Mestre -- Escola Nacional de Saude Publica, Rio de Janeiro, 1999.

O presente trabalho foi dividido em três etapas: 1) otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva utilizando três diferentes anticorpos; 2) mapeamento histológico e imunoistoquímico de cortes seriados do sistema nervoso central (SNC) de bovinos e eqüinos e 3) Histologia e imunoistoquímica de bovinos com diagnóstico de raiva registrados no programa DXSNC do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) com lesões de encefalite não-supurativa e de casos de eqüinos com raiva do arquivo do Setor de Patologia da UFRGS entre 2002-2007. Para a otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva foram utilizadas 5 amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato. No mapeamento do SNC foram avaliadas 12 amostras de bovinos e 3 de eqüinos que morreram de raiva. Foi realizado histologia convencional e imunoistoquímica com utilização do anticorpo policlonal na diluição de 1:1000. Os principais achados histopatológicos em bovinos e eqüinos caracterizaram-se por meningoencefalite não-supurativa, microgliose focal, degeneração e necrose neuronal e neuronofagia. Em bovinos os principais locais de lesões foram no tronco encefálico, medula espinhal e gânglio trigêmeo. Corpúsculos de inclusão foram observados em 83,33% dos bovinos e em 100% dos eqüinos. Na imunoistoquímica todos os casos de bovinos e eqüinos obtiveram marcação positiva para raiva. Na terceira etapa do trabalho a histopatologia e imunoistoquímica de 30 amostras de bovinos com raiva do Programa DXSNC do SPV-UFRGS caracterizaram-se por meningoencefalite e meningomielite não supurativa com infiltrado mononuclear perivascular, principalmente de linfócitos e também de plasmócitos e macrófagos, além de, microgliose, satelitose e neuronofagia. Presença de corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos foi observado em 73,33% dos casos. Na imunoistoquímica obteve-se marcação em 80% dos casos. Em dois casos de eqüinos examinados do material de arquivo do SPV-UFRGS havia meningoencefalite não-supurativa e com presença de corpúsculos de inclusão e marcação imunoistoquímica nos dois casos. / The present study was divided in three stages: 1) optimization of the immunohistochemistry technique for rabies using three different antibodies; 2) histological and immunohistochemical mapping of serial sections of the central nervous system (CNS) of cattle and horses, and 3) histology and immunohistochemistry of bovine diagnosed with rabies registered on the DXSNC program of the Ministério da Agricultura e Abastecimento (MAPA) with lesions of non-suppurative encephalitis and of equines diagnosed with rabies registered on the files of Veterinary Pathology Section at UFRGS from 2002 to 2007. For the optimization of the rabies immunohistochemistry technique, 5 samples of CNS of bovine naturally infected with rabies virus were used. One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6,0). Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer. In the CNS mapping, 12 samples of bovine and 3 of equine that died of rabies were evaluated. Conventional histology and immunohistochemistry with polyclonal antibody in a 1:1000 dilution were performed. The main histopathological findings in cattle and horses were non-suppurativepurulent meningoencephalitis, focal microgliosis, neuronal degeneration and necrosis and neurophagia. In bovine, the major sites of lesions were brain stem, spinal cord and trigeminal ganglion. Inclusion bodies were observed in 83.33% of bovine and 100% of equine. In the immunohistochemistry, all the bovine and equine cases resulted in positive staining for rabies. On the third stage of the study, histopathology and immunohistochemistry of 30 samples of bovine diagnosed with rabies from the DXSNC program of SPV-UFRGS were characterized by meningoencephalitis and nonsupurative meningomyelitis with perivascular mononuclear infiltrate, especially with lymphocytes and also plasma cells and macrophages. Microgliosis, satellitosis and neuronophagia were also seen. Intracytoplasmic inclusion bodies were observed in 73.33% of the cases. Positive staining was obtained in 80% of the cases in the immunohistochemistry. In two equine cases examined from the SPV-UFRGS file material, there was non-suppurative meningoencephalitis with inclusion bodies and immunohistochemical positive staining.