NTRODUÇÃO: O melanoma é um câncer de alta mortalidade tanto na medicina quanto na veterinária, devido à baixa resposta às terapias utilizadas e à capacidade de evolução metastática da doença. Avanços no campo da oncologia têm mostrado que os agentes que têm como alvo componentes do sistema imunológico, bem como as terapias molecularmente dirigidas, são muito promissores no tratamento do melanoma. Nosso grupo tem desenvolvido vetores virais para a transferência gênica de fatores antitumorais. O aprimoramento no vetor adenoviral inclui a inserção do tripeptídeo RGD, que permite um amplo tropismo de transdução, e o uso de um promotor responsivo a p53 para controlar expressão do gene terapêutico. Visto que o melanoma canino pode ser um modelo experimental por se tratar de um câncer de ocorrência espontânea e de comportamento biológico semelhante ao melanoma humano, procuramos testar nossa abordagem, que chamamos AdRGD-PG, neste modelo. MÉTODOS: Para isso foram estabelecidas linhagens celulares de melanoma canino para a determinação da capacidade de transdução pelos vetores adenovirais. Em seguida foi realizado o sequenciamento dos exons 4 - 8 do gene TP53 e a avaliação da expressão de genes da via de TP53 induzidos por doxorrubicina e Nutlin-3. RESULTADOS: As quatro linhagens de melanoma canino estabelecidas possuem capacidade tumorigênica e de serem transduzidas pelos vetores adenovirais. Não foram identificadas alterações na sequência do TP53 na região avaliada e a doxorrubicina promoveu aumento da expressão dos transgenes dirigidos pelo promotor PG e a ativação de genes da via de TP53. CONCLUSÕES: A funcionalidade desta plataforma adenoviral aprimorada abre oportunidades para estudos da transferência gênica, incluindo da combinação p19ARF/IFN-beta, nas linhagens estabelecidas. Com o sucesso destas análises, teremos um importante modelo experimental a ser utilizado no desenvolvimento de novas terapias para o melanoma / INTRODUCTION: Melanoma is a cancer of high mortality both in human and veterinary medicine due to the poor response to therapies and the metastatic evolution of the disease. Advances in the field of oncology have shown that agents that target immune system components, as well as molecularly targeted therapies, are very promising for the treatment of melanoma. Our group has developed viral vectors for gene transfer of antitumor factors. The improvement in the adenoviral vector includes the insertion of the RGD tripeptide, which allows a broad transduction tropism, and the use of a p53 responsive promoter to control therapeutic gene expression. Canine melanoma may be considered as an experimental model since it is a spontaneous cancer with biological behavior similar to human melanoma, thus we aim to test our approach, which we call AdRGD-PG, in this model. METHODS: For this purpose, canine melanoma cell lines were established before determining the transduction capacity of adenoviral vectors. Next, sequencing of exons 4-8 of the TP53 gene and evaluation of the expression of genes in the TP53 pathway upon induction with doxorubicin and Nutlin-3 were performed. RESULTS: The four established canine melanoma lines have tumorigenic capacity and are transduced by the adenoviral vectors. No changes were identified in the TP53 sequence in the assessed region and doxorubicin promoted increased expression of the transgenes directed by the PG promoter as well as activation of the TP53 pathway genes. CONCLUSIONS: The functionality of this improved adenoviral platform opens up opportunities for gene transfer studies, including the p19ARF / IFN-beta combination, in the established cell lines. With the success of these analyses, we have an important experimental model to be used in the development of new therapies for melanoma

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndreaDM_DISSERT.pdf: 1136289 bytes, checksum: 4971fd9b2aab3f08935061c736892689 (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / Toxoplasmosis is one zoonosis caused by Toxoplasma gondii protozoan. Goats, amongst the production animals, are one of the species most susceptible to this parasite, being one them main involved agents in ovine and goat abortions, determining great economic losses and implications for public health, since the presence it parasite in the products of goat origin, consist in one of the main sources of infection for the man. In this study 244 blood samples in 8 farms situated in 4 cities from the Sert?o do Cabugi region, Rio Grande do Norte State, northeast of Brazil and, tested by ELISA assay. The results had shown a prevalence of 47.13% for anti- T. gondii antibodies and a significant association between positivity and variable evaluated as age, locality and property. The IgG avidity assay evaluated in 115 positive samples was carried to discriminate acute and chronic infection. Twelve samples (10.4%) had presented antibodies of low avidity while 103 (89.6%) presented high avidity antibodies; indicating that most of the animals was precocious exposure to the parasite. Significant difference was verified only for the variable sex. We also evaluate the capacity of recombinant adenoviruses codifying SAG1, SAG2, SAG3 and CMV in inducing activation of specific immune response in goat. These 109 animals received 109 pfu of the AdSAG1, AdSAG2, AdSAG3, AdCMV or PBS in vaccine protocol with 3 immunizations. Serum samples of the each animal, before and after mmunization, had been submitted to the ELISA. The results demonstrate that the immunizations had induced the production of IgG antibodies specific against T. gondii proteins / A toxoplasmose ? uma zoonose causada pelo protozo?rio Toxoplasma gondii. Os caprinos, dentre os animais de produ??o, s?o uma das esp?cies mais suscet?veis a este parasito, sendo um dos principais agentes envolvidos no abortamento de ovinos e caprinos, determinando grandes perdas econ?micas e tendo implica??es para sa?de p?blica, j? que a presen?a do parasita nos produtos de origem caprina, constituem-se em uma das principais fontes de infec??o para o homem. Neste estudo foram coletadas 244 amostras de sangue em 8 fazendas situadas em 4 munic?pios da regi?o do Sert?o do Cabugi, Estado do Rio Grande do Norte, regi?o Nordeste do Brasil e testadas atrav?s do Ensaio Imunoenzim?tico (ELISA). Os resultados obtidos mostraram uma preval?ncia de 47,13% para anticorpos anti-T. gondii e uma associa??o significativa entre positividade e as vari?veis avaliadas tais como idade, localidade e propriedade. Foi realizado o ensaio IgG de avidez em 115 amostras positivas com o intuito de discriminar infec??o aguda e cr?nica. Doze amostras (10,4%) apresentaram anticorpos de baixa avidez enquanto 103 (89,6%) anticorpos de alta avidez; indicando que a maior parte dos animais foi exposto ao parasita precocemente. Foi verificada diferen?a estat?stica significativa apenas para a vari?vel sexo. Avaliamos tamb?m a capacidade de adenov?rus recombinantes codificando SAG1, SAG2, SAG3 e CMV em induzir ativa??o de resposta imune em caprinos. Estes animais receberam 109 pfu de AdSAG1, AdSAG2, AdSAG3, AdCMV ou PBS em protocolo vacinal com 3 imuniza??es. Amostras de soro obtidas dos animais, antes e ap?s cada imuniza??o, foram submetidas ao ELISA. Os resultados demonstram que as imuniza??es induziram a produ??o anticorpos IgG espec?ficos contra as prote?nas de T. gondii