Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-10-09T12:50:08Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline Luciana Rodrigues - 2011.pdf: 1902000 bytes, checksum: f7591f34d543c33bcea4f08d4cb14fa8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-10-09T14:43:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline Luciana Rodrigues - 2011.pdf: 1902000 bytes, checksum: f7591f34d543c33bcea4f08d4cb14fa8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:43:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline Luciana Rodrigues - 2011.pdf: 1902000 bytes, checksum: f7591f34d543c33bcea4f08d4cb14fa8 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-04-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The interest in the preservation of species threatened of extinction has increased the attention for cryopreservation of semen from the epididymis tail of animals that have died. Determination of the time in which the sperm is still viable for preservation represents a benefit for future research and use in animal-assisted breeding programs. In addition, the sperm cryopreservation process results in the production of radical free by the metabolism of the cell causing damage. The objectives of this study were: 1) to determine the viable time interval for cryopreservation of the epididymis tail sperm in cattle, 2) to test the addition of two antioxidants in the freezing media, 3) to determine the viability of semen samples from the tail of the epididymis in the production of embryos by in vitro fertilization. To guarantee the quality of freezing, the parameters: motility, vigor and sperm pathology in the pre-freezing were analyzed. After these assessments the material was divided into three treatments: tris-egg yolk diluent (TTG), Tris-egg yolk diluent catalase (TCAT) and tris-egg yolk diluent trolox (TTROL) and frozen in determined curve by pre-freezing automated process. After thawing, the motility and vigor were evaluated using CASA. Analysis of plasma membrane integrity and acrosome, test resistance thermometer (TTR), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), oxidation of 3,3 'diaminobenzidine (DAB) and in vitro fertilization (IVF) were also evaluated. According to the movement patterns analyzed using CASA, the analysis of data generated by the study allow us to conclude the characteristics of sperm in each treatment and it change on the different times of cooling (0h, 24h, 48h and 72h). In the assessment of integrity (INT) and injured sperm (LS), no statistical differences between the moments or between treatments were observed. Rates of cleavage D7 and D8 were statistically different, at 72 hours the trolox showed negative action. The results shown indicate that this procedure is important for conservation of animals of high genetic value or animals endangered that die suddenly. Further studies should be performed testing associations of antioxidants directly in the middle of fertilization and embryo culture, especially in production systems of embryos with high oxygen tension, as used in this experiment. xxii / O interesse pela preservação de espécies em risco de extinção tem aumentado a atenção pela criopreservação de sêmen da cauda do epidídimo de animais que morrem subitamente. A determinação do momento até quando os espermatozóides estão viáveis para preservação representa um benefício para pesquisas futuras e sua utilização em programas de reprodução animal assistida. Além disso, o processo de criopreservação dos espermatozóides resulta na produção de radicais livres pelo próprio metabolismo desta célula e causando danos. Os objetivos deste estudo foram: 1) determinar o intervalo de viabilidade de resfriamento de espermatozóides da cauda do epidídimo de bovinos, 2) testar o efeito da adição de dois antioxidantes nos meios de congelação, 3) determinar a viabilidade das amostras de sêmen da cauda do epidídimo na produção de embriões por fertilização in vitro. Para garantia da qualidade da congelação foram realizadas análises de motilidade, vigor, patologia espermática, no momento pré-congelação. Após estas avaliações o material foi dividido em três tratamentos: diluente tris-gema-glicerol (TTG), diluente tris-gema-glicerol com catalase (TCAT) e diluente tris-gema-glicerol com trolox (TTROL) e congelados em curva pré-determinada por processo de congelação automatizada. Após a descongelação foram avaliadas a motilidade e vigor com auxílio do CASA, análises de integridade de membrana plasmática e acrossoma, teste de termorresistência (TTR), substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARs), oxidação da 3,3’ diaminobenzidina (DAB) e fertilização in vitro (FIV). De acordo com os padrões de movimentos observados pelo CASA, a análise dos dados gerados pelo estudo nos possibilitam concluir as características dos espermatozóides em cada tratamento e como se comportaram nos momentos de