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Tripanossomatídeos em cães de pacientes chagásicos crônicos, habitantes de Botucatu (SP) e região, avaliados pelos métodos de xenodiagnóstico artificial, hemocultura e reação em cadeia da polimerase (PCR) para Trypanosoma cruzi e/ou Trypanosoma rangeli /

Lucheis, Simone Baldini. January 2003 (has links)
Orientador: Jussara Marcondes-Machado / Resumo: Não disponível. / Abstract: Not available. / Doutor
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Atividade biológica de derivados vegetais de famílias da flora brasileira sobre as linhagens I e II de Trypanosoma cruzi (Kinetoplastida, Trypanosomatidae) /

Alves, Renata Tomé. January 2011 (has links)
Orientador: João Aristeu da Rosa / Coorientador: Sergio de Albuquerque / Banca: Mara Cristina Pinto / Banca: Carlos Eugenio Cavasini / Banca: Ana Amélia Carraro Abrahão / Banca: Maria Tercilia Vilela Azeredo de Oliveira / Resumo: A atividade de 92 extratos etanólicos de espécies de Annonaceae, Apiaceae, Cucurbitaceae, Lauraceae, Moraceae, Nyctaginaceae, e Verbenaceae foi avaliada sobre formas epimastigotas das cepas Y e Bolívia de Trypanosoma cruzi, nas concentrações de 500, 350, 250 e 100 µg/ml. Quinze extratos de Lippia salviaefolia, L. sidoides, L. laciocalycina, L. lupulina, L. balansae, L. velutina e suas frações hexânicas, de acetato de etila, n-butanólicas e aquosas foram avaliados sobre formas epimastigotas do clone B5 da cepa CL Brener de T. cruzi, nas concentrações de 32, 8, 2 e 0,5 µg/ml. Adicionalmente, as amostras mais promissoras de Lippia sp foram avaliadas, in vitro, sobre as formas tripomastigotas e amastigotas de T. cruzi e, in vivo, em camundongos BALB/c. A citotoxicidade foi avaliada em fibroblastos da linhagem LLCMK2 e o benzonidazol foi utilizado como controle positivo. Todos os 92 extratos etanólicos, testados sobre as formas epimastigotas da cepa Y de T. cruzi, foram inativos. Os melhores resultados entre as 92 amostras avaliadas foram obtidos com o extrato etanólico de Ocotea paranapiacabensis, por apresentar atividade tripanocida sobre as formas epimastigotas da cepa Bolívia e toxicidade moderada, e com o extrato de Aegiphilla lhotzkyana, que demonstrou atividade tripanocida moderada sobre a cepa Bolívia e moderada citotoxicidade. Dentre os extratos etanólicos de Lippia sp avaliados, o de folhas de L. velutina apresentou a maior atividade tripanocida sobre as formas epimastigotas e toxicidade moderada, mas foi inativo contra as formas tripomastigotas e amastigotas de T. cruzi. Os melhores resultados foram obtidos da sua fração de acetato de etila que apresentou atividade, sobre formas epimastigotas, 42 vezes maior do que o benzonidazol, com Índice de Seletividade (IS) de 371,0, além de atividade moderada sobre as formas tripomastigotas. Esta amostra foi inativa contra... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Trypanocidal activity of 92 ethanol extracts of species of Annonaceae, Apiaceae, Cucurbitaceae, Lauraceae, Moraceae, Nyctaginaceae, and Verbenaceae was evaluated using the epimastigote forms of the Y and Bolivia strains of Trypanosoma cruzi at a concentration of 500, 350, 250, and 100 µg/ml. Fifteen extracts of Lippia salviaefolia, L. sidoides, L. laciocalycina, L. lupulina, L. balansae, L. velutina, their liquid-liquid extraction fractions of hexane, ethyl acetate, n-butanol and water were evaluated using the epimastigote forms of B5 clone of CL Brener strain of T. cruzi at a concentration of 32, 8, 2, 0.5 µg/ml. Additionally, samples of the most promising of Lippia sp were evaluated, in vitro, using trypomastigote and amastigote forms of T. cruzi and, in vivo, in BALB/c. The cytotoxic activity was evaluated on fibroblasts of lineage LLCMK2 and benznidazole was used as positive control. All the 92 ethanol extracts tested against epimastigote forms of the Y strain of T. cruzi are inactive. The best results among the 92 samples evaluated were obtained with ethanol extracts of Ocotea paranapiacabensis, for showing trypanocidal activity against epimastigote forms of the Bolivia strain and being moderately toxic, and the extracts of Aegiphilla lhotzkyana, which showed moderate trypanocidal activity against the Bolivia strain and moderate toxicity. Among the 15 ethanol extracts of Lippia sp assayed, the one from of leaves of L. velutina showed the highest trypanocidal activity on epimastigote forms and moderate toxicity, but was inactive against trypomastigote and amastigote forms of T. cruzi. Best results were obtained for its ethyl acetate fraction, which showed activity in epimastigote forms, 42 times more than benznidazole, with Selectivity Index (SI) of 371.0 and moderate activity on trypomastigote forms. This sample was inactive against the amastigote forms of the parasite... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Conversão in vitro e in vivo do pró-fármaco hidroximetilnitrofural, candidato a fármaco antichagásico /

