Resumo: A reabsorcao do osso alveolar e uma das principais caracteristicas associadas a progressao da doenca periodontal. Apesar da enorme complexidade da microbiota envolvida, considera-se que bacterias Gram-negativas tenham um papel relevante em sua etiopatogenese. Um dos fatores de virulencia destes microrganismos e representado por um componente de sua parede externa denominado lipopolissacarideo (LPS). A presenca de LPS na proximidade dos tecidos periodontais e capaz de induzir a producao de diversos mediadores inflamatorios que levam a degradacao tanto do tecido conjuntivo quanto osseo. Atualmente acredita-se que a interacao do ligante do receptor-ativador do fator nuclear kappa-B (RANKL) com seu receptor (RANK) presente em precursores hematopoieticos e necessaria e suficiente para a inducao da diferenciacao de osteoclastos. Por outro lado, a ligacao de RANKL com seu falso-receptor, denominado osteoprotegerina (OPG), reduz sua biodisponibilidade e inibe, desta forma, a osteoclastogenese. Assim, a razao da expressao de RANKL e OPG e considerada como o principal determinante do "turnover" do tecido osseo. A producao de RANKL e OPG depende das vias de sinalizacao ativadas, as quais sao influenciadas pela natureza do estimulo extracelular. Atualmente, a familia de receptores NLRs (nod-like receptors) foi identificada como receptor intracelular para componentes bacterianos e agentes moduladores de diferentes vias de sinalizacao. Considerando a relevancia do LPS bacteriano na patogenese da doenca periodontal, o papel do RANKL no processo de reabsorcao ossea e a possivel implicacao das proteinas Nod na transducao de sinais regulando a expressao de RANKL, o objetivo geral deste projeto foi estudar os mecanismos de regulacao da expressao de RANKL induzido por LPS bacteriano em celulas relevantes do periodonto (macrofagos, osteoblastos e fibroblastos). Os objetivos especificos propostos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bone resorption is one of the major characteristics of destructive periodontal disease. Despite the great number of different bacterial species in the dental biofilm, Gramnegative microorganisms were demonstrated to have a very important role on periodontal disease pathogenesis. Lipopolysaccharide (LPS) is a bacterial cell wall component, which is acknowledged as one of the main virulence factors of these microorganisms. The mere presence of LPS in proximity with the periodontal tissues initiates the expression and production of inflammatory mediators and other cytokines which can culminate in degradation of both soft and hard tissues. It is currently accepted that the interaction between receptor-activator of nuclear factor kappa-B ligand (RANKL) and its receptor (RANK) is both necessary and sufficient to induce osteoclast differentiation and activation. However, RANKL can interact with its soluble decoy receptor osteoprotegerin (OPG) inhibiting osteoclastogenesis by decreasing the bioavailability of RANKL. Production of RANKL/OPG is the result of the signaling pathways activated by external stimuli. Recently, the NLR (nod-like receptors) family was identified as cytosolic receptors for bacterial components and also, as capable of modulating different signaling pathways. Considering the relevance of LPS and RANKL in bone resorption and the possible implication of Nod proteins in signal transduction regulating RANKL expression, the aim of this study was to evaluate the influence of different intracellular signaling pathways on the regulation of RANKL expression induced by LPS in relevant cells of the periodontium (macrophages, osteoblasts and fibroblasts). The specific objectives proposed were to determine after LPS and interleukin-1 beta stimulation the role of MyD88-dependent and independent signaling pathways, Nod1 and Nod2 on the expression of RANKL, OPG, IL-10 and IFN-beta... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Carlos Rossa Junior / Coorientador: Joni Augusto Cirelli / Banca: José Augusto Cezar Sampaio / Banca: Luis Carlos Spolidório / Banca: Luiz Carlos de Mattos / Banca: Cleni Mara Marzocchi Machado / Doutor

Submitted by Renata Fontoura (comunicaicc@fiocruz.br) on 2014-11-26T15:13:12Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Claudia Maria do Nascimento Moreira - 01.pdf: 4994656 bytes, checksum: c9acb588dbfcaa318394a1f54b594a32 (MD5) Dissertação Claudia Maria do Nascimento Moreira - 01.pdf: 4994656 bytes, checksum: c9acb588dbfcaa318394a1f54b594a32 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-26T15:15:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Claudia Maria do Nascimento Moreira - 01.pdf: 4994656 bytes, checksum: c9acb588dbfcaa318394a1f54b594a32 (MD5) Dissertação Claudia Maria do Nascimento Moreira - 01.pdf: 4994656 bytes, checksum: c9acb588dbfcaa318394a1f54b594a32 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil / O complexo adaptador 1 (AP-1) atua na formação do revestimento de vesículas com clatrina na rede trans-Golgi em células