Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-12T20:37:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-13T22:34:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:34:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Arthur Tenório Ribeiro Clark.pdf: 4721510 bytes, checksum: 77c32bc787cef13bf2d3a0fa3ee2312c (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / Considerado um problema de saúde pública, o câncer tem tido um grande impacto em toda a comunidade, seja em países desenvolvidos ou em países em desenvolvimento. Em mulheres, destacam-se os cânceres de mama e útero, sendo o primeiro o de maior incidência entre as mulheres. Uma detecção precoce desses dois tipos de câncer pode significar um aumento da sobrevida do paciente e de sua cura. Uma das áreas de pesquisa voltada para o estudo do câncer é a busca por biomarcadores que possam ser úteis em sua detecção e/ou tratamento. É de notório conhecimento que uma expressão alterada de glicoconjugados de superfície celular podem contribuir para o fenótipo maligno em eventos oncogênicos. Entre os glicanos desses glicoconjugados, a polilactosamina (poliLacNAc) tem sido alvo de diversos estudos devido ao seu potencial papel em diversas eventos oncogênicos, em especial um envolvimento com o potencial metastático. Assim, a expressão de poliLacNAc e outros carboidratos (GlcNAc) foram avaliados, através de histoquímica com lectinas, em amostras normais e transformadas de colo uterino e mama em diferentes estágios de transformação. Também foram verificados a expressão, utilizando imunohistoquímica, de glicosiltransferases (MGAT5, β3GnT2 e β3GnT3) que podem alterar a expressão das poliLacNAc e galectina-3 (Gal-3), uma proteína que tem afinidade por polilactosaminas que também tem sido associada a eventos oncogênicos, incluído a metástase. Nas amostras de tumores de colo uterino foi observado a presença de cadeias de poliLacNAc foi observada mais expressas nas amostras com maior grau de transformação (carcinomas) quando comparado com as outras amostras normais e pré-malignas, além de que uma expressão nuclear também foi observada significantemente nesse tipo de amostra. Nas amostras de tecidos de mama as poliLacNAc foram pouco expressas em todos as amostras. No entanto, uma expressão de MGAT5, uma enzima que pode regular a expressão de poliLacNAc e que também associada à metástase foi mais observada nas amostras com grau de transformação mais elevado. Essas observações reforçam o potencial envolvimento das cadeias de poliLacNAc e de enzimas chaves que regulam sua expressão, como a MGAT5, durante os eventos de transformação oncogênica. / A public health problem, cancer has a major impact n the entire community, in developed countries or in developing countries. In women, breast and uterine cancers are the most prevalent, being breast cancer the first. An early detection of both cancer can allow an increasing of patient survival and rate of health. One of the goals of cancer science is the biomarker research to use them at detection and/or treatment. It is known that an altered expression of glycoconjugates of cell surface can contribute to the malignant phenotype at oncogenic events. Among these glycans, polylactosamine (polyLacNAc) has been target of many studies for its potential role in many oncogenic events, in especial at the metastatic potential. Thus, the expression of polyLacNAc and others carbohydrates (GlcNAc) was evaluated, using lectin histochemistry, in normal and transformed samples of uterine and breast tissue at different stages. It was also evaluated the expression, by immunohistochemistry, of glycosyltrasnferases (MGAT5, β3GnT2 e β3GnT3) which could regulate polyLacNAc chains and of galectin-3 (Gal-3), a binding protein for polyLacNAc which has been correlated to oncogenic events, including metastasis. At uterine samples, was observed the presence of polyLacNAc chains at high levels in samples which higher degree of transformation (carcinoma) when compared to the normal and pre-malignant samples, and was observed a significant nuclear expression at these samples. In breast samples, polyLacNAc was observed at lower levels at all samples. Besides, MGAT5 expression was observed at higher levels in samples which higher transformation degree. These findings reinforces the potential involvement of polyLacNAc chains and the enzymes involved in its expression, like MGAT5, at oncogenic events.

