Vacas leiteira de alta produção têm apresentado declínio da eficiência reprodutiva. Essa redução é devido a causas multifatoriais, entre elas a baixa concentração de estradiol (E2) no proestro e a baixa concentração de progesterona (P4) no ciclo estral subsequentente. O objetivo deste trabalho foi comparar o uso de gonadotrofina exógena na dinâmica folicular e na taxa de prenhez de vacas submetidas ao protocolo Ovsynch (Experimento 1) ou a protocolos utilizando P4 e E2 (Experimento 2). No Experimento 1, animais de primeiro serviço foram pré-sincronizados com dois protocolos (Presynch ou Double-Ovsynch). Já os animais de segundo ou mais serviços foram resincronizados com o protocolo Resynch. Os animais receberam GnRH (1º GnRH), seguido 7 dias depois pela adiministração de prostaglandina F2α (PGF2α). Nesse momento os animais foram divididos homogeneamente por paridade e número de inseminação em um de dois tratamentos: sem FSH (Ovsynch, n = 561) ou com FSH (Ovsynch + FSH, n = 571). O segundo GnRH (2º GnRH) foi administrado 56 horas após a PGF2α e a inseminação em tempo fixo foi realizada 16 horas após. Amostras de sangue foram colhidas no 1º e no 2º GnRH, na PGF2α e 6 e 13 dias após o 2º GnRH para dosagem de P4. Ainda, no 2º GnRH dosou-se também E2 No Experimento 2, os animais foram sincronizados no dia 0 com um dispositivo de P4 associado a 2 mg de benzoato de estradiol. Oito dias após o dispositivo foi removido e os animais receberam uma dose de PGF2α. Neste mesmo momento, as vacas foram divididas homogeneamente por paridade, número de serviços prévios, escore de condição corporal e presença de CL no inicio do protocolo em três tratamentos: Controle (sem tratamento adicional; n = 232); eCG (400 UI de eCG; n = 232) e FSH (20 mg de FSH; n = 230). Todos os animais receberam GnRH e foram insemados 56h após a retirada do dispositivo. Foram colhidas amostras de sangue a cada 48h do dia 11 ao dia 22. No Experimento 1, não houve efeito do FSH na concetração sérica de E2 no 2º GnRH (P = 0,88), no tamanho do maior folículo no 2 º GnRH (P = 0,63), na taxa de ovulação ao 2º GnRH (P = 0,69) ou na concentração sérica de P4 no 6º (P = 0,15) e 13º (P = 0,36) dia após o 2º GnRH. A taxa de prenhez foi semelhante (P> 0,05) entre os animais tratados com Ovsynch (36,2%) e Ovsynch + FSH (39,1%). No Experimento 2, os tratamentos não alteraram o diâmetro do folículo ovulatório (P = 0,15), o intervalo entre a remoção do dispositivo de P4 e a ovulação (P = 0,30) e a taxa de ovulação (P = 0,44). Não houve efeito de tratamento na concentração sérica de P4 (P = 0,15). A taxa de prenhez foi diferente entre os tratamentos aos 30 dias após a IATF (Controle = 28,0a vs FSH = 18,7b vs eCG = 29,7a %; P = 0,01), mas não aos 60 dias (Controle = 21,6 vs FSH = 16,1 vs eCG = 24,1%; P = 0,08) e na perda de gestacional (Controle = 18,8 vs FSH = 14,0 vs eCG = 18,4%; P = 0,39). Assim, o tratamento com FSH não estimulou o crescimento folicular final e a função luteínica de vacas leiteiras de alta produção sincronizadas com os protocolos Ovsynch e P4/E2. / Fertility in high-producing dairy cows has decreased over the years, which has been associated with reduced estradiol (E2) concentrations during proestrus and suboptimal progesterone (P4) concentrations during early stages of gestation. The objectives of the present study were to evaluate the effects of exogenous gonadotropins on follicular dynamics and risk of pregnancy per artificial insemination (P/AI) in cows subjected to the Ovsynch protocol (Experiment 1) or to a P4/E2-based timed AI protocol (experiment 2). In experiment 1, cows were enrolled in the Ovsynch protocol (GnRH, 7 d PGF2α, 56 h GnRH, 16 h IA) either after presynchronization (Presynch or Double-Ovsynch; first AI postpartum) or 32 d after previous AI. At the PGF2α injection, cows were blocked by parity and number of AI and, within each block, randomly allocated to eitherreceive 20 mg of FSH at the moment of the PGF2α(Ovsynch + FSH, n = 571) or to remain as untreated control (Ovsynch, n = 561). Blood was sampled at the 1st and 2nd GnRH and PGF2α injections, as well as on d 6 and 13 after the 2nd GnRH to access P4 and E2 (at the 2nd GnRH only) concentrations. In experiment 2, cows were received a P4 device and 2 mg of estradiol benzoate. The device was removed 8 d later concurrently with an injection of PGF2α, followed by an injection of GnRH and AI at 56 h.At the PGF2α injection, cows were blocked by parity, number of AI, body condition score, and presence of a CL at device insertion.Within each block, cows were randomly allocated to receive either 20 mg of FSH (FSH, n = 230), 400 IU of eCG (eCG, n = 232), or no additional treatment at the moment of the PGF2α (Control, n = 232). Blood was sampled at every 48 h from 1 to 12 d after AI. In experiment 1, there was no effect of FSH on serum E2 at the 2nd GnRH (P = 0.88), follicle diameter at the 2nd GnRH (P = 0.63), ovulatory response to the 2nd GnRH (P = 0.69), or serum P4 on d 6 (P = 0.15) and 13 (P = 0.36) after the 2nd GnRH. Also, P/AI was similar (P > 0.05) between Ovsynch (36.2%) and Ovsynch + FSH (39.1%). In experiment 2, treatment did not affect ovulatory diameter (P = 0.15), interval from P4 device removal and ovulation (P = 0.30), ovulatory response to the 2nd GnRH (P = 0.44), and serum P4 (P = 0.15). Interestingly, treatment with FSH reduced (P = 0.01) P/AI on d 30 (Control = 28.0a vs. FSH = 18.7b vs. eCG = 29.7a %), but not on d 60after timed AI (Control = 21.6 vs. FSH = 16.1 vs. eCG = 24.1%; P = 0.08).The risk of pregnancy loss was not affected by treatment (Control = 18.8 vs. FSH = 14.0 vs. eCG = 18.4%; P = 0.39). In conclusion, treatment with FSH failed to enhance the final growth of the ovulatory follicle and did not improve luteal function after AI in high-producing dairy cows synchronized with either the Ovsynch or P4/E2-based timed AI protocols.

