Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-09T12:02:26Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Janaina Gomes de Siqueira - 2016.pdf: 2965200 bytes, checksum: 015ab0c28746d09363a65c8817dd4068 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-09T12:03:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Janaina Gomes de Siqueira - 2016.pdf: 2965200 bytes, checksum: 015ab0c28746d09363a65c8817dd4068 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-09T12:03:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Janaina Gomes de Siqueira - 2016.pdf: 2965200 bytes, checksum: 015ab0c28746d09363a65c8817dd4068 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-11-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Histoplasma capsulatum var. capsulatum is a pathogenic fungus that causes the systemic disease known as histoplasmosis. This mycosis presents endemicity in the regions of the Mississippi and Ohio rivers in the United States, also found in several countries of South America. In Brazil, the number of people infected by this fungus has been growing in recent years, especially in immunocompromised people. H. capsulatum is a thermodymorphic microorganism, found in two morphotypes: mycelium at 25ºC and yeast at 37ºC. During the infection process the pathogenic microorganism needs to obtain nutrients so that it grows and develops within the tissue of the host. Among the essential nutrients, zinc is an essential metal ion, used in the maintenance of numerous metabolic pathways. Zinc is used as catalytic and structural cofactor of numerous metalloproteins. Zinc uptake is characterized as a virulence factor in H. capsulatum. In order to study the molecular mechanisms of zinc homeostasis in H. capsulatum, the in silico analysis of zinc homeostasis related proteins. The ZafA transcription factor, which acts on the regulation of genes in response to the zinc level in the medium and the transcription factor PacC that regulates genes in response to pH, were also found. ZrfA and ZrfC membrane transporters were also found ZrfF, ZrcA and ZrcC vacuolar transporters. The transcriptional profile analysis of these genes was measured by RT-PCR in infected macrophages and in vitro. During the infection the ZafA and ZrfA genes were induced, suggesting that these genes were expressed in order to supply the fungal cell with zinc, due to the metal deficiency caused by the infection. In vitro, ZafA, ZrfC, ZrfF, ZrcA and ZrcC were induced at zinc deprivation condition, compared with control condition. According with proteomic data of fungus under conditions of zinc deprivation, it was suggested the induction of proteins related to rescue, defense and virulence, related mainly to oxidative stress, besides other metabolic pathways such as gluconeogenesis. These data suggest that the fungus undergoes a metabolic remodeling in response to the oxidative stress caused by zinc deprivation. / Histoplasma capsulatum var. capsulatum é um fungo patogênico causador da doença sistêmica conhecida como histoplasmose. Essa micose apresenta endemicidade nas regiões do rio Mississipi e Ohio nos Estados Unidos, encontrado também em vários países da América do Sul. No Brasil, o número de pessoas infectadas por este fungo vem crescendo nos últimos anos, principalmente em pessoas imunocomprometidas. H. capsulatum é um micro-organismo termodimórfico, encontrado em dois morfotipos: micélio a 25ºC e levedura a 37ºC. Durante o processo de infecção o micro-organismo patogênico necessita obter nutrientes para que cresça e se desenvolva dentro do tecido do hospedeiro. Dentre os nutrientes essenciais, o zinco é um íon metal essencial, utilizado na manutenção de inúmeras vias metabólicas. O zinco é utilizado como cofator catalítico e ou estrutural de inúmeras metaloproteínas. A captação de zinco é caracterizada como um fator de virulência em H. capsulatum. Com o objetivo de estudar os mecanismos moleculares da homeostase de zinco em H. capsulatum, foi realizada primeiramente a análise in silico das proteínas relacionadas a homeostase de zinco. Foram encontrados o fator de transcrição ZafA que atua na regulação de genes em resposta ao nível de zinco no meio e o fator de transcrição PacC que atua na regulação de genes em resposta ao pH, adicionalmente foram encontrados transportadores de membrana ZrfA e ZrfC, além dos transportadores vacuolares ZrfF, ZrcA e ZrcC. A análise do perfil transcricional destes genes foi mensurada por RT-PCR em macrófagos infectados e in vitro. Durante a infecção os genes ZafA e ZrfA foram induzidos, sugerindo que estes genes foram expressos a fim de suprir a célula fúngica com zinco, devido a deficiência do metal causada pela infecção. In vitro, ZafA, ZrfC, ZrfF, ZrcA e ZrcC foram induzidos na condição de privação de zinco, comparado com a condição controle. De acordo com os dados proteômicos do fungo em condições de privação zinco, foi sugerido a indução de proteínas relacionadas ao resgate, defesa e virulência, relacionadas principalmente ao estresse oxidativo, além de outras vias metabólicas como gliconeogênese. Estes dados sugerem que o fungo sofre um remodelamento metabólico em resposta ao estresse oxidativo causado pela privação de zinco.