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-02T16:29:05Z No. of bitstreams: 1 2014_SileneManriqueRocha_Parcial.pdf: 581235 bytes, checksum: 06c91e2abfd9133d8817a8d59afad13c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-22T21:03:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_SileneManriqueRocha_Parcial.pdf: 581235 bytes, checksum: 06c91e2abfd9133d8817a8d59afad13c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-22T21:03:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_SileneManriqueRocha_Parcial.pdf: 581235 bytes, checksum: 06c91e2abfd9133d8817a8d59afad13c (MD5) / A raiva é uma das doenças transmissíveis mais importantes no mundo, devido ao elevado impacto em saúde pública e a maior taxa de mortalidade de todos agentes patógenos virais humanos. Estudos apontam a presença do Lyssavirus em reservatórios do ciclo silvestre evidenciando a participação de canídeos silvestres, saguis, morcegos hematófagos e não hematófagos entre os potenciais transmissores da doença para animais domésticos e humanos. Assim, a reintrodução da raiva no ambiente urbano a partir do ciclo silvestre é uma preocupação. Este estudo descreve o perfil de ocorrência de raiva no Brasil, de 2002 a 2012, com ênfase no ciclo de transmissão silvestre da doença. Foi realizado um estudo descritivo utilizando registros de tempo, pessoa e lugar dos casos confirmados em humanos e animais, como também de atendimentos antirrábicos registrados no banco de dados Sinan. No período, foram notificados 82 casos de raiva em humanos, transmitidos por animais silvestres, predominantemente nas regiões Norte e Nordeste em áreas rurais, com maior freqüência no sexo masculino. Observou-se que 72% dos casos humanos não receberam procedimentos de profilaxia pós-exposição (PEP). Dentre os mamíferos silvestres transmissores da doença, houve destaque para o morcego hematófago. Os 460 mamíferos silvestres terrestres confirmados com a doença foram notificados no Nordeste. No período houve registro de 1.703 morcegos infectados com vírus rábico e a região Sudeste se destacou pela frequência de registros de morcegos não hematófagos. Foi observado que as regiões Centro-Oeste e Norte apresentaram menor proporção de registros de raiva em mamíferos silvestres terrestres. O número elevado de casos de raiva em bovinos evidenciou, entretanto, a importância do morcego hematófago, como mantenedor do vírus rábico no ciclo rural. Os resultados apresentados são úteis para planejamento da vigilância da raiva no País. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Rabies is one of the most important communicable diseases in the world, due to high impact on public health and mortality approaches 100%. Studies indicate the presence of Lyssavirus in reservoirs showing the sylvatic cycle involving wild canids, marmosets, vampire bats and nonhematophagous as potential transmitters of disease to animals and humans. Thus, the reintroduction of rabies in the urban environment from the wildlife is a concern. This study describes the profile of the occurrence of rabies in Brazil, in the period 2002-2012, with emphasis on the wildlife transmission cycle of the disease. A descriptive study using the database Sinan data records with time approach, person and place of confirmed cases in humans and animals, as well antirrábico care was conducted. 84 cases of rabies in humans have been reported, predominantly in the North and Northeast regions, in rural areas, more frequently in males and 80 % of these did not receive prophylaxis. Among the wild species, the vampire bat is the largest transmitter of the disease to humans, the same was observed in antirrábicos care in the North. Is 460 terrestrial wild mammals confirmed with the disease were reported in northeast. 1703 bats, especially the vampire bats with no greater proportion of notifications in the Southeast were recorded. The North and Midwest regions showed no reported cases of rabies in wild mammals. The number of cattle was significant, showing that there was presence of vampire bat rabies virus that keeps rural disease cycle. Thus the results may be useful for surveillance of rabies in the country.