eucariontes. O conhecimento sobre o complexo AP-1 em tripanosomatídeos é escasso, mas já foi demonstrada sua importância na infectividade de Leishmania mexicana em macrófagos, assim como na viabilidade de Trypanosoma brucei. O Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado pertencente à família Trypanosomatidae, sendo o agente etiológico da doença de Chagas, a qual afeta milhões de pessoas no mundo. Neste contexto, esta dissertação teve como objetivo identificar os genes que codificam as quatro subunidades do complexo AP-1 no genoma de T. cruzi, analisar sua expressão e localização subcelular nesse parasita. Busca em banco de dados genômicos permitiu identificar as sequências codificantes para todas as subunidades do complexo AP-1, sendo obtidos os seguintes números de acesso gênicos: AP1-γ: XP_818958.1; AP1-β: XP_820334.1; AP1-µ:XP_818899.1; AP1-σ: XP_804127.1. Foram produzidos anticorpos em camundongos contra as proteínas recombinantes de todas as subunidades do complexo AP-1. Análise da especificidade dos anticorpos foi realizada por western blot e a localização subcelular das proteínas foi feita por imunofluorescência em microscopia de epifluorescência e microscopia confocal a laser. Resultados negativos foram obtidos com o antisoro contra a subunidade AP1-σ. Anticorpos obtidos contra as subunidades AP1-µ (policlonal) e AP1-β (monoclonal) reconheceram polipetídeos de tamanho compatível ao peso molecular da proteína endógena em extratos de formas epimastigotas, porém não reconheceram as proteínas por imunofluorescência. O antisoro policlonal obtido contra a subunidade AP1-γ reconheceu em extratos de diferentes formas evolutivas de T. cruzi (epimastigotas, tripomastigotas e amastigotas) um polipeptídeo de peso molecular compatível com o predito em banco de dados (~90 kDa). Imunolocalização demonstrou reação positiva pontual em região compatível com a do complexo de Golgi deste protozoário: entre núcleo e cinetoplasto de formas tripomastigotas e entre cinetoplasto e bolsa flagelar de epimastigotas e amastigotas. Colocalização da AP1-γ com a GTPase Rab7 (marcador de complexo de Golgi em T. cruzi) confirmou a localização desta subunidade no complexo de Golgi desse parasita. Nossos resultados demonstram que as subunidades do complexo AP-1 são conservadas e expressas em T. cruzi e que pelo menos a subunidade AP1-γ possui localização celular em complexo de Golgi, similar ao que é descrito em outras células eucariontes. / The adaptor complex 1 (AP-1) acts in the formation of clathrin-coated vesicles at the transGolgi network of eukaryotic cells. Knowledge about the AP-1 complex in trypanosomatids is scarce, but it has been already demonstrated its importance in the infectivity of Leishmania mexicana in macrophages, as well as the viability of Trypanosoma brucei. Trypanosoma cruzi is a protozoan flagellate that belongs to the family Trypanosomatidae, being the etiologic agent of Chagas disease, which affects millions of people worldwide. In this context, this study aimed to identify the genes encoding the four subunits of the AP-1 complex in the genome of T. cruzi and analyze their expression and subcellular localization in this parasite. Search in genomic database identified gene sequences coding for all subunits of the AP-1 complex, the following accession numbers being obtained: AP1-γ: XP_818958.1; AP1-β: XP_820334.1; AP1-µ: XP_818899 .1; AP1-σ: XP_804127.1. Antibodies were produced in mice against recombinant proteins of all subunits of the AP-1 complex. Analysis of the specificity of the antibodies was performed by western blot and subcellular localization of the proteins by immunofluorescence was done by epifluorescence microscopy and confocal laser microscopy. Negative results were obtained with the antiserum against subunit AP1-σ. Antibodies raised against the AP1-µ (polyclonal) and AP1-β (monoclonal) subunits recognized polypeptides with size compatible to the molecular weight of the endogenous protein in extracts from epimastigotes, but no proteins could be localized by fluorescence microscopy. The antiserum polyclonal obtained against the AP1-γ subunit recognized a polypeptide in extracts of different evolutionary forms of T. cruzi (epimastigotes, trypomastigotes and amastigotes) of molecular weight consistent with that predicted in database (~90 kDa). Immunolocalization showed punctual positive reaction in the region compatible with the Golgi complex of this protozoan: between nucleus and kinetoplast of trypomastigotes and between kinetoplast and flagellar pocket of epimastigotes and amastigotes. Colocalization of AP1-γ with the GTPase Rab7 (a marker of the Golgi complex in T. cruzi) confirmed the location of this subunit in the Golgi apparatus of this parasite. Our results demonstrate that the subunits of the AP-1 complex are conserved and expressed in T. cruzi and that at least the AP1-γ subunit has cellular localization in the Golgi apparatus, similar to that described in other eukaryotic cells.