Os filamentos branquiais da lagosta Americana, Homarus americanus, foram dissociados em solução salina fisiológica e os diversos tipos celulares separados em gradiente de 30, 40, 50 e 80% de sacarose através de centrifugação de alta velocidade. As células provenientes de cada solução de sacarose foram incubadas em 65Zn2+ visando caracterizar a tomada de zinco para cada tipo celular. A caracterização do acúmulo de zinco em cada célula foi investigada na presença e ausência de 10mM de cálcio (CaCl2), variadas concentrações de NaCl e pH, presença de 100 µM de verapamil, nifedipina (inibidores de canais de Ca2+) e ionóforo de cálcio, A23187. O influxo de 65Zn2+ foi descrito pela cinética de Michaelis-Menten nas concentrações de zinco variando de 1-1000 µM.. O cálcio externo não afetou o transporte de Zn para as células presentes no gradiente de 30% a 50% de sacarose, mas atuou como estimulador para as células em gradiente de 80% de sacarose. O cálcio reduziu o Km e a velocidade máxima de transporte (Vmax) para as células de 30% de sacarose, enquanto duplicou aparentemente a velocidade máxima de transporte para as células provenientes do meio em 80% de sacarose. Os resultados sugerem que o cálcio, sódio e prótons entram nas células branquiais através de um canal para cátion com ampla especificidade. Diferenças observadas no transporte de zinco em relação aos diferentes tipos de células aparentemente estão relacionadas com as diferentes taxas de afinidade de cada transportador em cada tipo celular. O transporte de 65Zn2+ também foi estudado em filamentos branquiais isolados e intactos, demonstrando propriedades de transporte muito parecidas com as observadas pelas células em gradiente de 80% de sacarose. Os resultados sugerem que a tomada de Zn se dá por processo de transporte na membrana apical das brânquias. Um modelo experimental para o transporte de Zn em células de brânquias de lagostas é apresentado. / Gill filaments of the American lobster, Homarus americanus, were dissociated in a physiological saline and separated into several cell types on a 30, 40, 50, and 80% sucrose gradient. Cells from each sucrose solution were separately resuspended in physiological saline and incubated in 65Zn2+ in order to assess the nature of metal uptake by each cell type. Characteristics of zinc accumulation by each kind of cell was investigated in the presence and absence of 10 mM calcium (CaCl2), variable NaCl concentrations and pH values, and 100 µM verapamil, nifedipine (calcium channel inhibitors), and the calcium ionophore, A23187. 65Zn2+ influxes were hyperbolic functions of zinc concentration (1-1000 µM) and followed the Michaelis-Menten kinetics. External calcium was neutral to cells from 30% to 50% sucrose, but stimulatory for cells from 80% sucrose. However, calcium reduced both apparent zinc binding affinity (Km) and maximal transport velocity (Jmax) for 30% sucrose cells, while doubling the apparent maximal transport velocity for 80% sucrose cells. Results suggest that calcium, sodium, and protons enter gill epithelial cells by way of an endogenous broad-specificity cation channel and trans-stimulate metal uptake by a plasma membrane carrier system. Differences in zinc transport observed between gill epithelial cell types appear related to apparent affinity differences of the transporters in each kind of cell. Low affinity cells from 30% sucrose were partially inhibited by calcium, while high affinity cells from 80% sucrose were stimulated. 65Zn2+ transport was also studied by isolated, intact, gill filament tips. These intact gill fragments generally displayed the same transport properties as did cells from 80% sucrose and provided support for metal uptake processes being an apical phenomena. A working model for zinc transport by lobster gill cells is presented.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-12T17:21:41Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 556858 bytes, checksum: 7e5f6d619338309754d49d32c8c4cbbf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T17:21:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 556858 bytes, checksum: 7e5f6d619338309754d49d32c8c4cbbf (MD5) Previous issue date: 2004-08-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neste trabalho estudou-se a influência do zinco no crescimento, na concentração de micronutrientes e nas características bioquímicas de progênies de cafeeiros, com o objetivo de avaliar a tolerância diferencial à deficiência de zinco, selecionar progênies eficientes nutricionalmente e estudar o requerimento de micronutrientes e as características bioquímicas dessas progênies. Para tanto, mudas de 14 progênies de cafeeiros foram submetidas a 0,0 e 3,0 μmol L-1 de zinco, em solução nutritiva, durante cinco meses, e 0,0 e 6,0 μmol L-1 de zinco, por mais cinco meses, devido à constatação de engrossamento de raízes e à necrose de meristemas apicais radiculares em algumas progênies, pressupondo a ocorrência de deficiência de zinco. O experimento foi conduzido em casa de vegetação e solução de Clark modificada, no esquema fatorial 14 x 2 (14 progênies e duas concentrações de zinco), em delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições. Após o período experimental, as plantas foram divididas em folhas apicais, folhas inferiores, folhas completamente expandidas, caule (ramo ortotrópico e ramos plagiotrópicos) e raízes para determinações de matéria seca, do teor dos micronutrientes zinco, ferro, cobre e manganês e do conteúdo de zinco acumulado pelas progênies. A partir da concentração de zinco e da matéria seca das diferentes partes analisadas foram calculadas as eficiências de absorção, de transporte, de produção de biomassa e nutricional. As concentrações de clorofila a, clorofila b, clorofila total, carotenóides, compostos indólicos e o índice SPAD foram avaliadas no segundo par de folhas. O estado nutricional de zinco afetou a produção de matéria seca, a