Serafim, Eliana Ometto Pavan. January 2008 (has links)
Resumo: A doença de Chagas, descoberta por Carlos Chagas há aproximadamente 100 anos, ainda constitui um grave problema de Saúde Pública. É considerada doença extremamente negligenciada, uma vez que afeta exclusivamente as populações dos países em desenvolvimento. Os pacientes dessa doença são, em sua maioria, de baixa renda e, não representando mercado, ficam excluídos do escopo e dos esforços de Pesquisa e Desenvolvimento das Indústrias Farmacêuticas. Estima-se que entre 18 e 20 milhões de indivíduos estejam infectados pelo Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença e de, aproximadamente, 120 milhões, a população em risco de contaminação na América Latina. O tratamento da doença de Chagas continua sendo um desafio, pois apenas dois fármacos nitro-heterocíclicos são comercializados no mundo: nifurtimox (Lampit8, Bayer) e benznidazol (Rochagan8, Roche), sendo este último, o único fármaco disponível no mercado brasileiro. Dentre os compostos potencialmente antichagásicos em estudo, o hidroximetilnitrofural (NFOH) mostrou maior atividade tripanomicida e menor mutagenicidade do que o nitrofural (composto matriz) em todos estágios de desenvolvimento de um fármaco. Em 2006, os estudos pré-clínicos de toxicidade mostraram que o NFOH apresentou DL50 >2000 mg em ratos, dose considerada segura pela Organização Mundial da Saúde (OMS) e promissor para a continuidade dos ensaios. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi estudar a conversão in vitro e in vivo do NFOH em NF. Assim, metodologia analítica foi desenvolvida e validada para a determinação de NF e NFOH em matriz de plasma humano e rato e foram realizados estudos de conversão in vitro (pH 1,2 e 7,4) e ensaios in vivo (farmacocinéticos) em ratos. Os resultados mostraram que o NFOH apresenta estabilidade in vitro, é metabolizado em plasma (humano e de ratos) e também, ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chagas disease, discovered by Carlos Chagas about a century ago and also known as American trypanosomiasis, is still a serious Public Health problem. The disease is considered extremely neglected because it afflicts exclusively populations in developing countries. Most Chagas' disease patients fall within the low income bracket and, being economically insignificant, are excluded from the research and development scope and efforts of the Pharmaceutical Industry. It is estimated that 18 and 20 million people in Latin America are infected with Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of the disease, and that approximately 120 million people are at risk of contamination in the continent. Chagas' disease treatment is a challenge because only two nitroheterocyclic drugs are market worldwide, namely nifurtimox (Lampit8, Bayer) and benznidazol (Rochagan8, Roche), and the latter is the only drug available in the Brazilian market. Among the potentially anti-Chagas compounds under study, hydroxymethyl nitrofural (NFOH) has shown higher tripanomicide activity and lower mutagenicity than nitrofural (active compound) in all stages of development of the parasite. In 2006, preclinical toxicity studies showed that NFOH presented LD50 higher than 2000 mg in rats. This value is considered safe by the World Health Organization (WHO) and promising for continuing test. In this context, the purpose of this work was to investigate the in vivo stability of NFOH. To this end, an analytical methodology was designed and validated for the determination of NF and NFOH in human and rat blood plasma. Conversion studies were carried out in vitro (pH 1.2 and 7.4) and in vivo (pharmacokinetic studies) with rats. The results indicated that NFOH presents in vitro stability, and is converted in plasma (human and rat) and in the liver. The NFOH displayed a profile ...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Lucia Ribeiro / Coorientador: Chung Man Chin / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Manoel Lima de Menezes / Banca: Cláudio Viegas Junior / Banca: Elizabeth Igne Ferreira / Doutor
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Estudo biométrico de formas epimastigotas e tripomastigotas de quatro cepas de trypanosoma cruzi, Chagas 1909 (Kinetoplastidae, Trypanosomatidae) /

Rossi, Leila Regina Lima. January 2007 (has links)
