Durante el presente siglo, el cáncer ha sido considerado una de las causas más importantes de muerte en todo el mundo; éste ocurre como consecuencia de una desregulación del crecimiento celular normal, usualmente por defectos en los mecanismos de señalización. Las proteínas Ras fueron algunas de las primeras proteínas identificadas que poseen la habilidad de regular el crecimiento celular. Son interruptores moleculares capaces de activar a otras proteínas cuesta abajo en la vía de señalización encabezada por los RTKs, llevando a la proliferación celular. Normalmente, las formas activas e inactivas de la proteína se encuentran, en equilibrio en la célula de manera que mantengan el crecimiento celular normal, sin embargo, en su forma mutada, la actividad GTPásica de la proteína se ve alterada, previniendo que las proteínas GAPs promuevan la hidrólisis del GTP por Ras y por tanto causando que Ras se acumule en su forma activa, unida a GTP. Los mutantes oncogénicos de las proteínas Ras han sido reportados en alrededor de 25 al 30% de los tumores humanos, encontrándose sobre expresada en carcinomas de estómago, cuello uterino, pulmón, células renales, entre otras. En el Perú, una de las neoplasias más frecuentes es la de estómago, llegando a ocupar el segundo lugar en incidencia en Lima Metropolitana, siendo superada únicamente por el cáncer de mama femenino, por lo que resulta importante conocer los mecanismos biológicos que ocurren en dicha neoplasia. Considerando que los trabajos a nivel proteómico son escasos, en la presente investigación se evaluó la expresión de la proteína Hras p21 por métodos inmunohistoquímicos en biopsias de carcinoma y adenocarcinoma gástrico, encontrando inmunorreacción positiva en el 77,78% y 85,71%, respectivamente, distribuida tanto en citoplasma como en membrana plasmática, concluyéndose que la proteína Hras p21 está sobre expresada en cáncer gástrico, presenta un doble perfil de expresión en tejido tumoral, es un factor etiológico importante en el desarrollo de la carcinogénesis gástrica, y podría servir como un marcador tumoral relacionado a cáncer gástrico. / During the present century, cancer has been considered one of the most important reasons of death around the world; it occurs when normal growth regulation breaks down, usually because of defects in these signalling mechanisms. The RAS proteins were some of the first proteins identified that possessed the ability to regulate cell growth. They are molecular switches, which act downstream from most RTKs, leading to cellular proliferation. In the resting cells, the active and inactive forms are in equilibrium, in order to maintain the normal cell growth, however, the Ras mutation compromise its GTPase activity of, preventing GAPs from promoting hydrolysis of GTP on RAS and therefore causing RAS to accumulate in the GTP-bound, active form. Oncogenic mutants of Ras proteins have been found in 25 - 30% of the human tumours. Ras proteins are over expressed in many tumours, such as stomach carcinoma, carcinomas of the uterine cervix, lung carcinoma, renal cells carcinoma. In Perú, one of the most frequents cancers is gastric cancer, it occupies the second place in incidence in Metropolitan Lima after breast cancer; for this reason it’s important to know the biological mechanisms that occur in this disease. Because there are not many research works at the proteomic level, in this investigation, it has been evaluated the expression of Hras p21 protein in gastric biopsy (carcinomas and adenocarcinomas) using inmunohistochemistry, finding a positive staining in 77.78% and 85.71% respectively, localized in cytoplasm and plasma membrane, concluding that Hras p21 is over expressed in gastric cancer, it shows a double expression profile in malignant tissue, and it’s an important ethiological factor for the development of a gastric tumour, and it may be an useful tumour marker related to gastric cancer.

Thesis (M. Phil.)--University of Hong Kong, 2002. / Includes bibliographical references (leaves 153-164).

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Thesis (M.S.)--State University of New York at Binghamton, Department of Computer Science, Thomas J. Watson School of Engineering and Applied Science, 2006. / Includes bibliographical references.