O presente trabalho foi dividido em três etapas: 1) otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva utilizando três diferentes anticorpos; 2) mapeamento histológico e imunoistoquímico de cortes seriados do sistema nervoso central (SNC) de bovinos e eqüinos e 3) Histologia e imunoistoquímica de bovinos com diagnóstico de raiva registrados no programa DXSNC do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) com lesões de encefalite não-supurativa e de casos de eqüinos com raiva do arquivo do Setor de Patologia da UFRGS entre 2002-2007. Para a otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva foram utilizadas 5 amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato. No mapeamento do SNC foram avaliadas 12 amostras de bovinos e 3 de eqüinos que morreram de raiva. Foi realizado histologia convencional e imunoistoquímica com utilização do anticorpo policlonal na diluição de 1:1000. Os principais achados histopatológicos em bovinos e eqüinos caracterizaram-se por meningoencefalite não-supurativa, microgliose focal, degeneração e necrose neuronal e neuronofagia. Em bovinos os principais locais de lesões foram no tronco encefálico, medula espinhal e gânglio trigêmeo. Corpúsculos de inclusão foram observados em 83,33% dos bovinos e em 100% dos eqüinos. Na imunoistoquímica todos os casos de bovinos e eqüinos obtiveram marcação positiva para raiva. Na terceira etapa do trabalho a histopatologia e imunoistoquímica de 30 amostras de bovinos com raiva do Programa DXSNC do SPV-UFRGS caracterizaram-se por meningoencefalite e meningomielite não supurativa com infiltrado mononuclear perivascular, principalmente de linfócitos e também de plasmócitos e macrófagos, além de, microgliose, satelitose e neuronofagia. Presença de corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos foi observado em 73,33% dos casos. Na imunoistoquímica obteve-se marcação em 80% dos casos. Em dois casos de eqüinos examinados do material de arquivo do SPV-UFRGS havia meningoencefalite não-supurativa e com presença de corpúsculos de inclusão e marcação imunoistoquímica nos dois casos. / The present study was divided in three stages: 1) optimization of the immunohistochemistry technique for rabies using three different antibodies; 2) histological and immunohistochemical mapping of serial sections of the central nervous system (CNS) of cattle and horses, and 3) histology and immunohistochemistry of bovine diagnosed with rabies registered on the DXSNC program of the Ministério da Agricultura e Abastecimento (MAPA) with lesions of non-suppurative encephalitis and of equines diagnosed with rabies registered on the files of Veterinary Pathology Section at UFRGS from 2002 to 2007. For the optimization of the rabies immunohistochemistry technique, 5 samples of CNS of bovine naturally infected with rabies virus were used. One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6,0). Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer. In the CNS mapping, 12 samples of bovine and 3 of equine that died of rabies were evaluated. Conventional histology and immunohistochemistry with polyclonal antibody in a 1:1000 dilution were performed. The main histopathological findings in cattle and horses were non-suppurativepurulent meningoencephalitis, focal microgliosis, neuronal degeneration and necrosis and neurophagia. In bovine, the major sites of lesions were brain stem, spinal cord and trigeminal ganglion. Inclusion bodies were observed in 83.33% of bovine and 100% of equine. In the immunohistochemistry, all the bovine and equine cases resulted in positive staining for rabies. On the third stage of the study, histopathology and immunohistochemistry of 30 samples of bovine diagnosed with rabies from the DXSNC program of SPV-UFRGS were characterized by meningoencephalitis and nonsupurative meningomyelitis with perivascular mononuclear infiltrate, especially with lymphocytes and also plasma cells and macrophages. Microgliosis, satellitosis and neuronophagia were also seen. Intracytoplasmic inclusion bodies were observed in 73.33% of the cases. Positive staining was obtained in 80% of the cases in the immunohistochemistry. In two equine cases examined from the SPV-UFRGS file material, there was non-suppurative meningoencephalitis with inclusion bodies and immunohistochemical positive staining.