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-07-03T12:46:30Z No. of bitstreams: 1 AlanKlingerSousaAlves_DISSERT.pdf: 7308597 bytes, checksum: 93db5dd7b53fe19393d357597c4c99c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-07-10T13:32:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AlanKlingerSousaAlves_DISSERT.pdf: 7308597 bytes, checksum: 93db5dd7b53fe19393d357597c4c99c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-10T13:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AlanKlingerSousaAlves_DISSERT.pdf: 7308597 bytes, checksum: 93db5dd7b53fe19393d357597c4c99c8 (MD5) Previous issue date: 2018-04-16 / A terapia ocupacional e a fisioterapia vêm ganhando nos últimos anos apoio da tecnologia aplicada em games. Dispositivos para VR tem sido utilizados juntamente com exergames para motivar o paciente a frequentar a terapia, entretendo-o ao mesmo tempo que realiza a terapia. Porém os consoles ainda não apresentam sensores capazes de identificar todos os movimentos necessários para os vários tipos de terapia, por exemplo, o Wii não é capaz de identificar se a mão do jogador estava fechada ou não. Dessa forma o TEAM (Laboratório de Tecnologias Educacionais, Assistivas e Multimídia), iniciou o desenvolvimento de tecnologias e exergames para aplicação em terapia física e ocupacional. Durante o desenvolvimento de novos dispositivos de interação, foi observado que a cada novo hardware era necessário modificar o código-fonte dos games já produzidos ou criar um novo game para tal dispositivo. Esse problema caracteriza um forte acoplamento entre o hardware e os exergames, bem como retrabalho, consequentemente havia dispositivos completamente desenvolvidos, mas que não era possível utilizá-los com um exergame. Logo notou-se a necessidade de uma ferramenta para intermediar tais artefatos. Este trabalho apresenta o TeamBridge, um middleware que tem por finalidade intermediar a comunicação entre dispositivos de interação para VR e exergames com foco em terapia física e ocupacional. Este middleware foi testado com um game comercial, provando que não há necessidade de modificação do código-fonte. Ele também passou por testes de performance, a fim de garantir que a experiência do jogador não seja comprometida. Ao final a ferramenta foi disponibilizada no GitHub. / Occupational therapy and physiotherapy have been gaining support in the last few years of applied technology in games. VR devices have been used together with exergames to motivate the patient to attend the therapy, entertaining him at the same time as performing the therapy. But the consoles still do not have sensors capable of identifying all the movements required for various types of therapy, for example, the Wii can’t identify whether the player’s hand was closed or not. In this way the TEAM (Laboratory of Educational, Assistive and Multimedia Technologies) started the development of technologies and exergames for application in occupational therapy. During the development of new input devices, it was observed that with each new hardware it was necessary to modify the source code of the games already produced or to create a new game for such a device. This problem characterizes a strong coupling between hardware and exergames, as well as rework, consequently there were fully developed devices, but it was not possible to use them with an exergame. Soon the need for a tool to intermediate these artifacts was noted. This paper presents our middleware that aims to intermediate communication between VR input devices and exergames with a focus on occupational therapy. This middleware was tested with a commercial game, proving that there is no need to modify the source code. He also underwent performance testing to ensure that the player’s experience is not compromised.