habilidade do cafeeiro em absorver, transportar e utilizar o micronutriente, as concentrações dos micronutrientes ferro, cobre e manganês e as características bioquímicas avaliadas. Dentre as características químicas e de crescimento estudadas, as reduções percentuais da área foliar, do número de folhas, do teor de zinco ativo na folha completamente expandida e de zinco total na raiz foram as variáveis que apresentaram maior importância relativa na discriminação das progênies dos cafeeiros. O agrupamento envolvendo as características de crescimento permitiu discriminar a progênie UFV 4066-3 (Tupi IAC 1669-33) como altamente exigente em zinco e a IAC 4376-5 (Tupi) como pouco exigente em zinco. A partir dos dados do acúmulo de zinco na matéria seca das plantas, as progênies IAC 4376-5 (Tupi) e UFV 4066-5 (Tupi IAC 1669-33) apresentaram baixa exigência em zinco, e as progênies Caturra Amarelo 1, UFV 4066-3 (Tupi IAC 1669-33), Caturra Amarelo 2 e Caturra Vermelho 2 apresentaram alta exigência em zinco. Com base no estudo das variáveis de crescimento e eficiência nutricional para zinco, a progênie UFV 4066-5 (Tupi IAC 1669-33) pôde ser classificada como pouco exigente em zinco e eficiente em baixo suprimento de zinco; a progênie UFV 4066-3 (Tupi IAC 1669-33) como exigente e eficiente em alto suprimento; a progênie IAC 4376-5 como pouco exigente e pouco eficiente; e a Caturra Vermelho 4 como intermediária quanto à exigência e eficiência nutricional. Os teores de clorofila a, clorofila b, clorofila total e carotenóides decresceram sob restrição no fornecimento de zinco nas progênies UFV 4066-5 (Tupi IAC 1669-33), UFV 4066-3 (Tupi IAC 1669-33) e IAC 4376-5 (Tupi), e foram incrementados na progênie Caturra Vermelho 4. Na solução em que se omitiu zinco, a progênie Caturra Vermelho 4 apresentou elevados teores de pigmentos e de zinco, de ferro, de cobre e de manganês, sugerindo metabolismo mais intenso que conduziu aos maiores teores de compostos indólicos observados para esta progênie. No entanto, a eficiência nutricional para zinco não está relacionada à manutenção de concentrações elevadas de micronutrientes, pigmentos e compostos indólicos nas folhas de mudas de cafeeiros. / This work studied the influence of zinc on the growth, micronutrient concentration and biochemical characteristics of coffee plant progenies to evaluate the differential tolerance to zinc deficiency, to select nutritionally efficient progenies and to study their micronutrient requirement and biochemical characteristics. Thus, seedlings of 14 coffee plant progenies were submitted to 0.0 and 3.0 μmol L-1 of zinc in a nutritive solution for five months, and 0.0 and 6.0 μmol L-1 of zinc for five extra months. The experiment was conducted in a greenhouse and modified Clark solution in a 14 x 2 factorial scheme (14 progenies and two zinc concentrations), arranged in a completely randomized design, with four repetitions. After the experimental period, the plants were grouped into apical leaves, inferior leaves, completely expanded leaves, stem (orthotropicbranch and plagiothropic branches) and roots to determine dry matter, and content of the micronutrients zinc, iron, copper and manganese as well as zinc content accumulated by the progenies. Based on the zinc and dry matter concentration of the different parts analyzed, absorption, transport, biomass and nutritional production efficiencies were calculated. Chlorophyl a, chlorophyl b, total chlorophyl, carotenoids, indolic compounds and the SPAD index were evaluated in the second leaf pair. Zinc nutrional state affected dry matter production; coffee plant ability to absorb, transport, and use this micronutrient; iron, copper, and manganese concentrations; and the biochemical characteristics evaluated. Among the chemical and growth characteristics studied, the variables percentual reductions of leaf area, leaf number, active zinc content in the completely expanded leaf and total zinc in the root presented higher relative importance in discriminating coffee plant progenies. The grouping involving growth characteristics allowed to discriminate the progeny UFV 4066-3 (Tupi IAC 1669-33) as highly zinc demanding and IAC 4376-5 (Tupi) as low zinc demanding. Based on the data on zinc accumulation in the dry matter of the plants, the progenies IAC 4376-5 (Tupi) and UFV 4066-5 (Tupi IAC 1669-33) presented a low zinc requirement, and the progenies Caturra Amarelo 1, UFV 4066-3 (Tupi IAC 1669-33), Caturra Amarelo 2 and Caturra Vermelho 2 presented a high zinc requirement. Based on the study of the variables growth and nutritional efficiency for zinc, the progeny UFV 4066-5 (Tupi IAC 1669-33) can be classified as low zinc demanding and efficient in low zinc supply; the progeny UFV 4066-3 (Tupi IAC 1669-33) as highly demanding and efficient in high zinc supply; the progeny IAC 4376-5 as low zinc demanding and inefficient; and Caturra Vermelho 4 as intermediary in nutritional requirement and efficiency. Chlorophyl a, chlorophyl b, total chlorophyl and carotenoids contents decreased with restricted zinc supply in the progenies UFV 4066-5 (Tupi IAC 1669-33), UFV 4066-3 (Tupi IAC 1669-33) and IAC 4376-5 (Tupi), and increased in the progeny Caturra Vermelho 4. Caturra Vermelho 4 presented high contents of zinc, iron, copper and manganese pigments in the solution without zinc, suggesting more intense metabolism which led to higher contents of indolic compounds observed for this progeny. However, the nutritional efficiency of zinc is not related to the maintenance of high concentrations of micronutrients, pigments, and indolic compounds in the leaves of coffee plant seedlings.