O presente trabalho foi dividido em três etapas: 1) otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva utilizando três diferentes anticorpos; 2) mapeamento histológico e imunoistoquímico de cortes seriados do sistema nervoso central (SNC) de bovinos e eqüinos e 3) Histologia e imunoistoquímica de bovinos com diagnóstico de raiva registrados no programa DXSNC do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) com lesões de encefalite não-supurativa e de casos de eqüinos com raiva do arquivo do Setor de Patologia da UFRGS entre 2002-2007. Para a otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva foram utilizadas 5 amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato. No mapeamento do SNC foram avaliadas 12 amostras de bovinos e 3 de eqüinos que morreram de raiva. Foi realizado histologia convencional e imunoistoquímica com utilização do anticorpo policlonal na diluição de 1:1000. Os principais achados histopatológicos em bovinos e eqüinos caracterizaram-se por meningoencefalite não-supurativa, microgliose focal, degeneração e necrose neuronal e neuronofagia. Em bovinos os principais locais de lesões foram no tronco encefálico, medula espinhal e gânglio trigêmeo. Corpúsculos de inclusão foram observados em 83,33% dos bovinos e em 100% dos eqüinos. Na imunoistoquímica todos os casos de bovinos e eqüinos obtiveram marcação positiva para raiva. Na terceira etapa do trabalho a histopatologia e imunoistoquímica de 30 amostras de bovinos com raiva do Programa DXSNC do SPV-UFRGS caracterizaram-se por meningoencefalite e meningomielite não supurativa com infiltrado mononuclear perivascular, principalmente de linfócitos e também de plasmócitos e macrófagos, além de, microgliose, satelitose e neuronofagia. Presença de corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos foi observado em 73,33% dos casos. Na imunoistoquímica obteve-se marcação em 80% dos casos. Em dois casos de eqüinos examinados do material de arquivo do SPV-UFRGS havia meningoencefalite não-supurativa e com presença de corpúsculos de inclusão e marcação imunoistoquímica nos dois casos. / The present study was divided in three stages: 1) optimization of the immunohistochemistry technique for rabies using three different antibodies; 2) histological and immunohistochemical mapping of serial sections of the central nervous system (CNS) of cattle and horses, and 3) histology and immunohistochemistry of bovine diagnosed with rabies registered on the DXSNC program of the Ministério da Agricultura e Abastecimento (MAPA) with lesions of non-suppurative encephalitis and of equines diagnosed with rabies registered on the files of Veterinary Pathology Section at UFRGS from 2002 to 2007. For the optimization of the rabies immunohistochemistry technique, 5 samples of CNS of bovine naturally infected with rabies virus were used. One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6,0). Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer. In the CNS mapping, 12 samples of bovine and 3 of equine that died of rabies were evaluated. Conventional histology and immunohistochemistry with polyclonal antibody in a 1:1000 dilution were performed. The main histopathological findings in cattle and horses were non-suppurativepurulent meningoencephalitis, focal microgliosis, neuronal degeneration and necrosis and neurophagia. In bovine, the major sites of lesions were brain stem, spinal cord and trigeminal ganglion. Inclusion bodies were observed in 83.33% of bovine and 100% of equine. In the immunohistochemistry, all the bovine and equine cases resulted in positive staining for rabies. On the third stage of the study, histopathology and immunohistochemistry of 30 samples of bovine diagnosed with rabies from the DXSNC program of SPV-UFRGS were characterized by meningoencephalitis and nonsupurative meningomyelitis with perivascular mononuclear infiltrate, especially with lymphocytes and also plasma cells and macrophages. Microgliosis, satellitosis and neuronophagia were also seen. Intracytoplasmic inclusion bodies were observed in 73.33% of the cases. Positive staining was obtained in 80% of the cases in the immunohistochemistry. In two equine cases examined from the SPV-UFRGS file material, there was non-suppurative meningoencephalitis with inclusion bodies and immunohistochemical positive staining.

A raiva bovina continua sendo uma importante zoonose. A ocorrência de casos confirmados da doença no meio rural é um problema atual de saúde pública, sendo mais relevante quando se consideram os casos de raiva huma na que ocorreram nos últimos anos no país. Este projeto teve por objetivo estudar a situação da raiva bovina no município de Guaxupé - MG, consideran do: a presença do morcego hematófago no município; o nível de conhecimento dos produtores/empregados rurais sobre a raiva; a vacinação contra a raiva bovina; a notificação de casos da doença junto ao Instituto Mineiro Agro pecuário (IMA); os casos confirmados de raiva animal. Quanto à metodologia, fo ram realizados: um levantamento de dados secundários junto ao IMA e junto à Vigilância Epidemiológica da Gerência Regional de Alfenas - MG, da qual faz parte o município de Guaxupé; a apli cação de um questionário sobre a raiva bovina junto a uma amostra de produtores/empregados rurais do município. Foi feita uma estratificação da amostra em dois grupos, sendo o questionário aplicado em 35 pequenas e médias