A cardiomiopatia chagásica crônica é a consequência mais grave da Doença de Chagas, quadro infeccioso humano causado pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Uma vez que os cardiomiocitos podem ser invadidos pelo T. cruzi, é nosso interesse averiguar se esta população estrutural reconhece o parasita in vivo através dos TLRs (Toll Like receptors). Visto que a maioria dos TLRs sinaliza através da molécula adaptadora MyD88, no presente trabalho temos estudado a participação deste elemento transdutor. Para isto fomos examinar a infecção pelo T. cruzi em camundongos F2 (Mer / MyD88flox+/+), modelo animal no qual o tratamento com a droga Tamoxifeno deve eliminar a molécula MyD88 exclusivamente nos cardiomiócitos. Resultados: em um estudo prévio, constatamos que cardiomiócitos tumorais murinos HL-1, em repouso ou após infecção pelo T. cruzi, transcrevem a molécula MyD88. A seguir, validamos o modelo experimental in vivo, ao mostrar que o tratamento com tamoxifeno dos animais F2 resulta na diminuição de MyD88 no coração, mas não no baço. Ainda, constatamos que a transcrição de MyD88 é mais intensa na aurícula do que no ventrículo, sendo igualmente abolida dos animais F2 pelo tratamento com tamoxifeno. Por outro lado, verificamos que o tamoxifeno determina um aumento da parasitemia em ambos os animais F2 e controle (MerCreMer+/+), não se observando diferenças significativamente entre estes. Finalmente, estudos preliminares mostraram que a eliminação de MyD88 nos cardiomiócitos dos animais F2 não altera significativamente o quadro de patologia (parasitismo e infiltração leucocitária) aos 10 ou 28 dias de infecção pelo T. cruzi, quando comparado ao de animais controle (MerCreMer+/+) igualmente tratados com tamoxifeno e infectados. / Chronic Chagas cardiomyopathy is the most serious consequence of Chagas Disease, caused by Trypanosoma cruzi. Cardiomyocytes are invaded by T. cruzi, it is our interest to see if this structural population in vivo recognizes the parasite through TLRs. Since most TLRs signal through MyD88, we studied in vivo participation of Myd88 in cardiomyocyte response. Treatment with tamoxifen (Tam) eliminate the MyD88 molecule exclusively from cardiomyocytes in F2 mice, which we used to understand its role on T. cruzi infection. Results: HL-1 cells, a murine cardiomyocyte tumor line, in infection with T. cruzi, transcribe the MyD88 molecule. Transcription of MyD88 is more intense in the atria than in ventricle. Tam treatment of F2 mice eliminates the MyD88 at the heart completely, but not at spleen. Tam caused increased parasitaemia, no differences were observed in the parasitaemia curve of infected F2 and MerCreMer+/+ (control) mice. Finally, MyD88 elimination in cardiomyocytes of F2 mice does not alters the pathology frame at days 10 and 28 post infection.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-06Bitstream added on 2014-06-13T19:44:15Z : No. of bitstreams: 1 leite_frm_dr_arafo.pdf: 1468835 bytes, checksum: e5bbe1112c569efdf39842ed3eb0c03b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A reabsorcao do osso alveolar e uma das principais caracteristicas associadas a progressao da doenca periodontal. Apesar da enorme complexidade da microbiota envolvida, considera-se que bacterias Gram-negativas tenham um papel relevante em sua etiopatogenese. Um dos fatores de virulencia destes microrganismos e representado por um componente de sua parede externa denominado lipopolissacarideo (LPS). A presenca de LPS na proximidade dos tecidos periodontais e capaz de induzir a producao de diversos mediadores inflamatorios que levam a degradacao tanto do tecido conjuntivo quanto osseo. Atualmente acredita-se que a interacao do ligante do receptor-ativador do fator nuclear kappa-B (RANKL) com seu receptor (RANK) presente em precursores hematopoieticos e necessaria e suficiente para a inducao da diferenciacao de osteoclastos. Por outro lado, a ligacao de RANKL com seu falso-receptor, denominado osteoprotegerina (OPG), reduz sua biodisponibilidade e inibe, desta forma, a osteoclastogenese. Assim, a razao da expressao de RANKL e OPG e considerada como o principal determinante do “turnover” do tecido osseo. A producao de RANKL e OPG depende das vias de sinalizacao ativadas, as quais sao influenciadas pela natureza do estimulo extracelular. Atualmente, a familia de receptores NLRs (nod-like receptors) foi identificada como receptor intracelular para componentes bacterianos e agentes moduladores de diferentes vias de sinalizacao. Considerando a relevancia do LPS bacteriano na patogenese da doenca periodontal, o papel do RANKL no processo de reabsorcao ossea e a possivel implicacao das proteinas Nod na transducao de sinais regulando a expressao de RANKL, o objetivo geral deste projeto foi estudar os mecanismos de regulacao da expressao de RANKL induzido por LPS bacteriano em celulas relevantes