As aflatoxinas são compostos carcinogênicos produzidos por fungos do gênero Aspergillus, que contaminam alimentos antes e após o processamento, causando riscos à saúde humana e perdas econômicas na produção animal. A exposição à aflatoxina B1 (AFB1), principal metabólito com maior toxicidade produzido pelo fungo, ocorre predominantemente através da ingestão de alimentos contaminados, sobretudo milho, amendoim e derivados. Após absorção e biotransformação da AFB1 por enzimas hepáticas microssomais, a toxina biotransformada liga-se com macromoléculas originando adutos tais como AFB1-lisina. A AFB1-lisina indica a dose interna de AFB1 que foi efetivamente absorvida através de alimentos contaminados. Os objetivos deste estudo foram determinar a concentração dos níveis séricos de AFB1-lisina em frangos de corte e suínos, e verificar a correlação entre os parâmetros bioquímicos séricos (aspartato aminotransferase [AST] e gama glutamiltransferase [GGT], proteína total [PT], albumina [Alb] e globulina [Glob]) e a concentração de AFB1-lisina em soro dos referidos animais. Para isto, foram realizados dois experimentos independentes, sendo um com frangos de corte (N = 40) subdivididos em dois grupos iguais (ração controle e ração contendo 222,17 µg/kg AFB1) alimentados com as dietas experimentais durante 14 dias, e outro com suínos (N = 20) alimentados com ração normal utilizada rotineiramente em um Campus universitário, sem qualquer intervenção. As rações foram analisadas quanto à presença de aflatoxinas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), enquanto que a AFB1-lisina no soro foi determinada através de CLAE acoplada a espectrômetro de massas (EM/EM). A AFB1 no nível testado não causou sinais visíveis de intoxicação. Os níveis das enzimas séricas (AST e GGT), PT e Glob não apresentaram diferenças (p>0,05) entre os tratamentos, nem entre os dias, exceto no 42º dia, quando GGT foi menor (p<0,05) que nos dias 28 e 35. Os valores de Alb foram menores (p<0,05) no tratamento com AFB1 aos 42 dias. A AFB1-lisina foi detectada no soro de todos os frangos do tratamento com AFB1, em níveis de 56.52 a 77.83 ng/mg Alb nos dias 35 e 42 de idade, respectivamente. Esses valores indicam a dose interna de AFB1 nas aves, a qual se correlacionou negativamente (p<0,05) com os níveis de PT, Alb e Glob. No experimento com suínos, a dieta apresentou níveis não detectáveis ou muito baixos de AFB1; portanto, a AFB1-lisina não foi detectada nas amostras de soro dos suínos. Os dados indicam que a AFB1-lisina apresenta potencial como biomarcador específico e sensível para a avaliação da exposição de aflatoxinas na dieta, bem como para fins de diagnósticos. / Aflatoxins are carcinogenic compounds produced by fungi of the genus Aspergillus that contaminate food before and after processing, resulting in risks to human health and economic losses in animal production. Exposure to aflatoxin B1 (AFB1), the main metabolite with greater toxicity produced by the fungus, occurs predominantly through ingestion of contaminated food, especially mayze, groundnuts and derivatives. After absorption and biotransformation of AFB1 by hepatic microsomal enzymes, the biotransformed toxin binds to macromolecules thus originating adducts such as AFB1-lysine. The AFB1-lysine adduct indicates the internal AFB1 dose that was actually absorbed through contaminated food. The objectives of this study were to determine the serum AFB1-lysine levels in broiler chicks and pigs, and check the correlation between the serum biochemistry parameters (aspartate aminotransferase [AST] e gamma-glutamyl transferase [GGT], total proteína [TP], albumin [Alb] and globulin [Glob]) and the concentration of AFB1-lysine in the serum of those animals. To this end, two independent experiments were conducted, one with broiler chicks (N = 40) subdivided into two equal groups (control feed, and feed containing 222,17 µg/kg AFB1) fed the experimental diets during 14 days, and the other with pigs (N = 20) fed normal diets routinely prepared in an University Campus, without any intervention. Feeds were analyzed for afltaoxins by high performance liquid chromatography (HPLC), while serum AFB1-lysin was determined by HPLC coupled to mass spectrometry (MS/MS). AFB1 at the level tested did not cause any sign of intoxication. The levels of serum enzymes (AST and GGT), TP and Glob did not show any difference (p>0.05) between treatments, or at different days, except for GGT on the 42nd day, which as lower (p<0.05) than concentrations on days 28 and 35. AFB1-lysine levels were detected in serum of all broilers fed the AFB1-contaminated diet, at mean levels of 56.52 to 77.83 ng/mg Alb on days 35 and 42 of age, respectively. These values indicated the internal dose of AFB1 in the birds, which negatively correlated (p<0.05) with the TP, Alb and Glob levels. In the experiment with pigs, non detectable or very low levels of AFB1 were found in the diets; therefore no AFB1-lysin was detected in the pig serum samples. Data indicated that AFB1-lysine shows the potential to be a sensitive and specific biomarker for the evaluation of broiler exposure to dietary aflatoxin, as well as for use in diagnostic purposes.