Lung cancer is the leading cause of death cancer-related worldwide, and is the third most common cancer type. The non-small cell lung cancer (NSCLC) comprises almost 85% of all lung cancers and the 5-year survival rate remains poor. The microRNAs (miRNAs) are a class of small non-coding RNAs that regulate post-transcriptionally the gene expression, being involved in essential processes of the cell. Deregulated miRNAs have been found in many diseases, including cancer, and as a result, there is a growing interest in studying their role as potencial biomarkers. The main objective of this doctoral thesis is to analyze the differential expression of miRNAs in a patient training group by next generation sequencing (NGS) to later validate the findings in an independent set of patients using a less complex technique, such as RTqPCR and evaluate its possible correlation with clinical-pathological and prognostic variables. Likewise, this will allow us to know in greater depth the profile of miRNAs in patients with NSCLC. The analysis by NGS showed 39 miRNAs differentially expressed in tumoral tissue: 28 upregulated and 11 downregulated. 22 of these miRNAs were validated by RTqPCR in a validation set. Later, survival analyses revealed that two miRNAs, miR-21 and miR-188, were related to prognosis. Furthermore, subgroup of patients with elevated expression levels of both miRNAs (miR-21, miR-188) presented a shorter relapse free survival (RFS) and overall survival (OS) than each miRNA individually. The multivariate Cox regression analysis revealed that combined signature could be considered as an independent prognosis biomarker in this group of patients. Therefore, it can be concluded that NGS technology can specifically identify deregulated miRNAs in resected early-stage NSCLC. Moreover, miR-21 and miR-188 overexpression correlated with a worse prognosis and combined signature for both miRNAs (miR-21high- miR-188high) represent a novel independent prognosis biomarker in NSCLC. / El cáncer de pulmón es una de las principales causas de muerte relacionada con cáncer en el mundo, siendo el tercer tipo de cáncer más común. El cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) representa casi el 85% de todos los cánceres de pulmón y la supervivencia a los 5 años es reducida. Los microARNs (miARNs) son un grupo de ARNs no codificantes de pequeño tamaño que regulan postranscripcionalmente la expresión génica y que por tanto están involucrados en procesos esenciales de la célula, encontrándose desregulados en muchas enfermedades incluida el cáncer. Como consecuencia, existe un creciente interés en estudiar su papel como posibles nuevos biomarcadores en cáncer. Por todo ello, el principal objetivo de esta tesis doctoral es analizar la expresión diferencial de miARNs en un grupo prueba de pacientes mediante secuenciación masiva para posteriormente validar el hallazgo en un grupo independiente de pacientes usando una técnica más sencilla como es la RTqPCR y evaluar su posible correlación con las variables clínico-patológicas y pronósticas en pacientes con CPNM. El análisis mediante secuenciación masiva reveló que 39 miARNs estaban diferencialmente expresados en tejido tumoral: 28 sobreexpresados y 11 infraexpresados. 22 de estos miARNs se validaron mediante RTqPCR en una cohorte independiente. Posteriormente, los análisis de supervivencia revelaron que dos miARNs, miR-21 y miR-188, se relacionaron con pronóstico. Además, el grupo de pacientes con elevada expresión de ambos miARNs (miR-21, miR-188) presentaba una supervivencia libre de enfermedad (SLE) y una supervivencia global (SG) más cortas que cada miARN analizado individualmente. El análisis multivariante de regresión de Cox reveló que la firma combinada puede considerarse como un biomarcador pronóstico independiente en este grupo de pacientes. Por tanto se puede concluir que la tecnología de secuenciación masiva puede identificar específicamente miARNs desregulados en CPNM en estadios resecables. Además la sobreexpresión del miR-21 y el miR-188 se correlacionó con un peor pronóstico, y la firma combinada de ambos (miR-21alto- miR-188alto) representó un nuevo biomarcador pronóstico independiente en CPNM. / El càncer de pulmó es una de les principals causes de mort relacionades amb càncer al món, sent a més a més el tercer tipus de cáncer més comú. El càncer de pulmó no microcític (CPNM) representa quasi el 85% de tots els casos de càncer de pulmó i la supervivència als 5 anys continua sent molt baixa. Els microARNs (miARNs) són un grup d'ARNs no