MicroRNAs são pequenos RNAs que desempenham papel importante como reguladores da expressão gênica em processos de iniciação e progressão do câncer. Achados recentes demonstram que microRNAs estão presentes em biofluidos, podendo ser encontrados na corrente sanguínea Especula-se que alterações nos níveis de expressão dos microRNAs em tecidos tumorais podem ser identificadas em plasma. Apesar de desafios relacionados a variáveis analíticas e pré-analíticas desta abordagem, há um grande interesse clínico em identificar microRNAs circulantes como biomarcadores em câncer dada a simplicidade e baixo risco de um exame como este. O carcinoma de cabeça e pescoço está entre as principais neoplasias no mundo. Ele está associado ao uso crônico de tabaco e álcool e a taxa de sobrevida média fica em torno de 50% em 5 anos. O objetivo deste trabalho foi estabelecer parâmetros adequados para processamento e detecção de microRNAs circulantes, assim como identificar microRNAs circulantes que pudessem caracterizar indivíduos portadores de carcinoma de cavidade oral e de orofaringe e, em particular, distinguir aqueles que apresentavam metástase linfonodal ao diagnóstico daqueles livres de comprometimento linfonodal. A expressão de 179 microRNAs foi analisada por PCR em tempo real no plasma de 45 indivíduos portadores de carcinoma epidermóide (28 com metástase linfonodal ao diagnóstico e 17 sem metástases linfonodais) e 15 indivíduos sadios. As amostras foram pareadas quanto a sexo, idade e quanto ao uso de tabaco. Identificamos microRNAs preferencialmente expressos em amostras de plasma de portadores do tumor, dentre os quais microRNAs já descritos como relevantes em carcinoma epidermóide oral, como miR-210, e miRNAs ainda pouco estudados, como miR-543. Diferenças importantes foram observadas quando tumores de cavidade oral foram analisados separadamente dos tumores de orofaringe, de acordo com diferenças moleculares existentes entre estes sub-sítios tumorais. MicroRNAs possivelmente envolvidos com o processo metastático foram identificados quando amostras de plasma de pacientes que apresentavam metástases em linfonodos foram comparadas com amostras de pacientes sem comprometimento linfonodal. Dentre estes miRNAs destacam-se miR-192 e miR-574, mais expressos em plasma de indivíduos portadores de tumores metastáticos de orofaringe e esses dados estão de acordo com ,a literatura onde formam identificados com perfil semelhante em amostras de plasma associadas a outros tipos de tumor. Concluímos que os miRNAs circulantes presentes em plasma podem refletir características moleculares do tumor, e que a desregulação da sua expressão em contextos específicos, como subsítios tumorais e condições clínicas distintas, como a presença ou ausência de metástase, poderiam auxiliar no diagnóstico e na avaliação do prognóstico de portadores de carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço. / MicroRNAs are small non-coding RNA molecules with roles in gene regulation and implications in cancer initiation and progression. Cell-free microRNAs detected in body fluids are of clinical interest due to their possible application as biomarkers. The stability of microRNAs in plasma has been demonstrated and it seems that alterations in cancer tissue may be detected in plasma from patients. Despite the fact that their reliable quantification depends on several technical parameters there is great clinical interest in this approach due to its simplicity and low risk to the patient. Oral squamous cell carcinoma is one of the most common cancer types worldwide. Tobacco and alcohol consumption are the most important risk factors and survival rates are about 50% in 5 years. The aim of this study was to establish reliable parameters for the detection of microRNAs in plasma and to identify plasma microRNAs associated with squamous cell carcinomas of the oral cavity and oropharynx as well as with the presence of cervical lymph node metastases. With this purpose we evaluated the expression of 179 microRNAs in plasma from 45 patients (28 presenting cervical lymph node metastases at diagnosis and 17 with no lymph node metastasis) and 15 healthy controls. Samples were matched according to age, sex, drinking and smoking habits. We identified microRNAs mostly expressed in tumor samples, some of which already described in oral squamous cell carcinoma, such as miR-210, and microRNAs poorly studied, such as miR-573. Comparisons between oral and oropharynx carcinomas yielded several differences, in accordance with molecular differences known between these cancer types. MicroRNAs possibly involved in the metastatic process were identified between plasma samples from individuals presenting lymph node metastasis at diagnosis and plasma from patients who were metastasis-free. Among these molecules, miR-192 and miR-574 were identified as more expressed in plasma from individuals with metastatic oropharynx squamous cell carcinoma. We conclude that plasma microRNAs may indicate molecular characteristics of the tumor and that its differential detection in association with specific clinical conditions or sub-sites may be considered as a potential tool to help in the diagnosis and prognosis assessment of head and neck squamous cell carcinoma.