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-19T17:19:11Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 171277 bytes, checksum: 6352885a7289ac3d3dd61d7e80b3aa5e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T17:19:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 171277 bytes, checksum: 6352885a7289ac3d3dd61d7e80b3aa5e (MD5) Previous issue date: 1997-06-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Em experimento conduzido em casa de vegetação, objetivou-se avaliar a eficiência dos extratores Mehlich-1, Mehlich-3 e DTPA quanto à disponibilidade de zinco em solos de Minas Gerais, com características químicas e físicas variáveis, na ausência e presença de calagem. Os tratamentos foram arranjados em esquema fatorial 7x2x5, correspondendo a sete solos, dois níveis de calagem e cinco doses de zinco, no delineamento em blocos casualizados, com três repetições. Amostras de 2dm 3 foram incubadas com e sem adição de calcário. As quantidades de calcário adicionadas foram determinadas por meio de curvas de neutralização da acidez, objetivando alcançar pH6,0. Após esse período de incubação, as amostras receberam zinco nas doses de 0, 2, 4, 6 e 8mgdm -3 , na forma de ZnSO 4 . Nessa mesma oportunidade, realizou-se adubação básica, sem zinco, com todos os outros macro e micronutrientes. Após 15 dias da fertilização das amostras, foram retiradas subamostras de 0,4 dm 3 , para avaliação de zinco pelos extratores Mehlich-1, utilizando filtragem logo após extração (M-1f) e retirada de alíquota após 16 horas (M-1s), Mehlich-3 (M-3) e DTPA-TEA. O volume de solo restante foi acondicionado em vasos plásticos para o cultivo do milho. Aos cinqüenta dias de cultivo foi analisada a produção de massa de matéria seca, bem como o teor e o conteúdo de zinco na parte aérea das plantas. Para avaliação da capacidade de extração dos diferentes métodos, foram ajustadas equações de regressão do Zn recuperado em função das doses adicionadas, para cada solo, nos dois níveis de calagem. Essas equações foram comparadas mediante teste de identidade de modelos, para avaliar a sensibilidade dos extratores à calagem. A resposta da planta à calagem e às doses de zinco foi avaliada pela produção de massa de matéria seca, teor e conteúdo de zinco na parte aérea. A capacidade de extração variou na seguinte ordem: M-1s>M-1f>M-3> DTPA, para todos os solos, na ausência e na presença de calagem. Os extratores M-1s e M-3 não apresentaram diferenças na capacidade de extração com a calagem, enquanto o M-1f e DTPA foram sensíveis à calagem. Os teores de zinco obtidos por todos os extratores correlacionaram-se significativa (p<0,05) e negativamente com o teor de argila e água retida a -33kPa dos solos, tanto na ausência como na presença de calagem. A capacidade de extração do DTPA apresentou-se melhor correlacionada com todas as características de solo, na presença de calagem, indicando que esse extrator pode ser melhor utilizado em solos com maiores valores de pH. Todos os extratores apresentaram correlações significativas (p<0,001) com o conteúdo de zinco na planta, podendo ser utilizados na avaliação da disponibilidade de zinco do solo. As plantas de milho apresentaram diminuição significativa na absorção de zinco com a calagem, sem contudo haver diminuição de produção, uma vez que, com a calagem, as plantas aumentaram a eficiência de utilização do nutriente. / This experiment was carried out under greenhouse conditions in order to evaluate the efficiency of Mehlich-1, Mehlich-3 and DTPA extractors for zinc availability in soils of Minas Gerais State presenting chemical and physical characteristics variable in the presence and absence of liming. Treatments were arranged in a 7x2x5 factorial scheme corresponding to seven soils, two liming levels and five zinc doses in a randomized block design with three replicates. The 2dm 3 samples were incubated with and without adding calcareous. The amounts of the added calcareous were determined by the acidity neutralization curves, aiming to attain pH6.0. After this incubation period, the samples were added zinc at the dosages of 0, 2, 4, 6 and 8mgdm -3 in the ZnSO 4 form. At this time, the basic adubation was realized without zinc and with all others macro and micronutrients. Fifteen days after sample fertilization, the 0.4dm 3 subsamples were removed for zinc evaluation by the Mehlich-1 extractors, using filtration just after extraction (M-1f) and removal of the aliquot 16 hours later (M-1s), Mehlich-3 (M-3) and DTPA-TEA. The remaining soil xvolume was conditioned in plastic pots for maize cropping. At fifty days cropping, the production of the dry matter mass was analyzed and the zinc concentration and content in the plant aerial part as well. To evaluate the extraction capacity of the different methods, the regression equations of the recovered Zn were adjusted as a function of the added doses, to each soil, in the two liming levels. These equations were compared through the model identity test in order to evaluate the extractor sensibility to liming. The plant response to both liming and Zn doses was evaluated by the production of dry matter mass, Zn concentration and content in the aerial part. The extraction capacity varied on the following order: M-1s>M-1f>M-3> DTPA, for all soils, in the presence and absence of liming. The extractors M-1s and M-3 didn’t present differences in the extraction capacity with liming, whereas M-1f and DTPA were liming-sensible. The Zn contents obtained by all extractors showed a significative (p<0.05) and negative correlation with the concentration of clay and water retained at -33kPa of the soils, in the absence as in the presence of liming. The DTPA extraction capacity correlated better with all soil characteristics, in the liming presence, indicating that this extractor can be better used in those soils with higher pH values. All extractors presented significative correlations (p<0.001) with the Zn content in plant, and can be used in evaluating Zn availability in the soil. The maize plants presented a significative decrease in absorbing zinc with the liming; however the yield didn’t diminished, since the plants increased their nutrient utilization efficiency with liming.

