Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2016-05-09T19:10:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Grasiele Bonadiman.pdf: 3637833 bytes, checksum: 9c919dca44b71050b2c6cbe78d9a59a6 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-06-06T12:34:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Grasiele Bonadiman.pdf: 3637833 bytes, checksum: 9c919dca44b71050b2c6cbe78d9a59a6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T12:34:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Grasiele Bonadiman.pdf: 3637833 bytes, checksum: 9c919dca44b71050b2c6cbe78d9a59a6 (MD5) / Possíveis associações entre doença periodontal (DP) e alterações cardiovasculares em cães, como a endocardite infecciosa (EI), são relatadas na literatura, apesar de ainda não comprovadas. Fármacos anestésicos, utilizados para a tratamento periodontal (TP), podem levar à hipotensão, redução do fluxo sanguíneo coronariano e isquemia miocárdica. A determinação de biomarcadores, especialmente a troponina I cardíaca (TnIc), pode ser utilizada para a detecção de lesão miocárdica tanto em casos de EI, quanto por efeitos de fármacos anestésicos. Objetivou-se avaliar os níveis séricos de TnIc em cães com DP, como um indicador de EI, anestesiados para TP, com e sem o uso de antibióticos. Utilizou-se 24 cães com DP, sem evidências de outras doenças sistêmicas, selecionados por meio de avaliação física, laboratorial e cardiovascular. Formou-se três grupos de 8 cães cada: grupo I (controle) – cães anestesiados; grupo II - cães anestesiados submetidos a TP, não tratados com antibióticos; grupo III - cães anestesiados submetidos a TP, tratados com antibióticos. Os cães foram sedados com meperidina e acepromazina, induzidos com propofol e mantidos com isoflurano em oxigênio. Dosagens de TnIc foram realizadas imediatamente antes e 24 horas após o TP, com kit comercial pelo método de ELISA. A análise estatística foi realizada por meio do teste de "D'Agostino & Pearson", teste t para comparação de duas médias e teste post hoc de comparação múltipla de Tukey, após a análise de variância. Não houve diferença significativa nas dosagens de TnIc entre os grupos, nem entre os momentos avaliados (p>0,05). Conclui-se que não há aumento de TnIc em cães com DP após o TP, submetidos ou não a antibioticoterapia, podendo sugerir que não houve o desenvolvimento de EI; e não há aumento de TnIc em cães saudáveis submetidos ao protocolo anestésico estipulado. / Associations between periodontal disease (PD) and cardiovascular changes in dogs, such as infeccious endocarditis (IE), are reported by literature, although no evidences between them are verified. Anesthetic drugs, used for periodontal treatment (PT), can lead to hypotension, reduction of coronary blood flow and myocardial ischemia. Determination of biomarkers, especially cardiac troponin I (cTnI) can be used for the detection of myocardial injury in both cases: endocarditis and the effects of anesthetic drugs. This study aimed to evaluate canine cTnI in dogs with PD, as an indicator of IE, after PT, with and without using antibiotics. It was used 24 dogs with PD, with no evidence of any other systemic diseases. They were selected by physical examination, laboratory and cardiovascular evaluation and were divided into three groups: group I (n=8; control) - anesthetized dogs, group II (n=8) - anesthetized dogs submited to PT, not treated with antibiotics, group III (n=8) - anesthetized dogs submited to PT, treated with antibiotics. The dogs were sedated with acepromazine and meperidine, induced with propofol and maintained with isoflurane in oxygen. Canine cTnI dosages were taken immediately before and 24 hours after PT, using commercial kit (ELISA). Statistical analysis were performed by using "D'Agostino & Pearson" normality test, unpaired t test to compare two samples and Tukey´s post hoc test for multiple comparisons. All tests were performed at a level of significance of 0.05 No significant differences were found between groups or in different moments (p>0.05). It was concluded that there is no increased cTnI in dogs with PD after PT, treated or not with antibiotics, suggesting that there was no development of IE, and there is no increase in canine cTnI in healthy dogs anesthetized using this protocol.

Glioblastoma multiforme (G BM), ou astrocitoma grau IV, é o tumor mais comum e letal do sistema nervoso central. Uma de suas características mais marcantes é seu alto potencial invasivo do tecido normal adjacente. Neste processo, o remodelamento da matriz extracelular, modulado por enzimas que degradam seus componentes e por inibidores destas enzimas, é crucial. Foi descrito que a expressão de MMP-2 e MMP-9, membros da família das metaloproteinases de matriz, aumentam conforme a progressão de astrocitomas. A variante canônica de RECK suprime a invasão tumoral e metástase através da inibição da atividade de, pelo menos, três MMPs: MMP-2, MMP-9 e MMP-14. Uma correlação positiva tem sido observada entre a abundância da expressão de RECK em amostras tumorais e um prognóstico mais favorável para pacientes com diversos tipos de tumores. Neste estudo, variantes de splicing do gene supressor de tumor RECK foram identificadas através da análise de Expressed sequenced Tags (ESTs), isoladas por RT-PCR, sequenciadas e clonadas. Três novas variantes de splicing do gene RECK foram identificadas e caracterizadas. O perfil de expressão dos transcritos de RECK foi determinado através de ensaios de RT-PCR quantitativo em um painel de tecidos normais e, também, durante a progressão de astrocitomas. Foram utilizadas, para esta análise, amostras macro dissecadas de tumores de pacientes com astrocitomas grau I (n=15), II (n=15), III (n=15) e GBMs (n=30). Os resultados mostram que maior expressão de RECK canônico, acompanhada de maior razão de expressão da variante canônica em relação às variantes de splicing alternativo, correlaciona positivamente com maior sobrevida global de pacientes com GBM, sugerindo seu papel como potenciais biomarcadores para o prognóstico destes pacientes. Análise funcional das isoform as de RECK em células U87 MG revelou que as células superexpressando as isoformas não