Introdução: A lesão renal aguda (LRA) ocorre em unidades de terapia intensiva (UTI), com incidência de 30%, enquanto que a incidência hospitalar é 3-5%. A mortalidade nestes pacientes, inalterada nas últimas décadas, varia entre 50 e 70%. O padrão clínico para diagnóstico da LRA é a dosagem da creatinina sérica, que é um método pouco sensível, tardio e incapaz de discriminar a gravidade da lesão. Esse fato compromete o uso de terapias efetivas em tempo hábil e não permite vislumbrar a evolução pós LRA. O reconhecimento da lesão renal precoce contribui para a prevenção de danos renais maiores. O NGAL, proteína presente no sangue e na urina proveniente da lesão de células tubulares renais, é capaz de detectar a LRA antes do aumento da creatinina, estabelece medidas de prevenção e tratamento logo após o insulto, indica o grau de severidade da lesão e sugere o início da terapia de substituição renal (TSR). Objetivo: Esse estudo visa caracterizar a evolução da função renal de pacientes com LRA baseados na classificação AKIN (Acute Kidney Injury Network) e no NGAL. Material e método: Estudo de coorte prospectivo consistindo de 83 pacientes internados em UTI, avaliados em relação ao fluxo urinário, creatinina plasmática e NGAL. Resultados: Um total de 65 pacientes desenvolveram LRA, 28 a adquiriram durante a internação na UTI e 37 já apresentavam LRA na admissão. Dos pacientes com LRA, trinta e três (50,8%) apresentaram AKIN estágio 1, treze (20,0%) apresentaram AKIN estágio 2 e dezenove (29,2%) AKIN estágio 3. Os pacientes classificados em AKIN estágio 3 apresentaram valor significativamente maior de NGAL do que o grupo com AKIN estágio 1. Níveis de NGAL significativamente menores (p< 0,05) foram encontrados em pacientes que não desenvolveram LRA. Dentre os fatores associados ao óbito, destacamos a presença de doença de Chagas, LRA e Sepse; a baixa fração de ejeção (FE); o uso de drogas vasoativas (DVA), ventilação mecânica (VM) e balão intra-aórtico (BIA); maior pontuação no escore SOFA; necessidade de hemodiálise; redução da diurese e elevações da creatinina e NGAL. Observamos que somente as variáveis: presença de BIA (p=0,013), balanço hídrico positivo positivo (p< 0,001) e necessidade de hemodiálise (p< 0,001) foram preditores de óbito. Somente a presença de sepse, distúrbios do sódio e fluxo urinário foram preditores de diálise Conclusão: Níveis de NGAL colhidos nas primeiras 24 horas de admissão na UTI contribuíram para predizer o desenvolvimento da LRA além de corresponder ao aumento da severidade da LRA. / Introduction: The incidence of AKI varies from 3-5% in hospitalized patients to 30% in patients in intensive care units (ICU). Over the last decades, mortality rates have remained unchanged for adult patients, at 50-70%. The clinical standard for AKI diagnosis is the serum creatinine levels, which have low sensitivity, are incapable of differentiating the lesions severity, and lead to the late diagnosis in the injury process. These facts compromise the timely use of effective therapies and the assessing of the lesions evolution. NGAL, a protein present in the blood, in the urine and provenient from kidney tubule cells damage, is capable of detecting AKI before serum cretinine levels rise, allowing treatmen to be undertaken right after the injury; it also reflects injury severity and may forecast the need of renal replacement therapy. Objective: this study aims to assess the evolution of kidney function of AKI patients, based on the AKIN (Acute Kidney Injury Network) classification and on NGAL levels. Material and methods: Coorte prospective study consisting of 83 intensive care patients, who had their serum creatinine, NGAL and urine output evaluated. Results: a total of 65 patients developed AKI, 28 developed it during their hospital stay, and 37 already demonstrated it at ICU admission. Of the AKI patients, 33 (50,8%) were classified as AKIN stage 1, 13 (20,0%) as AKIN stage 2 and 19 (29,2%), as AKIN stage 3. The AKIN stage 3 patients showed to have significantly higher NGAL levels than AKIN stage 1 patients. Significantly lower NGAL levels (p<0,05) were found in patients that have not developed AKI. Among the factors associated to mortality, we highlight Chagas disease, AKI and sepsis, low ejection fraction, the use of vasoative drugs, mechanical ventilation, intra-aortic balloon pump use, higher SOFA score, need of renal replacement therapy, reduction in urine output, higher NGAL and serum creatinine levels. Only positive hydric balance (p>0,001), the use of intra-aortic balloon pump, and the need of renal replacement therapy were able to predict death. Also, only the urine output, the presence of sepsis or sodium disturbances were able to predict the need of renal replacement therapy. Conclusion: NGAL levels obtained in the fist 24 hours after admission to the intensive care unit contributed to the prediction of AKI development, and they were indicative of the injurys severity.