As aflatoxinas são compostos carcinogênicos produzidos por fungos do gênero Aspergillus, que contaminam alimentos antes e após o processamento, causando riscos à saúde humana e perdas econômicas na produção animal. A exposição à aflatoxina B1 (AFB1), principal metabólito com maior toxicidade produzido pelo fungo, ocorre predominantemente através da ingestão de alimentos contaminados, sobretudo milho, amendoim e derivados. Após absorção e biotransformação da AFB1 por enzimas hepáticas microssomais, a toxina biotransformada liga-se com macromoléculas originando adutos tais como AFB1-lisina. A AFB1-lisina indica a dose interna de AFB1 que foi efetivamente absorvida através de alimentos contaminados. Os objetivos deste estudo foram determinar a concentração dos níveis séricos de AFB1-lisina em frangos de corte e suínos, e verificar a correlação entre os parâmetros bioquímicos séricos (aspartato aminotransferase [AST] e gama glutamiltransferase [GGT], proteína total [PT], albumina [Alb] e globulina [Glob]) e a concentração de AFB1-lisina em soro dos referidos animais. Para isto, foram realizados dois experimentos independentes, sendo um com frangos de corte (N = 40) subdivididos em dois grupos iguais (ração controle e ração contendo 222,17 µg/kg AFB1) alimentados com as dietas experimentais durante 14 dias, e outro com suínos (N = 20) alimentados com ração normal utilizada rotineiramente em um Campus universitário, sem qualquer intervenção. As rações foram analisadas quanto à presença de aflatoxinas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), enquanto que a AFB1-lisina no soro foi determinada através de CLAE acoplada a espectrômetro de massas (EM/EM). A AFB1 no nível testado não causou sinais visíveis de intoxicação. Os níveis das enzimas séricas (AST e GGT), PT e Glob não apresentaram diferenças (p>0,05) entre os tratamentos, nem entre os dias, exceto no 42º dia, quando GGT foi menor (p<0,05) que nos dias 28 e 35. Os valores de Alb foram menores (p<0,05) no tratamento com AFB1 aos 42 dias. A AFB1-lisina foi detectada no soro de todos os frangos do tratamento com AFB1, em níveis de 56.52 a 77.83 ng/mg Alb nos dias 35 e 42 de idade, respectivamente. Esses valores indicam a dose interna de AFB1 nas aves, a qual se correlacionou negativamente (p<0,05) com os níveis de PT, Alb e Glob. No experimento com suínos, a dieta apresentou níveis não detectáveis ou muito baixos de AFB1; portanto, a AFB1-lisina não foi detectada nas amostras de soro dos suínos. Os dados indicam que a AFB1-lisina apresenta potencial como biomarcador específico e sensível para a avaliação da exposição de aflatoxinas na dieta, bem como para fins de diagnósticos. / Aflatoxins are carcinogenic compounds produced by fungi of the genus Aspergillus that contaminate food before and after processing, resulting in risks to human health and economic losses in animal production. Exposure to aflatoxin B1 (AFB1), the main metabolite with greater toxicity produced by the fungus, occurs predominantly through ingestion of contaminated food, especially mayze, groundnuts and derivatives. After absorption and biotransformation of AFB1 by hepatic microsomal enzymes, the biotransformed toxin binds to macromolecules thus originating adducts such as AFB1-lysine. The AFB1-lysine adduct indicates the internal AFB1 dose that was actually absorbed through contaminated food. The objectives of this study were to determine the serum AFB1-lysine levels in broiler chicks and pigs, and check the correlation between the serum biochemistry parameters (aspartate aminotransferase [AST] e gamma-glutamyl transferase [GGT], total proteína [TP], albumin [Alb] and globulin [Glob]) and the concentration of AFB1-lysine in the serum of those animals. To this end, two independent experiments were conducted, one with broiler chicks (N = 40) subdivided into two equal groups (control feed, and feed containing 222,17 µg/kg AFB1) fed the experimental diets during 14 days, and the other with pigs (N = 20) fed normal diets routinely prepared in an University Campus, without any intervention. Feeds were analyzed for afltaoxins by high performance liquid chromatography (HPLC), while serum AFB1-lysin was determined by HPLC coupled to mass spectrometry (MS/MS). AFB1 at the level tested did not cause any sign of intoxication. The levels of serum enzymes (AST and GGT), TP and Glob did not show any difference (p>0.05) between treatments, or at different days, except for GGT on the 42nd day, which as lower (p<0.05) than concentrations on days 28 and 35. AFB1-lysine levels were detected in serum of all broilers fed the AFB1-contaminated diet, at mean levels of 56.52 to 77.83 ng/mg Alb on days 35 and 42 of age, respectively. These values indicated the internal dose of AFB1 in the birds, which negatively correlated (p<0.05) with the TP, Alb and Glob levels. In the experiment with pigs, non detectable or very low levels of AFB1 were found in the diets; therefore no AFB1-lysin was detected in the pig serum samples. Data indicated that AFB1-lysine shows the potential to be a sensitive and specific biomarker for the evaluation of broiler exposure to dietary aflatoxin, as well as for use in diagnostic purposes.