Introdução: O câncer do esôfago tem média a alta incidência na região sul do Brasil e em regiões vizinhas no Uruguai e Argentina. Os tipos histológicos mais freqüentes são o carcinoma epidermóide e o adenocarcinoma numa proporção de 4:1. Essa proporção, também presente nos Estados Unidos da América e na Europa até a década de 1960 tem mudado dramaticamente nos últimos 30 anos pela crescente incidência do adenocarcinoma. Esse fato tem sido associado à epidemia de obesidade e doença do refluxo gastresofágico naquelas áreas geográficas. Um aumento do adenocarcinoma do esôfago é desconhecido no Brasil. Objetivos: Determinar a prevalência do adenocarcinoma do esôfago durante 10 anos em hospital universitário, referência do sistema único de saúde no sul do Brasil, e compará-la aos dados do período imediatamente anterior na mesma instituição. Métodos: Prontuários consecutivos de pacientes submetidos à endoscopia digestiva alta entre 1997 e 2006, relatando “ câncer esofágico “ ou “ suspeita para câncer esofágico” foram revisados e os laudos histopatológicos das biópsias endoscópicas revistos. Todos os laudos descrevendo neoplasia foram incluídos e classificados nas categorias “adenocarcinoma”, “carcinoma epidermóide” ou “outras neoplasias”. Os resultados foram comparados aos dados observados em período anterior (1987-1996) pelo teste qui-quadrado. Resultados: Houve confirmação de neoplasia em 509 pacientes na presente série histórica. Adenocarcinoma foi identificado em 90 (17,7%), carcinoma epidermóide em 390 (76,6%) e “outras neoplasias” em 29 (5,7%) com uma distribuição anual estável. A prevalência de adenocarcinoma (17,7%) foi mais elevada na presente série quando comparada à série anterior (15,2%), mas não houve diferença estatisticamente significativa entre as duas séries (p= 0, 229). Conclusões: A prevalência do adenocarcinoma aumentou quando comparada com o período anterior, mas os resultados não atingiram significância estatística. Esses dados podem representar um aumento do adenocarcinoma do esôfago, mas estudos populacionais, com maior amostragem, são recomendados. / Introduction: Esophageal cancer has a medium to high incidence in the geographic areas of southern Brazil and neighboring Uruguay and Argentina. The main histological types are squamous cell carcinoma and adenocarcinoma in a proportion of 4:1. This proportion, also reported in the United States of America and Europe in the 1960s has been dramatically changing over the past 30 years due to adenocarcinoma growing incidence, most likely associated to obesity epidemics and gastroesophageal reflux disease. Such a growing incidence in Brazil is unknown. Objectives: Determine adenocarcinoma prevalence during a consecutive 10 years period in a single university hospital referral center in southern Brazil and compare it to data from a similar past study in the same hospital. Methods: Consecutive records from patients that underwent upper digestive endoscopy between 1997 and 2006 reporting “esophageal cancer” or “suspicious for esophageal cancer” were surveyed and histopathology reports from endoscopic biopsies reviewed. All reports describing neoplasia were included and classified either as “adenocarcinoma”, “squamous cell carcinoma” or “other neoplasia” and results compared to the data observed in the period 1987-1996 using a qui-square test. Results: Neoplasia were confirmed in 509 patients in the presents series. Adenocarcinoma was found in 90 (17,7%) squamous cell carcinoma in 390 (76,6%) and “other neoplasias” in 29 (5,7%) with a stable yearly distribution. Adenocarcinoma prevalence (17,7%) was higher in the present series when compared to the previous one (15,2%) but there was no statistical difference (p= 0, 229). Conclusions: In this series from a single institution in southern Brazil adenocarcinoma prevalence increased when comparing to a previous series, but results did not reach statistical significance. This may represent a trend towards an increasing frequency of adenocarcinoma of the esophagus, but populational studies with larger sample are recommended.