MicroRNAs são pequenos RNAs que desempenham papel importante como reguladores da expressão gênica em processos de iniciação e progressão do câncer. Achados recentes demonstram que microRNAs estão presentes em biofluidos, podendo ser encontrados na corrente sanguínea Especula-se que alterações nos níveis de expressão dos microRNAs em tecidos tumorais podem ser identificadas em plasma. Apesar de desafios relacionados a variáveis analíticas e pré-analíticas desta abordagem, há um grande interesse clínico em identificar microRNAs circulantes como biomarcadores em câncer dada a simplicidade e baixo risco de um exame como este. O carcinoma de cabeça e pescoço está entre as principais neoplasias no mundo. Ele está associado ao uso crônico de tabaco e álcool e a taxa de sobrevida média fica em torno de 50% em 5 anos. O objetivo deste trabalho foi estabelecer parâmetros adequados para processamento e detecção de microRNAs circulantes, assim como identificar microRNAs circulantes que pudessem caracterizar indivíduos portadores de carcinoma de cavidade oral e de orofaringe e, em particular, distinguir aqueles que apresentavam metástase linfonodal ao diagnóstico daqueles livres de comprometimento linfonodal. A expressão de 179 microRNAs foi analisada por PCR em tempo real no plasma de 45 indivíduos portadores de carcinoma epidermóide (28 com metástase linfonodal ao diagnóstico e 17 sem metástases linfonodais) e 15 indivíduos sadios. As amostras foram pareadas quanto a sexo, idade e quanto ao uso de tabaco. Identificamos microRNAs preferencialmente expressos em amostras de plasma de portadores do tumor, dentre os quais microRNAs já descritos como relevantes em carcinoma epidermóide oral, como miR-210, e miRNAs ainda pouco estudados, como miR-543. Diferenças importantes foram observadas quando tumores de cavidade oral foram analisados separadamente dos tumores de orofaringe, de acordo com diferenças moleculares existentes entre estes sub-sítios tumorais. MicroRNAs possivelmente envolvidos com o processo metastático foram identificados quando amostras de plasma de pacientes que apresentavam metástases em linfonodos foram comparadas com amostras de pacientes sem comprometimento linfonodal. Dentre estes miRNAs destacam-se miR-192 e miR-574, mais expressos em plasma de indivíduos portadores de tumores metastáticos de orofaringe e esses dados estão de acordo com ,a literatura onde formam identificados com perfil semelhante em amostras de plasma associadas a outros tipos de tumor. Concluímos que os miRNAs circulantes presentes em plasma podem refletir características moleculares do tumor, e que a desregulação da sua expressão em contextos específicos, como subsítios tumorais e condições clínicas distintas, como a presença ou ausência de metástase, poderiam auxiliar no diagnóstico e na avaliação do prognóstico de portadores de carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço. / MicroRNAs are small non-coding RNA molecules with roles in gene regulation and implications in cancer initiation and progression. Cell-free microRNAs detected in body fluids are of clinical interest due to their possible application as biomarkers. The stability of microRNAs in plasma has been demonstrated and it seems that alterations in cancer tissue may be detected in plasma from patients. Despite the fact that their reliable quantification depends on several technical parameters there is great clinical interest in this approach due to its simplicity and low risk to the patient. Oral squamous cell carcinoma is one of the most common cancer types worldwide. Tobacco and alcohol consumption are the most important risk factors and survival rates are about 50% in 5 years. The aim of this study was to establish reliable parameters for the detection of microRNAs in plasma and to identify plasma microRNAs associated with squamous cell carcinomas of the oral cavity and oropharynx as well as with the presence of cervical lymph node metastases. With this purpose we evaluated the expression of 179 microRNAs in plasma from 45 patients (28 presenting cervical lymph node metastases at diagnosis and 17 with no lymph node metastasis) and 15 healthy controls. Samples were matched according to age, sex, drinking and smoking habits. We identified microRNAs mostly expressed in tumor samples, some of which already described in oral squamous cell carcinoma, such as miR-210, and microRNAs poorly studied, such as miR-573. Comparisons between oral and oropharynx carcinomas yielded several differences, in accordance with molecular differences known between these cancer types. MicroRNAs possibly involved in the metastatic process were identified between plasma samples from individuals presenting lymph node metastasis at diagnosis and plasma from patients who were metastasis-free. Among these molecules, miR-192 and miR-574 were identified as more expressed in plasma from individuals with metastatic oropharynx squamous cell carcinoma. We conclude that plasma microRNAs may indicate molecular characteristics of the tumor and that its differential detection in association with specific clinical conditions or sub-sites may be considered as a potential tool to help in the diagnosis and prognosis assessment of head and neck squamous cell carcinoma.

Submitted by jose de souza andrade neto andrade (neto.jsa@hotmail.com) on 2018-01-09T15:51:07Z No. of bitstreams: 1 José Andrade Neto - Doutorado em Anestesiologia.pdf: 670032 bytes, checksum: b5c727b9c523ebb565c09234ac9ba901 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Pizzani null (luciana@btu.unesp.br) on 2018-01-10T12:53:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 andrade neto_js_doc_int.pdf: 670032 bytes, checksum: b5c727b9c523ebb565c09234ac9ba901 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-10T12:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 andrade neto_js_doc_int.pdf: 670032 bytes, checksum: b5c727b9c523ebb565c09234ac9ba901 (MD5) Previous issue date: 2017-10-16 / Introdução: a lesão renal aguda (LRA) é prevalente em pacientes hospitalizados e responsável por alta morbimortalidade. No entanto, ainda não há um marcador precoce e acurado para seu diagnóstico. Pacientes idosos estão em risco de desenvolver LRA no pós-operatório de grandes cirurgias. Objetivos: avaliar o biomarcador cistatina C plasmática como preditor precoce de LRA no período pós-operatório de cirurgia para correção de fratura de fêmur em idosos. Método: cinquenta e nove pacientes idosos submetidos à cirurgia de correção de fratura de fêmur foram estudados prospectivamente por 48 horas do pós-operatório. Amostras de sangue foram coletadas para análise de cistatina C plasmática nos seguintes tempos: logo ao término da cirurgia, no período de 4 e 24 horas depois. Amostras da creatinina foram coletadas na admissão hospitalar, ao término da cirurgia, 4, 24 e 48 horas no pós-operatório. Para a determinação do diagnóstico e estadiamento de LRA foi utilizado o critério KDIGO (Kidney Disease Improve Global Outcomes Acute Kidney Injury Workgroup). Foi analisada a precocidade e acurácia, esta última por meio da área sob a curva receiver operating characteristic (AUC ROC), da molécula de cistatina C plasmática para diagnóstico de LRA (KDIGO ≥1). Resultados: vinte e um pacientes (35,5%) apresentaram LRA. A cistatina C plasmática foi um marcador precoce de LRA elevando-se 4 horas após o fim da cirurgia (p < 0,003). Obteve uma AUC ROC em 4 horas de 0,750 (IC 95% de 0,610 a 0,860) e de 0,778 (IC 95% de 0,640 a 0,870) em 24 horas do pós-operatório. Conclusão: a molécula de cistatina C plasmática é um marcador precoce e com boa acurácia (apresentou AUC ROC > 0,70) para LRA, além de possuir elevado valor preditivo negativo para o ponto de corte de 0,92mg/L após 4 horas do término da cirurgia.