Vacas leiteira de alta produção têm apresentado declínio da eficiência reprodutiva. Essa redução é devido a causas multifatoriais, entre elas a baixa concentração de estradiol (E2) no proestro e a baixa concentração de progesterona (P4) no ciclo estral subsequentente. O objetivo deste trabalho foi comparar o uso de gonadotrofina exógena na dinâmica folicular e na taxa de prenhez de vacas submetidas ao protocolo Ovsynch (Experimento 1) ou a protocolos utilizando P4 e E2 (Experimento 2). No Experimento 1, animais de primeiro serviço foram pré-sincronizados com dois protocolos (Presynch ou Double-Ovsynch). Já os animais de segundo ou mais serviços foram resincronizados com o protocolo Resynch. Os animais receberam GnRH (1º GnRH), seguido 7 dias depois pela adiministração de prostaglandina F2α (PGF2α). Nesse momento os animais foram divididos homogeneamente por paridade e número de inseminação em um de dois tratamentos: sem FSH (Ovsynch, n = 561) ou com FSH (Ovsynch + FSH, n = 571). O segundo GnRH (2º GnRH) foi administrado 56 horas após a PGF2α e a inseminação em tempo fixo foi realizada 16 horas após. Amostras de sangue foram colhidas no 1º e no 2º GnRH, na PGF2α e 6 e 13 dias após o 2º GnRH para dosagem de P4. Ainda, no 2º GnRH dosou-se também E2 No Experimento 2, os animais foram sincronizados no dia 0 com um dispositivo de P4 associado a 2 mg de benzoato de estradiol. Oito dias após o dispositivo foi removido e os animais receberam uma dose de PGF2α. Neste mesmo momento, as vacas foram divididas homogeneamente por paridade, número de serviços prévios, escore de condição corporal e presença de CL no inicio do protocolo em três tratamentos: Controle (sem tratamento adicional; n = 232); eCG (400 UI de eCG; n = 232) e FSH (20 mg de FSH; n = 230). Todos os animais receberam GnRH e foram insemados 56h após a retirada do dispositivo. Foram colhidas amostras de sangue a cada 48h do dia 11 ao dia 22. No Experimento 1, não houve efeito do FSH na concetração sérica de E2 no 2º GnRH (P = 0,88), no tamanho do maior folículo no 2 º GnRH (P = 0,63), na taxa de ovulação ao 2º GnRH (P = 0,69) ou na concentração sérica de P4 no 6º (P = 0,15) e 13º (P = 0,36) dia após o 2º GnRH. A taxa de prenhez foi semelhante (P> 0,05) entre os animais tratados com Ovsynch (36,2%) e Ovsynch + FSH (39,1%). No Experimento 2, os tratamentos não alteraram o diâmetro do folículo ovulatório (P = 0,15), o intervalo entre a remoção do dispositivo de P4 e a ovulação (P = 0,30) e a taxa de ovulação (P = 0,44). Não houve efeito de tratamento na concentração sérica de P4 (P = 0,15). A taxa de prenhez foi diferente entre os tratamentos aos 30 dias após a IATF (Controle = 28,0a vs FSH = 18,7b vs eCG = 29,7a %; P = 0,01), mas não aos 60 dias (Controle = 21,6 vs FSH = 16,1 vs eCG = 24,1%; P = 0,08) e na perda de gestacional (Controle = 18,8 vs FSH = 14,0 vs eCG = 18,4%; P = 0,39). Assim, o tratamento com FSH não estimulou o crescimento folicular final e a função luteínica de vacas leiteiras de alta produção sincronizadas com os protocolos Ovsynch e P4/E2. / Fertility in high-producing dairy cows has decreased over the years, which has been associated with reduced estradiol (E2) concentrations during proestrus and suboptimal progesterone (P4) concentrations during early stages of gestation. The objectives of the present study were to evaluate the effects of exogenous gonadotropins on follicular dynamics and risk of pregnancy per artificial insemination (P/AI) in cows subjected to the Ovsynch protocol (Experiment 1) or to a P4/E2-based timed AI protocol (experiment 2). In experiment 1, cows were enrolled in the Ovsynch protocol (GnRH, 7 d PGF2α, 56 h GnRH, 16 h IA) either after presynchronization (Presynch or Double-Ovsynch; first AI postpartum) or 32 d after previous AI. At the PGF2α injection, cows were blocked by parity and number of AI and, within each block, randomly allocated to eitherreceive 20 mg of FSH at the moment of the PGF2α(Ovsynch + FSH, n = 571) or to remain as untreated control (Ovsynch, n = 561). Blood was sampled at the 1st and 2nd GnRH and PGF2α injections, as well as on d 6 and 13 after the 2nd GnRH to access P4 and E2 (at the 2nd GnRH only) concentrations. In experiment 2, cows were received a P4 device and 2 mg of estradiol benzoate. The device was removed 8 d later concurrently with an injection of PGF2α, followed by an injection of GnRH and AI at 56 h.At the PGF2α injection, cows were blocked by parity, number of AI, body condition score, and presence of a CL at device insertion.Within each block, cows were randomly allocated to receive either 20 mg of FSH (FSH, n = 230), 400 IU of eCG (eCG, n = 232), or no additional treatment at the moment of the PGF2α (Control, n = 232). Blood was sampled at every 48 h from 1 to 12 d after AI. In experiment 1, there was no effect of FSH on serum E2 at the 2nd GnRH (P = 0.88), follicle diameter at the 2nd GnRH (P = 0.63), ovulatory response to the 2nd GnRH (P = 0.69), or serum P4 on d 6 (P = 0.15) and 13 (P = 0.36) after the 2nd GnRH. Also, P/AI was similar (P > 0.05) between Ovsynch (36.2%) and Ovsynch + FSH (39.1%). In experiment 2, treatment did not affect ovulatory diameter (P = 0.15), interval from P4 device removal and ovulation (P = 0.30), ovulatory response to the 2nd GnRH (P = 0.44), and serum P4 (P = 0.15). Interestingly, treatment with FSH reduced (P = 0.01) P/AI on d 30 (Control = 28.0a vs. FSH = 18.7b vs. eCG = 29.7a %), but not on d 60after timed AI (Control = 21.6 vs. FSH = 16.1 vs. eCG = 24.1%; P = 0.08).The risk of pregnancy loss was not affected by treatment (Control = 18.8 vs. FSH = 14.0 vs. eCG = 18.4%; P = 0.39). In conclusion, treatment with FSH failed to enhance the final growth of the ovulatory follicle and did not improve luteal function after AI in high-producing dairy cows synchronized with either the Ovsynch or P4/E2-based timed AI protocols.