O objetivo deste trabalho foi estudar a transferência de aflatoxinas da ração para peixes lambari (Astyanax altiparanae), avaliando a influência dos níveis de toxina na ração sobre o desempenho dos peixes. As aflatoxinas foram incorporadas à ração extrusada para peixes tropicais, previamente testada para a presença de aflatoxinas, e as concentrações foram confirmadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Os tratamentos foram constituídos por: Controle - ração sem toxina; A. Ração + 10 µg AFB1/kg; B. Ração + 20 µg AFB1/kg e C. Ração + 50 µg AFB1/kg. Os juvenis de lambari foram alocados em aquários com densidade de 1 peixe por litro. O experimento foi realizado por 120 dias, com três repetições. A cada 30 dias foram realizados levantamentos biométricos e avaliação do desempenho (taxa de crescimento, sobrevivência, ganho de peso). A determinação de aflatoxinas nas amostras foi realizada por CLAE em músculo e fígado. Mensalmente, dez peixes por aquário foram utilizados para compor uma amostra, totalizando 48 amostras de músculo e 48 amostras de fígado analisadas ao final do experimento. As aflatoxinas na dieta prejudicaram o desempenho dos lambaris, observando-se menor peso e tamanho dos peixes nos tratamentos com aflatoxinas em relação ao controle. Houve também menor consumo de ração pelos peixes do tratamento C no período final do experimento. De modo geral, observou-se que, principalmente a partir dos 90 dias de experimento, houve acúmulo de aflatoxinas no fígado e no músculo dos animais. A concentração de aflatoxina B1 observada no músculo dos lambaris ao final do período de exposição foi semelhante aos níveis empregados na dieta. Os resultados mostraram que o lambari é uma espécie sensível, havendo efeito das aflatoxinas sobre o desempenho e acúmulo de aflatoxinas no músculo e fígado. Assim, quando da exposição diária e prolongada de lambaris às aflatoxinas, conclui-se que os limites atuais das legislações para aflatoxinas em ração animal não garantem segurança à produção e à saúde dos consumidores. / The aim of this study was to evaluate the transfer of aflatoxins from feed to lambari fish (Astyanax altiparanae), assessing the influence of toxin levels on fish performance. Aflatoxins were incorporated into extruded feed for tropical fish, previously tested for aflatoxins, and the concentrations were confirmed by high-performance liquid chromatography (HPLC). The treatments were: Control - feed without toxin; A. Feed + 10 µg AFB1/kg; B. Feed + 20 µg AFB1/kg and C. Feed + 50 µg AFB1/kg. Juveniles of lambari fish were placed in aquariums with density of 1 fish per liter. The experiment was conducted for 120 days, with three replications. Every 30 days biometric surveys were performed, including weight and standard length. Feed intake, feed conversion, growth rate and survival were also evaluated. Determination of aflatoxins was carried out by HPLC in muscle and liver. Monthly, a pool of 10 fish were used to make a sample, adding up to 48 samples of muscle and 48 samples of liver analyzed at the end of the experiment. Aflatoxins in the diet impaired the lambari performance, with lower weight and size of fish from aflatoxins treatments compared to control. There was also lower feed intake by fish from treatment C in the final period of the experiment. In general, it was observed that, mainly from 90 days of experiment, there was accumulation of aflatoxins in the liver of lambari fish and consequently in the muscle. Aflatoxin B1 concentration observed in the muscle of lambari fish at the end of the exposure period was similar to the levels used in the diet. Results showed that lambari fish is sensitive specie, with effects of aflatoxins on performance and accumulation of aflatoxins in muscle and liver. Therefore, when daily and prolonged exposure of lambaris to aflatoxins, it is concluded that the current regulation limits for aflatoxins in animal feed do not guarantee safety production and consumer health.

O objetivo deste trabalho foi estudar a transferência de aflatoxinas da ração para peixes lambari (Astyanax altiparanae), avaliando a influência dos níveis de toxina na ração sobre o desempenho dos peixes. As aflatoxinas foram incorporadas à ração extrusada para peixes tropicais, previamente testada para a presença de aflatoxinas, e as concentrações foram confirmadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Os tratamentos foram constituídos por: Controle - ração sem toxina; A. Ração + 10 µg AFB1/kg; B. Ração + 20 µg AFB1/kg e C. Ração + 50 µg AFB1/kg. Os juvenis de lambari foram alocados em aquários com densidade de 1 peixe por litro. O experimento foi realizado por 120 dias, com três repetições. A cada 30 dias foram realizados levantamentos biométricos e avaliação do desempenho (taxa de crescimento, sobrevivência, ganho de peso). A determinação de aflatoxinas nas amostras foi realizada por CLAE em músculo e fígado. Mensalmente, dez peixes por aquário foram utilizados para compor uma amostra, totalizando 48 amostras de músculo e 48 amostras de fígado analisadas ao final do experimento. As aflatoxinas na dieta prejudicaram o desempenho dos lambaris, observando-se menor peso e tamanho dos peixes nos tratamentos com aflatoxinas em relação ao controle. Houve também menor consumo de ração pelos peixes do tratamento C no período final do experimento. De modo geral, observou-se que, principalmente a partir dos 90 dias de experimento, houve acúmulo de aflatoxinas no fígado e no músculo dos animais. A concentração de aflatoxina B1 observada no músculo dos lambaris ao final do período de exposição foi semelhante aos níveis empregados na dieta. Os resultados mostraram que o lambari é uma espécie sensível, havendo efeito das aflatoxinas sobre o desempenho e acúmulo de aflatoxinas no músculo e fígado. Assim, quando da exposição diária e prolongada de lambaris às aflatoxinas, conclui-se que os limites atuais das legislações para aflatoxinas em ração animal não garantem segurança à produção e à saúde dos consumidores. / The aim of this study was to evaluate the transfer of aflatoxins from feed to lambari fish (Astyanax altiparanae), assessing the influence of toxin levels on fish performance. Aflatoxins were incorporated into extruded feed for tropical fish, previously tested for aflatoxins, and the concentrations were confirmed by high-performance liquid chromatography (HPLC). The treatments were: Control - feed without toxin; A. Feed + 10 µg AFB1/kg; B. Feed + 20 µg AFB1/kg and C. Feed + 50 µg AFB1/kg. Juveniles of lambari fish were placed in aquariums with density of 1 fish per liter. The experiment was conducted for 120 days, with three replications. Every 30 days biometric surveys were performed, including weight and standard length. Feed intake, feed conversion, growth rate and survival were also evaluated. Determination of aflatoxins was carried out by HPLC in muscle and liver. Monthly, a pool of 10 fish were used to make a sample, adding up to 48 samples of muscle and 48 samples of liver analyzed at the end of the experiment. Aflatoxins in the diet impaired the lambari performance, with lower weight and size of fish from aflatoxins treatments compared to control. There was also lower feed intake by fish from treatment C in the final period of the experiment. In general, it was observed that, mainly from 90 days of experiment, there was accumulation of aflatoxins in the liver of lambari fish and consequently in the muscle. Aflatoxin B1 concentration observed in the muscle of lambari fish at the end of the exposure period was similar to the levels used in the diet. Results showed that lambari fish is sensitive specie, with effects of aflatoxins on performance and accumulation of aflatoxins in muscle and liver. Therefore, when daily and prolonged exposure of lambaris to aflatoxins, it is concluded that the current regulation limits for aflatoxins in animal feed do not guarantee safety production and consumer health.