As dificuldades associadas à coleta de urina de 24h e à baixa credibilidade do uso do biomarcador na prática clínica para estimar a ingestão de proteína de pacientes com doença renal crônica (DRC) na fase não-dialítica sinalizam para busca de alternativas acuradas e de ampla acessibilidade para a descrição do consumo de proteína nessa população. Avaliar a acurácia de métodos de inquérito dietético para estimar o consumo de proteína em pacientes de DRC na fase não dialítica e, a concordância desses com o biomarcador de ingestão protéica. Também foi avaliado a concordâncias entre o registro alimentar (RA) e recordatório alimentar de 24 horas (Rec24h). Cento e vinte e dois pacientes com DRC na fase não dialítica, que atenderam aos critérios de elegibilidade, foram submetidos à avaliação antropométrica, laboratorial e, tiveram a ingestão de proteína estimada por três métodos de avaliação do consumo alimentar, sendo estes dois métodos de inquérito dietético e um método de biomarcador. Os métodos de inquéritos alimentares compreenderam 4 dias de RA e 2 dias de Rec24h. Para o biomarcador foi avaliado a excreção de nitrogênio uréico em uma amostra de urina de 24 horas, o qual foi utilizado em equação do equivalente protéico do aparecimento do de nitrogênio uréico (PNA). Na análise estatística dos métodos de inquérito dietético, utilizou-se o PC-Side para estimar a variabilidade da ingestão de proteína, equações para estimar o número de dias necessários para estimativas acuradas da ingestão de proteína em avaliações no nível individual e coletivo. Para avaliar a concordância entre os três métodos de avaliação do consumo de proteína, utilizou-se o Concordance correlation coefficient (CCC) e o gráfico de Bland & Altman. Resultados: Os 4 dias de RA e 2 Rec24h descreveram com acurácia elevada a ingestão de proteína no nível coletivo, sendo respectivamente de 0,85 e 0,73. Para o nível individual, com erro tolerado intermediário de 20% (acurácia de 0,8), foram necessários 6 dias de RA e 5 de Rec24h para avaliação do consumo de proteína. Ao avaliar a concordância entre o PNA com o RA e Rec24h, observou-se CCC reduzido (< 0,3). Da mesma forma, ao avaliar a dispersão individual das diferenças obtidas entre o PNA e RA e Rec24h pelo gráfico de Bland & Altman, notou-se valores amplos de limite de concordância. Por outro lado, valores mais elevados de CCC (>0,4) foram encontrados entre o RA e o Rec24h. O gráfico de Bland & Altman desses dois métodos mostrou menor dispersão. Contudo, essa melhor concordância pode ser decorrente de superestimação da correspondência entre os métodos. Além disso, a concordância reduzida observada entre o PNA e o RA e Rec24h não permitiram afirmar que os métodos de inquéritos dietéticos ofereçam medidas irreais da ingestão de proteína, nem tampouco foi possível afirmar que a medida real é aquela sugerida pelo PNA. Em pacientes com DRC na fase não dialítica, orientada a seguir dieta hipoprotéica, o RA e Rec24h podem ser usados em substituição ao uso PNA como alternativas de baixo custo e de ampla acessibilidade à prática clínica para descrever a ingestão de proteína, desde que sejam definidos o nível da avaliação, o número ideal de dias e a acurácia desejada. / It has been well described in the literature the errors inherent to the 24 hours urine collection in free-living individuals. Therefore, the assessment of protein intake in nondialyzed chronic kidney disease (CKD) patients by the urinary urea excretion in the 24 hour urine sample, may lead to important errors related to the method itself. In this regard, assessing surrogate methods is of high relevance. To evaluate the accuracy of the dietary methods to estimate the protein consumption in nondialyzed CKD patients and also to assess the agreement between a biomarker of protein intake and dietary methods. In addition, it was also evaluated the agreement between two dietary methods. One hundred and twenty-two nondialyzed CKD patients, who met the eligibility criteria, were included. All participants underwent to antropometric and laboratory assessments, and had the protein intake estimated by three methods: two methods of dietary intake and one dietary biomarker. The dietary intake comprised 4 days of food records (FRec) and 2 days of 24-hour food recall (24hFRecall). For the biomarker, it was evaluated the urinary urea nitrogen excretion in a 24 hours urine sample, which was used in the equation of the protein equivalent of nitrogen appearance (PNA). The software PC-Side was used to estimate the variability of the protein intake in the FRec and 24hFRecall. In addition, specific equations were used to assess the number of days needed to estimate the protein intake with high accuracy in the individual and collective level. In order to evaluate the agreement between the 3 methods, it was used the concordance correlation coefficient (CCC) and the Bland & Altman plot analysis (1986). In the collective level, 4 days FRec and the 2 days of 24hFRecall described the protein intake with an accuracy close the highest acceptable level, being of respectively 0.85 and 0.73. For the individual level, by accepting an intermediate tolerated error of 20% (accuracy 0.8), 6 days of FR and 5 days of 24hFR were needed for the assessment of protein intake. When assessing the agreement between the PNA and the FRec and 24hFRecall, it was observed reduced CCC (< 0.3). Likewise, when evaluating the individual differences obtained between the PNA and the FRec and 24hFRecall by the Bland & Altman plot analysis, it was observed a wide concordance limit, which is consistent with the low concordance observed between the methods. Moreover, higher values of CCC (> 0.4) were found between the FRec and 24hFRecall. The Bland & Altman plot analysis of these two methods showed more narrows differences, which is consistent with the higher CCC observed. However, this best agreement may be due to an overestimation between the methods. Furthermore, the reduced concordance observed between the PNA and the FRec and 24hFRecall does not mean that the dietary intake methods give biased or unrepresentative measurements of protein intake, nor was that the PNA gave unbiased measurements of protein intake. FRec and 24hFRecall can be used as surrogate methods for the PNA, as an alternative low cost and high applicability method in the clinical routine practice to describe the protein intake.