propriedades e em cinco grandes propriedades. De acordo com os dados do IMA, durante o período de 1999 a 2003, foram realizados 34 exames laboratoriais para diagnóstico da raiva, entre eles, 10 foram conside rados positivos, sendo oito da espécie bovina e dois da espécie eqüina. Com relação ao conhecimento de produto res/empregados rurais sobre a raiva, constatou-se que 74,3% consideram o veterinário como uma importante fonte de informação; 85% procuram o veterinário se houver um animal doente; 97,5% conhecem a importância da vacinação; 72,5% indicaram a salivação aumentada do animal como sintoma característico da doença; 58,3% indicaram o carbúnculo como doença que se confunde com a raiva; 90,0% afirmaram ser o morcego hematófago o transmissor da doença; 57,1% afirma ram aplicar algum tipo de produto em mordeduras por morcegos; 92,5% afirmaram ter conhecimento da presen ça do morcego em sua propriedade; 17,5% afirmaram ter tido caso confirmado de raiva na propriedade; 53% apontaram galpões de secador de café como abrigo para os morcegos; 90% afirmaram vacinar o rebanho durante as campanhas de vacinação. Com relação aos dados da Vigilância Epidemiológica, entre os anos de 2000 e 2006, ocorreram 587 casos de agressão por animais no município de Guaxupé. Desses casos, 24,3% ocorreram com crianças de até nove anos de idade; 91,5% ocorreram na zona urbana; 82,9% dos ferimentos foram por mordedura; 49,0% foram nas mãos; em 78,2% dos casos a espécie agressora era a canina; ocorreu apenas um caso de raiva canina com diagnós tico laboratorial e quatro casos de raiva animal com diagnóstico clínico. Esses estudos permitiram concluir que ainda é atual a necessidade de manter todas as ações que visam o controle da raiva, especialmente a vacinação; é importante a realização de um trabalho de consci entização com relação aos casos de agressão por animais, especialmente os cães. / Bovine rabies continues to be an important zoonosis. The occurrence of confirmed cases of the disease in the rural environment is a current public health problem, which is even more relevant when the cases of human rabies that occurred in the last few years are considered. The objective of the present project was to study the situation of bovine rabies in the municipality of Guaxupé - MG, on the basis of the presence of blood-sucking bats in the municipality, the level of knowledge of rural producers/employe es about rabies, the vaccination against bovine rabies, the notification of cases of the disease to the \"Instituto Mineiro Agropecuário\" (IMA), and the confirmed cases of animal rabies. The methodology consisted of a survey of secondary data at IMA and at the Epidemiological Surveillance of the Regional Management of Alfenas - MG, to which the municipality of Guaxupé belongs, and the application of a questionnaire about bovine rabies to a sample of rural producers/employees of the municipality. The sample was stratified into two groups, with the questionnaire being applied to 35 small and medium-sized properties and to 05 large properties. According to IMA data, 34 laboratory exams for the diagnosis of rabies were performed during the period from 1999 to 2003. Of these, 10 were considered to be positive, 08 of them involving cattle and 02 involving horses. Regarding the knowledge of rural producers/employe es about rabies, 74.3% were found to consider the veterinary to be an impor tant source of information; 85% called a veterinary when an animal was sick, 97.5% were aware of the importance of vaccination, 72.5% indicated that incre ased animal salivation is a characteristic symptom of the disease, 58.3% indica ted that carbuncle is a disease often confused with rabies, 90.0% stated that blood-sucking bats are the transmitters of the disease, 57.1% stated that they applied some type of product to bat bites, 92.5% stated that they were aware of the presence of bats on their property, 17.5% stated that they had a confirmed case of rabies on their property, 53% pointed out that coffee-drying barns are a shelter for bats, and 90% stated that they vaccinated the herd during vaccination campaigns. Regarding the data of Epidemiological Surveillance, 587 cases of aggression by animals occurred between 2000 and 2006 in the municipality of Guaxupé. Of these, 24.3% involved children up to 09 years of age, 91.5% occurred in the urban zone, 82.9% of the wounds were bites, 49.0% were in the hands, in 78.2% of cases the aggressing species was the canine one, and there was only one case of canine rabies with a laboratory diagnosis, plus 04 cases of animal rabies with a clinical diagnosis. These studies led to the conclusion that there still is the need to maintain all actions aiming at the control of rabies, especially vaccination, and that it is important to conduct awareness-raising work regarding cases of aggression by animals, especially dogs.