Submitted by GUILHERME RIBEIRO ROMUALDO null (romualdo.gr15@gmail.com) on 2016-03-10T20:50:41Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Guilherme Romualdo.pdf: 4726394 bytes, checksum: 0a935fc856c31a6b6b43be1eebbe9465 (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 6 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 6 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2016-03-14T13:53:10Z (GMT) / Submitted by GUILHERME RIBEIRO ROMUALDO null (romualdo.gr15@gmail.com) on 2016-03-14T15:31:13Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Guilherme Romualdo.pdf: 4726394 bytes, checksum: 0a935fc856c31a6b6b43be1eebbe9465 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-15T12:30:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 romualdo_gr_me_bot.pdf: 4726394 bytes, checksum: 0a935fc856c31a6b6b43be1eebbe9465 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-15T12:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 romualdo_gr_me_bot.pdf: 4726394 bytes, checksum: 0a935fc856c31a6b6b43be1eebbe9465 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Zinc is required for a wide range of enzymes and transcription factors involved in DNA repair, antioxidant defense and cell proliferation. Inadequate zinc intake could impair these functions, predisposing to the development of human diseases. This study evaluated whether dietary zinc deficiency or supplementation alter early chemically-induced mouse hepatocarcinogenesis. Male Balb/C mice received a single dose of diethylnitrosamine (DEN, 50 mg/Kg) at postnatal day (PND) 15 as an initiating agent for hepatocarcinogenesis. At PND 28, animals were allocated into three groups (n=13/group) and were fed AIN-93G diet containing different concentrations of zinc: adequate zinc (35 mg/Kg diet), zinc deficiency (3 mg/Kg diet) or zinc supplementation (180 mg/Kg diet). Also, 2-acetylaminefluorene (2-AAF, 0.02%) was incorporated in all experimental diets as a promoting agent for hepatocarcinogenesis. Mice were euthanized at 12 or 24 weeks after introducing the experimental diets. Blood and liver samples were collected to perform Comet Assay. Other liver fragments were sampled for histopathological, morphometrical and immunohistochemical analyses, western blotting and antioxidant profiling. Zinc deficiency decreased Nrf2 expression and reduced glutathione (GSH) levels and increased NFκB, p53 expression and the number of preneoplastic altered hepatocyte foci (AHF) per cm² at week 12. In addition, zinc deficiency decreased GSH levels and increased 2-AAF-induced genotoxicity (peripheral blood and liver), cell proliferation into AHF and AHF size at week 24. In contrast, zinc supplementation increased GSH levels and Glutathione Peroxidase (GPx) activity and decreased 2-AAF-induced genotoxicity (blood) and β-catenin expression at week 12. Besides, zinc supplementation increased GSH levels and GPx, superoxide dismutase, and catalase activity at week 24. The findings indicate that zinc deficiency promotes early chemically-induced mouse hepatocarcinogenesis while zinc supplementation enhances hepatic antioxidant defense. / O Zinco é um elemento essencial para uma grande diversidade de enzimas e fatores de transcrição envolvidos no reparo ao DNA, defesa antioxidante e proliferação celular. O consumo inadequado desse metal pode prejudicar tais funções e predispor ao desenvolvimento de doenças. Assim, o estudo avaliou se a deficiência ou suplementação de zinco alteram os estágios iniciais da hepatocarcinogênese. Para tanto, camundongos Balb/C receberam dose única intraperitoneal do carcinógeno dietilnitrosamina (50 mg/Kg) no 15º dia pós-natal (DPN), para iniciação da hepatocarcinogênese. Ao 28º DPN, os animais foram randomicamente alocados em três grupos experimentais (n=13/grupo) recebendo dieta AIN-93G contendo níveis adequados (35 mg/Kg), deficiência (3 mg/Kg) ou suplementação (180 mg/Kg) de zinco, além do agente promotor acetilaminofluoreno (0.02% em todas as dietas). Os animais foram eutanasiados após 12 e 24 semanas após a introdução das dietas. Amostras de sangue periférico foram coletadas antes da eutanásia para a avaliação de genotoxicidade pelo Teste do Cometa. Na necropsia, amostras de fígado foram retiradas para o Teste do Cometa, avaliação histopatológica e morfométrica análise imunoistoquímica, determinação do perfil antioxidante e western blot. Na 12ª semana, a deficiência de zinco reduziu a expressão de Nrf2 e os níveis de glutationa reduzida (GSH) e aumentou a expressão de NFκB e p53 e número de lesões pré- neoplásicas por cm². Já na 24ª semana, a deficiência reduziu os níveis de GSH e aumentou a genotoxicidade induzida por 2-AAF (sangue e fígado), o tamanho e a proliferação celular das lesões pré-neoplásicas. Por outro lado, a suplementação aumentou os níveis de GSH e a atividade da enzima glutationa peroxidase (GPx) e reduziu a expressão de β-catenina e genotoxicidade induzida por 2-AAF (sangue). Ademais, na 24ª semana, a suplementação aumentou os níveis de GSH e a atividade das enzimas GPx, superóxido dismutase e catalase. Os resultados indicam que a deficiência de zinco promove a hepatocarcinogênese em seus estágios iniciais, enquanto a suplementação aumenta a defesa antioxidante hepática. / FAPESP: 2014/01795-0

Submitted by FLÁVIA REGINA MORAES DA SILVA null (flavisbio@hotmail.com) on 2016-03-11T17:40:29Z No. of bitstreams: 1 Doutorado em Patologia (Flávia Regina Moraes da Silva) Versão Final.pdf: 2724811 bytes, checksum: a8ca539bbeff30c4bfa3fa6c2f9dfeba (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-03-14T17:46:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_fm_dr_bot.pdf: 2724811 bytes, checksum: a8ca539bbeff30c4bfa3fa6c2f9dfeba (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-14T17:46:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_fm_dr_bot.pdf: 2724811 bytes, checksum: a8ca539bbeff30c4bfa3fa6c2f9dfeba (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo teve como objetivo avaliar se a ingestão de dietas com deficiência ou suplementação de zinco, durante as fases de gestação, lactação e juvenil, interfere no desenvolvimento das glândulas mamárias e na susceptibilidade ao desenvolvimento de carcinogênese mamária induzida pela 7,12-dimetilbenz(a)antraceno (DMBA) em ratas da linhagem Sprague-Dawley (SD). Duas gerações, mães e prole de fêmeas receberam dietas com níveis adequados (35mg/Kg dieta), deficientes (3mg/Kg dieta) ou com suplementação (180mg/Kg dieta) de zinco durante a gestação e lactação. Após o desmame, as proles de fêmeas receberam as mesmas dietas das mães até o dia pós-natal (DPN) 51 ou 53. No DPN 51 fêmeas SD foram eutanasiadas para remoção das glândulas mamárias abdominais (D e E) ou receberam dose única de DMBA (50mg/kg; i.g.) para iniciação da carcinogênese e eutanasiadas no DPN 53 ou DPN 180. No dia DPN 53 as glândulas foram processadas para análises histológicas e imunoistoquímicas, e avaliação da expressão de genes relacionados a dano e reparo de DNA, apoptose, ciclo celular e sinalização de genes relacionados ao receptor de estrógeno e p53, por RT-qPCR com sistema Taqman Low density array (TLDA). Os tumores coletados ao longo do experimento e no DPN 180 foram processados para avaliação histológica. As fêmeas alimentadas com dieta deficiente de zinco apresentaram redução significativa no peso corpóreo nos DPNs 0, 10, 21 e 51. O número médio de brotos