As dificuldades associadas à coleta de urina de 24h e à baixa credibilidade do uso do biomarcador na prática clínica para estimar a ingestão de proteína de pacientes com doença renal crônica (DRC) na fase não-dialítica sinalizam para busca de alternativas acuradas e de ampla acessibilidade para a descrição do consumo de proteína nessa população. Avaliar a acurácia de métodos de inquérito dietético para estimar o consumo de proteína em pacientes de DRC na fase não dialítica e, a concordância desses com o biomarcador de ingestão protéica. Também foi avaliado a concordâncias entre o registro alimentar (RA) e recordatório alimentar de 24 horas (Rec24h). Cento e vinte e dois pacientes com DRC na fase não dialítica, que atenderam aos critérios de elegibilidade, foram submetidos à avaliação antropométrica, laboratorial e, tiveram a ingestão de proteína estimada por três métodos de avaliação do consumo alimentar, sendo estes dois métodos de inquérito dietético e um método de biomarcador. Os métodos de inquéritos alimentares compreenderam 4 dias de RA e 2 dias de Rec24h. Para o biomarcador foi avaliado a excreção de nitrogênio uréico em uma amostra de urina de 24 horas, o qual foi utilizado em equação do equivalente protéico do aparecimento do de nitrogênio uréico (PNA). Na análise estatística dos métodos de inquérito dietético, utilizou-se o PC-Side para estimar a variabilidade da ingestão de proteína, equações para estimar o número de dias necessários para estimativas acuradas da ingestão de proteína em avaliações no nível individual e coletivo. Para avaliar a concordância entre os três métodos de avaliação do consumo de proteína, utilizou-se o Concordance correlation coefficient (CCC) e o gráfico de Bland & Altman. Resultados: Os 4 dias de RA e 2 Rec24h descreveram com acurácia elevada a ingestão de proteína no nível coletivo, sendo respectivamente de 0,85 e 0,73. Para o nível individual, com erro tolerado intermediário de 20% (acurácia de 0,8), foram necessários 6 dias de RA e 5 de Rec24h para avaliação do consumo de proteína. Ao avaliar a concordância entre o PNA com o RA e Rec24h, observou-se CCC reduzido (< 0,3). Da mesma forma, ao avaliar a dispersão individual das diferenças obtidas entre o PNA e RA e Rec24h pelo gráfico de Bland & Altman, notou-se valores amplos de limite de concordância. Por outro lado, valores mais elevados de CCC (>0,4) foram encontrados entre o RA e o Rec24h. O gráfico de Bland & Altman desses dois métodos mostrou menor dispersão. Contudo, essa melhor concordância pode ser decorrente de superestimação da correspondência entre os métodos. Além disso, a concordância reduzida observada entre o PNA e o RA e Rec24h não permitiram afirmar que os métodos de inquéritos dietéticos ofereçam medidas irreais da ingestão de proteína, nem tampouco foi possível afirmar que a medida real é aquela sugerida pelo PNA. Em pacientes com DRC na fase não dialítica, orientada a seguir dieta hipoprotéica, o RA e Rec24h podem ser usados em substituição ao uso PNA como alternativas de baixo custo e de ampla acessibilidade à prática clínica para descrever a ingestão de proteína, desde que sejam definidos o nível da avaliação, o número ideal de dias e a acurácia desejada. / It has been well described in the literature the errors inherent to the 24 hours urine collection in free-living individuals. Therefore, the assessment of protein intake in nondialyzed chronic kidney disease (CKD) patients by the urinary urea excretion in the 24 hour urine sample, may lead to important errors related to the method itself. In this regard, assessing surrogate methods is of high relevance. To evaluate the accuracy of the dietary methods to estimate the protein consumption in nondialyzed CKD patients and also to assess the agreement between a biomarker of protein intake and dietary methods. In addition, it was also evaluated the agreement between two dietary methods. One hundred and twenty-two nondialyzed CKD patients, who met the eligibility criteria, were included. All participants underwent to antropometric and laboratory assessments, and had the protein intake estimated by three methods: two methods of dietary intake and one dietary biomarker. The dietary intake comprised 4 days of food records (FRec) and 2 days of 24-hour food recall (24hFRecall). For the biomarker, it was evaluated the urinary urea nitrogen excretion in a 24 hours urine sample, which was used in the equation of the protein equivalent of nitrogen appearance (PNA). The software PC-Side