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Identificação molecular do locus restaurador da macho-fertilidade (Ms), tipo de citoplasma e viabilidade de pólen em acessos de cebola (Allium cepa L.)

FERREIRA, Roberta Rocha 27 July 2017 (has links)
Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-12-18T13:25:28Z No. of bitstreams: 1 Roberta Rocha Ferreira.pdf: 3077956 bytes, checksum: 0c56b291570f1a18e2eadbd875ae0b1f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-18T13:25:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roberta Rocha Ferreira.pdf: 3077956 bytes, checksum: 0c56b291570f1a18e2eadbd875ae0b1f (MD5) Previous issue date: 2017-07-27 / In this study was accomplished the identification of cytoplasmic types and genotyping of Ms locus in 59 onion genotypes of the Embrapa germplasm collection, as well as association of molecular observations with pollen viability tests, aiming to reduce time for identification of male-sterile lines („A‟) and their maintainers („B‟), for the development of hybrids adapted to the edafoclimatic conditions of the São Francisco Valley. 5‟cob/orfA501 and orf725 markers were used for cytoplasmic identification, whereas AcSKP1 and AcPMS1 for genotyping of Ms. The pollen viability was estimated with acetocarmine 2%, Alexander‟s staining and in vitro germination. In the molecular identification two types of male-sterile cytoplasmic („S‟ and „T‟), as well as fertile cytoplasmic („N‟) and Ms and ms alleles, both in homozygosity and heterozygosity, were identified in the evaluated genotypes. The frequencies with 5‟cob/orfA501 and orf725 and AcSKP1 and AcPMS1 markers were approximate the evaluated accessions. For Brazilian germplasm, the cytoplasmic frequencies of „N‟, „S‟ and „T‟ were approximately 0,47, 0,28 e 0,25, respectively, while the allelic frequencies were 0,52 and 0,48 for Ms and ms, respectively. The accessions Régia, EHCEB 20146, EHCEB 201427, Alvorada, Serrana, Crioula Mercosul, EHCEB 20142, BRS 367, Rainha, Juporanga and Alfa SF C-XI exhibit potential for identification of „A‟ and „B‟ lines because show mixtures of type of cytoplasmic and different Ms allelic frequencies. The accessions EHCEB 20142040/EHCEB 20141040, EHCEB 20142028/EHCEB 20141028, EHCEB 20112006/EHCEB 20111006, EHCEB 20142027/EHCEB 20141027, EHCEB 20102019/EHCEB 20101019 and Alfa SF „B‟/Alfa SF „A‟ presented all evaluated plants in the Nmsms and Smsms or Tmsms conditions. Molecular selection and pollen viability tests showed complete agreement for Alfa SF (Nmsms), BRS 367 (Tmsms), BRS 367 (Nmsms), Cascuda T7 (Nmsms), Cascuda T5 (Smsms), EHCEB 20102017 and EHCEB 20142027. For Alfa SF (Tmsms), EHCEB 20142028 (Nmsms), EHCEB 20141028 (Smsms), EHCEB 20141027 (Tmsms) and EHCEB 20141017 (Tmsms) there was no validation of molecular selection by pollen viability tests for some plants. The pollen viability evaluation methods did not present sterile and fertile classification agreement for the accessions EHCEB 20142028, EHCEB 20141028, EHCEB 20141027 and EHCEB 20141017. Six pairs of „A‟ and „B‟ lines identified in the present study, Alfa SF (Tmsms ) x Alfa SF (Nmsms), BRS 367 (Tmsms) x BRS 367 (Nmsms), Cascuda T7 (Nmsms) x Cascuda T5 (Smsms), EHCEB 20142027 (Nmsms) x EHCEB 20141027 (Tmsms), EHCEB 20102017 (Nmsms) x EHCEB 20141017 (Tmsms) and EHCEB 20142028 (Nmsms) x EHCEB 20141028 (Smsms) demonstrated potential for the development of hybrids. / No presente trabalho foi realizado a identificação dos tipos citoplasmáticos e a genotipagem do locus Ms presentes em 59 genótipos de cebola do banco de germoplasma da Embrapa, bem como associação das observações moleculares de genótipos com testes de viabilidade polínica, visando diminuir o tempo na identificação de linhas macho-estéreis („A‟) e de suas mantenedoras („B‟), para o desenvolvimento de híbridos adaptados às condições edafoclimáticas do Vale do São Francisco. Os marcadores 5‟cob/orfA501 e orf725 foram usados para identificação de citoplasma, enquanto os marcadores AcSKP1 e AcPMS1 para genotipagem do locus Ms. A viabilidade polínica foi estimada com carmim acético 2%, solução de Alexander e germinação in vitro. Na identificação molecular os dois tipos de citoplasma macho-estéreis („S‟ e „T‟), bem como o citoplasma fértil („N‟), assim como os alelos Ms e ms, tanto em homozigose como em heterozigose foram, detectados nos 59 genótipos avaliados. As frequências com os marcadores 5‟cob/orfA501 e orf725, bem como com os marcadores AcSKP1 e AcPMS1, foram aproximadas nos acessos de cebola avaliados. No germoplasma brasileiro, as frequências dos citoplasmas „N‟, „S‟ e „T‟ foram de 0,47, 0,28 e 0,25, respectivamente, enquanto as frequências alélicas foram de 0,52 e 0,48 para Ms e ms, respectivamente. Os acessos Régia, EHCEB 20146, EHCEB 201427, Alvorada, Serrana, Crioula Mercosul, EHCEB 20142, BRS 367, Rainha, Juporanga e Alfa SF C-XI tem potencial para identificação de linhas „A‟ e „B‟, pois apresentaram misturas para tipo de citoplasma e diferentes frequências alélicas para Ms. Os acessos EHCEB 20142040/EHCEB 20141040, EHCEB 20142028/EHCEB20141028 e EHCEB 20112006/EHCEB20111006, EHCEB 20142027/EHCEB 20141027, EHCEB 20102019/EHCEB 20101019 e Alfa SF „B‟/Alfa SF „A‟ apresentaram todas as plantas avaliadas na condição Nmsms e Smsms ou Tmsms. A seleção molecular e testes de viabilidade polínica apresentaram completa concordância para as linhagens Alfa SF (Nmsms), BRS 367 (Tmsms), BRS 367 (Nmsms), Cascuda T7 (Nmsms), Cascuda T5 (Smsms), EHCEB 20102017 e EHCEB 20142027. Para Alfa SF (Tmsms), EHCEB 20142028 (Nmsms), EHCEB 20141028 (Smsms), EHCEB 20141027 (Tmsms) e EHCEB 20141017 (Tmsms) não houve validação da seleção molecular pelos de testes de viabilidade polínica para algumas plantas. Os métodos de avaliação da viabilidade polínica não apresentaram concordância de classificação estéril e fértil para os acessos EHCEB 20142028, EHCEB 20141028, EHCEB 20141027 e EHCEB 20141017. Seis pares de linhas „A‟ e „B‟ identificados no presente estudo, Alfa SF (Tmsms) x Alfa SF (Nmsms), BRS 367 (Tmsms) x BRS 367 (Nmsms), Cascuda T7 (Nmsms) x Cascuda T5 (Smsms), EHCEB 20142027 (Nmsms) x EHCEB 20141027 (Tmsms), EHCEB 20102017 (Nmsms) x EHCEB 20141017 (Tmsms) e EHCEB 20142028 (Nmsms) x EHCEB 20141028 (Smsms), apresentam potencial para o desenvolvimento de híbridos.
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Caracterização citogenética de cultivares de feijão (phaseolus vulgaris l.) / Cytogenetic characterization of common beans (phaseolus vulgaris l.)