LIMA, D. J. B. Estudo da atividade anticâncer da marinobufagenina, um bufadienolídeo extraído de anfíbios da espécie Rhinella marina. 2016. 92 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Departamento de Fisiologia e Farmacologia, Universidade Federal do Ceará, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-03-29T11:16:23Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_djblima.pdf: 1352205 bytes, checksum: e38247c17ab1d644502df66d14a1b12c (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-03-29T11:16:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_djblima.pdf: 1352205 bytes, checksum: e38247c17ab1d644502df66d14a1b12c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T11:16:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_djblima.pdf: 1352205 bytes, checksum: e38247c17ab1d644502df66d14a1b12c (MD5) Previous issue date: 2016-01-22 / Cancer is a complex genetic disease, considered one of the leading causes of death in the world. The use of substances derived from natural products has grown over the years and is an important source for the therapeutic arsenal. Bufadienolides, a group of cardioactive steroids with a 24 carbon structures are commonly found in glands of toads from Bufonidae family. These molecules a have wide range of biological activities, including anti-cancer effects. Bufadienolides have shown anti-proliferative effect on various human cancer cell lines by inducing death and cell cycle arrest. Marinobufagenin, a bufodienolide extracted from Rhinella marina toad especies was chosen to determine its standard cytotoxic and mechanism of action. Despite showing high cytotoxicity in human tumor cells, the sample showed no cytotoxicity to murine strains. In vitro experiments were performed using the PC3 prostate adenocarcinoma lineage. Cells were incubated with different concentrations of marinobufagenin (0.37, 0.75 and 1.5 mM) for 24 hours. The viability of PC3 cells was evaluated by flow cytometry, which showed that the number of cells reduced when incubated with the lowest concentration (0.37 mM) tested. However, no reduction in the percentage of cells with intact membranes was seen. The analysis of phosphatidylserine externalization by flow cytometry also revealed the increase of apoptotic cells at concentrations 0.75 and 1.5 uM. The flow citometry analysis of the nuclear contents, showed the accumulation of cells in G2 / M phase in all tested concentrations. Marinobufagenin did not damage the DNA in either PC3 or PBMC. In addiction, morphological changes were observed, including cytoplasmic shrinkage and perinuclear halo formation. Moreover, modifications on the pattern of cells adesion were also observed in cells treated with the bufadienolide. Despite lack of further studies to confirm its anticancer mechanisms, morphological changes occurred, the cycle-specific behavior and the lack of genotoxicity of Marinobufagenina make it an interesting molecule in the search for new drugs with antitumor potential. / O câncer é uma complexa doença de origem genética, considerada uma das principais causas de morte por doença no mundo. A utilização de substâncias derivadas de produtos naturais tem crescido com o passar dos anos, constituindo uma importante fonte no arsenal terapêutico. Os bufadienolídeos são esteróides cardioativos de 24 carbonos, isolados de extratos de glândulas de sapos da família Bufonidae. Essas moléculas possuem grande variedade de atividades biológicas, incluindo atividade anticâncer. Os bufadienolídeos tem demonstrado comportamento antiproliferativo em várias linhagens de células cancerígenas humanas por induzir morte e parada do ciclo celular. A marinobufagenina, um bufadienolídeo extraído do anfíbio Rhinella marina, foi escolhida para determinamos o seu padrão citotóxico e mecanismo de ação. Apesar de demonstrar alta citotoxicidade em células tumorais humanas, a amostra não apresentou citotoxicidade para linhagens murinas. Experimentos in vitro foram realizados utilizando-se a linhagem de adenocarcinoma de próstata PC3. As células foram tratadas com diferentes concentrações da amostra marinobufagenina (0,37, 0,75 e 1,5 μM) por 24 horas. A viabilidade das células PC3 foi avaliada por citometria de fluxo, mostrou que o número de células reduziu a partir da menor concentração (0,37 μM) testada sem, contudo, haver redução na porcentagem de células com membrana íntegra. A análise da externalização da fosfatidilserina por citometria de fluxo revelou aumento de células com padrão apoptótico nas concentrações 0,75 e 1,5 μM. Já a análise do conteúdo nuclear, nos mostrou acúmulo de células na fase G2/M em todas as concentrações testadas. A marinobufagenina não foi capaz de causar danos ao DNA de PC3 e de CMSP. Observou-se, ainda, uma série de alterações morfológicas e no citoesqueleto de células tratadas com o bufadienolídeo, a exemplo da acentuada retração citoplasmática e formação de halos perinucleares. Além disso, modificações do padrão adesivo das células também foram observadas em células tratadas com o bufadienolídeo. Apesar de necessitar de mais estudos para delinear seu mecanismo de ação anticâncer; as modificações morfológicas, o comportamento ciclo-específico e a ausência de genotoxicidade tornam a Marinobufagenina uma molécula interessante na prospecção de novos fármacos com potencial antitumoral.