was used to estimate the variability of the protein intake in the FRec and 24hFRecall. In addition, specific equations were used to assess the number of days needed to estimate the protein intake with high accuracy in the individual and collective level. In order to evaluate the agreement between the 3 methods, it was used the concordance correlation coefficient (CCC) and the Bland & Altman plot analysis (1986). In the collective level, 4 days FRec and the 2 days of 24hFRecall described the protein intake with an accuracy close the highest acceptable level, being of respectively 0.85 and 0.73. For the individual level, by accepting an intermediate tolerated error of 20% (accuracy 0.8), 6 days of FR and 5 days of 24hFR were needed for the assessment of protein intake. When assessing the agreement between the PNA and the FRec and 24hFRecall, it was observed reduced CCC (< 0.3). Likewise, when evaluating the individual differences obtained between the PNA and the FRec and 24hFRecall by the Bland & Altman plot analysis, it was observed a wide concordance limit, which is consistent with the low concordance observed between the methods. Moreover, higher values of CCC (> 0.4) were found between the FRec and 24hFRecall. The Bland & Altman plot analysis of these two methods showed more narrows differences, which is consistent with the higher CCC observed. However, this best agreement may be due to an overestimation between the methods. Furthermore, the reduced concordance observed between the PNA and the FRec and 24hFRecall does not mean that the dietary intake methods give biased or unrepresentative measurements of protein intake, nor was that the PNA gave unbiased measurements of protein intake. FRec and 24hFRecall can be used as surrogate methods for the PNA, as an alternative low cost and high applicability method in the clinical routine practice to describe the protein intake.

No presente estudo investigou-se amostras de plasma com DNA livre circulante (DNA LC) por meio da técnica Varredura Z. Esta é uma técnica eficiente na determinação de parâmetros de diferentes materiais, tais como cristais líquidos, ferrofluidos e compostos biológicos. Esta experiência é realizada através da focalização de um feixe laser de perfil gaussiano numa amostra. Na medida em que a amostra se aproxima do foco da lente, a intensidade do feixe aumenta e alcança seu valor máximo no ponto focal, então diminui para pontos distantes do foco. Na região próxima ao ponto focal se amplificam os fenômenos não-lineares. Recentemente foi demonstrado que níveis elevados de DNA LC no plasma ocorrem com frequência em pacientes com vários tipos de câncer, podendo ser utilizados para discriminar pacientes com malignidade de pessoas saudáveis. As amostras de DNA LC, submetidas ao experimento Varredura Z, forneceram respostas ópticas devido ao fenômeno de lente térmica. Os resultados revelaram que a amplitude de lente térmica das amostras extraídas do plasma de pacientes com malignidade difere daquela de doadores sãos. A técnica Varredura Z se mostrou mais vantajosa em relação a outras biológicas porque revelou uma maior diferença entre os grupos estudados e tem o caráter de detectar mudanças estruturais no DNA LC. / In the present study plasma samples with cell-free DNA were investigated by means of the Z-Scan technique. This is a powerfull technique in determining parameters of different materials, such as liquid crystals, ferrofluids and biological compounds. This experiment is performed by focusing a Gaussian profile laser beam on a sample. As the sample approaches the focus of the lens, the intensity of the beam increases and reaches its maximum value at the focal point, then decreases to points distant from the focus. In the region near the focal point non-linear phenomena are amplified. It has recently been demonstrated that high levels of plasma cell-free DNA occur frequently in patients with various cancers and can be used to discriminate patients with malignancy from healthy donors. The cell-free DNA samples, submitted to the Z-Scan experiment, provided optical responses due to the thermal lens phenomenon. The results revealed that the thermal lens amplitude of samples extracted from the plasma of patients with malignancy differs from that of healthy donors. The Z-Scan technique was more advantageous than other biological ones because it revealed a greater difference between the studied groups and has the character of detecting structural changes in cell-free DNA.