A raiva bovina continua sendo uma importante zoonose. A ocorrência de casos confirmados da doença no meio rural é um problema atual de saúde pública, sendo mais relevante quando se consideram os casos de raiva huma na que ocorreram nos últimos anos no país. Este projeto teve por objetivo estudar a situação da raiva bovina no município de Guaxupé - MG, consideran do: a presença do morcego hematófago no município; o nível de conhecimento dos produtores/empregados rurais sobre a raiva; a vacinação contra a raiva bovina; a notificação de casos da doença junto ao Instituto Mineiro Agro pecuário (IMA); os casos confirmados de raiva animal. Quanto à metodologia, fo ram realizados: um levantamento de dados secundários junto ao IMA e junto à Vigilância Epidemiológica da Gerência Regional de Alfenas - MG, da qual faz parte o município de Guaxupé; a apli cação de um questionário sobre a raiva bovina junto a uma amostra de produtores/empregados rurais do município. Foi feita uma estratificação da amostra em dois grupos, sendo o questionário aplicado em 35 pequenas e médias propriedades e em cinco grandes propriedades. De acordo com os dados do IMA, durante o período de 1999 a 2003, foram realizados 34 exames laboratoriais para diagnóstico da raiva, entre eles, 10 foram conside rados positivos, sendo oito da espécie bovina e dois da espécie eqüina. Com relação ao conhecimento de produto res/empregados rurais sobre a raiva, constatou-se que 74,3% consideram o veterinário como uma importante fonte de informação; 85% procuram o veterinário se houver um animal doente; 97,5% conhecem a importância da vacinação; 72,5% indicaram a salivação aumentada do animal como sintoma característico da doença; 58,3% indicaram o carbúnculo como doença que se confunde com a raiva; 90,0% afirmaram ser o morcego hematófago o transmissor da doença; 57,1% afirma ram aplicar algum tipo de produto em mordeduras por morcegos; 92,5% afirmaram ter conhecimento da presen ça do morcego em sua propriedade; 17,5% afirmaram ter tido caso confirmado de raiva na propriedade; 53% apontaram galpões de secador de café como abrigo para os morcegos; 90% afirmaram vacinar o rebanho durante as campanhas de vacinação. Com relação aos dados da Vigilância Epidemiológica, entre os anos de 2000 e 2006, ocorreram 587 casos de agressão por animais no município de Guaxupé. Desses casos, 24,3% ocorreram com crianças de até nove anos de idade; 91,5% ocorreram na zona urbana; 82,9% dos ferimentos foram por mordedura; 49,0% foram nas mãos; em 78,2% dos casos a espécie agressora era a canina; ocorreu apenas um caso de raiva canina com diagnós tico laboratorial e quatro casos de raiva animal com diagnóstico clínico. Esses estudos permitiram concluir que ainda é atual a necessidade de manter todas as ações que visam o controle da raiva, especialmente a vacinação; é importante a realização de um trabalho de consci entização com relação aos casos de agressão por animais, especialmente os cães. / Bovine rabies continues to be an important zoonosis. The occurrence of confirmed cases of the disease in the rural environment is a current public health problem, which is even more relevant when the cases of human rabies that occurred in the last few years are considered. The objective of the present project was to study the situation of bovine rabies in the municipality of Guaxupé - MG, on the basis of the presence of blood-sucking bats in the municipality, the level of knowledge of rural producers/employe es about rabies, the vaccination against bovine rabies, the notification of cases of the disease to the \"Instituto Mineiro Agropecuário\" (IMA), and the confirmed cases of animal rabies. The methodology consisted of a survey of secondary data at IMA and at the Epidemiological Surveillance of the Regional Management of Alfenas - MG, to which the municipality of Guaxupé belongs, and the application of a questionnaire about bovine rabies to a sample of rural producers/employees of the municipality. The sample was stratified into two groups, with the questionnaire being applied to 35 small and medium-sized properties and to 05 large properties. According to IMA data, 34 laboratory exams for the diagnosis of rabies were performed during the period from 1999 to 2003. Of these, 10 were considered to be positive, 08 of them involving cattle and 02 involving horses. Regarding the knowledge of rural producers/employe es about rabies, 74.3% were found to consider the veterinary to be an impor tant source of information; 85% called a veterinary when an animal was sick, 97.5% were aware of the importance of vaccination, 72.5% indicated that incre ased animal salivation is a characteristic symptom of the disease, 58.3% indica ted that carbuncle is a disease often confused with rabies, 90.0% stated that blood-sucking bats are the transmitters of the disease, 57.1% stated that they applied some type of product to bat bites, 92.5% stated that they were aware of the presence of bats on their property, 17.5% stated that they had a confirmed case of rabies on their property, 53% pointed out that coffee-drying barns are a shelter for bats, and 90% stated that they vaccinated the herd during vaccination campaigns. Regarding the data of Epidemiological Surveillance, 587 cases of aggression by animals occurred between 2000 and 2006 in the municipality of Guaxupé. Of these, 24.3% involved children up to 09 years of age, 91.5% occurred in the urban zone, 82.9% of the wounds were bites, 49.0% were in the hands, in 78.2% of cases the aggressing species was the canine one, and there was only one case of canine rabies with a laboratory diagnosis, plus 04 cases of animal rabies with a clinical diagnosis. These studies led to the conclusion that there still is the need to maintain all actions aiming at the control of rabies, especially vaccination, and that it is important to conduct awareness-raising work regarding cases of aggression by animals, especially dogs.