codificants de petit tamany que regulen postranscripcionalment l'expressió gènica i que per tant estàn involucrats en procesos fonamentals de la cèl¿lula, trobant-se desregulats en moltes malaties inclosa el cáncer. Com a consequència, existeix un creixent interés en estudiar el seu paper com possibles nous biomarcadors en cáncer. Per tot açò, el principal objectiu d'esta tesi doctoral és analitzar l'expressió diferencial de miARNs en un grup prova de pacients mitjançant seqüenciació massiva per a posteriorment validar la trobada en un grup independent de pacients utilitzant una tècnica més senzilla com és l'RTqPCR i evaluar la seu possible correlació amb les variables clinico-patològiques i pronòstiques en pacients amb CPNM. L'ànalisi mitjaçant seqüenciació masiva revelà que 39 miARNs estaven diferencialment expressats en teixit tumoral: 28 sobreexpressats i 11 infraexpressats. 22 d'aquests miARNs van ser validats mitjançant RTqPCR en un grup independent. Posteriorment, les análisis de supervivència revelaren que dos miARNs, miR-21 i miR-188, es relacionaren amb pronòstic. A més a més, el grup de pacients amb elevada expressió de tots dos miARNs (miR-21, miR-188) presentava una supervivència lliure de recaiguda (SLR) y una supervivència global (SG) més curtes que cadascun dels miARNs individualment. L'anàlisi multivariant de regressió de Cox revelà que la firma combinada pot considerar-se com un biomarcador pronòstic independent en aquest grup de pacients. Per tant, se pot concloure que la tecnologia de seqüenciació masiva pot identificar específicament miARNs desregulats en CPNM en estadis resecables. A més, la sobreexpressió del miR-21 i miR-188 correlacionava amb un pitjor pronòstic, i la firma combinada de tots dos (miR-21alt-miR-188alt) va representar un nou biomarcador pronòstic independent en CPNM. / Gallach García, S. (2017). ANÁLISIS DE MICROARNS EN CÁNCER DE PULMÓN NO MICROCÍTICO [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/90428 / TESIS

Antecedentes: En los últimos años se ha utilizado la conducta pupilar para medir el desempeño cognitivo de las personas, donde un mayor esfuerzo cognitivo produce un incremento en el diámetro pupilar. Diversos estudios han mostrado que la Memoria Visual Integrativa de Corto Plazo (memoria que permite almacenar la imagen completa y unívoca de un objeto) se encuentra alterada en personas con Enfermedad de Alzheimer (EA). A su vez, se ha vinculado al funcionamiento de la Memoria Visual Integrativa de Corto Plazo con una alta demanda de recursos cognitivos. Trabajos previos usando diversos estímulos visuales, mostraron que personas con Enfermedad de Alzheimer no presentan cambios significativos en sus pupilas a medida que aumenta la exigencia cognitiva. Objetivos: Establecer si el análisis del tamaño pupilar puede constituirse como un biomarcador cognitivo no invasivo para contribuir al diagnóstico temprano de la Enfermedad de Alzheimer. Métodos: Para analizar la conducta pupilar se utilizó la técnica de seguimiento ocular (eyetracking) en una muestra de 30 personas sanas (Controles) y 18 pacientes con diagnóstico de Enfermedad de Alzheimer leve mientras se evaluó el desempeño de la Memoria Visual Integrativa de Corto Plazo. Resultados: La media de dilatación pupilar en los Controles se amplió significativamente a medida que la actividad demandó mayor esfuerzo cognitivo. Por el contrario, pacientes con EA no mostraron mayor dilatación pupilar significativa frente al incremento de la demanda cognitiva. Además, el análisis de regresión logística mostró que el análisis pupilar permite separar personas sanas (Controles), de Enfermos con Alzheimer con una sensibilidad de 94% y una especificidad del 100%. Conclusiones: Los pacientes con Enfermedad de Alzheimer leve presentaron alteraciones cognitivas que impidieron modificar significativamente el diámetro de sus pupilas a medida que se incrementaba la demanda cognitiva. A su vez, la regresión logística mostró que lasrespuestas pupilares pueden considerarse una herramienta muy eficaz para clasificar desempeño a nivel individual, clasificando a todos los pacientes con Enfermedad de Alzheimer como tales (100 % especificidad). Los análisis, resultados e interpretaciones reportados aquí, son pioneros en la investigación de alteraciones en mecanismos moleculares y cognitivos en la Enfermedad de Alzheimer. Finalmente, proponemos el análisis de la conducta pupilar durante la ejecución de tareas que involucren a la Memoria Visual Integrativa de Corto Plazo como un biomarcador para detectar demencia tipo