida, contato com elevado fluxo de pessoas e animais, informações incorretas ou incompletas fornecidas pelos tutores dos animais, ausência de auxiliares em alguns procedimentos e resíduos biológicos. Já as medidas de biossegurança apontadas pelos participantes foram a obtenção do histórico completo do paciente, uso correto de equipamentos de proteção, maiores cuidados ao realizarem os procedimentos de rotina, contenção adequada de todos os animais, vacinação pré-exposição dos membros da equipe, conscientização e treinamento e descarte adequado dos materiais e resíduos. Ao demonstrarem noção dos riscos e perigos aos quais estão expostos e das medidas adequadas de biossegurança que podem colocar em prática, os profissionais e estudantes se encontram mais próximos de um nível de biosseguridade adequado.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-01-28T18:03:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoSoroepidemiologicoBrucella.pdf: 418722 bytes, checksum: 64411481a935abd8ead867d15a00af35 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-02-05T14:04:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoSoroepidemiologicoBrucella.pdf: 418722 bytes, checksum: 64411481a935abd8ead867d15a00af35 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-05T14:04:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoSoroepidemiologicoBrucella.pdf: 418722 bytes, checksum: 64411481a935abd8ead867d15a00af35 (MD5) Previous issue date: 2009 / Pesquisou-se a frequência da ocorrência de anticorpos anti-Brucella abortus, Toxoplasma gondii e vírus da artrite encefalite caprina (CAEV) em caprinos de 14 unidades produtoras localizadas dos Estados do Pará e Maranhão. No Estado do Pará foram analisados animais dos municípios de Benevides, Castanhal, Santa Izabel do Pará e Moju e no Estado do Maranhão, o município de Chapadinha. Os testes sorológicos realizados para o diagnóstico da brucelose foi o teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), como teste de triagem, e o 2- Mercaptoetanol (2-Me), como teste confirmatório. Para as análises de toxoplasmose foi utilizado a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e para CAEV Imunodifusão de Gel de Agarose (IDGA). O resultado das análises de brucelose mostrou-se negativo para 100,0% das amostras analisadas. Para toxoplasmose e CAEV a frequência obtida foi 23,5% (97/412) e 21,6% (85/393), respectivamente. Foi observada diferença estatística na relação entre a ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e a faixa etária dos caprinos, mostrando que animais com idade superior a 24 meses tiveram mais risco de estarem infectados quando comparados com animais mais novos OR= 2,15 (IC 95% 1,19 – 3,88). Já os fatores de risco encontrados para CAEV foram: falta de conhecimento da doença OR=6,45 (IC 95% 2,88-14,47); a não utilização de material descartável, OR=10,85 (IC 95% 4,85-24,28); sistema de criação extensivo OR=10,85 (IC 95% 4,85-24,28); sistema de criação semi-extensivo OR=3,71(IC 95% 1,64-8,39) e manejo OR=11,4 (IC 95% 5,51-23,60). Conclui-se que as unidades produtoras de caprinos dos Estados do Pará e Maranhão apresentam positividade em seus rebanhos para toxoplasmose e CAEV. / This study aimed at searching for the occurrence and frequency levels of the antibodies anti- Brucella abortus, Toxoplasma gondii and the Caprine Arthritis Encephalitis Virus (CAEV) in caprine from 14 distinct production units within the states of Pará and Maranhão. In the state of Pará, animals from the municipalities of Benevides, Castanhal, Santa Izabel do Pará and Moju have been analyzed, whereas in the state of Maranhão the study covered the municipality of Chapadinha. The serological tests accomplished with the purpose of diagnosing brucellosis disease were, the Buffered Acidified Plate Antigen test (BAPA), employed as triage test, and the 2-Mercaptoetanol (2-Me), as confirmatory test. For the toxoplasmosis analysis the Indirect Immunofluorescence Reaction (IIFR) and for CAEV the Agarose Gel Immunodiffusion (AGID) have been used respectively. The result of the brucellosis analysis has shown negativity in 100,0% of the studied samples. For toxoplasmosis and CAEV the respective incidences were 23,5% (97/412) and 21,6% (85/393). Statistical differences were observed in the relationship between anti-Toxoplasma gondii antibodies and the age of the caprines, showing that animals over 24-month old have undergone more risks of being infected when compared to animals at early ages OR=2,15 (IC95% 1,19 – 3,88). On the other hand, the risk factors found for CAEV were: lack of knowledge about the disease OR=6,45 (IC95% 2,88-14,47); the use of non - disposable materials, OR=10,85 (IC95% 4,85-24,28); the free-range farming system OR=10,85 (IC95% 4,85-24,28), the semi-extensive farming system OR=3,71 (IC95% 1,64-8,35) and handling procedures OR=11,4 (IC95% 5,51-23,60). It has been concluded that the caprine production units from Pará and Maranhão showed positive results for the studied diseases in their livestock.