A exposição à aflatoxina B1 (AFB1) ocorre predominantemente através da ingestão de alimentos contaminados. A AFB1 é biotransformada por enzimas hepáticas, levando à formação de adutos AFB1-N7-guanina e AFB1-lisina (AFB1-Lys), entre outros compostos que podem permanecer como resíduos no fígado, tais como aflatoxina M1 (AFM1) e aflatoxicol (AFL). Os produtos de biotransformação da AFB1 podem ser utilizados como biomarcadores de exposição às aflatoxinas através da dieta. O presente trabalho teve por objetivo verificar a aplicabilidade da determinação de biomarcadores de AFB1 na avaliação da eficiência de adsorventes em suínos. Foram utilizados 24 suínos machos castrados com 28 dias de idade, que após 21 dias de adaptação foram divididos em 4 tratamentos experimentais, em arranjo fatorial 2 x 2, correspondendo à dois níveis de incorporação de AFB1 às rações (0 e 1,1 mg/kg) e dois níveis de incorporação (0 e 0,5%) de Aluminossilicato de Cálcio e Sódio Hidratado (HSCAS) por 42 dias. Semanalmente foram analisados parâmetros de desempenho, coletadas amostras de soro e plasma para análises bioquímicas, hematológicas e dosagem de AFB1-Lys. Nos primeiros dez dias de intoxicação foram coletadas amostras diárias de urina para análise de produtos da biotransformação de AFB1 incluindo AFB1-N7-guanina. Após este período, as coletas de urina foram semanais. Ao final do experimento, foram coletadas amostras de soro, plasma heparinizado e com EDTA para avaliação de AFB1-Lys, e os animais foram abatidos para avaliação da carcaça e coleta de órgãos para avaliação do peso relativo, histopatologia e análise de resíduos. O HSCAS foi efetivo na adsorção in vitro de AFB1, cujos percentuais de ligação variaram de 36,83 a 100%, para concentrações do adsorvente entre 0,005 e 10 mg/10 mL. A adição de HSCAS restaurou significativamente (P<0,05) os efeitos deletérios sobre a maioria dos parâmetros avaliados. Em fígado, os níveis de AFB1, AFB2 e AFG1 foram menores (P<0,05) no tratamento com AFB1 e HSCAS, indicando que houve proteção do adsorvente nos animais deste grupo. Em urina, a AFM1 consistiu em ~93% do total de aflatoxinas excretadas quantificada. A inclusão de adsorvente nas dietas reduziu (P<0,05) os níveis urinários de AFB1, AFQ1 e AFB1-N7-guanina durante todo o experimento. Nos níveis de AFM1 houve redução significativa entre os dias 1 e 28 de intoxicação. Comparando-se com os resultados obtidos em soro e plasma heparinizado, os níveis de AFB1-Lys foram fortemente suprimidos em amostras com EDTA devido à interferência deste composto no processo de digestão enzimática. Os níveis semanais de AFB1-Lys séricos nos animais tratados com AFB1 e HSCAS foram menores (P<0,05) do que nos animais alimentados somente com AFB1 durante todo o período de intoxicação. Os dados indicam que níveis de AFB1, AFM1, AFQ1 e AFB1-N7-guanina urinária bem como AFB1-Lys sérica podem ser utilizados como biomarcadores de exposição para aflatoxinas em suínos. Além disso, as determinações de AFB1 e AFB1-N7-guanina urinária e AFB1-Lys sérica podem ser utilizadas para avaliar a capacidade de proteção dos adsorvente como biomarcadores de dose interna de AFB1, sendo capazes de demonstrar à severidade da intoxicação em cada animal. Outros estudos são necessários para esclarecer a toxicocinéticados biomarcadores avaliados em suínos. / Exposure to aflatoxin B1 (AFB1) occurs primarily through ingestion of contaminated food. AFB1 is biotransformed by liver enzymes leading to the formation of adducts AFB1-N7-guanine and AFB1-lysine (AFB1-lys), among other compounds which may remain as residue in the liver, such as Aflatoxin M1 (AFM1) and aflatoxicol (AFL). The products of AFB1 biotransformation can be used as exposure biomarkers to aflatoxins through diets. This study aims to verify the applicability of the determination of AFB1 biomarkers in the evaluation of adsorbents efficiency in swine. Twenty four barrows with 28 days of age were used. After 21 days of adaptation they were divided into 4 experimental treatments in a factorial 2 x 2, corresponding to two AFB1 incorporation levels to feed (0 to 1.1 mg / kg) and incorporating two levels (0 and 0.5%) of sodium calcium aluminosilicate hydrate (HSCAS) for 42 days. Performance parameters were weekly analyzed, as well the biochemical and hematological, and AFB1-Lys dosage. Urine samples were collected daily in the first ten days of intoxication to assess biotransformation products of AFB1, including AFB1-N7-guanine. After this period, the collection of urine samples occurs weekly. At the end of the experiment, serum, heparinized and EDTA plasma samples were collected for AFB1-Lys evaluation, and the animals were slaughtered to evaluate carcass and collection agencies to assess the relative weight, histopathology and residue analysis. The HSCAS was effective in in vitro adsorption of AFB1 binding percentages that ranged from 36.83 to 100% for the adsorbent concentrations between 0.005 and 10 mg/10 ml. Adding HSCAS restored significantly (P<0.05) the deleterious effects on the majority of the parameters evaluated. In liver, levels of AFB1, AFB2 and AFG1 were lower (P<0.05) in the treatment AFB1 and HSCAS, indicating that there was protection of the adsorbent in the animals of this group. In urine, AFM1 consisted of ~ 93% of total aflatoxins excreted and quantified. The inclusion of adsorbent in diets reduced (P<0.05) urinary levels of AFB1, AFQ1 and AFB1-N7-guanine throughout the experiment. In AFM1 levels decreased significantly between days 1 and 28 of poisoning. Compared with the results obtained in serum or heparinized plasma, AFB1-Lys levels were strongly suppressed in the samples with EDTA interference due to this compound in the enzyme digestion process. Weekly serum levels of AFB1-Lys in animals treated with AFB1 and HSCAS were lower (P<0.05) than animals treated with AFB1 alone during all the poisoning period. The data indicate that the urinary levels of AFB1, AFM1, AFQ1 and AFB1-N7-guanine and serum AFB1-Lys can be used as biomarkers of exposure to aflatoxins in pigs. Furthermore, the determinations of AFB1 and AFB1-N7-guanine urinary and serum AFB1-Lys can be used to evaluate the protective ability of the adsorbent as internal dose biomarkers, being able to demonstrate the severity of toxicity in each animal. Further studies are necessary to provide physiologically based toxicokinetics of the evaluated biomarkers in pigs.