Espécimens de saliva, oculares, de glândulas salivares e de encéfalo obtidos de 30 cães infectados naturalmente, foram examinados através das técnicas de IFD e de IIC e posteriormente comparados, com o objetivo de apreciar a sensibilidade de alternativas propostas para o diagnóstico da raiva. Os resultados evidenciam a ocorrência de discrepâncias entre as técnicas de IFD e de IIC apenas quando aplicadas aos espécimens de saliva, oculares e de glândulas salivares parôtidas, em 5 (16,66%), 9 (30%) e 11 (36,66%) casos respectivamente, mas sem revelar significância estatística. As glândulas salivares submaxilares e o encéfalo foram os espécimens mais apropriados para o diagnóstico da raiva, tanto à IFD, como à IIC, tendo ambos apresentado uma taxa de 100% de positividade, significativamente maior do que a observada com o exame da córnea, do humor aquoso e das glândulas salivares parótidas. A associação das duas técnicas para o diagnóstico da raiva, tornou o procedimento tão sensível quanto a combinação pareada dos diferentes espécimens, embora a eficiência de 100%, não tenha sido observada em todas as oportunidades, quando se considerou uma ou outra alternativa. O tratamento da saliva pelas técnicas de IFD e de IIC associadas, foi comparável à combinação da saliva com a córnea por IFD, para demonstrar a infecção rábica em cães. Ambas as alternativas revelaram uma positividade de 100%, idêntica à observada com cada um dos espécimens de glândulas salivares submaxilares e de encéfalo, quando tratados por uma ou outra técnica isoladamente. / glands specimens in 5 (16,66%), 9 (30%) and 11 (36,66%) cases respectivelly, without showing any evidence of statistical significance. The specimens from submaxillary salivary glands and encephalon were most suitable for the rabies diagnosis in either the direct immunofluorescence or in mouse intracerebral inoculation techniquess both of them showing a rate of 100% positiveness significantly greather than that observed in cornea, aqueous humor and parotid salivary glands examinations. The association of the two techniques for the rabies diagnosis aade the procedure as appreciable as the conjugation of different specimens taken two by two, although a 100% efficiency has not been observed in all cases, regarding to the procedures considered. The direct immunofluorescence and mouse intracerebral inoculation associated procedure for the saliva examination was comparable to combined of saliva and cornea by direct immunofluorescence in order to demonstrate a rabid infection in dogs. Both of the alternative procedures revealed a 100% positiveness identical to that observed for the submaxillary salivary glands and encephalon specimens, when submitted independently to either one or other technique.

Espécimens de saliva, oculares, de glândulas salivares e de encéfalo obtidos de 30 cães infectados naturalmente, foram examinados através das técnicas de IFD e de IIC e posteriormente comparados, com o objetivo de apreciar a sensibilidade de alternativas propostas para o diagnóstico da raiva. Os resultados evidenciam a ocorrência de discrepâncias entre as técnicas de IFD e de IIC apenas quando aplicadas aos espécimens de saliva, oculares e de glândulas salivares parôtidas, em 5 (16,66%), 9 (30%) e 11 (36,66%) casos respectivamente, mas sem revelar significância estatística. As glândulas salivares submaxilares e o encéfalo foram os espécimens mais apropriados para o diagnóstico da raiva, tanto à IFD, como à IIC, tendo ambos apresentado uma taxa de 100% de positividade, significativamente maior do que a observada com o exame da córnea, do humor aquoso e das glândulas salivares parótidas. A associação das duas técnicas para o diagnóstico da raiva, tornou o procedimento tão sensível quanto a combinação pareada dos diferentes espécimens, embora a eficiência de 100%, não tenha sido observada em todas as oportunidades, quando se considerou uma ou outra alternativa. O tratamento da saliva pelas técnicas de IFD e de IIC associadas, foi comparável à combinação da saliva com a córnea por IFD, para demonstrar a infecção rábica em cães. Ambas as alternativas revelaram uma positividade de 100%, idêntica à observada com cada um dos espécimens de glândulas salivares submaxilares e de encéfalo, quando