O presente experimento foi realizado com o objetivo de avaliar o impacto da inseminação artificial em tempo fixo (IATF) na eficiência reprodutiva de vacas de leite de alta produção inseminadas no período pós-parto. Vacas Holandesas com média de 50 dias pós-parto foram distribuídas homogeneamente em um de dois grupos experimentais, levando em consideração a presença ou ausência de corpo lúteo (CL), o escore de condição corporal e a produção de leite. No grupo Controle (G-Controle; n = 490), as vacas foram submetidas à observação do comportamento de aceitação de monta (duas vezes ao dia por uma hora) e inseminadas 12 horas após a primeira detecção. No grupo IATF (G-IATF; n = 495), as vacas receberam um implante auricular de norgestomet, mantido por oito dias, e 2 mg de benzoato de estradiol IM no dia 0 (D0; dia aleatório do ciclo estral). No momento da retirada do implante (D8) foram administrados 150 µg de prostaglandina F2α, 400 UI de gonadotrofina coriônica eqüina e 1 mg de cipionato de estradiol. A IATF foi realizada de 54 a 56 h após a retirada do implante auricular, concomitante à administração de 100 µg de gonadorelina. Após a IATF, as vacas foram submetidas à observação de cio com subseqüente inseminação, seguindo os mesmos critérios descritos para o G-Controle. Amostras de sangue foram colhidas de um subgrupo de animais (G-Controle, n = 50; G-IATF, n = 58) 5 e 11 dias após a primeira inseminação artificial (IA) para dosagem de progesterona (P4) circulante. Todos os animais foram mantidos no experimento até a terceira IA ou 150 dias após o parto e os tratamentos foram realizados no inverno e no verão. O diagnóstico de gestação foi realizado aos 30 dias pós-IA por ultrassonografia e aos 60 dias pós-IA por palpação transretal. Os dados binomiais foram analisados por regressão logística utilizando o PROC GLIMMIX e as variáveis contínuas por ANOVA utilizando PROC GLM do SAS. Não se verificou interação entre estação do ano e tratamento na análise das taxas de concepção, perda gestacional, intervalo entre IAs, intervalo parto-concepção (IPC) e taxa de prenhez aos 150 dias pós-parto. Os resultados são indicativos de que não existem diferenças nas taxas de concepção entre os diferentes grupos após as IAs (primeira, segunda e terceira). A perda gestacional relativa à primeira IA foi maior nas vacas do G-IATF. Os intervalos parto-primeira IA, parto-segunda IA e parto-concepção foram inferiores para as vacas do G-IATF. Entretanto, o intervalo entre a primeira e a segunda IA foi maior para o G-IATF. Não houve diferença na taxa de prenhez aos 150 dias entre os grupos. Ainda, a taxa de serviço (TS) nos primeiros 21 dias após o período voluntário de espera (PVE) foi maior para o grupo IATF. Entretanto, a TS entre 21 e 42 dias após o PVE foi maior para o G-Controle. As concentrações circulantes de P4 não diferiram entre os grupos e as estações do ano. Concluiu-se que o emprego da IATF 60 dias pós-parto foi eficiente para diminuir o IPC. Contudo, a porcentagem de vacas prenhes aos 150 pós-parto foi semelhante entre os dois tratamentos (Controle e IATF) / The aim of the present study was evaluate the impact of fixed-time artificial insemination (FTAI) on reproductive efficiency of high-producing dairy cows inseminated during the postpartum period. Holstein cows with average 50 days in milk were allocated to one of two groups considering the presence or absence of corpus luteum (CL), body condition score and milk production. On Control group (Control-G; n = 490), the cows were submitted to estrus detection twice per day for one h and were inseminated 12 hours after the first detection. On FTAI group (FTAI-G; n = 495), the cows received a norgestomet ear implant (kept for eight days) plus administration of 2 mg of estradiol benzoate i.m. on Day 0 (random day of the estrous cycle). The implant was removed on Day 8 followed by FTAI 54 to 56 h later and the administration of 100 µg of gonadorelin. On Day 8, cows received 400 IU eCG, 150 &micro:g of prostaglandin F2α and 1 mg of estradiol cypionate. After FTAI, cows were submitted to estrus detection and artificial insemination (AI) 12 h after. Blood samples were collected from a subset of animals (Control-G, n = 50; FTAI-G, n = 58) on Day 5 and 11 after the first AI to investigate serum progesterone concentration (P4). All animals were maintained on the experiment until 150 days post-partum and the treatments were conducted during the winter and summer. Pregnancy diagnosis was performed by ultrasonography 30 days after AI (Day 30) and by rectal palpation 60 days after AI (Day 60). Binomial data were analyzed by logistic regression using the PROC GLIMMIX and continuous variables by ANOVA using PROC GLM of SAS. No interaction was found between season and treatment when conception rate, pregnancy loss, interval between inseminations, interval from calving to conception and pregnancy rate 150 post-partum were analysed. The results indicate no differences on conception rate among both experimental groups after AI (first, second and third). However, the interval from calving to first and second AI and interval from calving to conception were lower on FTAI-G. No difference on pregnancy rate 150 days post-partum was found among groups. Pregnancy loss after first AI was greater on FTAI-G. The interval from calving to first AI, from calving to second AI and the interval from calving to conception were shorter on FTAI-G. However, the interval between first and second AI was longer on FTAI-G. There was no difference on pregnancy rate 150 days post-partum among treatments. Also, the service rate (SR) 21 days after the voluntary waiting period (VWP) was greater on FTAI-G compared to Control-G. Conversely, the SR was lower between 21 and 42 days after the VWP on FTAI-G. No difference was found in serum concentration of P4 among treatment groups and season. Thus, the use of FTAI 60 days post-partum was efficient to anticipate the conception of high-producing dairy cattle by reducing the interval from calving to conception, but did not increase the pregnancy rate 150 days post-partum