apresentam inibição do processo de invasão celular, como observado para superexpressão da proteína canônica. Dentre as isoformas analisadas, destaca-se RECK-B, isoforma potencialmente ancorada à membrana plasmática por GPI, como a proteína canônica RECK, sugerindo uma possível colocalização destas variantes. Observa-se que células superexpressando RECK-B apresentam maior capacidade tumorigênica. Os resultados indicam que as variantes de RECK e o balanço entre a expressão destas variantes, apresentam um papel importante no comportamento e na agressividade de GBMs, tendo potencial valor na clínica. Além disso, para abrir perspectivas para o estudo das variantes de RECK, o balanço de expressão dos transcritos canônico e alternativos deste gene foi explorado durante os processos de diferenciação osteogênica e adipogênica. Os resultados indicam que a expressão da variante canônica é mais abundante em relação à expressão de suas isoformas em estágios tardios da adipogênese, sendo que o perfil inverso é observado em relação à isoforma B durante a osteogênese, sugerindo que o balanço entre os níveis de expressão das isformas de RECK possui um potencial papel biológico que deve ser explorado durante esses processos. Em conjunto, os resultados demonstram a existência de, pelo menos, três variantes de splicing do gene supressor de tumor RECK com envolvimento na tumorigênese e na diferenciação celular, abrindo novas perspectivas para o estudo e a aplicação do gene RECK na clínica. / Glioblastoma multiforme (GBM) or grade IV astrocytoma is the most common and lethal tumor of the central nervous system. One of the most striking features of GBMs is their invasive potential of the normal surrounding brain tissue. It has been described that MMP-2 and MMP-9 expression levels increase during astrocytoma progression. Canonical RECK suppresses tumor invasion and metastasis by negatively regulating at least three matrix metalloproteinases, namely: MMP-9, MMP-2 and MT1-MMP. A positive correlation has been observed between the abundance of RECK express ion in tumor samples and a more favorable prognosis for patients with several types of tumors. In this study, splice variants of the RECK tumor suppressor gene were identified by Expressed Sequence Tag (EST) analysis, isolated by RT-PCR, sequenced and cloned. Three novel alternatively spliced variants of the RECK tumor suppressor gene were identified and characterized. The RECK transcripts expression profiles were investigated using quantitative RT-PCR assays in a normal tissue RNA panel and, also, during astrocytoma progression in macrodissected tumor samples of patients with astrocytoma grades I (n=15), II (n=15), III (n=15) and IV/GBM (n=30). The results show that higher canonical RECK expression, accompanied by a higher ratio of canonical to alternative transcript expression, positively correlated with higher overall survival rate after chemotherapeutic treatment of GBM patients. Our findings suggest that these RECK transcript variants may potentially be used as biomarkers for prognosis of GBM patients. U87 MG cells overexpressing each RECK alternative variant were generated and found to lack the supressive role of cellular invasion processes found upon overexpressing the canonical protein. Among the characterized isoforms, RECK-B stands out, since this isoform is potentially anchored to the cell membrane by a GPI anchor, exactly as the canonical RECK and, also, since cells overexpressing RECK-B display greater tumorigenic capacity. The results indicate that RECK variants and the balance between the expressions of these variants, play an important role in the behavior and aggressiviness of GBMs, therefore have a potential translational application. In addition, in order to investigate new perspectives for the analysis of these isoforms, the expression balance of RECK transcripts was assessed during osteogenesis and adipogenesis, by qRT - PCR. The results show that the expression of the canonical RECK variant is more abundant that that of its alternative isoforms in later stages of adipogenic differentiation. The opposite profile is found regarding RECK-B during osteogenesis, suggesting that the balance between the expressions of these transcripts may have a potential role during these processes. Taken together, the results show the existence of, at least, three alternatively spliced variants of the RECK tumor suppressor gene, which are involved in tumogigenesis and cellular differentiation, o pening new perspectives for studies and clinical application of the RECK gene.

Este trabalho descreve o desenvolvimento de um biossensor contendo transdução condutométrica sem contato (C4D, capacitively coupled contactless conductivity detection) e ácido fólico (FA) como biorreceptor em microchip, uma nova alternativa que poderá ser utilizada na determinação do biomarcador tumoral FR-α. Essa espécie exibe interações com FA altamente específicas, com constantes de formação da ordem de 109-1010. Os dispositivos microfluídicos, os quais consistiram de uma lâmina de vidro (integrando os eletrodos), dielétrico (contendo a fase biossensora) e substrato de poli(dimetilsiloxano) (PDMS, incorporando os microcanais), foram fabricados utilizando-se processos de fotolitografia e deposição de filmes finos em fase vapor. Objetivando melhorias nos níveis de detecção da C4D, estudos de sensibilidade com base em parâmetros da curva analítica foram conduzidos alterando-se a natureza do dielétrico e a configuração dos eletrodos. Posteriormente, estudos de caracterização foram realizados para as superfícies modificadas com os intermediários de imobilização; condições reacionais distintas (reagente, concentração, solvente e tempo) foram consideradas. As técnicas de microscopia eletrônica de varredura e espectroscopia de fotoelétrons excitados por raios-X foram usadas, respectivamente, a fim de se verificar a possível formação de aglomerados e permitir determinações qualitativas e quantitativas sobre as composições químicas das superfícies. Como resultado dos experimentos de sensibilidade e caracterização de superfície, adotamos os parâmetros seguintes para os ensaios de interações biomoleculares posteriores: filme de SiO2 como dielétrico, eletrodos seletivos à C4D com formato retangular e orientação antiparalela e monocamadas automontadas do reagente 3-aminopropil(trietoxisilano) como intermediário de imobilização de FA. As duas etapas finais do trabalho foram: otimização do tempo de funcionalização com FA (3, 5 e 7 h) e caracterização da fase biossensora, realizada a partir de medidas de C4D e microscopia de força atômica (AFM). Para o primeiro caso, os microchips foram aplicados a um padrão de anticorpo monoclonal específico a FA (α-FA). Os ensaios biomoleculares indicaram uma adsorção efetiva de FA junto à superfície de SiO2 silanizada, sem a ocorrência (ao menos em níveis significativos) de impedimentos estéricos de sua espécie bioativa. Dentre os tempos de funcionalização investigados, 3 h foi aquele que resultou em uma maior sensibilidade do método. Em termos da etapa de caracterização eletroquímica da fase biossensora, seus resultados mostraram haver correlação entre a resposta analítica e as interações FA/α-FA. Em adição, conforme indicaram as medidas de AFM, não houve alterações drásticas na morfologia do substrato (SiO2) em função dos processos de modificação química de superfície. Por fim, o uso da C4D como uma técnica de transdução em biossensores mostrou-se uma alternativa promissora para a análise do biomarcador tumoral FR-α. Dentre outros aspectos, essa plataforma analítica requer uma instrumentação simples, barata e portátil, não apresenta inconvenientes relacionados ao contato eletrodo/solução, dispensa o uso de mediadores redox e permite a determinação simultânea de multianalitos. Neste ínterim, alterações no transdutor devem ser implementadas visando um aumento na sensibilidade do método, o qual representa seu fator limitante principal. / This work describes the development of a biosensor containing capacitively coupled contactless conductivity transduction (C4D) and folic acid (FA) as bioreceptor in microchip, a new alternative that can be used in FR-α tumor biomarker analysis. FR-α exhibits highly specific interactions with FA, showing formation constants of the order of 109-1010. The microfluidic devices consisted of a glass layer (integrating the electrodes), dielectric (containing the biosensor phase), and poly(dimetilsiloxane) substrate (PDMS, incorporating microchannel). The microfabrication stage evolved photolithography processes, metal adsorption via sputtering, and plasma-enhanced vapor film deposition. In order to improve detection levels of C4D, sensitivity studies were conducted by changing the dielectric nature and electrode configuration. Through flow analysis with given electrolyte standards, the limits of detection and quantification were calculated based on analytical curve parameters. Subsequently, researches were performed to characterize the modified surfaces with immobilization intermediate considering reaction conditions distinct (reagent, concentration, solvent, and time). The techniques of scanning electron microscopy and X-ray photoelectron spectroscopy were employed, respectively, aiming to verify the clusters formation and allow qualitative and quantitative determinations about the surfaces chemical composition. From the results of sensitivity experiments and surface characterization, we adopt the following parameters for the biomolecular interactions assays: SiO2 film as dielectric, C4D selective electrodes with rectangular shape and antiparallel orientation, and self-assembled monolayers of 3-aminopropyl(triethoxysilane) as intermediary for immobilization of FA. The two final steps of the work were: optimizing the FA functionalization time (3, 5, and 7 h) and phase biosensor characterization, made from measures of C4D and atomic force microscopy (AFM). For the first case, due to the absence of FR-α standard for purchase, the microchips were applied to FA specific monoclonal antibody (α-FA). The biomolecular assay indicated effective adsorption of FA, without occurrence (at least in significant levels) of steric hindrance of its bioactive specie. Among the investigated times of functionalization, 3 h resulted in a higher sensitivity of the method. In terms of biosensor phase electrochemical characterization stage, their results evidenced correlation between analytical response and FA/α-FA interactions. Additionally, as the AFM measurements showed, drastic changes in the morphology of the substrate (SiO2) with the surface modification processes did not occur. Finally, the use of the C4D as transduction technical in biosensors proved to be a promissory alternative for FR-α tumor biomarker analysis. Among other features, this platform has not drawbacks related to the electrode/solution contact, dispenses the use of redox mediators, allows the simultaneous determination of multianalytes, and employs an instrumentation that is simple, cheap, and portable. Nevertheless, changes in the transducer should be implemented to increase the method sensitivity, which represents its main limiting factor.

Submitted by Livia Mello (liviacmello@yahoo.com.br) on 2016-09-13T12:57:37Z No. of bitstreams: 1 DissCRP.pdf: 2172178 bytes, checksum: e99c43cd09be9ecf3e7b2348a45607e3 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-15T13:28:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissCRP.pdf: 2172178 bytes, checksum: e99c43cd09be9ecf3e7b2348a45607e3 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-15T13:28:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissCRP.pdf: 2172178 bytes, checksum: e99c43cd09be9ecf3e7b2348a45607e3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T13:28:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissCRP.pdf: 2172178 bytes, checksum: e99c43cd09be9ecf3e7b2348a45607e3 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Breast cancer is the most common type of cancer among women and results in 70% of cases of estrogen receptor alpha (ERα) overexpression, a tumor biomarker. In the present study we developed a sensitive and low cost disposable electrochemical immunosensor, coupled with a microfluidic system, as an alternative to determine ERα, since there are no reports on the determination of this compound in the literature