resfriamento logo após o abate, 24 horas, 48 horas e 72 horas após resfriamento à 5ºC ( 0h, 24h, 48h e 72h). O uso dos antioxidantes não garantiu melhor proteção e nem auxílio na funcionalidade dos espermatozóides do epidídimo nos diferentes períodos de resfriamento. lulas imóveis) não houve diferenças estatísticas. Nas taxas de clivagem D7 e D8 foram observadas diferenças estatísticas, o α-tocoferol no momento 72 h demonstrou ação negativa. Os resultados demonstrados revelaram que tal procedimento é de suma importância para conservação de animais de alto xx valor genético ou animais em risco de extinção que morrem subitamente. Novos estudos devem ser realizados testando associações de antioxidantes ou o uso de antioxidantes diretamente no meio de fecundação e cultivo embrionário, especialmente em sistemas de produção de embriões com alta tensão de oxigênio, como o utilizado neste experimento.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-05T11:46:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AnaliseImunohistologicaDesenvolvimento.PDF: 2859553 bytes, checksum: 2230002045f35242ef2d2c221a773945 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-09T21:47:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AnaliseImunohistologicaDesenvolvimento.PDF: 2859553 bytes, checksum: 2230002045f35242ef2d2c221a773945 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T21:47:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AnaliseImunohistologicaDesenvolvimento.PDF: 2859553 bytes, checksum: 2230002045f35242ef2d2c221a773945 (MD5) Previous issue date: 2014-12-11 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi estudar a foliculogênese ovariana de Saimiri sciureus. Para tanto, foi avaliada a expressão de fatores intra-ovarianos ligados ao desenvolvimento, inibição folicular e proliferação celular, além da investigação dos efeitos do pré-tratamento com o análogo da vitamina E, Trolox®, sobre a viabilidade e funcionalidade folicular, índice de apoptose, proliferação celular, vascularização e fibrose, após o auto-transplante do tecido ovariano fresco. Foi possível imunolocalizar pela primeira vez a expressão das proteínas: fator crescimento e diferenciação-9 (GDF-9), c-Kit/Kit Ligante e Ki-67 e confirmar a expressão do hormônio anti-mülleriano (AMH) em diferentes fases do desenvolvimento folicular de macaco de cheiro. No que diz respeito a pré-incubação com o antioxidante Trolox®, pôde-se observar uma melhora na sobrevivência folicular após o autotransplante, diminuição da taxa de apoptose em células do estroma, porém, aumento nas áreas de fibrose no tecido. Os nossos resultados sugerem que o tecido ovariano fresco pode ser incubado e enxertado sem grande impacto sobre o crescimento folicular precoce e a morfologia após auto-transplante subcutâneo por curto período. Acreditamos que nossos resultados oferecem uma contribuição importante para a compreensão do processo de foliculogênese em macacos neotropicais. Este conhecimento é uma ferramenta importante para avaliar a viabilidade folicular e funcionalidade após a criopreservação, transplante de tecido ovariano e cultivo in vitro de folículos pré-antrais, em especial para os animais com risco de extinção e às mulheres com risco de perda de fertilidade devido à quimioterapia e radioterapia. / The main objective of the present work was to study ovarian folliculogenesis in Saimiri sciureus. Therefore, we evaluated the expression of intra-ovarian factors related with the follicular development, inhibition and cell proliferation, as well as investigation the effects of pretreatment with vitamin E analogue, Trolox, on the viability and follicular function, apoptosis index, cell proliferation, vascularization and fibrosis after auto-transplanted of fresh ovarian tissue. It was possible for the first time imuno localize proteins expressed as: growth and differentiation factor -9 (GDF -9), c- kit/Kit Ligand and Ki-67 and confirm the expression of anti-Mullerian Hormone (AMH) in different stages of follicular development in squirrel monkey ovary. Regarding pre-incubation with the Trolox antioxidant, it can improves follicular survival after autotransplantation, decrease apoptosis rates in stromal cells, although increase areas of fibrosis after graft. Our results suggest that fresh ovarian tissue can be grafted and incubated without major impact on early follicular growth and morphology after subcutaneous autotransplantation for a short-term. We believe that our results provide an important contribution to understanding the process of folliculogenesis in neotropical monkeys. This knowledge is an important tool to evaluate follicular viability and functionality after cryopreservation of ovarian tissue transplantation and in vitro culture of early follicles, especially for animals at risk of extinction and women that are undergoing to chemotherapy and radiation with risk of loss fertility.