do periodonto (macrofagos, osteoblastos e fibroblastos). Os objetivos especificos propostos... / Bone resorption is one of the major characteristics of destructive periodontal disease. Despite the great number of different bacterial species in the dental biofilm, Gramnegative microorganisms were demonstrated to have a very important role on periodontal disease pathogenesis. Lipopolysaccharide (LPS) is a bacterial cell wall component, which is acknowledged as one of the main virulence factors of these microorganisms. The mere presence of LPS in proximity with the periodontal tissues initiates the expression and production of inflammatory mediators and other cytokines which can culminate in degradation of both soft and hard tissues. It is currently accepted that the interaction between receptor-activator of nuclear factor kappa-B ligand (RANKL) and its receptor (RANK) is both necessary and sufficient to induce osteoclast differentiation and activation. However, RANKL can interact with its soluble decoy receptor osteoprotegerin (OPG) inhibiting osteoclastogenesis by decreasing the bioavailability of RANKL. Production of RANKL/OPG is the result of the signaling pathways activated by external stimuli. Recently, the NLR (nod-like receptors) family was identified as cytosolic receptors for bacterial components and also, as capable of modulating different signaling pathways. Considering the relevance of LPS and RANKL in bone resorption and the possible implication of Nod proteins in signal transduction regulating RANKL expression, the aim of this study was to evaluate the influence of different intracellular signaling pathways on the regulation of RANKL expression induced by LPS in relevant cells of the periodontium (macrophages, osteoblasts and fibroblasts). The specific objectives proposed were to determine after LPS and interleukin-1 beta stimulation the role of MyD88-dependent and independent signaling pathways, Nod1 and Nod2 on the expression of RANKL, OPG, IL-10 and IFN-beta... (Complete abstract click electronic access below)

A cardiomiopatia chagásica crônica é a consequência mais grave da Doença de Chagas, quadro infeccioso humano causado pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Uma vez que os cardiomiocitos podem ser invadidos pelo T. cruzi, é nosso interesse averiguar se esta população estrutural reconhece o parasita in vivo através dos TLRs (Toll Like receptors). Visto que a maioria dos TLRs sinaliza através da molécula adaptadora MyD88, no presente trabalho temos estudado a participação deste elemento transdutor. Para isto fomos examinar a infecção pelo T. cruzi em camundongos F2 (Mer / MyD88flox+/+), modelo animal no qual o tratamento com a droga Tamoxifeno deve eliminar a molécula MyD88 exclusivamente nos cardiomiócitos. Resultados: em um estudo prévio, constatamos que cardiomiócitos tumorais murinos HL-1, em repouso ou após infecção pelo T. cruzi, transcrevem a molécula MyD88. A seguir, validamos o modelo experimental in vivo, ao mostrar que o tratamento com tamoxifeno dos animais F2 resulta na diminuição de MyD88 no coração, mas não no baço. Ainda, constatamos que a transcrição de MyD88 é mais intensa na aurícula do que no ventrículo, sendo igualmente abolida dos animais F2 pelo tratamento com tamoxifeno. Por outro lado, verificamos que o tamoxifeno determina um aumento da parasitemia em ambos os animais F2 e controle (MerCreMer+/+), não se observando diferenças significativamente entre estes. Finalmente, estudos preliminares mostraram que a eliminação de MyD88 nos cardiomiócitos dos animais F2 não altera significativamente o quadro de patologia (parasitismo e infiltração leucocitária) aos 10 ou 28 dias de infecção pelo T. cruzi, quando comparado ao de animais controle (MerCreMer+/+) igualmente tratados com tamoxifeno e infectados. / Chronic Chagas cardiomyopathy is the most serious consequence of Chagas Disease, caused by Trypanosoma cruzi. Cardiomyocytes are invaded by T. cruzi, it is our interest to see if this structural population in vivo recognizes the parasite through TLRs. Since most TLRs signal through MyD88, we studied in vivo participation of Myd88 in cardiomyocyte response. Treatment with tamoxifen (Tam) eliminate the MyD88 molecule exclusively from cardiomyocytes in F2 mice, which we used to understand its role on T. cruzi infection. Results: HL-1 cells, a murine cardiomyocyte tumor line, in infection with T. cruzi, transcribe the MyD88 molecule. Transcription of MyD88 is more intense in the atria than in ventricle. Tam treatment of F2 mice eliminates the MyD88 at the heart completely, but not at spleen. Tam caused increased parasitaemia, no differences were observed in the parasitaemia curve of infected F2 and MerCreMer+/+ (control) mice. Finally, MyD88 elimination in cardiomyocytes of F2 mice does not alters the pathology frame at days 10 and 28 post infection.