Introdução: A lesão renal aguda (LRA) ocorre em unidades de terapia intensiva (UTI), com incidência de 30%, enquanto que a incidência hospitalar é 3-5%. A mortalidade nestes pacientes, inalterada nas últimas décadas, varia entre 50 e 70%. O padrão clínico para diagnóstico da LRA é a dosagem da creatinina sérica, que é um método pouco sensível, tardio e incapaz de discriminar a gravidade da lesão. Esse fato compromete o uso de terapias efetivas em tempo hábil e não permite vislumbrar a evolução pós LRA. O reconhecimento da lesão renal precoce contribui para a prevenção de danos renais maiores. O NGAL, proteína presente no sangue e na urina proveniente da lesão de células tubulares renais, é capaz de detectar a LRA antes do aumento da creatinina, estabelece medidas de prevenção e tratamento logo após o insulto, indica o grau de severidade da lesão e sugere o início da terapia de substituição renal (TSR). Objetivo: Esse estudo visa caracterizar a evolução da função renal de pacientes com LRA baseados na classificação AKIN (Acute Kidney Injury Network) e no NGAL. Material e método: Estudo de coorte prospectivo consistindo de 83 pacientes internados em UTI, avaliados em relação ao fluxo urinário, creatinina plasmática e NGAL. Resultados: Um total de 65 pacientes desenvolveram LRA, 28 a adquiriram durante a internação na UTI e 37 já apresentavam LRA na admissão. Dos pacientes com LRA, trinta e três (50,8%) apresentaram AKIN estágio 1, treze (20,0%) apresentaram AKIN estágio 2 e dezenove (29,2%) AKIN estágio 3. Os pacientes classificados em AKIN estágio 3 apresentaram valor significativamente maior de NGAL do que o grupo com AKIN estágio 1. Níveis de NGAL significativamente menores (p< 0,05) foram encontrados em pacientes que não desenvolveram LRA. Dentre os fatores associados ao óbito, destacamos a presença de doença de Chagas, LRA e Sepse; a baixa fração de ejeção (FE); o uso de drogas vasoativas (DVA), ventilação mecânica (VM) e balão intra-aórtico (BIA); maior pontuação no escore SOFA; necessidade de hemodiálise; redução da diurese e elevações da creatinina e NGAL. Observamos que somente as variáveis: presença de BIA (p=0,013), balanço hídrico positivo positivo (p< 0,001) e necessidade de hemodiálise (p< 0,001) foram preditores de óbito. Somente a presença de sepse, distúrbios do sódio e fluxo urinário foram preditores de diálise Conclusão: Níveis de NGAL colhidos nas primeiras 24 horas de admissão na UTI contribuíram para predizer o desenvolvimento da LRA além de corresponder ao aumento da severidade da LRA. / Introduction: The incidence of AKI varies from 3-5% in hospitalized patients to 30% in patients in intensive care units (ICU). Over the last decades, mortality rates have remained unchanged for adult patients, at 50-70%. The clinical standard for AKI diagnosis is the serum creatinine levels, which have low sensitivity, are incapable of differentiating the lesions severity, and lead to the late diagnosis in the injury process. These facts compromise the timely use of effective therapies and the assessing of the lesions evolution. NGAL, a protein present in the blood, in the urine and provenient from kidney tubule cells damage, is capable of detecting AKI before serum cretinine levels rise, allowing treatmen to be undertaken right after the injury; it also reflects injury severity and may forecast the need of renal replacement therapy. Objective: this study aims to assess the evolution of kidney function of AKI patients, based on the AKIN (Acute Kidney Injury Network) classification and on NGAL levels. Material and methods: Coorte prospective study consisting of 83 intensive care patients, who had their serum creatinine, NGAL and urine output evaluated. Results: a total of 65 patients developed AKI, 28 developed it during their hospital stay, and 37 already demonstrated it at ICU admission. Of the AKI patients, 33 (50,8%) were classified as AKIN stage 1, 13 (20,0%) as AKIN stage 2 and 19 (29,2%), as AKIN stage 3. The AKIN stage 3 patients showed to have significantly higher NGAL levels than AKIN stage 1 patients. Significantly lower NGAL levels (p<0,05) were found in patients that have not developed AKI. Among the factors associated to mortality, we highlight Chagas disease, AKI and sepsis, low ejection fraction, the use of vasoative drugs, mechanical ventilation, intra-aortic balloon pump use, higher SOFA score, need of renal replacement therapy, reduction in urine output, higher NGAL and serum creatinine levels. Only positive hydric balance (p>0,001), the use of intra-aortic balloon pump, and the need of renal replacement therapy were able to predict death. Also, only the urine output, the presence of sepsis or sodium disturbances were able to predict the need of renal replacement therapy. Conclusion: NGAL levels obtained in the fist 24 hours after admission to the intensive care unit contributed to the prediction of AKI development, and they were indicative of the injurys severity.