terminais (TEBs), ductos terminais (TEDs) e lóbulos alveolares (ABLs) mamários não diferiram entre as proles dos três grupos experimentais. No DPN 53, os índices de proliferação nas células epiteliais mamárias foram significativamente maiores no grupo que recebeu suplementação de zinco em relação ao grupo controle, enquanto os índices de células epiteliais em apoptose e RE-α positivas não diferiram entre os grupos. Além disso, a suplementação de zinco reduziu significativamente a expressão dos genes Api5 e Ercc1, que atuam como inibidor de apoptose e reparo de DNA, respectivamente. No DPN 180, tanto a deficiência quanto a suplementação de zinco na dieta não alteraram a latência, incidência, multiplicidade ou volume dos tumores mamários induzidos pela DMBA em relação ao grupo controle. No entanto, a suplementação de zinco aumentou o número total de tumores em 72% quando comparado aos demais grupos. Portanto a suplementação de zinco durante as fases iniciais da vida e perído juvenil aumentou marginalmente a suscetibilidade ao desenvolvimento de tumores mamários. / The present study was designed to evaluate whether dietary intake with zinc deficiency or supplementation during the pregnancy, lactation and juvenile stages interfere the development of mammary glands and susceptibility to the mammary carcinogenesis induced by 7,12-dimethylbenzanthracene (DMBA) in female rats Sprague-Dawley (SD) rats. Two generations, dams and female offspring received dietary with zinc levels adequate (35 mg/kg diet), deficiency (3 mg/kg diet) or supplementation (180 mg/kg diet) during pregnancy and lactation. After weaning, the females offspring received the same diets as their dams until post natal day (PND) 51 or 53. On PND 51, females SD were euthanized for removal of the mammary glands (right and left) or received a single dose of DMBA (50mg/kg, ig) for initiation of mammary carcinogenesis and euthanized on PND 53 or PND 180. On PND 53, mammary glands were processed for histological and immunohistochemical analyses, as well as evaluation of the expression of genes related to DNA damage and repair, apoptosis, cell cycle and signaling related to estrogen receptor and p53 by RT-qPCR with Taqman Low density array system (TLDA). Tumors collected throughout experiment or on PND 180 were processed for histological evaluation. The females fed with dietary zinc deficiency presented a significant reduction in body weight on PND 0, 10, 21 e 51. The mean number of the terminal buds (TEBs), terminal ducts (TEDs) and alveolar lobe (ABLs) in mammary gland did not differ among offspring of the three groups. On PND 53 the indexes of proliferation in the mammary glands epithelial cells were significantly higher in the zinc supplementation group in relation to the control group, while the indexes of apoptosis epithelial cell and positive ER-α did not differ among the groups. Also, dietary zinc supplementation significantly reduced the expression of the Api5 and Ercc1 genes related to apoptosis inhibitor and DNA repair, respectively. On PND 180 both dietary zinc deficiency as supplementation did not change the, latency, incidence, multiplicity or volume of DMBA-induced mammary tumors in relation to the control group. However, dietary zinc supplementation increased the total number of tumors in 72% compared to others groups. Therefore zinc supplementation during the early life and juvenile period marginally increased the susceptibility to the mammary tumors development.

Made available in DSpace on 2016-12-09T13:52:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-29. Added 1 bitstream(s) on 2016-12-09T13:55:18Z : No. of bitstreams: 1 000866330.pdf: 1200487 bytes, checksum: 014fddf2888896e1d4fcdca5dcca9be9 (MD5) / O escore Simplified Acute Physiology Score III (SAPS III) é um instrumento utilizado para estimar a taxa de mortalidade hospitalar e predizer a gravidade dos pacientes, mais recentemente utilizado. Novos estudos com pacientes críticos têm associado o uso dos escores de gravidade com a avaliação das concentrações de zinco (Zn) e selênio (Se), já que esta interfere na concentração destes micronutrientes. O presente trabalho teve por objetivo estratificar os pacientes segundo a gravidade e analisar as concentrações de zinco e selênio no plasma, eritrócitos e urina. Trata-se de um estudo misto (observacional e transversal), realizado na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) do Hospital Estadual Américo Brasiliense/SP. Os dados foram coletados na primeira hora antes ou após internação na UTI para preenchimento do escore. Posteriormente, avaliou-se os micronutrientes de 95 pacientes em grupos separados de acordo com a gravidade e diagnóstico de sepse. Os resultados evidenciaram que o escore SAPS III possui adequada calibração e discriminação para a população estudada e o ponto de corte que melhor discriminou sobreviventes de não sobreviventes foi de 63,5 pontos. Quanto às análises das concentrações plasmáticas de Zn e Se, se mostraram menores que os valores de referências para ambos os micronutrientes (55,07±26,1 µg/dL e 14,55±4,64μg/L, respectivamente) e maiores que a referência para Zn urinário (2522,02±2340,46μg/24 horas). A concentração média de Se plasmático foi significativamente menor nos pacientes com maior gravidade, o que não foi observado para o Zn (p=0,921). Os resultados de albumina (r= -0,2628, p=0,0105) e PCR (r=0,3965, p<0,0001) correlacionaram-se com o escore de gravidade SAPS III. Concluiu-se que as alterações nas concentrações de Zn e Se plasmático são frequentes em pacientes críticos e relacionadas à gravidade... / The Simplified Acute Physiology Score III (SAPS III) score is one of the scoring systems that estimates the rate of hospital mortality and predicts the severity of the patient, most recently used. News studies of critical ill patients have associated the use of the scoring systems to the evaluation of zinc (Zn) and selenium (Se) concentrations, as the severity of the patient interfere in the concentration of these micronutrients. Thus, this study presented a proposed stratify critically ill according to severity and analyzing the concentrations of zinc and selenium in plasma, erythrocytes, and urine. This was a mixed study, accomplished in the Intensive Care Unit (ICU) of the Hospital Estadual Américo Brasiliense/SP. Data were collected in the first hour before or after ICU hospitalization to fill score. Subsequently, 95 patients were evaluated for micronutrient analysis in groups identified by the severity and diagnosis of sepsis. The results showed that the SAPS III score has adequate calibration and discrimination for the population studied and the cut-off point that better discriminated survivors from non-survivors was 63.5 points. As regards the analysis of plasma concentrations, Zn and Se were lower than the reference values for both micronutrients (55.07±26.10mg / dl and 14.55±4.64mg/L, respectively) and higher the reference urinary Zn (2522.02±2340.46μg/24hours). The average plasma concentration of Se was significantly lower in patients with greater severity, which was not seen for Zn (p=0.921). The results albumin (r= -0.2628, p=0.0105) and CRP (r=0.3965, p<0.0001) correlated with the SAPS III severity score. It was concluded that changes in the concentrations of Zn and Se in plasma are common in critically ill patients and related to the severity for the Se.