using this method. The immunosensor was developed by the screen printing method, comprising a reference electrode, a counter electrode and an array of eight working electrodes, all disposable. The working electrodes were modified by layer-by-layer with poly(diallyldimethylammonium chloride) (PDDA) and gold nanoparticles decorated with glutathione (AuNP-GSH), in order to support, by covalent bond, a double-stranded DNA containing an estrogen response element (dsDNA-ERE). Also, we use magnetic particles containing thousands of antibodies and enzymes, wherein the enzymes are responsible for indirect response from the immunosensor and antibodies are used to capture the analyte in the sample. Once that the analyte is captured, it interacts with the dsDNA-ERE immobilized on the surface of the working electrode. In the linear range 16.6 to 513.3 fg mL-1 were obtained detection limit of 10.0 fg mL-1, quantification limit of 16.89 fg mL-1 and a sensitivity of 7.7 nA mL fg [ ERα]-1. Finally, it was possible to test the immunosensor front of a real sample lysate cells MCF-7, which showed that the device is a promising choice for use in the treatment and possible early diagnosis of breast cancer. / O câncer de mama é o tipo mais comum de câncer entre as mulheres e resulta, em 70% dos casos, na superexpressão do biomarcador tumoral receptor de estrógeno alfa (ERα). No presente trabalho, foi desenvolvido um imunossensor eletroquímico descartável, sensível e de baixo custo, acoplado a um sistema microfluídico, como uma alternativa para se determinar ERα, uma vez que, não há relatos sobre a determinação desse composto usando esse método na literatura. O imunossensor foi desenvolvido pelo método de serigrafia, compondo de um eletrodo de referência, um contra-eletrodo e um arranjo de oito eletrodos de trabalho, todos descartáveis. Os eletrodos de trabalho foram modificados por layer-by-layer com cloreto de poli(dialildimetilamônio) (PDDA) e nanopartículas de ouro decoradas com glutationa (AuNP-GSH), a fim de sustentar, por ligação covalente, uma dupla fita de DNA contendo um elemento de resposta de estrógeno (dsDNA-ERE). Ainda, utilizam-se partículas magnéticas contendo milhares de enzimas e anticorpos, no qual as enzimas foram responsáveis pela resposta indireta do imunossensor e os anticorpos capturaram o analito na amostra. Uma vez capturado o analito, estes interagiram com o dsDNA-ERE imobilizado na superfície dos eletrodos de trabalho. Em intervalo linear de 16,6 a 513,3 fg mL-1 foram obtidos limite de detecção de 10,0 fg mL-1, limite de quantificação de 16,89 fg mL-1 e sensibilidade de 7,7 nA mL fg [ERα] -1. Por fim, foi possível testar o imunossensor frente a uma amostra real de lisado de células MCF-7, o que evidenciou que o dispositivo é uma escolha promissora para uso no tratamento e possível diagnóstico precoce do câncer de mama.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-03-10T13:28:42Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1709624 bytes, checksum: 611d57a52bcfe9c0edefc3032fa9a2b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-10T13:28:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1709624 bytes, checksum: 611d57a52bcfe9c0edefc3032fa9a2b3 (MD5) Previous issue date: 2016-01-28 / This work aimed biomonitoring intake of fluoride in preschool rural residents with residual fluoride levels and non-fluoridated city, estimating the risk of fluorosis and correlating exposure biomarkers. Thirty preschoolers 24-71 months, divided into two groups, one with residents of a rural area with a high concentration of fluoride in the water supply (G1-Brejo das Freiras/ São João do Rio do Peixe-PB) and another representing a city without fluoridation (G2-João Pessoa-PB). The volunteers were monitored for intake (water, solid and liquid diet, and dentifrice) and fluorine retention. The fluorine excretion in 24 hours, and samples fingernails served as biomarker. Comparative analysis, regression and correlation were significant when p ≤ 0.05. The average fluoride intake was 0.18 ± 0.14 (G1) and 0.05 ± 0.04 (G2) mg/kg/day, p <0.05. In G1 there were water contribution in daily intake (0.07 ± 0.1 mg/kg/day), as opposed to G2 determined according to the dentifrice (0.04 ± 0.04 mg/kg/day). Retention was directly proportional to the concentration of fluoride in the water in G1, following the trend of Urinary Excretion Fraction (FUFE), similar in both groups. A correlation between fluoride in the fingernails and toes, and the nails of the feet more sensitive to differences between the groups. It was concluded that there is a high intake of fluoride in the region with residual fluoride levels correlated with sensitivity of biomarkers. / Esse trabalho visa biomonitorar a ingestão de fluoretos em pré-escolares residentes de zona rural com teores residuais de flúor e em cidade não fluoretada, estimando o risco de fluorose e correlacionando à marcadores de exposição. Trinta pré-escolares de 24-71 meses, divididos em dois grupos, um com residentes de uma zona rural com alta concentração de fluoreto na água de abastecimento (G1-Brejo das Freiras/ São João do Rio do Peixe-PB) e outro representando uma cidade sem fluoretação (G2-João Pessoa-PB). Os voluntários foram monitorados quanto à ingestão (água, dieta sólida e líquida, e dentifrício) e retenção de flúor. A excreção de flúor em 24 horas, assim como amostras de unhas serviram como biomarcadores. Análises comparativas, de regressão e correlação foram significantes quando p≤0,05. A ingestão média de fluoreto foi 0,18 ± 0,14 (G1) e 0,05 ± 0,04 (G2) mg/kg/dia, p<0,05. Em G1 há maior contribuição da água na ingestão diária (0,1 ± 0,07 mg/kg/dia), ao contrario de G2, determinado pelo dentifrício (0,04 ± 0,04 mg/kg/dia). A retenção foi diretamente proporcional à concentração de flúor na água em G1, seguindo a tendência da Fração Urinária de Excreção (FUFE), similar nos dois grupos. Observou-se correlação entre o flúor nas unhas das mãos e dos pés, sendo as unhas dos pés mais sensíveis às diferenças entre os grupos. Concluiu-se que há uma elevada ingestão de fluoretos em região com teores residuais de flúor correlacionadas à sensibilidade dos biomarcadores.