A exposição à aflatoxina B1 (AFB1) ocorre predominantemente através da ingestão de alimentos contaminados. A AFB1 é biotransformada por enzimas hepáticas, levando à formação de adutos AFB1-N7-guanina e AFB1-lisina (AFB1-Lys), entre outros compostos que podem permanecer como resíduos no fígado, tais como aflatoxina M1 (AFM1) e aflatoxicol (AFL). Os produtos de biotransformação da AFB1 podem ser utilizados como biomarcadores de exposição às aflatoxinas através da dieta. O presente trabalho teve por objetivo verificar a aplicabilidade da determinação de biomarcadores de AFB1 na avaliação da eficiência de adsorventes em suínos. Foram utilizados 24 suínos machos castrados com 28 dias de idade, que após 21 dias de adaptação foram divididos em 4 tratamentos experimentais, em arranjo fatorial 2 x 2, correspondendo à dois níveis de incorporação de AFB1 às rações (0 e 1,1 mg/kg) e dois níveis de incorporação (0 e 0,5%) de Aluminossilicato de Cálcio e Sódio Hidratado (HSCAS) por 42 dias. Semanalmente foram analisados parâmetros de desempenho, coletadas amostras de soro e plasma para análises bioquímicas, hematológicas e dosagem de AFB1-Lys. Nos primeiros dez dias de intoxicação foram coletadas amostras diárias de urina para análise de produtos da biotransformação de AFB1 incluindo AFB1-N7-guanina. Após este período, as coletas de urina foram semanais. Ao final do experimento, foram coletadas amostras de soro, plasma heparinizado e com EDTA para avaliação de AFB1-Lys, e os animais foram abatidos para avaliação da carcaça e coleta de órgãos para avaliação do peso relativo, histopatologia e análise de resíduos. O HSCAS foi efetivo na adsorção in vitro de AFB1, cujos percentuais de ligação variaram de 36,83 a 100%, para concentrações do adsorvente entre 0,005 e 10 mg/10 mL. A adição de HSCAS restaurou significativamente (P<0,05) os efeitos deletérios sobre a maioria dos parâmetros avaliados. Em fígado, os níveis de AFB1, AFB2 e AFG1 foram menores (P<0,05) no tratamento com AFB1 e HSCAS, indicando que houve proteção do adsorvente nos animais deste grupo. Em urina, a AFM1 consistiu em ~93% do total de aflatoxinas excretadas quantificada. A inclusão de adsorvente nas dietas reduziu (P<0,05) os níveis urinários de AFB1, AFQ1 e AFB1-N7-guanina durante todo o experimento. Nos níveis de AFM1 houve redução significativa entre os dias 1 e 28 de intoxicação. Comparando-se com os resultados obtidos em soro e plasma heparinizado, os níveis de AFB1-Lys foram fortemente suprimidos em amostras com EDTA devido à interferência deste composto no processo de digestão enzimática. Os níveis semanais de AFB1-Lys séricos nos animais tratados com AFB1 e HSCAS foram menores (P<0,05) do que nos animais alimentados somente com AFB1 durante todo o período de intoxicação. Os dados indicam que níveis de AFB1, AFM1, AFQ1 e AFB1-N7-guanina urinária bem como AFB1-Lys sérica podem ser utilizados como biomarcadores de exposição para aflatoxinas em suínos. Além disso, as determinações de AFB1 e AFB1-N7-guanina urinária e AFB1-Lys sérica podem ser utilizadas para avaliar a capacidade de proteção dos adsorvente como biomarcadores de dose interna de AFB1, sendo capazes de demonstrar à severidade da intoxicação em cada animal. Outros estudos são necessários para esclarecer a toxicocinéticados biomarcadores avaliados em suínos. / Exposure to aflatoxin B1 (AFB1) occurs primarily through ingestion of contaminated food. AFB1 is biotransformed by liver enzymes leading to the formation of adducts AFB1-N7-guanine and AFB1-lysine (AFB1-lys), among other compounds which may remain as residue in the liver, such as Aflatoxin M1 (AFM1) and aflatoxicol (AFL). The products of AFB1 biotransformation can be used as exposure biomarkers to aflatoxins through diets. This study aims to verify the applicability of the determination of AFB1 biomarkers in the evaluation of adsorbents efficiency in swine. Twenty four barrows with 28 days of age were used. After 21 days of adaptation they were divided into 4 experimental treatments in a factorial 2 x 2, corresponding to two AFB1 incorporation levels to feed (0 to 1.1 mg / kg) and incorporating two levels (0 and 0.5%) of sodium calcium aluminosilicate hydrate (HSCAS) for 42 days. Performance parameters were weekly analyzed, as well the biochemical and hematological, and AFB1-Lys dosage. Urine samples were collected daily in the first ten days of intoxication to assess biotransformation products of AFB1, including AFB1-N7-guanine. After this period, the collection of urine samples occurs weekly. At the end of the experiment, serum, heparinized and EDTA plasma samples were collected for AFB1-Lys evaluation, and the animals were slaughtered to evaluate carcass and collection agencies to assess the relative weight, histopathology and residue analysis. The HSCAS was effective in in vitro adsorption of AFB1 binding percentages that ranged from 36.83 to 100% for the adsorbent concentrations between 0.005 and 10 mg/10 ml. Adding HSCAS restored significantly (P<0.05) the deleterious effects on the majority of the parameters evaluated. In liver, levels of AFB1, AFB2 and AFG1 were lower (P<0.05) in the treatment AFB1 and HSCAS, indicating that there was protection of the adsorbent in the animals of this group. In urine, AFM1 consisted of ~ 93% of total aflatoxins excreted and quantified. The inclusion of adsorbent in diets reduced (P<0.05) urinary levels of AFB1, AFQ1 and AFB1-N7-guanine throughout the experiment. In AFM1 levels decreased significantly between days 1 and 28 of poisoning. Compared with the results obtained in serum or heparinized plasma, AFB1-Lys levels were strongly suppressed in the samples with EDTA interference due to this compound in the enzyme digestion process. Weekly serum levels of AFB1-Lys in animals treated with AFB1 and HSCAS were lower (P<0.05) than animals treated with AFB1 alone during all the poisoning period. The data indicate that the urinary levels of AFB1, AFM1, AFQ1 and AFB1-N7-guanine and serum AFB1-Lys can be used as biomarkers of exposure to aflatoxins in pigs. Furthermore, the determinations of AFB1 and AFB1-N7-guanine urinary and serum AFB1-Lys can be used to evaluate the protective ability of the adsorbent as internal dose biomarkers, being able to demonstrate the severity of toxicity in each animal. Further studies are necessary to provide physiologically based toxicokinetics of the evaluated biomarkers in pigs.