O presente experimento foi realizado com o objetivo de avaliar o impacto da inseminação artificial em tempo fixo (IATF) na eficiência reprodutiva de vacas de leite de alta produção inseminadas no período pós-parto. Vacas Holandesas com média de 50 dias pós-parto foram distribuídas homogeneamente em um de dois grupos experimentais, levando em consideração a presença ou ausência de corpo lúteo (CL), o escore de condição corporal e a produção de leite. No grupo Controle (G-Controle; n = 490), as vacas foram submetidas à observação do comportamento de aceitação de monta (duas vezes ao dia por uma hora) e inseminadas 12 horas após a primeira detecção. No grupo IATF (G-IATF; n = 495), as vacas receberam um implante auricular de norgestomet, mantido por oito dias, e 2 mg de benzoato de estradiol IM no dia 0 (D0; dia aleatório do ciclo estral). No momento da retirada do implante (D8) foram administrados 150 µg de prostaglandina F2α, 400 UI de gonadotrofina coriônica eqüina e 1 mg de cipionato de estradiol. A IATF foi realizada de 54 a 56 h após a retirada do implante auricular, concomitante à administração de 100 µg de gonadorelina. Após a IATF, as vacas foram submetidas à observação de cio com subseqüente inseminação, seguindo os mesmos critérios descritos para o G-Controle. Amostras de sangue foram colhidas de um subgrupo de animais (G-Controle, n = 50; G-IATF, n = 58) 5 e 11 dias após a primeira inseminação artificial (IA) para dosagem de progesterona (P4) circulante. Todos os animais foram mantidos no experimento até a terceira IA ou 150 dias após o parto e os tratamentos foram realizados no inverno e no verão. O diagnóstico de gestação foi realizado aos 30 dias pós-IA por ultrassonografia e aos 60 dias pós-IA por palpação transretal. Os dados binomiais foram analisados por regressão logística utilizando o PROC GLIMMIX e as variáveis contínuas por ANOVA utilizando PROC GLM do SAS. Não se verificou interação entre estação do ano e tratamento na análise das taxas de concepção, perda gestacional, intervalo entre IAs, intervalo parto-concepção (IPC) e taxa de prenhez aos 150 dias pós-parto. Os resultados são indicativos de que não existem diferenças nas taxas de concepção entre os diferentes grupos após as IAs (primeira, segunda e terceira). A perda gestacional relativa à primeira IA foi maior nas vacas do G-IATF. Os intervalos parto-primeira IA, parto-segunda IA e parto-concepção foram inferiores para as vacas do G-IATF. Entretanto, o intervalo entre a primeira e a segunda IA foi maior para o G-IATF. Não houve diferença na taxa de prenhez aos 150 dias entre os grupos. Ainda, a taxa de serviço (TS) nos primeiros 21 dias após o período voluntário de espera (PVE) foi maior para o grupo IATF. Entretanto, a TS entre 21 e 42 dias após o PVE foi maior para o G-Controle. As concentrações circulantes de P4 não diferiram entre os grupos e as estações do ano. Concluiu-se que o emprego da IATF 60 dias pós-parto foi eficiente para diminuir o IPC. Contudo, a porcentagem de vacas prenhes aos 150 pós-parto foi semelhante entre os dois tratamentos (Controle e IATF) / The aim of the present study was evaluate the impact of fixed-time artificial insemination (FTAI) on reproductive efficiency of high-producing dairy cows inseminated during the postpartum period. Holstein cows with average 50 days in milk were allocated to one of two groups considering the presence or absence of corpus luteum (CL), body condition score and milk production. On Control group (Control-G; n = 490), the cows were submitted to estrus detection twice per day for one h and were inseminated 12 hours after the first detection. On FTAI group (FTAI-G; n = 495), the cows received a norgestomet ear implant (kept for eight days) plus administration of 2 mg of estradiol benzoate i.m. on Day 0 (random day of the estrous cycle). The implant was removed on Day 8 followed by FTAI 54 to 56 h later and the administration of 100 µg of gonadorelin. On Day 8, cows received 400 IU eCG, 150 &micro:g of prostaglandin F2α and 1 mg of estradiol cypionate. After FTAI, cows were submitted to estrus detection and artificial insemination (AI) 12 h after. Blood samples were collected from a subset of animals (Control-G, n = 50; FTAI-G, n = 58) on Day 5 and 11 after the first AI to investigate serum progesterone concentration (P4). All animals were maintained on the experiment until 150 days post-partum and the treatments were conducted during the winter and summer. Pregnancy diagnosis was performed by ultrasonography 30 days after AI (Day 30) and by rectal palpation 60 days after AI (Day 60). Binomial data were analyzed by logistic regression using the PROC GLIMMIX and continuous variables by ANOVA using PROC GLM of SAS. No interaction was found between season and treatment when conception rate, pregnancy loss, interval between inseminations, interval from calving to conception and pregnancy rate 150 post-partum were analysed. The results indicate no differences on conception rate among both experimental groups after AI (first, second and third). However, the interval from calving to first and second AI and interval from calving to conception were lower on FTAI-G. No difference on pregnancy rate 150 days post-partum was found among groups. Pregnancy loss after first AI was greater on FTAI-G. The interval from calving to first AI, from calving to second AI and the interval from calving to conception were shorter on FTAI-G. However, the interval between first and second AI was longer on FTAI-G. There was no difference on pregnancy rate 150 days post-partum among treatments. Also, the service rate (SR) 21 days after the voluntary waiting period (VWP) was greater on FTAI-G compared to Control-G. Conversely, the SR was lower between 21 and 42 days after the VWP on FTAI-G. No difference was found in serum concentration of P4 among treatment groups and season. Thus, the use of FTAI 60 days post-partum was efficient to anticipate the conception of high-producing dairy cattle by reducing the interval from calving to conception, but did not increase the pregnancy rate 150 days post-partum