Alzheimer en estadíos tempranos de la patología / Background: In recent years, pupillary behavior has been used to measure the cognitive performance of people, where greater cognitive effort produces an increase in pupillary diameter. Several studies have shown that Integrative Visual Short-Term Memory (memory that allows storing the complete and univocal image of an object) is altered in people with Alzheimer's Disease (AD). In turn, the functioning of the Integrative Visual Short-Term Memory has been linked to a high demand of cognitive resources. Previous work using different visual stimuli showed that people with Alzheimer's disease do not show changes in their pupils as cognitive demand increases. Objectives: To establish whether pupil size analysis can be used as a non-invasive cognitive biomarker to contribute to the early diagnosis of Alzheimer's disease. Methods: To analyze pupillary behavior, the eyetracking technique was used in a sample of 30 healthy people (Controls) and 18 patients with a diagnosis of mild Alzheimer's disease while the performance of the Integrative Visual Short-Term Memory was evaluated. Results: Mean pupillary dilation in Controls widened significantly as the activity demanded greater cognitive effort. In contrast, AD patients did not show greater pupillary dilation as cognitive demand increased. In addition, logistic regression analysis showed that pupillary analysis allows separating healthy people (Controls), from Alzheimer's Disease with a sensitivity of 94% and a specificity of 100%. Conclusions: Patients with mild Alzheimer's Disease presented cognitive alterations that prevented significant modification of their pupil diameter as cognitive demand increased. In turn, logistic regression showed that pupillary responses can be considered a very effective tool to classify performance at the individual level, classifying all patients with Alzheimer's disease as such (100% specificity). The analyses, results and interpretations reported here are pioneering in the investigation of alterations in molecular and cognitive mechanisms in Alzheimer's disease. Finally, we propose the analysis of pupillary behavior during the execution of tasks involving Integrative Visual Short-Term Memory as a biomarker to detect Alzheimer's type dementia in early stages of the pathology.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-03-09T12:05:20Z No. of bitstreams: 1 Gisele Barbosa da Silva.pdf: 1555897 bytes, checksum: 5f2bad68cb77c839037be42c78bab9f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-09T12:05:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gisele Barbosa da Silva.pdf: 1555897 bytes, checksum: 5f2bad68cb77c839037be42c78bab9f2 (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Donkeys are rustic animals with excellent adaptability to different environmental conditions and the activities to which they are submitted. The aim of the present study was to assess the hematological and biochemical biomarkers of Northeastern donkeys, since very little data has been published on the clinical aspects of these animals. In total, 62 adult Northeastern donkeys (male and female) were assessed. The animals were fed with grass, salt and hay from the Northeast of Brazil (Mirandiba, Limoeiro and Natal). Hematological and biochemical analyses were carried out (urea, creatinine, aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase, gamma-glutamyl transferase, creatine kinase (CK), total plasma proteins, albumin, uric acid (UcA), calcium, phosphorus (P), chlorides (Cl), iron, triglycerides (TG), total cholesterol (TC), sodium, potassium, glutamine and glutamate). The results were submitted to version 13.0 of SigmaStat for Windows software, using ANOVA with two factors (gender and region). Tukey´s test was then applied, with the level of significance set at 5%. All of the data were displayed as mean +/- standard deviation values. Significant differences were recorded for the different biomarkers, according to gender: red cell distribution width coefficient of variation (RDW-CV); mean platelet volume (MPV); UcA; TC; TG; Ca; P. Significant differences were also found for the region: erythrocytes; hemoglobin; hematocrit; mean corpuscular volume (MCV); red cell distribution width standard deviation (RDW-SD); lymphocytes; urea; UcA; Glutamate; TC; TG; NEFA; CK; P; Cl. In conclusion, when analyzing the biomarkers for adult Northeastern donkeys from three different regions of the Northeast of Brazil, the values recorded for gender, region and breeding system were similar