Submitted by Leonardo Cavalcante (leo.ocavalcante@gmail.com) on 2018-04-23T22:33:49Z No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 8097104 bytes, checksum: 8976cc960e57607b6bc0686e00fc41c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-23T22:33:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 8097104 bytes, checksum: 8976cc960e57607b6bc0686e00fc41c3 (MD5) Previous issue date: 2016-04-01 / Skeletal fluorosis is a chronic metabolic disorder caused by chronic ingestion or inhalation of high concentrations of fluoride. The main consequences are bone alterations and deformities leading to disability. It is a disease of difficult diagnosis because of its pre-clinical signs resembling other bone diseases. In this sense, this epidemiological, observational, transversal and descriptive study aimed at mapping clinical, radiological and molecular biomarkers of exposure. Initially the sample consisted of 103 individuals of both sexes and varied ages. From the total, 45 individuals were analyzed for the identification of the radiological biomarker and 25 individuals were monitored for the biochemical and proteomic markers. For the analysis of fluoride intake in the region, drinking water was collected and the biomarkers were evaluated. As for identification of the samples regarding fluoride exposure: 25 hours urine analysis was performed through the direct method using TISAB II and III on an specific electrode and for the fluoride dosage on fingernail and hair the analysis was done though the indirect method (HMDS). The radiographs were carried out on a Kodak K 9000 C 3d apparatus (by the same operator) with exposure of 16 S, 10 Ma, 60-70 kvp and the maximum skin intake (DEP) of 5 mgy. The volunteers underwent digital panoramic radiographs under same circumstances. For biochemical parameters it was performed a complete blood count, hormonal dosage, calcium and enzymes dosage (creatinine and alkaline phosphatase). For the proteomic identification it was performed a mass spectrophotometry (MALDI-TOF). Data were analyzed on the statistical package for social sciences (SPSS), version 18, using p<0.05. The results pointed out that 46% of the drinking water from São João do Peixe River presented [F] above the ideal value for human consumption of 0.7mg/L and 84% showed values above 1.5mg/L, being indicative of fluorosis in the region. The average age of the volunteers was 50 years, with the prevalence of women, and they showed a time of exposure around 40 years. Regarding the symptomatology 85 individuals reported pain, of which 77% (chi-squared) presented symptoms on more than 3 regions. However, the lumbar region was the indicative variable of presence of bone fluorosis (linear regression, p < 0.005). As for the radiological biomarker, it was verified that the most discriminatory bone conditions were osteopenia, ossification of soft tissues, bone deformit ies, jaw density, and thin cortical of jaw and jaw. There was evaluation divergence between orthodontists and radiologist. Panoramic radiographs proved to be an auxiliaar method of diagnosis and can only be an indicative of bone changes related to skeletal fluorosis, it cannot be discriminatory in cases of grades I and II skeletal fluorosis. The biochemical variables showed that the average volume of urine excreted was 890 ml in 24 hours, whose concentration contained an average of 3.9 mgF/liter (0.2-3.2 VR), presenting a high fluoride excretion. The average fluoride concentration on fingernails was 14.2 being the highest level ever recorded, probably due to the diffusion capture of F by the HMDS. Serum calcium had an average of 9.0 mg/dl (8.9 -10, 3VR); phosphorus, 3.8 mg/dl (2.4-4.7 VR); alkaline phosphatase, 288 IU/litre (32-91 VR); Alkaline phosphatase bone specific, 96 ug/litre (4.5-16.9 VR); Osteocalcin, 309 ng/ml (11-50 VR); and PTH, 203 pg/ml (10-65 VR). Electrolytes, glucose, albumin, urea and creatinine were with 70% normal, as well as platelet count. Among the sick and non-patient studied groups, there were no differences between the groups, according to the Mann-Whitney test, p < 0.05. For proteomics analysis, there was a large quantity of proteins in the serum, being the affected volunteers more altered when compared to the other group. Few proteins were found on the saliva. Data indicate that mass spectrophotometry is capable of detecting differential proteins so it can be useful for fluoride biomarkers identification as well as it can help understand the skeletal fluorosis mechanism. / A fluorose ó ssea é uma doença metabólica crônica, causada pela alta concentração do flúor ingerido ou inalado. Tem como principal consequência alterações e deformidades ó sseas levando a incapacidade. Mordidade de difíc il diagnó stico, devido aos sinais pré- clínicos assemelhar-se a de outras doenç as ó sseas, gerando problemas para a realizaç ão do diagnó stico. Neste sentido, este estudo epidemiológico, observacional, transversal e descritivo teve como objetivo mapear biomarcadores de exposiç ão, clínicos, radiológicos e moleculares para fluorose ó ssea . A amostra constitui inicialmente de 103 indivíduos de ambos os sexos e variadas faixas etárias. Sendo 45 analisados quanto a identificaç ão do biomarcador radiológico e 25 monitorados quanto ao marcador bioquímico e proteô mico. Para investigaç ão das concentraç ões de ingestão de flúor na região foi realizada a coleta de água para consumo e para identificaç ão das amostras quanto a exposiç ão ao fluoreto foram avaliados os biomarcadores: urina (25 horas) ambos realizado através do método direto com TISAB II e III respectivamente e a dosagem da unha e cabelo, pelo meio indireto por difusão com hexametildisiloxano (HMDS). As radiografias foram realizadas em aparelho Kodak K 9000 C 3D (pelo mesmo operador) com exposiç ão de 16 s, 10 mA, 60- 70 Kvp e dose de entrada de pele (DEP) máxima de 5 mGy. Os indivíduos