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-23Bitstream added on 2014-06-13T19:09:58Z : No. of bitstreams: 1 silva_prl_me_jabo.pdf: 5927581 bytes, checksum: 05e88466357134b71042346d04f0c5aa (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo foi constituído por três experimentos: Experimento 1: Foram analisadas as variáveis hematológicas de fêmeas bovinas da raça holandesas mensalmente durante toda a gestação e o periparto. As fêmeas foram distribuídas em 5 grupos: novilhas gestantes (G1), vacas de segunda gestação (G2), vacas de segunda gestação, repetidoras de estro(G3), vacas de terceira gestação (G4) e vacas de terceira gestação, repetidoras de estro(G5). As atividades das enzimas AST e ALP, foram maiores em G1. Houve diferença significativa entre vacas repetidoras e não repetidoras de estro somente nas concentrações séricas de colesterol no início da gestação. No segundo mês de gestação as concentrações de cálcio total e ionizado foram alteradas significativamente em relação ao primeiro mês, em todos os grupos. No terço final da gestação, dia do parto e no pós-parto houve alteração nas concentrações de cálcio, fósforo, ferro, cloretos, creatinina, bilirrubina direta e total, colesterol, triglicerídeos, proteína total, albumina e imunoglobulinas, no número de hemácias e leucócitos, volume globular, nos teores plasmáticos de glicose e hemoglobina e na atividade da enzima AST em todos grupos de animais. As atividades de LDH, ALP e GGT e as concentrações de sódio, potássio e uréia não foram significativamente alteradas durante o experimento. Experimento 2: Os constituintes sanguíneos das vacas do experimento 1 (G1) foram comparados aqueles de vacas acometidas por abortamento G (2) entre 25 (25 DPc) e 45 dias após inseminação artificial ou transferência de embrião (45 DPc). O teor de cálcio ionizado foi significativamente maior no grupo 1 45 dias após a inseminação artificial ou transferência de embrião. Possivelmente esses abortos tem origem metabólica/nutricional... / The present study was constituted by 3 experiments: Experiment 1: Were analysed the blood constituents of Holstein bovine females monthly during the whole gestation and the peripartum. The females were sorted in five groups: pregnancy heifers (G1), second pregnancy cows (G2) repeat-breeders second pregnancy cows (G3), third pregnancy cows (G4) and repeat-breeders third pregnancy cows. The seric activity of AST and ALP enzymes was higher in G1. Only the cholesterol level. The diference was significative between repeat-breeders and non repeat-breeders cows only in the cholesterol seric concentration in the early gestation. In the second month of pregnancy the seric concentration of total calcium and ionized calcium was significant modified compared with the first month of gestation in all groups. In the late gestation, at the partum and in post-partum period the seric concentration of calcium, phosphorus, iron, chlorides, creatinine, direct and total bilirrubins, cholesterol, triglycerides, total protein, albumin, and imunoglobulins, number of eritrocytes and leukocytes, plasmatic concentration of glucose and hemoglobin and AST activity in all of the animal groups. The sodium, potassium and urea concentrations were not significantly modified during the experiment. Experiment 2: The blood constituents of the cows of experiment 1 (G1) was compared with cows that aborted between 25 and 45 days post-breed. Possibly this abortion has metabolic/nutricional cause, because was not found alterations in the acute-phase protein concentrations neither in the leukogram. Experiment 3: The passive immunity transfer to the heifers which were daughters of the females from the experiment 1 was evaluated by measuring seric GGT , total protein and IGg . The heifers got colostrum from their own mothers and there was no significant difference between the groups. The TIP found in all the groups was considered good.

A presente tese foi dividida em 5 Experimentos. Os objetivos do Experimento 1 foram avaliar a utilização da gonadotrofina coriônica equina (eCG) e/ou do cipionato de estradiol (ECP) na dinâmica folicular e taxa de concepção de vacas holandesas submetidas a inseminação em tempo fixo (IATF). No D0, todos os animais (n = 782) receberam 2 mg de benzoato de estradiol (BE) e um dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR). Oito dias depois, o CIDR foi retirado e todos os animais receberam PGF2?. Simultaneamente, os animais foram divididos em 4 grupos: G1) eCG + ECP no Dia 8; G2) eCG no Dia 8 + GnRH após 48h; G3) ECP no Dia 8; G4) GnRH após 48h. Amostras de sangue e exames utlra-sonográficos foram realizados frequentemente em um subgrupo de animais (n = 96). As análises estatísticas de todos os experimentos foram efetuadas com o proc GLIMMIX e proc MIXED do SAS. O uso de eCG e o escore de condição corporal (ECC) dos animais afetaram as concentrações circulantes de progesterona no diestro. Os animais do G2 apresentaram maior taxa de concepção que os do G4 (33,8% vs. 28,9%). Além disso, para animais de menor ECC, ficou evidente o benefício da aplicação de eCG (G2 = 44,4% vs. G4 = 6,1%). No Experimento 2 (n = 26), o objetivo foi comparar o efeito da administração da eCG no dia da remoção do CIDR em animais de menor (2,0-2,5) ou maior (3,0-3,5) ECC. Foram avaliadas algumas características do corpo lúteo (CL) como o volume e histologia, assim como as concentrações plasmáticas de progesterona no diestro. Independentemente da condição corporal dos animais, a eCG aumentou o volume do CL e a concentração plasmática de progesterona no diestro. O ECC afetou negativamente o volume e concentração de progesterona sérica no diestro. Não foi encontrado diferença na proporção de células grandes/pequenas, assim como no fluxo sanguíneo no CL entre os grupos experimentais. No Experimento 3, foi comparado a taxa de concepção em vacas de leite de alta produção (n = 388) após o uso do protocolo G2 do Experimento 1 (Capítulo I), com ou sem adição de ECP no momento da retirada do CIDR (novo ou usado). Não foi verificado efeito da adição do tratamento com ECP e nem do tipo do dispostivo na taxa de concepção. No Experimento 4 (n = 199), apesar no aumento verificado no diâmetro folicular no grupo tratado com GnRH 56h (17,8 mm) comparado com GnRH 48h (16,5 mm); e do atraso no momento da ovulação após a retirada do CIDR (GnRH 56h = 75,3h; GnRH 48h = 79,8h) não foi constatado qualquer diferença na concepção ao se atrasar a aplicação do GnRH de 48h para 56h em vacas inseminadas 16h depois do GnRH. No Experimento 5 (n = 185), a taxa de concepção não diferiu em animais que receberam o GnRH 48h ou 56h (momento da IATF) após a retirada do CIDR, indicando a possibilidade do emprego de um protocolo com apenas 3 manejos em vacas de leite de alta produção. / The current thesys has been divided in 5 Experiments. Objectives of Experiment 1 were to evaluate the effects of equine chorionic gonadotropin (eCG) and/or estradiol cypionate (ECP) on follicular dymanics and conception rate in Holstein cows receiving fixed timed artificial insemination (TAI). On D0, all cows (n = 782) received 2 mg of estradiol benzoate (EB) and one intravaginal progesterone device (CIDR). Eight days later, CIDR was removed and all animals were treated with PGF2?. Simultaneously, animals were divided in 4 groups: G1) eCG + ECP on Day 8; G2) eCG on Day 8 + GnRH 48h later; G3) ECP on Day 8; G4) GnRH 48h later. Blood samples and ultrasound exams were frequently performed in a subset of the animals (n = 96). All the statistical analyses for all experiments were performed with proc GLIMMIX and proc MIXED of SAS. Equine chorionic gonadotropin (eCG) treatment and body condition score (BCS) affected circulating progesterone in the diestrus. Cows in G2 had greater conception rates than cows in G4 (33,8% vs. 28,9%). In addition, in cows with lower BCS, eCG seems to be even more affective (G2 = 44,4% vs. G4 = 6,1%). In Experiment 2 (n = 26), the objective was to compare the effect of eCG the day of CIDR removal in animals with lower (2,0-2,5) or higher (3,0-3,5) BCS. Some variables such as corpus luteum (CL) volume, histology and circulating progesterone concentration in the diestrus were evaluated. Regardless of the body condition of the animals, eCG increased CL volume and circulating progesterone concentration in the diestrus. BCS negatively affected CL volume and circulating progesterone. There were no differences in large/small CL cell ratio, as well as CL blood flow between experimental groups. In Experiment 3, it was compared conception rate in dairy cows (n = 388) after using the same protocol G2 from Experiment 1 (Chapter I), with or without an ECP treatment at the time of CIDR (new or used) removal. Both ECP treatment and type of CIDR did not significantly affected conception rates. In Experiment 4 (n = 199), despite the fact that follicular diameter was increased in group GnRH 56h (17,8 mm) compared with GnRH 48h (16,5 mm); and of the delayed time of ovulation after CIDR removal (GnRH 56h = 75,3h; GnRH 48h = 79,8h), there were no differences in conception rates after delaying the GnRH treatment from 48h to 56h in cows inseminated 16h after GnRH. In Experiment 5 (n = 185), conception rate did not differ in animals that received GnRH 48h or 56h (at the time of TAI) after CIDR removal, indicating the possibility of using a protocol with only 3 handlings in high producing dairy cows.

O objetivo deste estudo foi analisar o plasma sanguíneo correspondente ao período de transição, de vacas Holandesas de alta produção e sua relação com o desempenho reprodutivo. Para isso, este plasma foi analisado com emprego do equipamento de espectrômetro de massas híbrido triplo quadrupolo/tempo-de-vôo, para identificação dos Lipídios. As alterações metabólicas e hormonais ocorridas durante esta fase, nas vacas leiteiras, afetam diretamente a saúde e o desempenho produtivo e reprodutivo das mesmas. Nesse período, ocorre o balanço energético negativo, caracterizado pelo aumento da mobilização de reservas energéticas, normalmente do tecido adiposo, para atender às demandas voltadas à produção de leite. Neste projeto, propõe-se o estudo da condição metabólica, principalmente sob um contexto lipidômico, durante o período de transição e início de lactação de vacas leiteiras em dois grupos de produção (Alta: ≥ 45,9 kg leite/dia e Média: 30-45,8kg leite/dia), nos períodos de Inverno e Verão que se tornaram prenhes ou não aos 150 dias de experimento (após 3 IATF), em um contexto multidisciplinar, visando o melhor entendimento, tanto do desempenho produtivo, como do reprodutivo e na elaboração de estratégias de manejo, para aplicação nos rebanhos leiteiros no Brasil. Foram utilizadas 31 vacas da raça Holandesa, multíparas e gestantes, com parto previsto para 21 dias após o início do período de avaliação experimental. Os animais foram avaliados durante o período pré-parto até 150 dias de lactação. Nas amostras foram analisadas variáveis plasmáticas, conhecidamente ligadas às condições metabólicas (energética, proteica e enzímica). Estes valores serão utilizados como guias na utilização da abordagen ômica (lipidômica), com finalidade de identificar biomarcadores lipídicos descritivos do metabolismo destes animais. Todos os dados obtidos foram analisados por métodos estatísticos convencionais e por estatística multivariada, utilizando técnicas como PCA (Principal Component Analisis) e OPLS (Orthogonal Projection on Latent Structures) e ferramentas de bioinformática, a fim de identificar quais metabólitos são mais descritivos do metabolismo destes animais, bem como a interação das diferentes vias metabólicas. Concluí-se que ao final do período de transição, o plasma de vacas pós-parto que contenham maiores quantidades de fosfatifilcolinas, principalmente 36:2 e 36:4, podem obter melhores chances de se tornarem prenhes à 1IATF. Estas fosfatidilcolinas podem ser consideradas como bons biomarcadores lipídicos devido à sua interferência com a maior síntese de lipoproteínas VLDL, evitando assim, a ocorrência de fígado gorduroso, característico desse período. Além disso, estas moléculas podem auxiliar no processo de monitoramento de alguns parâmetros metabólicos alterados, normalmente observados durante o balanço energético negativo / The aim of this study was to analyze the corresponding blood plasma in transitional period of Holstein cows with high production and its relation to the reproductive performance. Therefore, this plasma was analyzed with the use of a triple quadrupole mass spectrometer time-of-flight, for identification of lipids. In dairy cows, the metabolic and hormonal changes during this phase, directly affect the health and productive and reproductive performance. In this period, the negative energy balance is characterized by increased mobilization of energy reserves, usually by fat, due the demands on milk production. In this project, we proposed the study of metabolic condition, especially under a lipidomic context, during the transition period and early lactation dairy cows on two milk productions (High: ≥ 45.9 kg milk/day and Medium: 30 -45,8kg milk/day) during the