to those reported in the literature, even when the body score condition was not modified. / Os asininos são animais rústicos que possuem boa adaptabilidade às diversas condições ambientais e atividades empregadas às quais são submetidos. Objetivou-se avaliar os biomarcadores hematológicos e bioquímicos dos jumentos nordestinos, uma vez que dados publicados sobre aspectos clínicos desses animais são escassos. Foram avaliados 62 jumentos nordestinos, machos e fêmeas, adultos, alimentados com capim, sal e feno, oriundos da região Nordeste do Brasil (Mirandiba, Limoeiro e Natal). Foram realizadas as análises hematológicas e bioquímicas (ureia, creatinina, aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), fosfatase alcalina (FA), gama glutamiltransferase (GGT), creatina quinase (CK), proteínas plasmáticas totais (PPT), albumina, ácido úrico (AcU), cálcio (Ca), fósforo (P), cloretos (Cl), ferro, triglicerídes (TRIG), colesterol total (COLE-T), sódio, potássio, glutamina e glutamato). Os resultados obtidos foram submetidos ao programa estatístico SigmaStat 13.0 para Windows, utilizando ANOVA com dois fatores (sexo e região) e teste Tukey com o nível de significância de 5%. Todos os dados foram expressos em médias +/- desvio padrão. Analisando os resultados, foram encontradas diferenças significativas nos diferentes biomarcadores conforme o grupo sexual (amplitude de distribuição dos eritrócitos coeficiente de variação (RDW-CV), volume plaquetário médio (VPM), AcU, COLE-T, TRIG, Ca, P), e o grupo regional (hemácias, hemoglobina, hematócrito, volume corpuscular médio (VCM), amplitude de distribuição dos eritrócitos desvio padrão (RDW-SD), linfócitos, ureia, AcU, Glutamato, COLE-T, TRIG, AGNE, CK, P, Cl). Concluiu-se que para os biomarcadores estudados nos asininos adultos da raça Nordestina oriundos de três regiões distintas no Nordeste, os valores encontrados demonstraram que tanto sexo, região e sistema de criação estão próximos aos que são indicados pela literatura, mesmo sem modificar o índice de escore corporal.

Orientador: Eunice Oba / Resumo: O presente estudo teve como objetivo descrever o perfil proteico do plasma seminal de búfalos e bovinos e identificar proteínas que funcionem como marcadores de funções espermáticas. Foram utilizados 16 búfalos e 16 bovinos sadios, de 2,5 a 5 anos de idade. A colheita do sêmen foi realizada por eletroejaculação e analisado segundo características macroscópicas e microscópicas. Após a análise, as amostras foram centrifugadas a 800g durante 10 minutos para a separação do plasma seminal, o qual foi imediatamente congelado. No laboratório, as amostras foram descongeladas em banho de gelo e recentrifugadas a 10.000g durante 30 minutos, a 4° C. A concentração de proteína total foi realizada pelo método Bradford utilizando nanoespectrofotômetro As amostras foarm digeridas in solution, seguida da análise de espectrometria de massas. No primeiro experimento, foram encontradas 48 proteínas no plasma seminal de búfalos, sendo que 10 destas apresentaram diferenças estatísticas significativas entre os grupos. As proteínas spermadhesin, ribonuclease, 14-3-3 protein zeta/delta, acrosin inhibitor, epididymal secretory protein E, serum albumin e clusterin foram encontradas em maior abundância no plasma seminal de búfalos de alta motilidade espermática, sendo as demais prosaposin, peptide YY, cystatn-C e secretoglobin family 1D member encontradas em animais de baixa motilidade espermática. No experimento 2 foram identificados um total de 25 proteínas relevantes em bovinos e búfalos, sendo comu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T12:40:08Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Amanda Guedes Linhares.pdf: 6914929 bytes, checksum: e47bb91b70aceba932b0339a3e0c2b20 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T12:40:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Amanda Guedes Linhares.pdf: 6914929 bytes, checksum: e47bb91b70aceba932b0339a3e0c2b20 (MD5) Previous issue date: 2013 / Apesar do aumento na produtividade agrícola proporcionado pelos pesticidas, o uso inadequado dessas substâncias traz impactos negativos à saúde humana e ambiental. Estimativas de eficiência de aplicação relatam que apenas cerca de 0,1% dos pesticidas aplicados atingem as pragas-alvo, enquanto o restante se espalha pelo ambiente. Além disso, os recursos financeiros economizados ao se evitar o ataque de pragas terminam sendo gastos na recuperação dos danos à saúde pública e ao meio ambiente causados pelos próprios pesticidas. Diversas metodologias vêm sendo desenvolvidas utilizando as enzimas colinesterases como biomarcadores de pesticidas organofosforados e carbamatos, tendo em vista sua alta especificidade em relação a esses compostos. Para utilização dessas biomoléculas como biomarcadores de pesticidas, estudos preliminares são realizados analisando-se as alterações provenientes de sua interação. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um método para extração e determinação da atividade da AChE eritrocitária humana e avaliar a precisão do método na detecção de pesticidas, comparando os resultados de inibição com a legislação nacional e internacional vigente. Dessa forma, membranas de eritrócitos livres de hemoglobina foram extraídas e utilizadas na análise da atividade da acetilcolinesterase (AChE) ancorada nessas células. A evidência da atividade da enzima foi comprovada através da inibição seletiva utilizando dibrometo de 1,5-bis (4-alil-dimetilamônio-fenil) pentan-3-ona (BW284c51), tetraisopropil pirofosforamidato (Iso-OMPA) e brometo de neostigmina. As amostras de sangue foram expostas a treze concentrações de três pesticidas organofosforados (diclorvós, clorpirifós e diazinon) e dois carbamatos (carbaril e carbofuran). As concentrações dos pesticidas capazes de inibir a atividade da enzima em 50% (CI50) foram 10,66 μM (diclorvós), 21,42 μM (clorpirifós), 109,98 μM (carbaril) e 5,44 μM (carbofuran). O diazinon não atingiu 50% de inibição da atividade enzimática na faixa de concentração utilizada. Os resultados relativos a 20% de inibição da atividade enzimática (CI20 - nível utilizado na estimativa dos limites mínimos de resíduos de compostos anticolinesterásicos) foram inferiores aos valores de ingestão diária aceitável (IDA) para cada pesticida recomendados pela ANVISA, OMS, FAO, ATSDR, EFSA e USEPA com exceção do organofosforado diazinon. Sendo assim, o cut-off de 20% de inibição da atividade da AChE eritrocitária foi escolhido para avaliar a sensibilidade e a especificidade, parâmetros de confiabilidade do método, capazes de minimizar a influência de falsos positivos e falsos negativos na análise. Os valores de sensibilidade para os pesticidas investigados situaram-se acima de 80%, exceto para o diazinon, enquanto que os valores de especificidade para todos os pesticidas estiveram acima de 60%. Estes resultados sugerem que os métodos de extração da AChE eritrocitária e de determinação de sua atividade propostos podem ser ferramentas adequadas para o monitoramento da exposição ocupacional aos agrotóxicos.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:48:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8996_1.pdf: 8721607 bytes, checksum: a9d8c98e91d8c01c8d88a83f7375e09b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Organofosforados e carbamatos são as principais classes de inseticidas no mercado mundial. Sua rápida degradação e baixa estabilidade no meio ambiente fizeram com que substituíssem rapidamente outras classes importantes. Todavia, sua alta toxicidade em relação aos organismos não-alvo aliada às grandes quantidades utilizadas constituem uma ameaça à saúde humana e ambiental. O modo de ação de ambas as classes baseia-se na inibição de enzimas colinesterases. No presente trabalho, a acetilcolinesterase presente no cérebro de cinco espécies de peixes, Colossoma macropomum (tambaqui), Arapaima gigas (pirarucu), Rachycentron canadum (beijupirá), Oreochromis niloticus (tilápia do Nilo) e Cichla ocellaris (tucunaré) foi caracterizada fisico-quimica e cineticamente e foi exposta a pesticidas organofosforados, carbamatos e a íons. A acetilcolinesterase eritrocitária humana também foi exposta a esses pesticidas a fim de verificar a viabilidade de seu uso na detecção de pesticidas em agricultores residentes em localidades distantes dos laboratórios de análises. Os resultados demonstraram a possibilidade de estimação de parâmetros de eficiência catalítica (Kcat, Kcat/km, Energia de ativação e acréscimo na velocidade de reação) a partir do extrato bruto. Além disso, foi observada alta sensibilidade dos extratos enzimáticos de peixes aos pesticidas, principalmente ao diclorvós, carbofuran e tetraetil pirofosfato (TEPP). Também foi verificada a influência causada por alguns íons sobre a atividade dessas enzimas uma vez que eles são frequentemente encontrados em amostras ambientais. Nos ensaios com a enzima eritrocitária humana, constatou-se que a mesma, nas condições de ensaio propostas, foi sensível a concentrações dos pesticidas abaixo dos limites recomendados pela legislação nacional e internacional. Tais resultados contribuem para a determinação de condições ótimas experimentais e sugerem a utilização da acetilcolinesterase dessas fontes como biomarcador in vitro no monitoramento ambiental e da exposição ocupacional de alguns desses pesticidas