foram submetidos a radiografias panorâ micas (digital) em aparelhos de RX do mesmo modelo e em condiç ões similares. Para os parâ metros bioquímicos foram realizados hemograma completo, dosagem hormonal, dosagem de cá lcio e enzimologia (creatina e fosfatase alcalina). Para identificaç ão de proteomas utilizou-se espectometria de massa (MALDI- TOF). Os dados foram avaliados por meio do Programa Statistical Package for Social Sciences (SPSS) versão 18, com p<0,005. Os resultados apontaram que 46% da água presente em poç os artesianos em São João do Rio do Peixe-PB, apresentam [F] acima do valor ideal de 0,7mg/L para ingestão de água para consumo humano e 84% aponta valores acima de1,5mg/L, sendo indicativo de fluorose na região. A média de idade foi de 50 anos, com predomínio de mulheres, a amostra apresentou um tempo de exposiç ão em torno de 40 anos. Quanto a sintomatologia 85 relataram dor, destes 77% (qui-quadrado), apresentam mais de 3 regiões acometidas. Porém a região lombar foi a variável indicativa de presenç a de fluorose ó ssea (regressão linerar, p<0,005). No que concerne o biomarcador radiológico, verifica-se que as condiç ões ó sseas mais discriminantes: osteopenia, ossificaç ão dos tecidos moles, deformidades ó sseas, densidade da maxila, e cortical fina de maxila e mandíbula. Houve divergê ncia na avaliaç ão entre ortodontistas e radiologias. A radiografia panorâ mica se mostrou como um recurso auxiliar e apenas indicativa de alteraç ões ó sseas relacionadas com a fluorose ó ssea, não podendo ser discriminató ria nos casos de fluorose ó ssea de graus I e II. Quanto as biomarcadores de exposiç ão foi evidenciado. As variáveis bioquímicas que o volume médio excretado foi de 890 ml em 24 h, cuja concentraç ão continha uma média de 3,9 mg / litro F (0,2-3,2 VR), constatando uma excreç ão elevada. A concentraç ão média da unha encontrado foi de 14,2 sendo o mais elevado nível de concentraç ão já registrada, provavelmente devido à captura de difusão de F pelo HMDS.Cá lcio sérico teve uma média de 9,0 mg / dl (8,9-10,3VR); fó sforo, 3,8 mg / dl (2,4-4,7 VR); fosfatase alcalina, 288 UI / litro (32-91 VR); específica do osso da fosfatase alcalina, 96 ug / litro (4,5-16,9 VR); osteocalcina, 309 ng /ml (11-50 VR); e PTH, 203 pg/ml (10-65 VR). Eletró litos, glicose, albumina, uré ia e creatina estavam com 70% normais, assim como contagem de plaquetas. Entre os grupos estudados doentes e não doentes, não houve diferenç as entre os grupos, segundo o teste de Mann-Whitney, p<0,05. Para aná lise proteô mica, verificou-se a presenç a de uma grande quantidade de proteínas no soro, estando os doentes mais alterado quando comparado com o outro grupo. A saliva poucas proteínas foram encontradas. Os dados indicam que a espectometria de massa é capaz de detectar proteínas diferecialmente expressa. Podendo ser útil para identificaç ão de biomarcadores para F, além de ajudar no avanç o do mecanismo envolvido da fluorose ó ssea.

Introduction: Tuberculosis is an infectious disease that affects more than 9 million people each year worldwide . For tuberculosis control methods for the study of more accurate diagnostic and monitoring treatment , make it essential . Objectives: To identify biomarkers by Phage display technique and evaluate the immunoreactivity of the IG\'s clones selected sera from patients with tuberculosis to monitor treatment . Methods: Blood samples were collected from 61 individuals over 18 years , both sexes , and performed the tuberculin test ( PPD ) as a control . The samples were subjected to the process of selection of clones, the biopanning using a library of random 12 amino acid region of the protein expressed on the phage pIII . After selecting the ELISA assay was performed to analyze the immunoreactivity of selected clones . Results: after the in silico analysis , it was found that the sequence of clone F10 ( VYKTPNSTANRW ) has similarity to the membrane protein MPT64 low molecular weight , 28 to 32 kDa, immunogenicity of the M. tuberculosis complex. In ELISA clone F10 showed reactivity significant ( p < 0.05 ) and monitoring of individuals in treatment (P < 0.005). Conclusion : the reactivity of clone F10 demonstrated that it can be used for monitoring the treatment of tuberculosis , contributing to its control. / Introdução: A Tuberculose é uma doença infectocontagiosa , que acomete mais de 9 milhões de indivíduos a cada ano em todo o mundo . Para o controle da tuberculose o estudo por métodos de diagnósticos mais acurados e o monitoramento ao tratamento, tornam se imprescindíveis. Objetivos: identificar biomarcadores pela técnica de Phage display e avaliar a imunorreatividade dos clones selecionados ás igG\'s de soros de pacientes com tuberculose para o monitoramento do tratamento. Métodos: foram coletadas amostras de sangue de 61 indivíduos maiores de 18 anos, ambos os sexos, e realizada a prova tuberculina (PPD) como controle. As amostras foram submetidas ao processo de seleções de clones, o Biopanning, utilizando uma biblioteca de 12 aminoácidos randômicos expressos na região da proteína pIII do bacteriófago. Após a seleção foi realizado o ensaio ELISA para analisar a imunorreatividade dos clones selecionados. Resultados: após as análises in silico, observou-se que a sequência do clone F10 (V Y K T P N S T A N RW), possui similaridade com a proteína MPT64 de membrana de baixo peso molecular, 28 a 32 KDa, imunogênica do complexo M.tuberculosis . No ensaio ELISA o clone F10 apresentou uma reatividade significante ( p<0,05 ) e no monitoramento dos indivíduos em tratamento ( p<0,005 ). Conclusão: a reatividade do clone F10 demonstrou que pode ser utilizada para o monitoramento do tratamento da tuberculose, contribuindo para seu controle. / Mestre em Ciências da Saúde