O objetivo do presente trabalho foi determinar resíduos de aflatoxinas M1 (AFM1), aflatoxicol (AFL), B1 (AFB1), B2 (AFB2), G1 (AFG1) e G2 (AFG2) não metabolizadas no fígado e rim de frangos de corte, com a finalidade de verificar sua aplicabilidade na avaliação da eficiência de um adsorvente comercial à base de aluminossilicato de cálcio e sódio (HSCAS) incorporado na dieta, bem como determinar o percentual de ligação do adsorvente com a AFB1em ensaios in vitro. Cem frangos de corte (Ross 708), machos, de 1 dia de idade, foram mantidos em baterias metálicas, com acesso ad libitum à ração e água. Utilizou-se um delineamento inteiramente casualizado com 4 tratamentos, sendo cada tratamento composto por 5 gaiolas contendo 5 frangos em cada uma. Os tratamentos foram os seguintes: A) dieta basal (DB), sem adição de HSCAS ou AFB1; B) DB com adição de 0,5% de HSCAS; C) DB com adição de 2,5 mg/kg de AFB1; e D) DB com adição de 2,5 mg/kg de AFB1 e 0,5% de HSCAS. As rações experimentais foram administradas de 1 a 21 dias de vida. No dia 21, 5 frangos de cada tratamento foram insensibilizados com dióxido de carbono, mortos por deslocamento cervical e amostras de fígado e rim foram coletadas para análise de resíduos de AFB1. O HSCAS foi efetivo em se ligar, in vitro, à AFB1, cujos percentuais de ligação variaram de 8,8 a 99,5%, para concentrações do adsorvente entre 0,05 e 100 mg/10 mL. Apesar de o HSCAS ter melhorado, numericamente, o desempenho dos frangos no estudo in vivo, estatisticamente não houve diferença significativa entre os tratamentos C e D. As concentrações de AFB1, AFL, AFG1 e AFB2 foram menores (P<0,05) nos fígados das aves alimentadas com AFB1 adicionado de HSCAS (dieta D), quando comparado com aves alimentadas somente com AFB1 (dieta C). As concentrações de AFB1 também foram menores (P<0,05) nos rins das aves alimentadas com AFB1 adicionado de HSCAS (dieta D) quando comparado com aves alimentadas somente com AFB1 (dieta C). A determinação de resíduos de aflatoxinas no fígado e rins não é aplicável para avaliar a proteção do adsorvente contra efeitos tóxicos das aflatoxinas em frangos de corte, sendo, porém, de grande utilidade para verificar a capacidade do adsorvente em reduzir as concentrações das aflatoxinas residuais nas vísceras de frangos destinadas ao consumo humano. / The objective of the study was to determine residues of aflatoxin M1 (AFM1), aflatoxicol (AFL), B1 (AFB1), B2 (AFB2), G1 (AFG1) and G2 (AFG2) non-metabolized in liver and kidney of broiler chicks, aiming to verify its applicability for evaluation of a commercial adsorbent based-HSCAS efficacy incorporated into the diet, aswell as to determine the binding capacity of a HSCAS for AFB1 in an in vitro testing. One hundred day-old male broilers (Ross 708) were maintained in chick batteries and allowed libitum access to feed and water. A completely randomized design was used with 5 replicate pens of5 chicks assigned to each of 4 dietary treatments from hatch to 21 days. Dietary treatments included: A) basal diet (BD), with no HSCAS or AFB1; B) BD supplemented with 0.5% HSCAS only; C) BD supplemented with 2.5 mg AFB1/kg of feed; and D) BD supplemented with 2.5 mg AFB1/kg of feed and 0.5% HSCAS. On day 21, 5 chicks from each treatment wereinsensibilized with carbon dioxide, killed by cervical dislocation and samples of liverand kidney collected for analysis of AFB1 residues. The HSCAS was effective to binding AFB1 in vitro, with percentage of AFB1 bound varying from 8.8 to 99.5% for adsorbent concentrations between 0.05 and 100 mg/10mL. Although HSCAS has improved numerically the performance of broilers on the in vivostudy, there was no statistically significant difference between treatments C and D. Concentrations of AFB1, AFL, AFG1 and AFB2 were lower (P<0.05) in livers of birds fed AFB1 plus HSCAS (diet D), when compared to birds fed AFB1 alone (diet C). Concentrations of AFB1 were also lower (P<0.05) in kidneys of birds fed AFB1 plus HSCAS (diet D) compared to those fed AFB1 only (diet C). The determination of aflatoxin residues in liver and kidney is not applicable for evaluation of the adsorbent protection against the toxic effects of aflatoxins in broiler chicks, being, however, very useful to verify the adsorbentcapacity to reduce the concentration of aflatoxin residues in the organs of chickens intended for human consumption.