periods, winter and summer, of cows that became pregnant or not in the 150 days of the experiment (after 3 IATF), in a multidisciplinary context, for get better understand the both productions performances, the reproductive and developing management strategies for application in dairy herds in Brazil. They used 31 Holstein cows, multiparous and pregnants, with calving expected to 21 days after the beginning of the experimental evaluation period. The animals were evaluated during ante partum period to 150 days of lactation. Samples were analyzed by parameters, known to be linked to metabolic conditions (energy, protein and enzyme). These values will be used as guides in a ohmic approach (lipidomics), with the purpose of identifying biomarkers describe lipid metabolism of these animals. All data were analyzed by conventional statistical methods and multivariate statistics, using techniques such as PCA (Principal Component Analysis) and OPLS (Orthogonal Projection on Latent Structures) and bioinformatics tools to identify which metabolites are more descriptive of the metabolism of these animals as well as the interaction of different metabolic pathways. It can be concluded that the end of the transition period, the plasma post-partum cows containing larger amounts of phosphatidylcholines, especially 36:2 and 36:4, may best chance of becoming pregnant in 1IATF. These phosphatidylcholines may be considered a good lipid biomarkers interfering with the highest synthesis of VLDL, thereby avoiding the occurrence of fatty liver characteristic of that period. Therefore, these molecules can be used for monitoring the process of change of some metabolic parameters normally observed during negative energy balance

O objetivo deste estudo foi analisar o plasma sanguíneo correspondente ao período de transição, de vacas Holandesas de alta produção e sua relação com o desempenho reprodutivo. Para isso, este plasma foi analisado com emprego do equipamento de espectrômetro de massas híbrido triplo quadrupolo/tempo-de-vôo, para identificação dos Lipídios. As alterações metabólicas e hormonais ocorridas durante esta fase, nas vacas leiteiras, afetam diretamente a saúde e o desempenho produtivo e reprodutivo das mesmas. Nesse período, ocorre o balanço energético negativo, caracterizado pelo aumento da mobilização de reservas energéticas, normalmente do tecido adiposo, para atender às demandas voltadas à produção de leite. Neste projeto, propõe-se o estudo da condição metabólica, principalmente sob um contexto lipidômico, durante o período de transição e início de lactação de vacas leiteiras em dois grupos de produção (Alta: ≥ 45,9 kg leite/dia e Média: 30-45,8kg leite/dia), nos períodos de Inverno e Verão que se tornaram prenhes ou não aos 150 dias de experimento (após 3 IATF), em um contexto multidisciplinar, visando o melhor entendimento, tanto do desempenho produtivo, como do reprodutivo e na elaboração de estratégias de manejo, para aplicação nos rebanhos leiteiros no Brasil. Foram utilizadas 31 vacas da raça Holandesa, multíparas e gestantes, com parto previsto para 21 dias após o início do período de avaliação experimental. Os animais foram avaliados durante o período pré-parto até 150 dias de lactação. Nas amostras foram analisadas variáveis plasmáticas, conhecidamente ligadas às condições metabólicas (energética, proteica e enzímica). Estes valores serão utilizados como guias na utilização da abordagen ômica (lipidômica), com finalidade de identificar biomarcadores lipídicos descritivos do metabolismo destes animais. Todos os dados obtidos foram analisados por métodos estatísticos convencionais e por estatística multivariada, utilizando técnicas como PCA (Principal Component Analisis) e OPLS (Orthogonal Projection on Latent Structures) e ferramentas de bioinformática, a fim de identificar quais metabólitos são mais descritivos do metabolismo destes animais, bem como a interação das diferentes vias metabólicas. Concluí-se que ao final do período de transição, o plasma de vacas pós-parto que contenham maiores quantidades de fosfatifilcolinas, principalmente 36:2 e 36:4, podem obter melhores chances de se tornarem prenhes à 1IATF. Estas fosfatidilcolinas podem ser consideradas como bons biomarcadores lipídicos devido à sua interferência com a maior síntese de lipoproteínas VLDL, evitando assim, a ocorrência de fígado gorduroso, característico desse período. Além disso, estas moléculas podem auxiliar no processo de monitoramento de alguns parâmetros metabólicos alterados, normalmente observados durante o balanço energético negativo / The aim of this study was to analyze the corresponding blood plasma in transitional period of Holstein cows with high production and its relation to the reproductive performance. Therefore, this plasma was analyzed with the use of a triple quadrupole mass spectrometer time-of-flight, for identification of lipids. In dairy cows, the metabolic and hormonal changes during this phase, directly affect the health and productive and reproductive performance. In this period, the negative energy balance is characterized by increased mobilization of energy reserves, usually by fat, due the demands on milk production. In this project, we proposed the study of metabolic condition, especially under a lipidomic context, during the transition period and early lactation dairy cows on two milk productions (High: ≥ 45.9 kg milk/day and Medium: 30 -45,8kg milk/day) during the periods, winter and summer, of cows that became pregnant or not in the 150 days of the experiment (after 3 IATF), in a multidisciplinary context, for get better understand the both productions performances, the reproductive and developing management strategies for application in dairy herds in Brazil. They used 31 Holstein cows, multiparous and pregnants, with calving expected to 21 days after the beginning of the experimental evaluation period. The animals were evaluated during ante partum period to 150 days of lactation. Samples were analyzed by parameters, known to be linked to metabolic conditions (energy, protein and enzyme). These values will be used as guides in a ohmic approach (lipidomics), with the purpose of identifying biomarkers describe lipid metabolism of these animals. All data were analyzed by conventional statistical methods and multivariate statistics, using techniques such as PCA (Principal Component Analysis) and OPLS (Orthogonal Projection on Latent Structures) and bioinformatics tools to identify which metabolites are more descriptive of the metabolism of these animals as well as the interaction of different metabolic pathways. It can be concluded that the end of the transition period, the plasma post-partum cows containing larger amounts of phosphatidylcholines, especially 36:2 and 36:4, may best chance of becoming pregnant in 1IATF. These phosphatidylcholines may be considered a good lipid biomarkers interfering with the highest synthesis of VLDL, thereby avoiding the occurrence of fatty liver characteristic of that period. Therefore, these molecules can be used for monitoring the process of change of some metabolic parameters normally observed during negative energy balance