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-07T13:20:45Z No. of bitstreams: 1 Flavia de Souza e Silva.pdf: 1132785 bytes, checksum: 023aaa1807ce9c419a62e111a92ac439 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-07T13:20:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flavia de Souza e Silva.pdf: 1132785 bytes, checksum: 023aaa1807ce9c419a62e111a92ac439 (MD5) Previous issue date: 2012-02-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The standard four-beat gaited simulation test (TSM) had been used to evaluate four-beat gaited horses´s fitness levels. The objectives of this research were evaluated adaptation of blood electrolytes and biomarkers in equine submitted to TSM. It was used 16 horses (Campolina n=8 and Mangalarga-Marchador n=8), males and females, Age ~6,6 years-old. Blood samples were collected in: fasting (T0), immediately after the warm-up (T1), after 15 (T3) and 30 (T4) min of “marcha” phase and 15 min after recovery period (T5). It was collected: heat rate (FC), [Glucose], [Lactate], [TPP], Hematocrit, [Ca2+], [P+], [Cl-], [K+], [Na+], [Mg2+], [Triglycerides], [Total Cholesterol Total], [Glutamine] e [Glutamate]. Also it was measured horses' speed and distance. Results were analysed by one- and two-way ANOVA and post hoc Holm-Sidak test, with P<0.05. Horses did TSM at ~3.03 m/s, and fit horses had higher [Glucose] and [Lactate] when compared with unfit group (P<0.05). In addition, [TPP] and Hematocrit were higher in T4. [Ca2+] decreased and [P+] and [K+] elevated during the TSM (P<0.05). [Triglyceride] changed significantly but not [T-Cholesterol]. Finally, HR changes but were inside the higher limit to HR for aerobic exercise. In conclusion, "marcha" or four-beat gait is a typical aerobic exercise and produce metabolic adaptation to support horse’s energetic metabolism and electrolyte concentration in the blood. / O teste padrão de simulação de marcha (TSM) tem sido regularmente utilizado como método de avaliação do condicionamento físico dos cavalos. Este trabalho teve como objetivo avaliar o condicionamento físico por meio dos parâmetros bioquímicos séricos que refletiram à adaptação dos cavalos marchadores durante o TSM. Foram utilizados 16 cavalos, clinicamente sadios, das raças Campolina e Mangalarga Marchador, de ambos os sexos, com idade média de seis anos e meio. Amostras de sangue foram colhidas com os animais em jejum (T0), após 10 minutos ao passo (T1), 15 minutos em marcha (T2), depois da virada, 15 minutos em marcha (T3) e após 15 minutos ao passo (T4). Foram analisados: freqüência cardíaca (FC), hematócrito, [Glicose], [Lactato], [PPT], [Ca2+], [P+], [Cl-], [K+], [Na+], [Mg2+], [Triglicérides], [Colesterol Total], [Glutamina] e [Glutamato]. Os resultados foram analisados pelo ANOVA, com um e dois fatores, com P<0,05 e quando necessário o Teste de Holm-Sidak, com P<0,05. Após as análises observou-se que a velocidade média dos cavalos foi de 3,03 m/s e o grupo condicionado apresentou [Glicose] e [Lactato] superior aos não condicionados. Também se observou elevação na [PPT] e Hematócrito em T4 no TSM. Entre os eletrólitos, observou-se redução na [Ca2+] e elevação nas [P+] e [K+] ao longo do TSM. Houve elevação nos [Triglicerides] e a FC elevou-se significativamente durante o exercício, mas ainda assim, dentro dos limites aceitos para o exercício aeróbico. Concluindo que a marcha é um exercício aeróbico que produz alterações no metabolismo energético de modo a disponibilizar energia por longo período de exercício e causa mudanças na concentração de alguns eletrólitos no sangue.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-28T19:13:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO_MARLYETE_ MESTRADO_CCB.pdf: 1359439 bytes, checksum: c77312ff5d07a6b83188d66e242b0ba7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T19:13:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO_MARLYETE_ MESTRADO_CCB.pdf: 1359439 bytes, checksum: c77312ff5d07a6b83188d66e242b0ba7 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / CNPQ / Acetilcolinesterase (AChE; 3.1.1.7) é uma enzima do grupo das serino-esterases que atua na hidrólise do neurotransmissor acetilcolina garantindo a intermitência dos impulsos nervosos responsáveis pela comunicação neuronal. A inibição deste mecanismo ocorre devido aos efeitos da exposição a pesticidas organofosforados e carbamatos, bem como a íons metálicos. A atividade da acetilcolinesterase de várias espécies de peixes tem sido utilizada como biomarcador em programas de monitoramento de recursos hídricos por ser um método diagnóstico informativo e efetivo, além de economicamente viável, visto que esta enzima está localizada e disponível de forma abundante num tecido descartado do peixe, o cérebro. Este trabalho objetivou caracterizar parcialmente parâmetros cinéticos e físico-químicos da acetilcolinesterase cerebral de Parachromis managuensis e investigar o efeito in vitro de pesticidas e íons metálicos sobre sua atividade. O pH ótimo e a temperatura ótima foram determinados ensaiando a atividade do extrato em pH de 4,0 a 9,0 e temperaturas de 25 a 80°C. A termoestabilidade foi determinada submetendo o extrato as mesmas temperaturas durante 30 min e, após o equilíbrio, foi mensurada a atividade remanescente. Parâmetros cinéticos; velocidade máxima (Vmax) e constante de Michaelis - Menten (Km) foram calculados em concentrações crescentes (0,8 a 20,8 mM) dos substratos iodeto de acetil e butirilcolina. O extrato foi incubado durante 60 min com um pesticidas organoforforado (diclorvós) e dois carbamatos (carbaril e carbofuran) e foi exposto durante 40 min a 10 íons (Al3+, Ba2+, Cd2+, Cu2+, Hg2+, Mg2+, Mn2+, Pb2+, Fe2+ e Zn2+) em cinco concentrações de 0,001 a 10 mM. A atividade enzimática foi analisada após exposição aos inibidores seletivos BW284c51, Iso-OMPA, neostigmina e eserina nas mesmas concentrações. Estes inibidores confirmaram AChE e BChE como responsáveis pela atividade analisada. O pH ótimo e a tempertura ótima encontrados para a AChE foram 8,0 