Orientador: Anderson Marliere Navarro / Banca: Vivian Marques Miguel Suen / Banca: Juliana Alvares Duarte Bonini Campos / Resumo: O escore Simplified Acute Physiology Score III (SAPS III) é um instrumento utilizado para estimar a taxa de mortalidade hospitalar e predizer a gravidade dos pacientes, mais recentemente utilizado. Novos estudos com pacientes críticos têm associado o uso dos escores de gravidade com a avaliação das concentrações de zinco (Zn) e selênio (Se), já que esta interfere na concentração destes micronutrientes. O presente trabalho teve por objetivo estratificar os pacientes segundo a gravidade e analisar as concentrações de zinco e selênio no plasma, eritrócitos e urina. Trata-se de um estudo misto (observacional e transversal), realizado na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) do Hospital Estadual Américo Brasiliense/SP. Os dados foram coletados na primeira hora antes ou após internação na UTI para preenchimento do escore. Posteriormente, avaliou-se os micronutrientes de 95 pacientes em grupos separados de acordo com a gravidade e diagnóstico de sepse. Os resultados evidenciaram que o escore SAPS III possui adequada calibração e discriminação para a população estudada e o ponto de corte que melhor discriminou sobreviventes de não sobreviventes foi de 63,5 pontos. Quanto às análises das concentrações plasmáticas de Zn e Se, se mostraram menores que os valores de referências para ambos os micronutrientes (55,07±26,1 µg/dL e 14,55±4,64μg/L, respectivamente) e maiores que a referência para Zn urinário (2522,02±2340,46μg/24 horas). A concentração média de Se plasmático foi significativamente menor nos pacientes com maior gravidade, o que não foi observado para o Zn (p=0,921). Os resultados de albumina (r= -0,2628, p=0,0105) e PCR (r=0,3965, p<0,0001) correlacionaram-se com o escore de gravidade SAPS III. Concluiu-se que as alterações nas concentrações de Zn e Se plasmático são frequentes em pacientes críticos e relacionadas à gravidade... / Abstract: The Simplified Acute Physiology Score III (SAPS III) score is one of the scoring systems that estimates the rate of hospital mortality and predicts the severity of the patient, most recently used. News studies of critical ill patients have associated the use of the scoring systems to the evaluation of zinc (Zn) and selenium (Se) concentrations, as the severity of the patient interfere in the concentration of these micronutrients. Thus, this study presented a proposed stratify critically ill according to severity and analyzing the concentrations of zinc and selenium in plasma, erythrocytes, and urine. This was a mixed study, accomplished in the Intensive Care Unit (ICU) of the Hospital Estadual Américo Brasiliense/SP. Data were collected in the first hour before or after ICU hospitalization to fill score. Subsequently, 95 patients were evaluated for micronutrient analysis in groups identified by the severity and diagnosis of sepsis. The results showed that the SAPS III score has adequate calibration and discrimination for the population studied and the cut-off point that better discriminated survivors from non-survivors was 63.5 points. As regards the analysis of plasma concentrations, Zn and Se were lower than the reference values for both micronutrients (55.07±26.10mg / dl and 14.55±4.64mg/L, respectively) and higher the reference urinary Zn (2522.02±2340.46μg/24hours). The average plasma concentration of Se was significantly lower in patients with greater severity, which was not seen for Zn (p=0.921). The results albumin (r= -0.2628, p=0.0105) and CRP (r=0.3965, p<0.0001) correlated with the SAPS III severity score. It was concluded that changes in the concentrations of Zn and Se in plasma are common in critically ill patients and related to the severity for the Se. / Mestre

Orientador: Luis Fernando Barbisan / Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar se a ingestão de dietas com deficiência ou suplementação de zinco, durante as fases de gestação, lactação e juvenil, interfere no desenvolvimento das glândulas mamárias e na susceptibilidade ao desenvolvimento de carcinogênese mamária induzida pela 7,12-dimetilbenz(a)antraceno (DMBA) em ratas da linhagem Sprague-Dawley (SD). Duas gerações, mães e prole de fêmeas receberam dietas com níveis adequados (35mg/Kg dieta), deficientes (3mg/Kg dieta) ou com suplementação (180mg/Kg dieta) de zinco durante a gestação e lactação. Após o desmame, as proles de fêmeas receberam as mesmas dietas das mães até o dia pós-natal (DPN) 51 ou 53. No DPN 51 fêmeas SD foram eutanasiadas para remoção das glândulas mamárias abdominais (D e E) ou receberam dose única de DMBA (50mg/kg; i.g.) para iniciação da carcinogênese e eutanasiadas no DPN 53 ou DPN 180. No dia DPN 53 as glândulas foram processadas para análises histológicas e imunoistoquímicas, e avaliação da expressão de genes relacionados a dano e reparo de DNA, apoptose, ciclo celular e sinalização de genes relacionados ao receptor de estrógeno e p53, por RT-qPCR com sistema Taqman Low density array (TLDA). Os tumores coletados ao longo do experimento e no DPN 180 foram processados para avaliação histológica. As fêmeas alimentadas com dieta deficiente de zinco apresentaram redução significativa no peso corpóreo nos DPNs 0, 10, 21 e 51. O número médio de brotos terminais (TEBs), ductos terminais (TEDs... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study was designed to evaluate whether dietary intake with zinc deficiency or supplementation during the pregnancy, lactation and juvenile stages interfere the development of mammary glands and susceptibility to the mammary carcinogenesis induced by 7,12-dimethylbenzanthracene (DMBA) in female rats Sprague-Dawley (SD) rats. Two generations, dams and female offspring received dietary with zinc levels adequate (35 mg/kg diet), deficiency (3 mg/kg diet) or supplementation (180 mg/kg diet) during pregnancy and lactation. After weaning, the females offspring received the same diets as their dams until post natal day (PND) 51 or 53. On PND 51, females SD were euthanized for removal of the mammary glands (right and left) or received a single dose of DMBA (50mg/kg, ig) for initiation of mammary carcinogenesis and euthanized on PND 53 or PND 180. On PND 53, mammary glands were processed for histological and immunohistochemical analyses, as well as evaluation of the expression of genes related to DNA damage and repair, apoptosis, cell cycle and signaling related to estrogen receptor and p53 by RT-qPCR with Taqman Low density array system (TLDA). Tumors collected throughout experiment or on PND 180 were processed for histological evaluation. The females fed with dietary zinc deficiency presented a significant reduction in body weight on PND 0, 10, 21 e 51. The mean number of the terminal buds (TEBs), terminal ducts (TEDs) and alveolar lobe (ABLs) in mammary gland did not di... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luís Fernando Barbisan / Resumo: Zinc is required for a wide range of enzymes and transcription factors involved in DNA repair, antioxidant defense and cell proliferation. Inadequate zinc intake could impair these functions, predisposing to the development of human diseases. This study evaluated whether dietary zinc deficiency or supplementation alter early chemically-induced mouse hepatocarcinogenesis. Male Balb/C mice received a single dose of diethylnitrosamine (DEN, 50 mg/Kg) at postnatal day (PND) 15 as an initiating agent for hepatocarcinogenesis. At PND 28, animals were allocated into three groups (n=13/group) and were fed AIN-93G diet containing different concentrations of zinc: adequate zinc (35 mg/Kg diet), zinc deficiency (3 mg/Kg diet) or zinc supplementation (180 mg/Kg diet). Also, 2-acetylaminefluorene (2-AAF, 0.02%) was incorporated in all experimental diets as a promoting agent for hepatocarcinogenesis. Mice were euthanized at 12 or 24 weeks after introducing the experimental diets. Blood and liver samples were collected to perform Comet Assay. Other liver fragments were sampled for histopathological, morphometrical and immunohistochemical analyses, western blotting and antioxidant profiling. Zinc deficiency decreased Nrf2 expression and reduced glutathione (GSH) levels and increased NFκB, p53 expression and the number of preneoplastic altered hepatocyte foci (AHF) per cm² at week 12. In addition, zinc deficiency decreased GSH levels and increased 2-AAF-induced genotoxicity (peripheral blood ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: O Zinco é um elemento essencial para uma grande diversidade de enzimas e fatores de transcrição envolvidos no reparo ao DNA, defesa antioxidante e proliferação celular. O consumo inadequado desse metal pode prejudicar tais funções e predispor ao desenvolvimento de doenças. Assim, o estudo avaliou se a deficiência ou suplementação de zinco alteram os estágios iniciais da hepatocarcinogênese. Para tanto, camundongos Balb/C receberam dose única intraperitoneal do carcinógeno dietilnitrosamina (50 mg/Kg) no 15º dia pós-natal (DPN), para iniciação da hepatocarcinogênese. Ao 28º DPN, os animais foram randomicamente alocados em três grupos experimentais (n=13/grupo) recebendo dieta AIN-93G contendo níveis adequados (35 mg/Kg), deficiência (3 mg/Kg) ou suplementação (180 mg/Kg) de zinco, além do agente promotor acetilaminofluoreno (0.02% em todas as dietas). Os animais foram eutanasiados após 12 e 24 semanas após a introdução das dietas. Amostras de sangue periférico foram coletadas antes da eutanásia para a avaliação de genotoxicidade pelo Teste do Cometa. Na necropsia, amostras de fígado foram retiradas para o Teste do Cometa, avaliação histopatológica e morfométrica análise imunoistoquímica, determinação do perfil antioxidante e western blot. Na 12ª semana, a deficiência de zinco reduziu a expressão de Nrf2 e os níveis de glutationa reduzida (GSH) e aumentou a expressão de NFκB e p53 e número de lesões pré- neoplásicas por cm². Já na 24ª semana, a deficiência reduziu os níveis de ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre