O presente trabalho visou estudar o comportamento biológico em camundongos de 10 amostras de vírus da raiva isoladas de morcegos hematófagos e não-hematófagos, no Estado do Rio de Janeiro, sua caracterização genética quanto aos genes N e G, além da resposta de camundongos vacinados com a vacina anti-rábica produzida pela replicação da amostra Pitman-Moore em cultivo celular, frente ao desafio com estas amostras virais. As passagens sucessivas em camundongos determinaram uma redução do período de incubação e a obtenção de amostras virais com altos títulos. A vacina anti-rábica utilizada na imunização dos camundongos ofereceu proteção em mais de 80% dos camundongos vacinados com a diluição 1:5 da vacina, frente à maioria das amostras. A análise filogenética do gene da proteína N apresentou um padrão de agregação dividido em variante de morcego hematófago e variante de morcego insetívoro, com diferenças filogenéticas entre as variantes de morcego hematófago isoladas na Região Noroeste do Estado do Rio de Janeiro e aquelas isoladas nas Regiões Metropolitana e Sul do Estado. A substituição do resíduo ácido aspártico por ácido glutâmico na posição 118, encontradas na caracterização genética da proteína G das amostras 704/97 e 151/98, permite inferir que esta posição esteja relacionada à antigenicidade viral. Não foram observadas diferenças genéticas temporais entre as amostras estudadas. / In the present study we analyzed the biological behavior in mice of 10 rabies virus samples isolated from haematophagous and non-haematophagous bats in Rio de Janeiro State, its genetic characterization from genes N and G, and we also studied the response of mice vaccinated with cell culture rabies vaccine, produced with the Pitman-Moore strain, after viral challenge with bat rabies virus samples. Viral passages in mice resulted in reduced incubation period and high virus titrers. The vaccine used conferred protection in more than 80% of the mice vaccinated with 1:15 vaccine dilution, after viral challenge. N gene genetic analysis divided the samples in haematophagous bat strains and insectivorous bat strains, with phylogenetic differences between samples isolated in Northeast Region and those isolated in the Metropolitan and South Regions of Rio de Janeiro State. The substitution of an aspartic acid to a glutamic acid found in the position 118 of G gene genetic characterization from samples 704/97 and 151/98 seems to be related to viral antigenicity. There were no time-related genetic differences between the studied samples.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, São José dos Pinhais, 2011 / Inclui bibliografias / A raiva permanece como uma doenca preocupante para medicos e veterinários devido aos expressivos prejuizos e perdas que ela acarreta. O estudo continuado da raiva, focando em seus metodos profilaticos e em especial no desenvolvimento de novos metodos vaci / Rabies remains a preoccupying disease in human and animal medicine due to the expressive losses that it causes. The continued study of rabies, concentrating on its prophylactic methods, specifically in the development of new vaccine methods becomes essent

O presente trabalho visou estudar o comportamento biológico em camundongos de 10 amostras de vírus da raiva isoladas de morcegos hematófagos e não-hematófagos, no Estado do Rio de Janeiro, sua caracterização genética quanto aos genes N e G, além da resposta de camundongos vacinados com a vacina anti-rábica produzida pela replicação da amostra Pitman-Moore em cultivo celular, frente ao desafio com estas amostras virais. As passagens sucessivas em camundongos determinaram uma redução do período de incubação e a obtenção de amostras virais com altos títulos. A vacina anti-rábica utilizada na imunização dos camundongos ofereceu proteção em mais de 80% dos camundongos vacinados com a diluição 1:5 da vacina, frente à maioria das amostras. A análise filogenética do gene da proteína N apresentou um padrão de agregação dividido em variante de morcego hematófago e variante de morcego insetívoro, com diferenças filogenéticas entre as variantes de morcego hematófago isoladas na Região Noroeste do Estado do Rio de Janeiro e aquelas isoladas nas Regiões Metropolitana e Sul do Estado. A substituição do resíduo ácido aspártico por ácido glutâmico na posição 118, encontradas na caracterização genética da proteína G das amostras 704/97 e 151/98, permite inferir que esta posição esteja relacionada à antigenicidade viral. Não foram observadas diferenças genéticas temporais entre as amostras estudadas. / In the present study we analyzed the biological behavior in mice of 10 rabies virus samples isolated from haematophagous and non-haematophagous bats in Rio de Janeiro State, its genetic characterization from genes N and G, and we also studied the response of mice vaccinated with cell culture rabies vaccine, produced with the Pitman-Moore strain, after viral challenge with bat rabies virus samples. Viral passages in mice resulted in reduced incubation period and high virus titrers. The vaccine used conferred protection in more than 80% of the mice vaccinated with 1:15 vaccine dilution, after viral challenge. N gene genetic analysis divided the samples in haematophagous bat strains and insectivorous bat strains, with phylogenetic differences between samples isolated in Northeast Region and those isolated in the Metropolitan and South Regions of Rio de Janeiro State. The substitution of an aspartic acid to a glutamic acid found in the position 118 of G gene genetic characterization from samples 704/97 and 151/98 seems to be related to viral antigenicity. There were no time-related genetic differences between the studied samples.

Estimou-se o tamanho e a distribuição espacial da população canina domiciliada no Município de Guarulhos, Estado de São Paulo, correlacionando-os com a população humana e composição sócio-econômica. Um Sistema de Informação Geográfica (SIG) foi elaborado para avaliar a localização espacial dos postos da Campanha de Vacinação Anti-rábica Canina em Guarulhos, no ano 2000. A população total de cães, no ano 2000, foi estimada com base em uma razão entre a população humana e a população canina, de acordo com uma amostra que considerou critérios sócio-econômicos. Observou-se que esta razão não está correlacionada com nível sócio-econômico, podendo-se considerar um valor único, ou seja, 5,30 (erro padrão de 0,27), para a Zona Urbana do município. Na Zona Rural, estimou-se a razão em 8,16 (erro padrão de 1,13). Foi determinada a densidade populacional canina para os setores censitários, com base na razão entre a população humana e a população canina. Baseado em uma lista de endereços, a localização geográfica dos 160 postos fixos de vacinação foi levantada, pelo uso de um aparelho de localização global por satélite (SPG). Estes pontos foram então plotados em um mapa georreferenciado do município de Guarulhos e suas 'áreas de influência' foram estabelecidas com base em uma distância média de deslocamento dos proprietários até os postos de vacinação. A população canina foi estimada em 193886 no ano 2000. A população felina foi estimada em 44070 no mesmo ano. Confrontando-se estes números com o total de animais vacinados na Campanha de Vacinação Anti-rábica do ano 2000, estimou-se que 61,77% dos cães domiciliados e 38,31% dos gatos domiciliados foram atendidos. Observou-se, através de mapas temáticos, que a cobertura espacial dos postos de vacinação é adequada, pois atende as áreas de maior densidade populacional animal. A proporção entre os gêneros da população canina foi estimada em 1,70, ou seja, 1,70 machos para cada fêmea. A mesma proporção, para a população felina, foi estimada em 1,44. / The size of supervised dog population and its distribution was estimated in Guarulhos, State of Sao Paulo, and correlated with human population and its socio-economic composition. A Geographic Information System (GIS) was built to evaluate spatial location of posts of anti-rabic vaccination campaign in Guarulhos, in the year 2,000. The total canine population in the year 2,000 was estimated by a human population:dog population ratio, obtained by a socio-economic criteria sampling. This ratio is not correlated with socio-economic levels, so that it may be considered a single value, or 5.30 (standard error in 0.27), to Guarulhos Urban Area. In Rural Area, this ratio is 8.16 (standard error in 1.13). Canine population density in censitary sectors was determinated based on human population:dog population ratio. Geographic location of 160 vaccination posts was found, based on an address list, by using a global positioning system (GPS) device. Those points were plotted in a map of Guarulhos, and its 'influence areas' were established by a mean walking distance, or the distance that a dog owner was prone to reach a vaccination post. Canine population was estimated in 193,886 for the year of 2,000. Feline population was estimated in 44,070 in the same year. Comparing these numbers with total vaccinated animals (dogs and cats) in Anti-rabic Vaccination Campaign of 2000, 61.77% of supervised dogs and 38.31% of cats were estimated to be attended. Through thematic maps, spatial coverage of vaccination posts was found to be adequate for Guarulhos, because it covers areas of high animal density. The proportion between genders of canine supervised population was estimated in 1.70, or 1.70 male for each female. The same proportion for feline supervised population, was estimated in 1.44.

Estimou-se o tamanho e a distribuição espacial da população canina domiciliada no Município de Guarulhos, Estado de São Paulo, correlacionando-os com a população humana e composição sócio-econômica. Um Sistema de Informação Geográfica (SIG) foi elaborado para avaliar a localização espacial dos postos da Campanha de Vacinação Anti-rábica Canina em Guarulhos, no ano 2000. A população total de cães, no ano 2000, foi estimada com base em uma razão entre a população humana e a população canina, de acordo com uma amostra que considerou critérios sócio-econômicos. Observou-se que esta razão não está correlacionada com nível sócio-econômico, podendo-se considerar um valor único, ou seja, 5,30 (erro padrão de 0,27), para a Zona Urbana do município. Na Zona Rural, estimou-se a razão em 8,16 (erro padrão de 1,13). Foi determinada a densidade populacional canina para os setores censitários, com base na razão entre a população humana e a população canina. Baseado em uma lista de endereços, a localização geográfica dos 160 postos fixos de vacinação foi levantada, pelo uso de um aparelho de localização global por satélite (SPG). Estes pontos foram então plotados em um mapa georreferenciado do município de Guarulhos e suas 'áreas de influência' foram estabelecidas com base em uma distância média de deslocamento dos proprietários até os postos de vacinação. A população canina foi estimada em 193886 no ano 2000. A população felina foi estimada em 44070 no mesmo ano. Confrontando-se estes números com o total de animais vacinados na Campanha de Vacinação Anti-rábica do ano 2000, estimou-se que 61,77% dos cães domiciliados e 38,31% dos gatos domiciliados foram atendidos. Observou-se, através de mapas temáticos, que a cobertura espacial dos postos de vacinação é adequada, pois atende as áreas de maior densidade populacional animal. A proporção entre os gêneros da população canina foi estimada em 1,70, ou seja, 1,70 machos para cada fêmea. A mesma proporção, para a população felina, foi estimada em 1,44. / The size of supervised dog population and its distribution was estimated in Guarulhos, State of Sao Paulo, and correlated with human population and its socio-economic composition. A Geographic Information System (GIS) was built to evaluate spatial location of posts of anti-rabic vaccination campaign in Guarulhos, in the year 2,000. The total canine population in the year 2,000 was estimated by a human population:dog population ratio, obtained by a socio-economic criteria sampling. This ratio is not correlated with socio-economic levels, so that it may be considered a single value, or 5.30 (standard error in 0.27), to Guarulhos Urban Area. In Rural Area, this ratio is 8.16 (standard error in 1.13). Canine population density in censitary sectors was determinated based on human population:dog population ratio. Geographic location of 160 vaccination posts was found, based on an address list, by using a global positioning system (GPS) device. Those points were plotted in a map of Guarulhos, and its 'influence areas' were established by a mean walking distance, or the distance that a dog owner was prone to reach a vaccination post. Canine population was estimated in 193,886 for the year of 2,000. Feline population was estimated in 44,070 in the same year. Comparing these numbers with total vaccinated animals (dogs and cats) in Anti-rabic Vaccination Campaign of 2000, 61.77% of supervised dogs and 38.31% of cats were estimated to be attended. Through thematic maps, spatial coverage of vaccination posts was found to be adequate for Guarulhos, because it covers areas of high animal density. The proportion between genders of canine supervised population was estimated in 1.70, or 1.70 male for each female. The same proportion for feline supervised population, was estimated in 1.44.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Sandro.pdf: 259492 bytes, checksum: 9e24465090764a22ac75d827ad8af255 (MD5) Previous issue date: 2008-08-27 / The effect of a probiotic on the immune response of cattle immunized with one dose of rabies vaccine was evaluated in this study. The Nelore bovines (N=75) were divided randomly into 5 groups: four groups fed with a diet supplemented with the 2, 3, 4 and 8 g the probiotic (Proenzime®)/bovine/day, groups G2, G3, G4 and G8, respectively, for 60 days. The 5th group was used as control. All the animals were immunized with a single dose of rabies vaccine on the first day of the experiment (day 0). The antibody titers were measured on days 0, 30 and 60 by RFFIT test. The results show the significant interaction was found between the probiotic level and vaccination time. There was also a significant difference among rabies titers in groups Gc, G2, G3, G4 and G8 on both days 30 and 60. In group G4, titers of rabies antibody in cattle decreased significantly on day 60. A significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals in the control group and the other treatments was found on both days 30 and 60. On day 60, the control group did not differ from G2. However, no significant difference (p<0.05) was found among the treatments which were supplemented with probiotic. In addition, no significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals on days 30 and 60 was found in control (Gc) or any other treatment (G2, G3, G4 or G8). In conclusion, the probiotic (Proenzime®) increase the humoral immune response of bovine immunized with rabies vaccine. / Foi avaliado o efeito do probiótico sobre a resposta imune de bovinos imunizados com uma dose de vacina anti-rábica. Utilizaram-se bovinos Nelore (N=75) divididos randomicamente em 5 grupos: quatro grupos foram suplementados com 2, 3, 4 e 8 g probiótico (Proenzime®)/bovino/dia, grupos G2, G3, G4 e G8, respectivamente, por 60 dias. O 5º grupo foi controle. Todos os animais foram imunizados com uma dose de vacina anti-rábica no dia zero do experimento. Os títulos de anticorpos anti-rábicos foram mensurados nos dias 0, 30, 60 por meio do teste de RFFIT. Os resultados mostraram interação significativa entre concentração de probiótico e tempo de vacinação. Também teve aumento significativo nos títulos de anticorpos anti-rábicos nos grupos Gc, G2, G3, G4 e G8 nos dias 30 e 60. No grupo G4 os títulos de anticorpos anti-rábicos reduziram significativamente no dia 60. Houve diferença significativa (p<0,05) entre a freqüência de animais imunizados entre os grupos controle e tratados nos dias 30 e 60. No dia 60, o grupo controle não diferiu do G2. Além disso, não houve diferença significativa (p<0,05) na freqüência de animais nos dias 30 e 60, no grupo controle ou nos grupos tratados (G2, G3, G4 e G8). Conclui-se que o probiótico (Proenzime®) aumentou a resposta imune humoral em bovinos imunizados com vacina anti-rábica.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Sandro.pdf: 259492 bytes, checksum: 9e24465090764a22ac75d827ad8af255 (MD5) Previous issue date: 2008-08-27 / The effect of a probiotic on the immune response of cattle immunized with one dose of rabies vaccine was evaluated in this study. The Nelore bovines (N=75) were divided randomly into 5 groups: four groups fed with a diet supplemented with the 2, 3, 4 and 8 g the probiotic (Proenzime®)/bovine/day, groups G2, G3, G4 and G8, respectively, for 60 days. The 5th group was used as control. All the animals were immunized with a single dose of rabies vaccine on the first day of the experiment (day 0). The antibody titers were measured on days 0, 30 and 60 by RFFIT test. The results show the significant interaction was found between the probiotic level and vaccination time. There was also a significant difference among rabies titers in groups Gc, G2, G3, G4 and G8 on both days 30 and 60. In group G4, titers of rabies antibody in cattle decreased significantly on day 60. A significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals in the control group and the other treatments was found on both days 30 and 60. On day 60, the control group did not differ from G2. However, no significant difference (p<0.05) was found among the treatments which were supplemented with probiotic. In addition, no significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals on days 30 and 60 was found in control (Gc) or any other treatment (G2, G3, G4 or G8). In conclusion, the probiotic (Proenzime®) increase the humoral immune response of bovine immunized with rabies vaccine. / Foi avaliado o efeito do probiótico sobre a resposta imune de bovinos imunizados com uma dose de vacina anti-rábica. Utilizaram-se bovinos Nelore (N=75) divididos randomicamente em 5 grupos: quatro grupos foram suplementados com 2, 3, 4 e 8 g probiótico (Proenzime®)/bovino/dia, grupos G2, G3, G4 e G8, respectivamente, por 60 dias. O 5º grupo foi controle. Todos os animais foram imunizados com uma dose de vacina anti-rábica no dia zero do experimento. Os títulos de anticorpos anti-rábicos foram mensurados nos dias 0, 30, 60 por meio do teste de RFFIT. Os resultados mostraram interação significativa entre concentração de probiótico e tempo de vacinação. Também teve aumento significativo nos títulos de anticorpos anti-rábicos nos grupos Gc, G2, G3, G4 e G8 nos dias 30 e 60. No grupo G4 os títulos de anticorpos anti-rábicos reduziram significativamente no dia 60. Houve diferença significativa (p<0,05) entre a freqüência de animais imunizados entre os grupos controle e tratados nos dias 30 e 60. No dia 60, o grupo controle não diferiu do G2. Além disso, não houve diferença significativa (p<0,05) na freqüência de animais nos dias 30 e 60, no grupo controle ou nos grupos tratados (G2, G3, G4 e G8). Conclui-se que o probiótico (Proenzime®) aumentou a resposta imune humoral em bovinos imunizados com vacina anti-rábica.

Para atestar a imunogenicidade de vacinas contra raiva, os testes de titulação e de soroneutralização de vírus rábico em células BHK-21 foram validados quanto à linearidade, precisão, exatidão e robustez. Cinco esquemas de imunização com diferentes concentrações, vias de inoculação e intervalos entre as doses foram avaliados em camundongos com vacina contra raiva em células Vero. O grupo II que recebeu um esquema de 2 doses e intervalos maiores (0 e 60 dias) apresentou títulos de anticorpos neutralizantes [ACN] mais elevados (46,1 UI/mL) do que o Grupo I (19,4 UI/mL), de 3 doses e intervalos menores (0,7 e 28 dias). O grupo III, que recebeu 2 doses, sendo a 1ª diluída 1/10, apresentou ACN semelhantes ao grupo II (39,2 UI/mL), sendo igualmente eficaz. Nenhum animal do grupo IV, imunizado por via oral (VO) apresentou ACN, indicando supressão e todos os do grupo V, imunizados VO com antígeno adsorvido/encapsulado em sílica nanoestruturada SBA-15, apresentaram títulos de ACN detectáveis, mostrando que o antígeno foi protegido da degradação no trato gastrointestinal. / To assure the reliability of the results of immunogenicity of rabies vaccines, tests of virus titration and neutralization in BHK-21 cells were validated for linearity, precision, accuracy and robustness. Five schemes of immunization with different concentrations, routes of inoculation and intervals between doses were evaluated in mice with rabies vaccine in Vero cells. Group II, immunized with 2 doses and enlarged interval (0 and 60 days) presented higher levels of neutralizing antibody (NAs) (46,1 IU/mL) than group I (19,4 IU/mL), with 3 doses and shorter intervals (0,7 and 28 days). Group III, which received 2 doses, the 1st diluted to 1/10, presented results similar to group II (39,2 IU/mL). None mouse of Group IV, immunized by oral route, presented NAs, indicating suppression and all mice of group V, immunized by oral route with vaccine adsorbed/encapsulated in nanostructured SBA-15 silica presented detectable NAs titers, showing that the SBA-15 silica prevented the antigen degradation in the gastrointestinal tract.

Para atestar a imunogenicidade de vacinas contra raiva, os testes de titulação e de soroneutralização de vírus rábico em células BHK-21 foram validados quanto à linearidade, precisão, exatidão e robustez. Cinco esquemas de imunização com diferentes concentrações, vias de inoculação e intervalos entre as doses foram avaliados em camundongos com vacina contra raiva em células Vero. O grupo II que recebeu um esquema de 2 doses e intervalos maiores (0 e 60 dias) apresentou títulos de anticorpos neutralizantes [ACN] mais elevados (46,1 UI/mL) do que o Grupo I (19,4 UI/mL), de 3 doses e intervalos menores (0,7 e 28 dias). O grupo III, que recebeu 2 doses, sendo a 1ª diluída 1/10, apresentou ACN semelhantes ao grupo II (39,2 UI/mL), sendo igualmente eficaz. Nenhum animal do grupo IV, imunizado por via oral (VO) apresentou ACN, indicando supressão e todos os do grupo V, imunizados VO com antígeno adsorvido/encapsulado em sílica nanoestruturada SBA-15, apresentaram títulos de ACN detectáveis, mostrando que o antígeno foi protegido da degradação no trato gastrointestinal. / To assure the reliability of the results of immunogenicity of rabies vaccines, tests of virus titration and neutralization in BHK-21 cells were validated for linearity, precision, accuracy and robustness. Five schemes of immunization with different concentrations, routes of inoculation and intervals between doses were evaluated in mice with rabies vaccine in Vero cells. Group II, immunized with 2 doses and enlarged interval (0 and 60 days) presented higher levels of neutralizing antibody (NAs) (46,1 IU/mL) than group I (19,4 IU/mL), with 3 doses and shorter intervals (0,7 and 28 days). Group III, which received 2 doses, the 1st diluted to 1/10, presented results similar to group II (39,2 IU/mL). None mouse of Group IV, immunized by oral route, presented NAs, indicating suppression and all mice of group V, immunized by oral route with vaccine adsorbed/encapsulated in nanostructured SBA-15 silica presented detectable NAs titers, showing that the SBA-15 silica prevented the antigen degradation in the gastrointestinal tract.

Foram imunizados 27 macacos-prego (Cebus apella), por via intramuscular, com vacina anti-rábica inativada, produzida a partir de cérebros de camundongos lactentes (VARCCL), empregada nas campanhas de prevenção da raiva animal de cães e gatos. Os animais permaneceram em cativeiro, durante o período de junho de 1995 a junho de 1997, sendo divididos em 3 grupos experimentais e vacinados conforme o esquema: grupo I, com 3 doses a intervalo de 30 dias; o II, com 2 doses a intervalo 30 dias e reforço aos 210 dias; e, o III com uma dose e reforço aos 210 dias. A revacinação anual foi realizada em todos os animais aos 365 dias. As amostras de soros foram obtidas aos 0, 30, 60, 90, 150, 210, 240, 300, 365, 395, 545 e 730 dias, e armazenadas à temperatura de -20ºC, e a dosagem dos anticorpos realizada através do teste simplificado da inibição da fluorescência. Verificou-se que os animais do grupo I apresentaram soroconversão mais duradoura (12232 dias) do que os dos grupos II e III (p<0,05) após a vacinação inicial, e os animais do grupo I apresentaram soroconversão mais duradoura (183,6120,6 dias) do que os dos grupos II (p<0,05), após a revacinação anual aos 365 dias. A VARCCL induziu a resposta imune nos macacos-prego, após vacinação e revacinação, respectivamente, em 81,4 por cento e 76,0 por cento dos animais; com produção de anticorpos neutralizantes, iguais ou superiores a 0,5 UI/ml, porém, de curta duração; não constituindo assim, imunógeno apropriado para ser utilizado na rotina de imunização destes animais de difícil lide, mantidos em cativeiro / Twenty-seven capuchin monkeys (Cebus apella) were intramuscularly immunized with inactivated suckling mouse brain rabies vaccine (SMBV) employed in campaigns for animal rabies prevention in dogs and cats. The animals were kept confined from June, 1995 to June, 1997. They were divided into 3 experimental groups and vaccinated according to the following scheme: group I, with 3 doses within a 30-day interval; group II, with 2 doses within a 30-day interval and a booster dose at the 210th day; and, group III; with a single dose and a booster dose at the 210th day. All animals were given the annual re-vaccination at the 365th day. Sera samples were obtained at the 0th, 30 th, 60th, 90 th, 150 th, 210 th, 240 th, 300 th, 365 th, 395 th, 545 th e 730 th days and kept stored at 20ºC. The antibodies dosage was carried out through the simplified inhibition fluorescent test. The following results were observed: animals belonging to group I had longer humoral immune response (12232 days) than the ones belonging either to group II or group III (p<0.05) after initial vaccination; animals of group I presented longer humoral immune response (183.6120.6 days) than the ones of the group II (p<0.05) after the annual re-vaccination at the 365th day. The SMBV induced humoral immune response in capuchin monkeys after vaccination and re-vaccination in respectively 81.4 per cent and 76.0 per cent of the animals, producing neutralizing antibodies equal to or higher than 0.5 IU/ml; however, they were short-lasting, being therefore not appropriate as an immunogen to be used routinely in the immunization of these animals which are difficult both to be deal with and to be held confined