Orientador: João Aristeu da Rosa / Banca: Sergio de Albuquerque / Banca: José Clóvis do Prado Júnior / Resumo: Este estudo visou mensurar formas tripomastigotas e epimastigotas de Trypanosoma cruzi das cepas Bolívia, QM2, S.I.9 e Y por meio de microscópio óptico acoplado a um analisador de imagens e programa Leica QWin. Para tanto utilizou-se os parâmetros definidos por DIAS, FREITAS FILHO (1943) e BARRETO (1965): distâncias da extremidade posterior ao meio do núcleo (PN), do meio do núcleo à extremidade anterior do corpo (NA), comprimento do flagelo (FL), comprimento total (T), largura (L), Área do Cinetoplasto (AC), Área do Núcleo (NA) e Índice Nuclear (IN). Mensurou-se 360 formas tripomastigotas sanguíneas, 120 formas epimastigotas de meio de cultura LIT e 120 formas epimastigotas de fezes de triatomíneo de T. cruzi de cada uma das cepas Bolívia, QM2, S.I.9 e Y. Os oito parâmetros definidos para caracterização das formas tripomastigotas sanguíneas foram mensurados anteriormente ao pico de parasitemia, durante o pico e posteriormente ao pico de parasitemia para as formas tripomastigotas sanguíneas. As quatro cepas de T. cruzi mostraram percentual distinto de formas finas, intermediárias e largas das formas tripomastigotas sanguíneas. De acordo com os parâmetros morfométricos as formas foram classificadas em fina, intermediária e larga no que se refere à largura e curta, intermediária e longa com relação ao comprimento. As mensurações das formas tripomastigotas sanguíneas de T. cruzi das cepas Bolívia, QM2, S.I.9 e Y quanto a largura mostraram os seguintes resultados: as formas finas variaram entre 0,6 e 1,3μm; intermediárias entre 1,4 e 2,1μm; largas entre 2,2 e 5,5μm. Quanto ao comprimento total obtevese para a forma curta variação entre 13,5 e 19,5μm; para a forma intermediária entre 19,6 e 24,7μm; para a forma longa entre 24,8 e 43,8μm. As formas epimastigotas de meio de cultura LIT apresentaram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed the measurement of trypomastigotes and epimastigote of Trypanosoma cruzi from Bolivia strains, QM2, S.I.9 and Y by means of an optical microscope coupled to an image analyses program called Leica QWin. The following parameters defined for DIAS, FREITAS FILHO (1943) & BARRETO (1965) were used for these measurements: distance from the posterior extremity to the middle of the nucleus (PN), from the middle of the nucleus to the anterior extremity of the body (NA), flagellum length (FL), total length (T), width (L), kinetoplast area (AC), nucleus area (NA) and nuclear index (IN). 360 blood-stream forms were measured, 120 epimastigote forms in the LIT culture mean and 120 epimastigote forms from triatomine feces of T. cruzi for each of the Bolivia strains, QM2, S.I.9 and Y. All eight defined parameters for trypomastigote forms characterization were measured before the parasitemia peak, during the peak and after the parasitemia peak. The four T. cruzi strains showed to be distinct when comparing the percentage in the thin, intermediary and large forms of trypomastigotes. According the morphometric parameters the forms were classified as thin, intermediary and wide regarding width, and short, intermediary and long regarding length. The measurements of trypomastigote blood stream forms of T. cruzi from Bolivia strains QM2, S.I.9 and Y regarding width showed the following results: the thin form varied from 0.6 to 1.3μm; the intermediary from 1.4 to 2.1μm; wide from 2.2 to 5.5μm. Now the total length obtained for the short form varied from 13.5 to 19.5μm; for the intermediary form from 19.6 to 24.7μm; for the long form from 24.8 to 43.8μm. The epimastigote forms in the LIT culture mean presented the following measurements related to width: thin forms between 1.1 and 1.7μm, intermediary forms between 1.8 and 2.8μm. / Mestre
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Estudo clínico da infecção natural por T. cruzi em cães residentes em uma área rural de Mato Grosso do Sul, Brasil /

Souza, Alda Izabel de. January 2007 (has links)
Orientador: Aparecido Antonio Camacho / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Denise Saretta Schwartz / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Mary Marcondes / Resumo: O trabalho teve como objetivo descrever as características clínicas da infecção natural pelo T. cruzi em cães residentes em uma área rural do estado de Mato Grosso do Sul, Brasil. Foram utilizados métodos sorológicos convencionais e não convencionais em 75 cães residentes na área e avaliação cardiovascular e da bioquímica sérica em quatro animais confirmadamente chagásicos. Foram usados os testes de reação de imunofluorescência indireta (RIFI), ELISA com antígenos da forma epimastigota do T. cruzi (EAE ELISA) e ELISA com antígeno excretado e secretado da forma tripomastigota do T. cruzi (TESA-ELISA), que detectaram anticorpos em 45,33% (n=34), 24,0% (n=18) e 12,0% (n=09) dos cães, respectivamente. A real prevalência da infecção foi