Resumo não disponível

O adenocarcinoma ductal pancreático (ADP) é uma doença rara, mas possui uma taxa de incidência muito próxima à taxa de letalidade. Parte da alta mortalidade do ADP se deve ao diagnóstico difícil (muitas vezes somente possível com análise de tecido pancreático) e tardio da doença, que geralmente acontece com o tumor já em estágio avançado. Assim, a descoberta de biomarcadores não-invasivos surge como uma possibilidade de diagnóstico mais seguro e, de preferência, precoce. Recentemente descobriuse que os microRNAS (miRNAs - pequenos RNAs não-codificantes, envolvidos na iniciação e na manutenção de tumores, incluindo o ADP) são estáveis em amostras circulantes, e a diferença em seus níveis de expressão pode discriminar com acurácia a presença ou ausência de determinadas doenças. Neste estudo, nós avaliamos a expressão de seis miRNAs (miR-21, -34a, -155, -196a, -200b e -376a) escolhidos de acordo com dados prévios da literatura, em amostras de soro e saliva de pacientes com e sem ADP, e também em tecido tumoral e não-tumoral de pacientes com ADP. Esta avaliação comparativa teve como objetivo verificar a presença de biomarcadores de diagnóstico, e possivelmente de prognóstico, neste perfil. Os níveis de expressão foram mensurados através de quantificação relativa, por PCR quantitativo em tempo real. Embora os níveis de expressão tenham se mostrado elevados em todas as amostras de tecido tumoral em relação ao tecido não-tumoral, esta diferença não foi significativa. Isso pode ser explicado pelo pequeno tamanho amostral, pela heterogeneidade tumoral e tecidual e pela ampla variabilidade de expressão dos miRNAs. Em amostras de soro, miR-21 e miR-34a foram significativamente mais expressos em pacientes com ADP e ambos foram capazes de discriminar pacientes com e sem doença com sensibilidade e especificidades clinicamente aceitáveis. Nosso estudo mostrou ainda que existe uma correlação forte e positiva entre os níveis de expressão destes dois miRNAs em amostras de soro e tecido, embora o mecanismo responsável por esta correlação seja desconhecido. A ausência de correlação de miR-21 e de miR-34a, quando analisados individualmente em amostras de soro e tecido pareadas, sugere que diferentes mecanismos regulam a expressão destes miRNAs em diferentes tecidos. Nas amostras de saliva, de modo geral, os níveis de miRNA foram muito baixos, e mesmo os miRNA detectáveis não apresentaram valores de expressão significativamente diferentes entre casos e controles. Tais achados sugerem que os miRNAs escolhidos neste estudo não são biomarcadores salivares adequados para diagnóstico, embora seja necessário uma confirmação destes dados em uma série maior de casos. / Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a rare disease, whose incidence rates are very close to mortality rates. Part of the high mortality of PDAC is due to its difficult (often only possible with pancreatic tissue analysis) and late diagnosis, when disease is at an advanced stage. Thus, the discovery of noninvasive diagnostic biomarkers emerges as a possibility to perform a safe diagnosis, preferably early in the disease course. Recently, microRNAs (miRNAs - small non-coding RNAs involved in tumors initiation and maintenance, including PDAC) were discovered as stable molecules in circulating samples. Several studies have shown that the difference in their expression levels between cases and controls can accurately discriminate the presence or absence of certain diseases. In this study, we evaluated the expression levels of six miRNAs (miR-21, -34a, -155, -196a, -200b and -376a), chosen according to previous literature data, in serum and saliva samples from patients with and without PDAC, and also in non-tumoral and tumoral tissue. The aim of our study was to investigate the presence of diagnostic and/or prognostic biomarkers. Expression levels were measured by relative quantification using real-time quantitative PCR. Although expression levels were increased in tumor tissues, this difference did not reach significance. This can be explained by the small sample size and the heterogeneity of tumor and tissue, beyond the already described wide variability in miRNAs expression levels. In serum, miR-21 and miR-34a were significantly more expressed in samples from patients with ADP and both were able to distinguish patients with and without disease with clinically acceptable sensitivity and specificity. Our study also showed that there is a strong positive correlation between the expression levels of these two miRNAs in serum and tissue. However, the mechanism related to this correlation remains unknown. The absence of correlation between each miR-21 and miR-34a individually, when matched serum and tissue samples were compared, indicates that different mechanisms regulate the expression of these miRNAs in different body compartments. In saliva samples, generally, miRNA levels were very low, and no difference in miRNA expression levels was seen between cases and controls. These findings suggest that the chosen miRNAs are not adequate as diagnostic biomarkers in saliva, although these findings require confirmation in a larger series of cases.