tratados por uma ou outra técnica isoladamente. / glands specimens in 5 (16,66%), 9 (30%) and 11 (36,66%) cases respectivelly, without showing any evidence of statistical significance. The specimens from submaxillary salivary glands and encephalon were most suitable for the rabies diagnosis in either the direct immunofluorescence or in mouse intracerebral inoculation techniquess both of them showing a rate of 100% positiveness significantly greather than that observed in cornea, aqueous humor and parotid salivary glands examinations. The association of the two techniques for the rabies diagnosis aade the procedure as appreciable as the conjugation of different specimens taken two by two, although a 100% efficiency has not been observed in all cases, regarding to the procedures considered. The direct immunofluorescence and mouse intracerebral inoculation associated procedure for the saliva examination was comparable to combined of saliva and cornea by direct immunofluorescence in order to demonstrate a rabid infection in dogs. Both of the alternative procedures revealed a 100% positiveness identical to that observed for the submaxillary salivary glands and encephalon specimens, when submitted independently to either one or other technique.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T10:20:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 278471.pdf: 10142418 bytes, checksum: 81a2829aec816d6569139279ccf7dd18 (MD5) / Os primeiros anticorpos monoclonais (AcM) contra o vírus rábico foram produzidos por Wiktor e Koprowski em 1978 e, desde então, diversos outros foram produzidos e descritos. No entanto, apesar do grande número de AcM antirrábicos descritos na literatura, eles nem sempre são facilmente obtidos, principalmente porque a produção de AcM no Brasil é bastante limitada. Ademais, devido à grande diversidade de variantes de vírus rábico existentes no Brasil, torna-se importante produzir novos AcM que possam atender a interesses mais específicos. Assim, o objetivo do presente trabalho foi a produção e caracterização de AcM contra o vírus rábico. Para tanto, foram realizados cinco protocolos de imunização, nos quais camundongos Balb/c foram imunizados com os seguintes antígenos: (1) vacina antirrábica (VeroRab®, Aventis-Pasteur) para uso em humanos; (2) suspensão inativada de tecido de sistema nervoso central de camundongos infectados com vírus rábico selvagem isolado de um bovino naturalmente infectado por morcego hematófago em Passos de Torres/SC; (3) fragmento recombinante da glicoproteína do vírus rábico cepa ERA compreendendo os aminoácidos 179 a 281 (denominado rGERA179-281) seguido da inoculação de vírus rábico cepa PV na pata; (4) rGERA179-281 seguida por um reforço com a mesma proteína ou com vírus rábico cepa PV; (5) rGERA179-281 e vacina VeroRab®. Esplenócitos dos camundongos imunizados foram fusionados com células de mieloma da linhagem P3X63Ag8.653 utilizando polietilenoglicol 4000 e os hibridomas secretores de anticorpos antirrábicos foram triados por imunofluorescência indireta em células BHK-21 infectadas com vírus rábico. Diluições limitantes foram realizadas e sete clones estáveis foram obtidos, sendo denominados LIA 02 (fusão 1), 6H8 e 7B7 (fusão 2) e 3E6, 8D11, 9C7 e 8B6 (fusão 3). Nos dois últimos protocolos, não foram obtidos hibridomas secretores de anticorpos antirrábicos estáveis. Dentre os AcM, três foram caracterizados como IgG2a (6H8, 8D11 e 8B6), dois como IgM (7B7 e 9C7), um como IgG2b (LIA 02) e um como IgG3 (3E6), todos com cadeia leve kappa. Por ensaio de neutralização, foi verificado que o AcM 8D11 foi capaz de neutralizar o vírus rábico cepa PV in vitro. Além disso, o 7B7 reconheceu a rGERA179-281 e apenas o 8D11 não reconheceu o vírus presente na vacina VeroRab®, conforme demonstrado por ELISA. Os AcM também foram testados contra vírus rábico selvagem isolado de diferentes animais (bovinos, equinos, morcegos, cães e canídeos silvestres) e de humano (uma amostra) oriundas de diferentes regiões do Brasil. O AcM 6H8 reconheceu todas as amostras testadas. Os AcM LIA 02, 3E6 e 9C7 juntos também reconheceram todas elas. Assim, a partir dos resultados obtidos neste trabalho, novos estudos utilizando esses AcM como ferramentas biotecnológicas poderão ser desenvolvidos.