confirmada como 10,7% (n=08) pela técnica de immunoblotting com antígeno secretado e excretado da forma tripomastigota do T. cruzi (TESA-blot). O teste com melhor índice de concordância (Kappa; 0,93), sensibilidade (100%) e especificidade (98,5%) foi o TESA-ELISA, que quando associado à RIFI igualou-se aos dados obtidos com o TESA-blot (10,7%). Três dos quatro animais chagásicos apresentaram aumento da silhueta cardíaca direta, aumento da duração de onda P e do complexo QRS. Um cão apresentou bloqueio de ramo direto e outro, bloqueio atrioventricular de primeiro grau e parada sinusal. Notou-se, também, espessamento de parede livre de ventrículo esquerdo em diástole, redução da fração de encurtamento e inversão dos picos de velocidade das onda E e A, indicando disfunção sistólica e diastólica...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study was conduted to describe the clinical characteristics of the natural infection caused by the T. cruzi in dogs residing in a rural area of Mato Grosso do Sul, Brazil. Conventional and nonconventional diagnosis methods were used in 75 dogs living in this area for screening T. cruzi infection. Cardiovascular and biochemical serum were also performed in four confirmed positive dogs. The following tests were used: indirect immunofluorescence test (IFAT), enzyme-linked immunosorbent assay with T .cruzi. epimastigote antigens (EAE ELISA) and enzymelinked immunosorbent assay with T.cruzi excreted-secreted trypomastigote antigens (TESA-ELISA) with detected antibodies in 45,33% (n=34), 24,0% (n=18) and 12,0% (n=09) of the dogs, respectively. The real prevalence of the infection was confirmed as 10,7% (n=08) by immunoblotting test with T. cruzi excreted-secreted antigens (TESAblot). The test with the best concordance index (Kappa; 0,93), sensibility (100%) and specifity (98,5%) was the TESA-ELISA, which, when associated with IFAT had the same as results those obtained with the TESA-blot (10,7%). Three out of the four chagasic animals showed enlarged cardiac silhouette on x-ray and an increase of the P-wave duration and QRS complex in electrocardiogram. Two dogs presented conduction disturbances, right bundle block in one dog and the first-degree atrioventricular block and sinus arrest in another...(Complete abstract, click electronic access below) / Doutor
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Caracterização molecular de UsnRNAs em trypanosoma cruzi /

Ambrósio, Daniela Luz. January 2005 (has links)
Orientador: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Marcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Lucile Maria Floeter-Winter / Resumo: Alguns fatores importantes no funcionamento das células eucarióticas correspondem à pequenos complexos de RNA e proteínas; essas partículas de ribonucleoproteínas (UsnRNPs) têm um papel essencial no processamento do pré-mRNA, principalmente durante o splicing (corte de íntrons e união de éxons). Embora as snRNPs estejam definidas em mamíferos, ainda não estão bem caracterizadas em certos tripanosomatídeos como o Trypanosoma cruzi. Assim, este trabalho propôs a caracterização molecular dos snRNAs (U2, U4, U5 e U6), por PCR e RT-PCR de formas epimastigotas de T. cruzi (cepa Y). Essas seqüências amplificadas foram clonadas, seqüenciadas e comparadas entre os tripanosomatídeos e o alinhamento múltiplo apresentou mais de 70% de identidade, exceto da U5 snRNA, que se mostrou menos conservada. Árvores filogenéticas mostraram a proximidade evolutiva dos snRNAs analisados em Trypanosoma brucei e Trypanosoma cruzi. As respectivas estruturas secundárias foram preditas, confirmando-se também as semelhanças com aquelas de T. brucei. O alinhamento das snRNAs de T. cruzi com as seqüências de Homo sapiens mostrou regiões únicas em U2, U4 e U5 snRNAs, nessa espécie, enquanto U6 mostrou-se fortemente conservada. Até o momento, ainda não foi possível a obtenção da seqüência completa de U1 snRNA de T. cruzi. / Abstract: Some important factors in functioning of the eucariotic cells are the small complexes of RNA and proteins; these particles of ribonucleoproteins (UsnRNPs) have an essential role in the pre-mRNA processing, mainly during splicing (cut of introns and union of exons). Even though they are well defined in mammals, snRNPs are still not characterized in certain Trypanosomatids, as well, Trypanosoma cruzi. So, this work proposed the molecular characterization of the snRNAs (U2, U4, U5 and U6), by PCR and RT-PCR with T. cruzi epimastigote forms (Y strain). These amplified sequences were cloned, sequenced and compared among the Trypanosomatids and the multiple alignment presented more than 70% of identity, except for U5 snRNA, which showed less conserved. Phylogenetic trees showed the evolutionary proximity between the Trypanosoma brucei and Trypanosoma cruzi snRNAs analysed. The respective secondary structures were predicted and also confirmed similarity with T. brucei. The alignment of T. cruzi snRNAs with Homo sapiens sequences showed unique regions in U2, U4 and U5 snRNAs in this species, while U6 was strongly conserved. Until this moment, it was not still possible to obtain U1 snRNA of T. cruzi complete sequence. / Mestre