A presente tese foi dividida em 5 Experimentos. Os objetivos do Experimento 1 foram avaliar a utilização da gonadotrofina coriônica equina (eCG) e/ou do cipionato de estradiol (ECP) na dinâmica folicular e taxa de concepção de vacas holandesas submetidas a inseminação em tempo fixo (IATF). No D0, todos os animais (n = 782) receberam 2 mg de benzoato de estradiol (BE) e um dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR). Oito dias depois, o CIDR foi retirado e todos os animais receberam PGF2?. Simultaneamente, os animais foram divididos em 4 grupos: G1) eCG + ECP no Dia 8; G2) eCG no Dia 8 + GnRH após 48h; G3) ECP no Dia 8; G4) GnRH após 48h. Amostras de sangue e exames utlra-sonográficos foram realizados frequentemente em um subgrupo de animais (n = 96). As análises estatísticas de todos os experimentos foram efetuadas com o proc GLIMMIX e proc MIXED do SAS. O uso de eCG e o escore de condição corporal (ECC) dos animais afetaram as concentrações circulantes de progesterona no diestro. Os animais do G2 apresentaram maior taxa de concepção que os do G4 (33,8% vs. 28,9%). Além disso, para animais de menor ECC, ficou evidente o benefício da aplicação de eCG (G2 = 44,4% vs. G4 = 6,1%). No Experimento 2 (n = 26), o objetivo foi comparar o efeito da administração da eCG no dia da remoção do CIDR em animais de menor (2,0-2,5) ou maior (3,0-3,5) ECC. Foram avaliadas algumas características do corpo lúteo (CL) como o volume e histologia, assim como as concentrações plasmáticas de progesterona no diestro. Independentemente da condição corporal dos animais, a eCG aumentou o volume do CL e a concentração plasmática de progesterona no diestro. O ECC afetou negativamente o volume e concentração de progesterona sérica no diestro. Não foi encontrado diferença na proporção de células grandes/pequenas, assim como no fluxo sanguíneo no CL entre os grupos experimentais. No Experimento 3, foi comparado a taxa de concepção em vacas de leite de alta produção (n = 388) após o uso do protocolo G2 do Experimento 1 (Capítulo I), com ou sem adição de ECP no momento da retirada do CIDR (novo ou usado). Não foi verificado efeito da adição do tratamento com ECP e nem do tipo do dispostivo na taxa de concepção. No Experimento 4 (n = 199), apesar no aumento verificado no diâmetro folicular no grupo tratado com GnRH 56h (17,8 mm) comparado com GnRH 48h (16,5 mm); e do atraso no momento da ovulação após a retirada do CIDR (GnRH 56h = 75,3h; GnRH 48h = 79,8h) não foi constatado qualquer diferença na concepção ao se atrasar a aplicação do GnRH de 48h para 56h em vacas inseminadas 16h depois do GnRH. No Experimento 5 (n = 185), a taxa de concepção não diferiu em animais que receberam o GnRH 48h ou 56h (momento da IATF) após a retirada do CIDR, indicando a possibilidade do emprego de um protocolo com apenas 3 manejos em vacas de leite de alta produção. / The current thesys has been divided in 5 Experiments. Objectives of Experiment 1 were to evaluate the effects of equine chorionic gonadotropin (eCG) and/or estradiol cypionate (ECP) on follicular dymanics and conception rate in Holstein cows receiving fixed timed artificial insemination (TAI). On D0, all cows (n = 782) received 2 mg of estradiol benzoate (EB) and one intravaginal progesterone device (CIDR). Eight days later, CIDR was removed and all animals were treated with PGF2?. Simultaneously, animals were divided in 4 groups: G1) eCG + ECP on Day 8; G2) eCG on Day 8 + GnRH 48h later; G3) ECP on Day 8; G4) GnRH 48h later. Blood samples and ultrasound exams were frequently performed in a subset of the animals (n = 96). All the statistical analyses for all experiments were performed with proc GLIMMIX and proc MIXED of SAS. Equine chorionic gonadotropin (eCG) treatment and body condition score (BCS) affected circulating progesterone in the diestrus. Cows in G2 had greater conception rates than cows in G4 (33,8% vs. 28,9%). In addition, in cows with lower BCS, eCG seems to be even more affective (G2 = 44,4% vs. G4 = 6,1%). In Experiment 2 (n = 26), the objective was to compare the effect of eCG the day of CIDR removal in animals with lower (2,0-2,5) or higher (3,0-3,5) BCS. Some variables such as corpus luteum (CL) volume, histology and circulating progesterone concentration in the diestrus were evaluated. Regardless of the body condition of the animals, eCG increased CL volume and circulating progesterone concentration in the diestrus. BCS negatively affected CL volume and circulating progesterone. There were no differences in large/small CL cell ratio, as well as CL blood flow between experimental groups. In Experiment 3, it was compared conception rate in dairy cows (n = 388) after using the same protocol G2 from Experiment 1 (Chapter I), with or without an ECP treatment at the time of CIDR (new or used) removal. Both ECP treatment and type of CIDR did not significantly affected conception rates. In Experiment 4 (n = 199), despite the fact that follicular diameter was increased in group GnRH 56h (17,8 mm) compared with GnRH 48h (16,5 mm); and of the delayed time of ovulation after CIDR removal (GnRH 56h = 75,3h; GnRH 48h = 79,8h), there were no differences in conception rates after delaying the GnRH treatment from 48h to 56h in cows inseminated 16h after GnRH. In Experiment 5 (n = 185), conception rate did not differ in animals that received GnRH 48h or 56h (at the time of TAI) after CIDR removal, indicating the possibility of using a protocol with only 3 handlings in high producing dairy cows.