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Gens Diana de les ProantocianidinesLa tesi es planteja demostrar la següent hipòtesis: les proantocianidines actuen modulant l'expressió diferencial de gens diana per condicionar una adaptació homeostàtica que previngui situacions d'estrès metabòlic, oxidatiu o inflamatori. S'han emprat diferents estratègies experimentals, unes utilitzant la metodologia de transcriptòmica no dirigida analitzant fetges de rates amb tractaments aguts i crònics dosi-resposta amb extractes de proantocianidines. Els resultats obtinguts a partir d'aquesta primera aproximació ens indiquen que no hi ha dosi resposta: a cada dosi el ventall de gens que es modifiquen es diferent i no d'una forma especialment significativa, possibilitant això no obstant adaptacions bioquímiques que van en el sentit postulat, modulant el metabolisme dels lípids i corregint potencials situacions d'estrès inflamatori. Destaca el paper proapoptòtic descobert. Una segona estratègia s'ha centrat en l'estudi de proantocianidines concretes: epicatequina, dímer i trímer de catequina fent servir cèl·lules hepàtiques en cultiu utilitzant també la transcriptòmica no dirigida. Destaquen com a resultats el fet que són molts pocs els gens que modifiquen l'expressió amb epicatequina, mentre que pel dímer i trímer la modificació de l'expressió és important i centrada en uns processos bioquímics alterats pel dímers, uns altres pel trímer i forces, especialment en el context d'actuar com inhibidors de la resposta immune, per ambdues molècules. En la tercera estratègia, centrada en la tècnica de la transcriptòmica dirigida s'han estudiat els canvis d'expressió gènica en cèl·lules hepàtiques i cèl·lules endotelials tractades amb extracte de proantocianidines de pinyol de raïm, extracte de proantocianidines ric en oligòmers, epicatequina gal·lat, dímer B2 i trímer C1, per tal de comprovar els canvis de la transcriptòmica no dirigida i ampliar l'estudi a cèl·lules endotelials. El conjunt de resultats obtinguts permeten avançar en la hipòtesi plantejada i avalen el potencial de les proantocianidines com a molècules reguladores i utilitzables en la indústria dels aliments funcionals. Gens Diana de les ProantocianidinesThe aim of this Thesis is to demonstrate the following hypothesis: proanthocyanidins act by modulating the differential expression of target genes for conditioning a homeostatic adaptation to prevent metabolic, oxidative or inflammatory stress.We have used different experimental strategies using transcriptomics tool for achieving the hypothesis.The first strategy is based on the methodology of untargeted transcriptomics analysis using the livers of rats that were administered an acute or a chronic treatment of a proanthocyanidin extract. The results obtained are firstly, that the effect is not dose-dependent. At each dose the range of genes that change is different and are not particularly significant. The conclusions derived from this first study showed a biochemical adaptation of animals, modulating lipid metabolism in addition to exert proapoptotic and anti-inflammatory action.The second strategy is focused on the study of pure molecules, using concrete proanthocyanidins such as the epicatechin monomer, a dimer of catechin and a trimer of catechin. These three treatments have been used in rat liver cells in culture and also using untargeted transcriptomics tool. The results derived from this secondstrategy postulated that the administration of epicatechinmodify the expression of a few genes. Moreover, administration of dimer of catechin and trimer of catechin exert a dual effect evident on these cells, inducing common changes mainly supressingthe immune response.The third strategy is focused on targeted transcriptomics. The models used have been liver cells and endothelial cells in culture treated with grape seed proanthocyanidins extract, an extract rich in oligomers purified from the generic extract, epigallocatechin gallate, dimer B2 and trimer C1 to visualize changes in gene expression of selected genes, all involved in the development of cardiovascular disease.The overall results obtained allow us to progress in the hypothesis and support the potential of proanthocyanidins as regulatory molecules and its use in the functional food industry.