Nora, Gracieli Dalla 17 February 2012 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The meiotic behavior and estimation of pollen viability were studied in seven cultivars of common bean (Phaseolus vulgaris L.), which were IAPAR 44, Guapo Brilhante, BRS Expedito, BRS Valente, Guateian 6662, Pérola e Iraí. Floral buds were collected from cultivars, fixed and stored under refrigeration for the preparation of slides by squashing technique anthers and coloring with acetic orceína 2% and reactive Alexander. It was tried to obtain the greatest possible number of cells of each stage of meiosis. The estimation of pollen viability was observed by counting 800 pollen grains per plant. To verify changes in size, were measured 100 grains of pollen of each cultivar considered mature. There were no cells with abnormalities during the analysis of meiotic behavior in all cultivars. The meiotic index were high and uniform over 90%, indicating that these cultivars have the meiotic process stable and use in plant breeding not present problems. The pollen grains showed no significant differences as to its size, being similar among cultivars. Data on meiotic behavior and pollen viability obtained in this work combined with the literature, emphasize that the bean has a meiotic process uniform, showing high potential fertility of male gametes, which facilitates the use of this species in breeding programs. / O comportamento meiótico e estimativa da viabilidade do pólen foram estudados em sete cultivares de feijão (Phaseolus vulgaris L.), sendo elas, IAPAR 44, Guapo Brilhante, BRS Expedito, BRS Valente, Guateian 6662, Pérola e Iraí. Botões florais foram coletados das cultivares, fixados e armazenados sob refrigeração para o preparo de lâminas pela técnica de esmagamento das anteras e coloração com orceína acética 2% e reativo de Alexander. Procurou-se obter o maior número de células possíveis de cada uma das fases da meiose. A estimativa da viabilidade polínica foi observada contando-se 800 grãos de pólen por planta. Para verificar alterações de tamanho, foram medidos 100 grãos de polens considerados maduros de cada cultivar. Não ocorreram células com anormalidades durante a análise do comportamento meiótico em todas as cultivares. Os índices meióticos encontrados foram elevados e uniformes, acima de 90%, indicando que estas cultivares possuem o processo meiótico estável e o uso em cruzamentos não apresentará problemas. Os grãos de polens não apresentaram diferenças significativas quanto ao seu tamanho, mostrando-se semelhante entre as cultivares. Os dados sobre comportamento meiótico e viabilidade polínica obtidos neste trabalho aliados aos da literatura, reforçam que o feijão possui um processo meiótico uniforme, demonstrando alto potencial de fertilidade dos gametas masculinos, o que facilita o uso dessa espécie em programas de melhoramento.
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Fatores ambientais na produção de sementes de híbridos interespecíficos de brachiaria / Environment factors in seed production of interspecific hybrids of brachiaria

França, Leomara Vieira de 26 April 2011 (has links)
Made available in DSpace on 2014-08-20T13:44:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_leomara_vieira_franca.pdf: 1162787 bytes, checksum: 8a5d01449a80429de1597fab8c180921 (MD5) Previous issue date: 2011-04-26 / In recent years, for most agricultural species, has increased the use of hybrids by to its high yield and other qualities that put them in front of varieties. In the genus Brachiaria hybridization has been accomplished through the use of crossing B. ruziziensis, that is sexual, and other species of the genus mainly apomictic B. brizantha and B. decumbens. However, hybrids of Brachiaria obtained until now are interspecific and have low seed production, factor limiting the spread of the same, because the convenience and lower cost of implementation / renewal of pastures using seeds instead of seedlings. In the search for the reason that low seed production, this work was to verify the existence of genotype-environment interaction in seed production of hybrid genotypes and seed production potential of these genotypes with reference to cv. Marandú. In a first study, we sought to verify the influence of temperature on the male gamete of five interspecific hybrids of Brachiaria (HBCG348, HBCG011, HBCG148, HBCG450 and