e 35°C respectivamente. A AChE reteve 70% da atividade após incubação a 40°C por 30 min. Os parâmetros cinéticos, Vmax e Km foram respectivamente 0,520 ± 08,98 mU/mg e 0,587 ± 0,95 mM para AChE; e 0,267 ± 5,2 mU/mg e 4,06 ± 0,82 mM para BChE. Todos os pesticidas usados mostraram efeito inibitório na atividade da AChE. Os valores da concentração inibitória média dos pesticidas (IC50) foram: 1,68 μM (diclorvós), 4,35 μM (carbaril) e 0,28 μM (carbofuran). A maioria dos íons em 1 mM não mostraram efeito significativo (p = 0.05), enquanto Zn2+, Cd2+, Cu2+, Hg2+, inibiram a atividade da enzima em 17%, 25%, 53% e 100% respectivamente. AChE de P. managuensis mostrou potencial como biomarcador para todos os pesticidas usados, principalmente para o carbamato carbofuran, além do íon mercúrio (Hg2+). Sendo, portanto, considerada uma ferramenta útil no monitoramento ambiental. / Acetylcholinesterase (AChE; 3.1.1.7) is an enzyme from the group of serine esterases acting in the hydrolysis of the neurotransmitter acetylcholine ensuring the burst of nerve impulses responsible for neuronal communication. The mechanism of this inhibition is due to the effects of exposure to organophosphorus and carbamate pesticides, as well as metal ions. The acetylcholinesterase activity of several species of fish has been used as a biomarker for monitoring water resources programs to be a method informative diagnosis and effective, and economically viable, since this enzyme is localized and available in abundance in a discarded tissue fish, the brain. This study aimed to partially characterize physicochemical and kinetic parameters of the brain acetylcholinesterase from Parachromis managuensis and investigate the in vitro effects of pesticides and metal ions on its activity analyzing its potential role as biomarker. Optimal pH and temperature were estimated exposing the enzyme extracts to a pH variation between 4.0 and 9.0 and a temperatures ranging from 25 to 80°C. The thermostability was determined submitting the extracts to the temperatures decribed above during 30 min and assaying the residual activity. Kinetic parameters such as maximum velocity (Vmax) and Michaelis-Menten constant (Km) were calculated using increasing concentrations (from 0.8 to 20.8 mM) of the substrates acetyl and butyrylcholine iodide. The extract was incubated during 60 min with one organophosphate (dichlorvos) and two carbamate (carbaryl and carbofuran) pesticides and was exposed for 40 min to 10 ions (Al3+, Ba2+, Cd2+, Cu2+, Hg2+, Mg2+, Mn2+, Pb2+, Fe2+ and Zn2+) in five concentrations from 0.001 to 10 mM. The enzymatic activity was analyzed after exposure to the selective inhibitors BW284c51, Iso-OMPA, neostigmine and eserine in the same concnetrations. These inhibitors confirmed AChE and BChE as responsible for the analyzed activity. Optimal pH and temperature found were 8.0 and 35°C, respectively. AChE retained 70% of its activity after incubation with 40°C for 30 min. The kinetic parameters Vmax and Km were, respectively, 520 ± 8.98 mU/mg and 0.587 ± 0.95 mM for AChE; and 267 ± 5.2 mU/mg and 4.06 ± 0.82 mM for BChE. All the used pesticides showed inhibitory effect on ChE acitivities. The mean inhibitory concentration (IC50) values were: 1.68 μM (dichlorvos); 4.35 μM (carbaryl) and 0.28 μM (carbofuran). Most of the analyzed ions did not show significant effect at 1 mM (p = 0.05), whereas Zn2+, Cd2+, Cu2+ and Hg2+ inhibited the enzyme activity in 17%, 25%, 53% and 100%, respectively at the same concentration. P. managuensis AChE showed potential as biomarker for all the pesticides under study, mainly for the carbamate carbofuran as well as for the mercury ion (Hg2+) and being, therefore, considered a promising tool for environmental monitoring

O presente trabalho objetivou explorar a eventual variação da expressão do mRNA e da proteína S100b no hipocampo, cerebelo e córtex cerebral de ratos neonatos em condições de anóxia, comparativamente à condições controle. Este estudo foi desenvolvido em ratos albinos, divididos em dois grupos: o grupo Experimental Anóxia (EA) e o grupo Experimental Controle (EC), que por sua vez foram subdivididos em tempos de 2, 4, 6, 12 e 24 horas no que se refere à coleta de amostras após a aplicação dos estímulos pré-estabelecidos para cada grupo. Dos períodos avaliados, nossos resultados indicaram que a anóxia proporcionou um pico na expressão gênica de S100b após duas horas e proteica após 4 horas nas áreas do hipocampo e cerebelo. O córtex cerebral do grupo EA quando comparado ao grupo EC, não apresentou nenhum aumento significante de S100b nos períodos avaliados. Os resultados obtidos contribuem de forma crucial para elucidação do papel da proteína S100b como biomarcadora na EHI, bem como no esclarecimento parcial da função deste gene com relação à fisiopatologia da doença. / The aim of the present study was to investigate the temporal variation in the expression of S100b mRNA and protein in the hippocampus, cerebellum, and cerebral cortex of newborn rats under conditions of anoxia compared with control rats. The study was performed using two groups albino rats: Experimental Anoxia (EA) and Experimental Control (EC). The animals in both EA and EC were distributed in the following subgroups relative to the time elapsed since the application of the stimuli predefined for each group: two, four, six, 12, and 24 hours. Anoxia induced a peak in the S100b gene expression after two hours and protein expression after 4 hours in the hippocampus and cerebellum. With respect to the cerebral cortex, S100b never exhibited a significant increase in the EA group compared with the EC group. The results of the present study represent a crucial contribution to the elucidation of the role protein S100b plays as a biomarker in HIE, as well as a contribution to the elucidation of the role the corresponding gene plays in the physiopathology of the disease.