O estudo teve por finalidade avaliar a contaminação por aflatoxinas (AF) em três espécies de peixes no Estado de São Paulo, avaliando também a micobiota e a ocorrência das toxinas nas rações. Foram coletadas amostras de ração, em uso e em estoque, e amostras dos peixes lambari (Astyanax altiparanae), matrinxã (Brycon cephalus) e pacu (Piaractus mesopotamicus) em cinco pisciculturas localizadas no Estado de São Paulo. As amostras de ração foram avaliadas quanto à contaminação fúngica, classificando os Aspergillus quanto à espécie e ao potencial toxigênico. A contagem de bolores variou de 1,0 x 102 UFC/g até 4,0 x 104 UFC/g, sendo o maior valor encontrado em rações em uso. A atividade de água variou de 0,45 a 0,72. Na análise da micobiota da ração, o gênero Aspergillus foi encontrado em 100% das amostras avaliadas, além dos gêneros Penicillium, Fusarium e Cladosporium. Dentre os isolados de Aspergillus seção Flavi, 84,2% produziram aflatoxinas. Foram identificadas diferentes espécies de Aspergillus, sendo 42,1% classificados como Aspergillus flavus. A detecção e quantificação de aflatoxinas foram efetuadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em amostras de ração, tecido muscular e fígado dos peixes. AFB1 e AFG2 foram detectadas em 8,34% e 16,67% das amostras de ração, respectivamente. No tecido muscular, apenas uma amostra apresentou 5,4 µg AFM1/kg. Nas amostras de fígado, 50% apresentaram AFM1, variando de 2,3 a 17,1 µg/kg, e 16,67% apresentaram AFB1 em níveis de 8,9 a 12,7 µg/kg. Embora tenham sido encontrados níveis baixos de aflatoxinas na ração das propriedades investigadas, a detecção nos tecidos dos peixes sugere que os animais ingeriram a toxina em algum momento. Assim, pode-se concluir que o risco de contaminação por aflatoxinas em pisciculturas no estado de São Paulo existe e deve ser controlado. / The study aimed to evaluate the contamination by aflatoxins (AF) in three species of fish in the state of Sao Paulo, evaluating also the mycobiota and the occurrence of toxins in feed. It were collected feed samples, in use and stored, and fish samples: lambari (Astyanax altiparanae), matrinxã (Brycon cephalus) and pacu (Piaractus mesopotamicus) in five fish farming from state of Sao Paulo. Feed samples were evaluated for fungal contamination, classifying Aspergillus at species and their toxigenic potential. The mold count ranged from 1.0 x 102 CFU/g to 4.0 x 104 CFU/g, and the highest value was found in feed in use. The water activity ranged from 0.45 to 0.72. Regarding mycobiota analysis, the genus Aspergillus was found in 100% of the samples, as well Penicillium, Fusarium and Cladosporium genus were noted. Among the isolates of Aspergillus section Flavi, 84.2% produced aflatoxins. Different Aspergillus species were identified, with 42.1% classified as Aspergillus flavus. The detection and quantitation of aflatoxins in feed samples, fish muscle and fish liver were performed by high performance liquid chromatography (HPLC). AFB1 and AFG2 were detected in 8.34% and 16.67% of feed samples, respectively. In fish muscle, only one sample showed 5.4 µg AFM1/kg. In the liver samples, 50% presented AFM1, ranging from 2.3 to 17.1 µg/kg, and 16.67% had AFB1 at levels from 8.9 to 12.7 µg/kg. Despite the low levels of aflatoxin in the fish feed from the investigated properties, the detection in fish tissues suggests that animals could have ingested the toxin anytime. Thus, it can be concluded that the risk of aflatoxin contamination in fish farming in the state of Sao Paulo exists and it must be controlled.

A deposição de aflatoxinas em peixes é residual e cumulativa, além de causar efeitos adversos no peso, tamanho, consumo de ração e sobrevivência, demarcando amplas diferenças quanto à sensibilidade e metabolismo entre as espécies. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a transferência de aflatoxinas da ração para matrinxã (Brycon cephalus) e a influência sobre parâmetros biométricos, bioquímicos e histopatológicos. As aflatoxinas foram incorporadas na ração pelo método de imersão em metanol, obtendo-se os seguintes tratamentos: A. Controle - ração sem toxina; B. Ração + 10 &micro;g Aflatoxina B1/kg; C. Ração + 20 &micro;g Aflatoxina B1/kg e D. Ração + 50 &micro;g Aflatoxina B1/kg. As aflatoxinas foram quantificadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) no fígado e músculo de matrinxã. Para avaliação do desempenho produtivo foram mensurados o peso, comprimento, taxa de sobrevivência e consumo diário de ração. Para avaliação bioquímica e histopatológica foram realizadas coletas de sangue por punção da veia caudal para determinação das atividades séricas de aspartato aminotransferase (AST), fosfatase alcalina (FA), proteínas totais (PT), albumina (ALB) e globulina (GLOB). Para observação histológica foram coletados fragmentos de fígado, que foram processados para posterior inclusão em parafina e coloração de hematoxilina e eosina. Os peixes expostos aos tratamentos B, C e D apresentaram menor peso e comprimento (P<0,05) quando comparados com o tratamento controle, sendo os matrinxãs do tratamento C os mais afetados. O consumo de ração e a sobrevivência apresentaram diferenças a partir do dia 150 no tratamento D. Foi observado o acúmulo de AFB1 no fígado em função do aumento da concentração da toxina na ração. No tratamento D, foram observados resíduos a partir do dia 30, com valores entre 0,17 e 0,62 mg AFB1/kg. AST, FA, PT, ALB e GLOB, apresentaram alterações muito discretas, o que dificultou a identificação de danos hepáticos ou afecções à funcionalidade do fígado. A exposição à AFB1 causou degeneração gordurosa moderada e severa, degeneração hidrópica, morte celular ou células em processo de morte e desorganização do arranjo cordonal. Conclui-se que matrinxã sob condições experimentais não