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Avaliação do potencial tripanocida de substâncias extraídas da Família Piperaceae em formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi /

Passerini, Gabriela Duó. January 2008 (has links)
Orientador: Regina Maria Barrteo Cicarelli / Banca: Márcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Sergio de Albuquerque / Resumo: O protozoário hemoflagelado, Trypanosoma cruzi, transmitido principalmente pelo inseto triatomíneo, por infecção congênita ou por transfusão sanguínea, causa a tripanossomíase americana ou doença de Chagas, como é mais conhecida. Essa é uma séria doença parasitária que ocorre na América Latina, com considerável impacto social e econômico. Dois medicamentos, nifurtimox e benzonidazol, são indicados no tratamento de pessoas infectadas, mas são pouco eficientes na fase aguda e praticamente ineficientes na fase crônica. Devido a esses fatores, é de extrema importância que se encontre um novo e eficiente agente quimioterápico e/ou quimiopreventivo. Neste trabalho, foi investigada a atividade de extratos, frações, substâncias puras e semi-sintéticas de diferentes espécies da Família Piperaceae na presença das formas epimastigotas da cepa Y do T. cruzi; as substâncias que se apresentaram ativas, também foram analisadas nas cepas NCS e Bolívia. Além disso, observaram-se as possíveis modificações morfológicas que essas substâncias poderiam causar nos parasitos, bem como um possível local de sua atuação e uma análise preliminar de sua citotoxicidade, quando na presença de macrófagos de camundongos isogênicos. A eficácia dessas substâncias foi avaliada pelo método colorimétrico utilizando a redução do MTT [3-(4,5-dimethylthiazol- 2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] em formazan, produzido pela atividade da enzima succinato desidrogenase da mitocôndria. Os cristais de formazan formados, depois de dissolvidos, foram determinados espectrofotometricamente. Os resultados encontrados foram proporcionais às atividades metabólicas das células (parasitos e/ou macrófagos), sendo o IC50 (metade da concentração inibitória máxima) calculado por regressão linear para cada substância. Intensas modificações morfológicas foram observadas nos parasitos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The hemoflagellate protozoan, Trypanosoma cruzi, transmitted by triatominae bugs, congenital route or blood transfusion, causes American trypanosomiasis or Chagas' disease, as it is more known. This is a serious parasitic disease which occurs in Latin America, as a considerable social and economic impact. Two drugs, nifurtimox and benznidazol, had been evaluated in the treatment of infected people, but they have low tolerance in the acute phase and practically inefficient in the chronic phase. Because of these considerations, it is important to search for new more efficient chemopreventive and chemotherapeutic agents. In this work, we have been investigating the activity of crude extracts, fractions, pure and halfsynthetic substances from different species of the Piperaceae Family in the presence of the epimastigote forms from T. cruzi Y strain; the samples which presented some activity also were analyzed in NCS and Bolívia strains. Moreover, we observed morphological modifications that some samples can make in the parasites, as well as a possible action site and a preliminary analysis of their citotoxicity, when in the presence of isogenic mice macrophages (Balb/c and C57/Black). The efficacy of these samples was also measured using the reduction of MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] into a stained formazan product by the mitochondrial enzyme succinate dehydrogenises activity. The crystals of formazan formed, after dissolved, had been determined spectrophotometrically. The results were proportional to the metabolic activity of the cells (parasites and/or macrophages), being the IC50 (half of the maximum inhibitory concentration) calculated by linear regression for each sample. Intense morphological modifications were observed in the parasites after a determined time of incubation, confirming the toxic activity of some substances. However, it seems... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

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