HBCG148) and a second study evaluated the viability of pollen and seed production of these same genotypes in different environmental conditions. It was concluded that: a) the temperature factor affect the pollen viability of hybrids; b) the pollen viability of hybrids HBGC348 and HBGC148 is inversely proportional to the temperature rise; c) all the hybrids studied have floral abnormalities that affect the spread of pollen and subsequent seed production; d) were studied the hybrid genotype interaction with the environment; and e) none of the hybrids studied has the potential to produce seeds that credentials to sign in seed-bed market. / Nos últimos anos, para a maioria das espécies agrícolas, tem aumentado a utilização de híbridos graças a sua elevada produtividade além de outras qualidades que os colocam na frente das variedades. No gênero Brachiaria a hibridação tem sido realizada através da utilização do cruzamento de B. ruziziensis, que é sexual, e outras espécies apomíticas do mesmo gênero principalmente B. brizantha e B. decumbens. Entretanto, os híbridos de braquiária obtidos até o momento são interespecíficos e apresentam baixa produção de sementes, fator que limita a disseminação dos mesmos, visto a praticidade e menor custo de implantação/renovação de pastagens utilizando-se sementes ao invés de mudas. Na busca pelo motivo dessa baixa produção de semente, este trabalho teve como objetivo verificar a existência de interação genótipo x ambiente na produção de sementes de genótipos híbridos e o potencial produtivo de semente desses genótipos tendo como referência a cv. Marandú. Em um primeiro estudo, buscou-se verificar a interferência da temperatura sobre o gameta masculino de cinco híbridos interespecíficos de brachiaria (HBCG348, HBCG011, HBCG148, HBCG450 E HBCG148) e em um segundo estudo, foi avaliado a viabilidade polínica e a produção de semente desses mesmos híbridos em diferentes condições ambientais. Concluiu-se que: a) o fator temperatura afeta a viabilidade polínica dos híbridos; b) a viabilidade polínica dos híbridos HBGC348 e HBGC148 é inversamente proporcional a elevação da temperatura; c) todos os híbridos estudados tem anormalidade floral que afetam a disseminação polínica e consequente produção de sementes; d) houve interação genotípica dos híbridos estudados com o ambiente; e e) nenhum dos híbridos estudados tem potencial de produção de sementes que os credenciem para entrar no mercado sementeiro.
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Conservação à baixa temperatura e avaliação da viabilidade de grãos de pólen de mamoneira / Conservation in low temperatures and avaliation of the viability of castor bean pollen grain

Cuchiara, Cristina Copstein 19 March 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_cristina_cuchiara.pdf: 54838030 bytes, checksum: 080d5f9c1d6101f82e129f93588c1a24 (MD5) Previous issue date: 2010-03-19 / The castor bean (Ricinus communis L.) it is known by the high adaptation capacity to the different climate conditions and soil, characteristics these that it possible be her cultivated commercially in different areas of Brazil. Consequently, researches about conservation and germination of the pollen are indispensable to the programs of genetic improvement. The purpose is to evaluate the viability and conservate grains of castor bean pollen. For the study, were used floral buttons of the cultivars IAC 80, AL Guarany 2002 and Lara. In the first experiment, were selected appropriate parameters of pH (5, 6, 7 and 8), temperature (15, 20, 25 and 30 ºC), sucrose (0; 5; 10 and 20%) and combinations of 4, 8 and 10 mgL-1 boron with sucrose. In the second experiment, the storage of pollen was evaluated of the cultivars IAC 80 and AL Guarany 2002 in four places (liquid nitrogen (-196 ºC); ultrafreezer (-72 ºC); freezer (-18 ºC) and refrigerator (4 ºC)) being analyzed week after week to complete thirty days and in the sixty days. The third experiment was evaluated the effect about the time of defreezing of pollen cultivars IAC 80 and AL Guarany 2002, submitted to the same places and storage periods (15, 30 and 60 days) analyzed of hour after hour to complete six hours and after twenty-four hours. The viability test was constituted preparing ideal culture medium for each experiment, after that it was deposited in excavated plates, where the pollen was distributed on the surface