The objective of the research was to investigate proton-coupled electron transfer (PCET) reactions involving antioxidants to gain insight into the detailed mechanisms of glutathione (GSH), Trolox, and α-tocopherol (α-TOH). PCET reactions are complex redox reactions that transfer electrons and protons sequentially or in concert. These reactions are ubiquitous in natural or artificial processes that produce electrochemical energy that is extractable as electricity or as chemical fuels of high energy content. Examples of processes based on PCET are photosynthesis, respiration, nitrogen fixation, carbon dioxide reduction, redox fuel cells, and artificial photosynthesis. Antioxidants were selected as a PCET model to understand the coupling between proton transfer (PT) and electron transfer (ET) in order to elucidate structure-reactivity relationships under different experimental conditions. PCET reactions were studied with a set of electrochemical techniques to propose a preliminary mechanism that could be validated with digital simulations matching the electrochemical response. In some cases, other analytical techniques were used to aid in the system characterization. This thesis presents the results and discussion of the effects of oxidant-base pairs on the mediated oxidation of GSH, the -2e-/-H+ process of Trolox in aqueous and nonaqueous solvents with various pH values, and the particle collision electrolysis of α-tocopherol in oil-in-water emulsion droplets on an ultramicroelectrode. Ultimately our goal was to determine the kinetic and thermodynamic factors that control PCET reactions so that they can be applied in designing artificial systems for the production of energy using more abundant reagents with lower cost and better yields.

Orientador: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Antônio Cláudio Tedesco / Banca: Francisco Guilherme Leite / Resumo: Os objetivos do estudo foram: avaliar o efeito antioxidante do Trolox® 1) no meio de manutenção de embriões sobre as taxas de concepção (25 e 46 dias) e a perda gestacional de receptoras bovinas Holandesas repetidoras de serviço, em dois períodos (abril-junho/setembro-novembro) e 2) no meio de transporte de oócitos bovinos aspirados de ovários de abatedouro sobre as taxas de clivagem, blastocisto e eclosão in vitro. No Experimento 1, doadoras de embriões foram superovuladas e submetidas à lavagem uterina. Os embriões colhidos foram divididos em dois grupos, deixados em meio com ou sem antioxidante, por 2 a 6h. No Experimento 2, folículos foram aspirados e os complexos cumulus-oócito grau I e II foram divididos em quatro grupos: Controle 8h, Antioxidante 8h, Controle 20h e Antioxidante 20h. Então, foram mantidos em uma transportadora de oócitos (37ºC) por 8 ou 20 horas. Após a maturação, fecundação e cultivo in vitro, as taxas de clivagem (D3), blastocisto (D6, 7 e 9) e eclosão (D11) foram avaliadas. Alíquotas de 200 μL do meio de transporte foram retiradas em cada momento experimental (0, 8 e 20h) para realização dos testes de capacidade antioxidante total (CAT). No Experimento 1, não houve efeito de tratamento sobre as variáveis avaliadas. Foi verificado efeito de período experimental (P=0,001), categoria da doadora (P<0,05), qualidade embrionária (P=0,049) e intervalo Divisão dos Grupos-Inovulação (P<0,0001). No Experimento 2, não houve efeito de tratamento sobre as taxas analisadas. No entanto, houve redução das taxas de clivagem e blastocisto (D7 e 9) nos grupos 20 horas. Ainda, no D6 foram obtidas taxas de blastocisto semelhantes nos grupos Antioxidante 8 e 20h. A análise da CAT evidenciou que o Trolox® auxiliou o combate às ROS. / Abstract: The objectives of the present study were to evaluate the effect of the addition of an antioxidant (Trolox®) 1) to a holding media for bovine in vivo produced embryos, on conception rates 25 and 46 days of pregnancy and pregnancy loss, in Holstein bovine recipients at 4th or more service, during two periods of the year (April-June/September-November) and 2) to a transport media for bovine oocytes aspirated from slaughter house ovaries, on in vitro cleavage, blastocyst and hatching rates. In Experiment 1, donor cows were superovulated and submitted to uterine flushings. The recovered embryos were divided into two groups, kept in holding media with or without antioxidant, for 2-6h. In Experiment 2, follicles were aspirated and cumulus-oocyte complexes grade I and II were divided into four groups: Control 8h, Antioxidant 8h, Control 20h and Antioxidant 20h. Oocytes were kept in a transportable machine (37ºC) for 8 or 20 hours. After in vitro maturation, fertilization and culture, cleavage (D3), blastocyst (D6, 7 and 9) and hatching rates (D11) were evaluated. Samples (200 μL) of the transport media were collected in each experimental moment (0, 8 e 20h) for total antioxidant capacity assay (TACA). In Experiment 1, no effect of treatment was observed. Effects of experimental period (P=0.001), donor category (P<0.05), embryo quality (P=0.049) and interval Group division-embryo transfer (P<0.0001) were detected. In Experiment 2, no effect of treatment was found on the analyzed rates. However, reduction on cleavage and blastocyst (D7 e 9) rates was detected on Groups 20h. Also, on D6 similar blastocyst rates were observed in Groups Antioxidant 8 and 20h. The analysis of TACA evidenced that Trolox® collaborated with the combat against the ROS. / Mestre