ROMERO, José Camilo Torres. Análise proteômica do plasma de pacientes portadores de síndrome mielodisplásica do tipo areb e arsa utilizando lectinas vegetais. 2016. 104 f. Tese (Doutorado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-05-03T20:55:53Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_jctromero.pdf: 2418639 bytes, checksum: f9af8288a0c70314148c067bb2ed7ae5 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-05-18T23:10:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_jctromero.pdf: 2418639 bytes, checksum: f9af8288a0c70314148c067bb2ed7ae5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-18T23:10:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_jctromero.pdf: 2418639 bytes, checksum: f9af8288a0c70314148c067bb2ed7ae5 (MD5) Previous issue date: 2016 / The myelodysplastic syndromes (Myelodysplastic Syndrome MDS) are diseases that occur when blood-producing cells are damaged bone marrow. This causes damage to one or moretypes of blood cells because its production is defective. MDS is considered a type of cancer and often end up being melodie acute leukemia (AML). The most common types of these syndromes are refractory anemia with ringed sideroblasts (ARSA) and anemia refractory with Excess Blasts (AREB). This study aimed to carry out the proteomic analysis of spinal cord serum of pediatric patients with any of the syndromes for the identification of proteins that are potential candidates for biological markers for evaluation, study and diagnosis of disease. The samples from ten patients with ARSA, tem with AREB and Ten healthy persons (control) were compared. These were subjected to immunodepletion, affinity chromatography with lectin galactose-linker selected by the anomeric recognition profile using chromatography in crosslinked hemicelulases, the selected lectins were subsequently immobilized in Sepharose 4B, the serum bone marrow samples were digested for subsequent analysis by mass spectrometry. The softwareExpressionE, based on protein expression levels, calculated the ratio between the selected groups, so 7 proteins have been identified as possible candidates for the biomarker syndromes. The overexpression of Vitronectin (VTN), fibrinogen (FGA), Pregnancy zone protein (PZP), Kininogen (KNG1) Immunoglobulin lambda chain (IGL), complement factor C4b (CB4) and Hemopexin (HPX) compared with the group control, seems to be an indicator of syndromes and were selected to form a panel of potential candidates for prognostic biomarkers. The only recognition by the frutalin to Clusterin (CLU) and Vitronectin in ARSA and Fibrinogen to AREB, do lectin a very useful tool to differentiate syndromes in proteomics studios. / As Síndromes Mielodisplásicas (SMD) são doenças que ocorrem quando as células produtoras de sangue são danificadas na medula óssea e esses danos podem afetar um ou mais tipos de células sanguíneas. Os tipos mais comuns de SMD são a Anemia Refratariacom Sideroblastos em Anel (ARSA) e Anemia Refratariacom Excesso de Blastos (AREB). Este trabalho teve como objetivo realizar a análise proteômica do plasmamedular de pacientes com SMD tipo ARSA e AREB, visando àidentificação de proteínas que sejam potenciais candidatas a marcadores biológicos para avaliação, estudo e diagnóstico dessas doenças. Amostras de plasmade dez pacientes com ARSA, dez com AREB e dez indivíduos saudáveis (Controle) foram selecionadas para análise proteômica. Estas foram submetidas à imunodepleção, cromatografia de afinidade com lectina α-D-galactose-ligante de sementes de Artocarpus incisa imobilizada em SepharoseTM 4B, concentradas e digeridas para posterior análise por espectrometria de massas. O programa ExpressionE, baseado nos níveis de expressão das proteínas, calculou a razão entre os grupos selecionados. Foram identificadas 7 proteínas potenciais candidatas a biomarcadores, tais como a Vitronectina (VTN), Fibrinogênio (FGA), Pregnancy zone protein (PZP), Cininogênio (KNG1), Cadeia de Imunoglobulina Lambda (IGLL1), Factor do complemento Cb4 (Cb4) e Hemopexina (HPX), por estarem super expressas no grupo de pacientes com SMD, em ambos os tipos, ao se comparar com o grupo controle (indivíduos sadios). Estas foram selecionadas para formar um painel de proteínas candidatas biomarcadoresde diagnóstico da SMD. O reconhecimento único por parte da frutalina para Clusterina (CLU) e Vitronectina em ARSA e Fibrinogenio para AREB, torna essa lectina, uma ferramenta muito útil para diferenciar as SMD em estudos proteômicos.