of the medium, the plates were put in humid camera and taken for incubation. In random delineation, were analyzed a hundred pollens per repetitions in a total of four repetitions for the first experiment and six for the others. I In the first experiment was observed that pH values above 6,0 cause decrease in the amount of germinated pollens. The temperature of 20 ºC and 5% and 10% of sucrose were appropriate for the germination. Sucrose and 4 and 8 boron mgL-1 increased the germination, however 10 mgL-1 didn't favor. It was observed in the second experiment that the storage in 4 and -18 ºC is not efficient, the number of germinated pollens falls quickly causing unviability after the fifth week, in -72ºC the pollens of the cultivar IAC 80 stayed viable even the fourth week and the cultivar AL Guarany 2002 presented viability the sixty days and -196 ºC was very efficient even to fifth week. With the third experiment can be verified that for the cultivars IAC 80, to the 15 and 30 days of storage, the temperature of the -72 ºC presented around 50% of germination needing five and six hours of incubation for the defreezing, respectively; for the cultivar AL Guarany 2002, the best result was reached to -196 ºC and the sixty days was occurred the unviability. Therefore, the cultivars answered in a different way the best methodology of evaluation of pollen viability and conservation, however, the one that suggests be species-specific. / A mamoneira (Ricinus communis L.) é conhecida pela alta capacidade de adaptação às diferentes condições de clima e solo, características estas que a possibilita ser comercialmente cultivada em diferentes regiões do Brasil. Consequentemente, pesquisas sobre conservação e germinação do pólen são indispensáveis aos programas de melhoramento genético. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade e a conservação de grãos de pólen de mamoneira. Para tanto, foram utilizados botões florais das cvs. IAC 80, AL Guarany 2002 e Lara. No 1º experimento, foram selecionados parâmetros adequados de pH (5, 6, 7 e 8), temperatura (15, 20, 25 e 30 ºC), sacarose (0; 5; 10 e 20%) e combinações de 4, 8 e 10 mgL-1 boro com sacarose. No 2º experimento, foi avaliado o armazenamento de pólen das cvs. IAC 80 e AL Guarany 2002 em 4 ambientes (nitrogênio líquido (-196 ºC); ultrafreezer (-72 ºC); freezer (-18 ºC) e refrigerador (4 ºC)) sendo a análise realizada de semana em semana até completar 30 dias e aos 60 dias. No 3º experimento foi avaliado o efeito do tempo de descongelamento de pólen das cvs. IAC 80 e AL Guarany 2002, submetidas aos mesmos ambientes e períodos de armazenamento (15, 30 e 60 dias) analisados de hora em hora até completar 6h e após 24h. O teste de viabilidade foi constituído do preparo do meio de cultura ideal para cada experimento, após depositado em placas de lâmina escavada, onde o pólen foi distribuído sobre a superfície do meio e após as placas foram colocadas em câmara úmida e levadas para incubação. Em delineamento inteiramente casualizado, foram analisados 100 polens/repetição num total de 4 repetições para o 1º experimento e 6 para os demais. No 1º experimento foi verificado que valores de pH acima de 6,0 provocam diminuição na quantidade de polens germinados. A temperatura de 20 ºC com 5% e 10% de sacarose foram adequadas para a germinação. Sacarose com 4 e 8 mgL-1 de boro aumentaram a germinação, porém 10 mgL-1 não favoreceu. Observou-se no 2º experimento que o armazenamento em 4 e -18 ºC não é eficiente, pois o número de polens germinados cairam rapidamente causando inviabilidade após a 5ª semana. Em -72 ºC os polens da cv. IAC 80 permaneceram viáveis até a 4ª semana e os da cv. AL Guarany 2002 apresentaram viabilidade aos 60 dias e -196 ºC foi muito eficiente até a 5ª semana. Com o 3º experimento foi possivel verificar que para a cv. IAC 80, aos 15 e 30 dias de armazenamento, a temperatura de -72 ºC apresentou em torno de 50% de germinação necessitando de 5 e 6h de incubação para o descongelamento, respectivamente; para a cv. AL Guarany 2002, o melhor porcentual foi alcançado a temperatura de -196 ºC sendo observado aos 60 dias a ocorrência de inviabilidade. Portanto, as cultivares responderam de forma diferente a melhor metodologia de avaliação de viabilidade polínica e conservação, no entanto, o que sugere ser espécie-específico.

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