representa risco à saúde do consumidor, no entanto, é uma espécie sensível aos efeitos adversos das aflatoxinas. / The deposition of aflatoxins in fish is residual and cumulative, besides causing adverse nonlethal effects on weight, size, feed consumption and survival, establishing wide differences in sensitivity and metabolism among species. The present work aims to evaluate the transfer of aflatoxins from the feed to matrinxã (Brycon cephalus) and the influence on biometric, biochemical and histopathological parameters. The aflatoxins were incorporated into the feed by the method of immersion in methanol, obtaining the following treatments: A. Control - feed without toxin; B. Feed + 10 &micro;g AFB1/kg; C. Feed + 20 &micro;g AFB1/kg and D. Feed + 50 &micro;g AFB1/kg. Aflatoxins were quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) in the liver and muscle of matrinxã. performance based on weight, length, survival rate and daily feed intake was evaluated. Blood samples were collected to determine the serum activity of aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (AP), total proteins (PT), albumin (ALB) and globulin (GLOB). For histological observation, liver fragments were collected and processed in paraffin followed by hematoxylin and eosin staining. The fish exposed to treatments B, C and D presented lower weight and length (P<0.05) when compared with the control treatment, and the matrinxãs of treatment C were the most affected. Feed intake and survival showed differences from day 150 in treatment D. AFB1 accumulation was observed in the liver as the toxin concentration in the diet increased. In treatment D, residues were observed from day 30 with values between 0.17 and 0.62 mg AFB1/kg. AST, AF, PT, ALB and GLOB presented very discrete alterations, making it difficult to identify liver damage or liver function disorders. Exposure to AFB1 caused moderate and severe fatty degeneration, hydropic degeneration, cell death or cells in the process of death and disorganization of the cordial arrangement. Concludes that matrinxã under experimental conditions does not pose a risk to consumer health, however, is a susceptible species to the adverse effects of aflatoxins.

O estudo teve por finalidade avaliar a contaminação por aflatoxinas (AF) em três espécies de peixes no Estado de São Paulo, avaliando também a micobiota e a ocorrência das toxinas nas rações. Foram coletadas amostras de ração, em uso e em estoque, e amostras dos peixes lambari (Astyanax altiparanae), matrinxã (Brycon cephalus) e pacu (Piaractus mesopotamicus) em cinco pisciculturas localizadas no Estado de São Paulo. As amostras de ração foram avaliadas quanto à contaminação fúngica, classificando os Aspergillus quanto à espécie e ao potencial toxigênico. A contagem de bolores variou de 1,0 x 102 UFC/g até 4,0 x 104 UFC/g, sendo o maior valor encontrado em rações em uso. A atividade de água variou de 0,45 a 0,72. Na análise da micobiota da ração, o gênero Aspergillus foi encontrado em 100% das amostras avaliadas, além dos gêneros Penicillium, Fusarium e Cladosporium. Dentre os isolados de Aspergillus seção Flavi, 84,2% produziram aflatoxinas. Foram identificadas diferentes espécies de Aspergillus, sendo 42,1% classificados como Aspergillus flavus. A detecção e quantificação de aflatoxinas foram efetuadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em amostras de ração, tecido muscular e fígado dos peixes. AFB1 e AFG2 foram detectadas em 8,34% e 16,67% das amostras de ração, respectivamente. No tecido muscular, apenas uma amostra apresentou 5,4 &micro;g AFM1/kg. Nas amostras de fígado, 50% apresentaram AFM1, variando de 2,3 a 17,1 &micro;g/kg, e 16,67% apresentaram AFB1 em níveis de 8,9 a 12,7 &micro;g/kg. Embora tenham sido encontrados níveis baixos de aflatoxinas na ração das propriedades investigadas, a detecção nos tecidos dos peixes sugere que os animais ingeriram a toxina em algum momento. Assim, pode-se concluir que o risco de contaminação por aflatoxinas em pisciculturas no estado de São Paulo existe e deve ser controlado. / The study aimed to evaluate the contamination by aflatoxins (AF) in three species of fish in the state of Sao Paulo, evaluating also the mycobiota and the occurrence of toxins in feed. It were collected feed samples, in use and stored, and fish samples: lambari (Astyanax altiparanae), matrinxã (Brycon cephalus) and pacu (Piaractus mesopotamicus) in five fish farming from state of Sao Paulo. Feed samples were evaluated for fungal contamination, classifying Aspergillus at species and their toxigenic potential. The mold count ranged from 1.0 x 102 CFU/g to 4.0 x 104 CFU/g, and the highest value was found in feed in use. The water activity ranged from 0.45 to 0.72. Regarding mycobiota analysis, the genus Aspergillus was found in 100% of the samples, as well Penicillium, Fusarium and Cladosporium genus were noted. Among the isolates of Aspergillus section Flavi, 84.2% produced aflatoxins. Different Aspergillus species were identified, with 42.1% classified as Aspergillus flavus. The detection and quantitation of aflatoxins in feed samples, fish muscle and fish liver were performed by high performance liquid chromatography (HPLC). AFB1 and AFG2 were detected in 8.34% and 16.67% of feed samples, respectively. In fish muscle, only one sample showed 5.4 &micro;g AFM1/kg. In the liver samples, 50% presented AFM1, ranging from 2.3 to 17.1 &micro;g/kg, and 16.67% had AFB1 at levels from 8.9 to 12.7 &micro;g/kg. Despite the low levels of aflatoxin in the fish feed from the investigated properties, the detection in fish tissues suggests that animals could have ingested the toxin anytime. Thus, it can be concluded that the risk of aflatoxin contamination in fish farming in the state of Sao Paulo exists and it must be controlled.