INTRODUÇÃO: As recidivas e as metástases são os fatores responsáveis pela morte de pacientes com câncer de pulmão (representando 90% dos casos), indicando a necessidade de conhecer as múltiplas vias sinalizadoras envolvidas em sua patogênese, progressão, invasão e metástase. Adenocarcinomas e carcinomas de grandes células invadem primariamente vasos sanguíneos e linfáticos, metastatizando à distância. Já os carcinomas de células escamosas envolvem diretamente o mediastino, sobretudo, linfonodos e pericárdio. Carcinomas neuroendócrinos de baixo grau (carcinoides típicos e atípicos) invadem e metastatizam apesar de serem indolentes, enquanto que carcinomas neuroendócrinos de alto grau (carcinoma neuroendócrino de grandes células e carcinoma de pequenas células), rapidamente metastatizam à distância. Esse espectro diferencial de invasividade nos carcinomas de pulmão ainda não pôde ser definitivamente demarcado por biomarcadores, sobretudo nas variantes neuroendócrinas. Neste aspecto, acredita-se que a EMT esteja mais intimamente envolvida no processo de invasão, despontando como potencial biomarcador. OBJETIVO: Realizar o mapeamento genético da EMT nos carcinomas pulmonares, estabelecendo uma assinatura gênica capaz de prever o potencial de invasão nos diferentes tipos histológicos do câncer de pulmão. MÉTODOS: Espécimes de tumores ressecados cirurgicamente e criopreservados de 60 pacientes foram submetidos a análise de expressão gênica através da qPCR em tempo real, por meio do kit RT2 Profiler PCR array para a EMT com 84 genes de interesse. RESULTADOS: Observou-se a elevada expressão de 24 genes (AKT1, COL1A2, COL3A1, COL5A2, DSP, EGFR, FR11, GSK3B, ILK, ITGA5, ITGAV, ITGB1, JAG1, MAP1B, MMP2, MMP3, SNAI2, SPARC, SPP1, STAT3, TCF3, TGF?3, VPS13A, WNT5A) que participam do processo da EMT e atuam no desenvolvimento da neoplasia pulmonar. Tumores em estádio avançado e com metástases linfonodais apresentaram significante maior expressão dos seguintes genes, COL1A2, COL5A2, DSP, EGFR, FR11, GSK3B, ILK, ITGAV, ITGB1, MAP1B, SNAI2 e VPS13A. Comparando-se carcinomas nãoneuroendócrinos (CEC e AD) e neuroendócrinos (CT, CA, CPPC, CNEGC), observou-se que os neuroendócrinos apresentaram elevada expressão significativa dos genes: FR11, GSK3B, ILK, ITGB1, JAG1, MAP1B e VPS13A. Em relação à sobrevida, a análise univariada demonstrou menor sobrevida para pacientes em estádio avançado do tumor com metástase linfonodal e portador de carcinoma neuroendócrino que apresenta a hiperxpressão de todos os 24 genes da EMT, com exceção dos genes COL3A1 e SPP1. Pela análise multivariada demonstrou-se que pacientes com carcinomas neuroendócrinos com expressão elevada de MMP2 e SPARC apresentaram maior risco de morte (OR 5,41 e 4,94, respectivamente), enquanto que pacientes portadores de carcinomas de células escamosas ou adenocarcinomas com baixa expressão gênica de ILK, SPP1, COL1A2, ITGB1 apresentaram menor risco de morte (OR -7,02; -0,4, -1,3 e -3,02). CONCLUSÃO: Através do presente estudo estabeleceu-se uma assinatura gênica de 24 genes capaz de prever o potencial de agressividade histológica, de invasão e de metástases nos carcinomas pulmonares neuroendócrinos e não-neuroendócrinos / INTRODUCTION: Metastasis are responsible for the death of 90% of patients with lung cancer, indicating the need to know the multiple signaling pathways involved. Adenocarcinomas (Adc) and large cell carcinomas primarily invade blood vessels with distant metastasis, whereas squamous cell carcinoma (SqCC) involves the mediastinal lymph nodes. Neuroendocrine carcinomas of low-grade (typical and atypical carcinoid) are indolent, while high-grade neuroendocrine carcinoma (large cell neuroendocrine carcinoma and small cell carcinoma) metastasize rapidly. Biomarkers of aggressiveness in lung carcinomas remain to be determined, especially in neuroendocrine variants. In these fields, Epithelial to mesenchymal transition (EMT) genes profile emerge promise as an indicator of invasion and metastasis. AIMS: Carry out the genetic mapping of EMT in lung cancer, establishing a gene signature capable of predicting the invasion potential of different histological types of lung cancer. METHODS: Were included specimens of 60 patients and the EMT gene expression was quantified with a quantitative real-time (RT)- PCR carried out on StepOnePlus(TM) Real-Time PCR System (Applied Biosystems) with RT2 Profiler PCR Array System for the EMT pathway wih 84 target genes. (Qiagen, Dusseldorf, Germany). Associations of the gene signature and clinicopathological features, as well as prognostic factors were evaluated. RESULTS: Was observed high expression of 24 genes (AKT1, COL1A2, COL3A1, COL5A2, DSP, EGFR, FR11, GSK3B, ILK, ITGA5, ITGAV, ITGB1, JAG1, MAP1B, MMP2, MMP3, SNAI2, SPARC, SPP1, STAT3, TCF3, TGFbeta3, VPS13A, WNT5A) that are involved in the EMT process and act in the development of pulmonary neoplasia. Tumors at the advanced stage and with lymph node metastasis shown a significant higher expression of the genes COL1A2, COL5A2, DSP, EGFR, FR11, GSK3B, ILK, ITGAV, ITGB1, MAP1B, SNAI2 and VPS13A. Comparing the histological subtypes non-neuroendocrine (SqCC and AD) and neuroendocrine carcinomas (TC, AT, SCLC, LCNEC), was observed that the neuroendocrine variant shown a higher significant expression of the genes FR11, GSK3B, ILK, ITGB1, JAG1, MAP1B and VPS13A. Regarding survival, univariate analysis showed lower survival for patients in the advanced tumor stage, with lymph node metastasis and with neuroendocrine carcinoma histology that presenting overexpression for all 24 EMT genes, with the exception of the COL3A1 and SPP1 genes. Cox regression controlled by, histological types and gene expression of ILK, MMP2, SPP1, SPARC, COL1A2 and ITGB1 showed that patients with neuroendocrine carcinomas with higher expression of MMP2 and SPARC had a higher risk of death (OR 5.41 and 4.94, respectively), whereas patients with squamous cell carcinomas or adenocarcinomas with lower gene expression of ILK, SPP1, COL1A2, ITGB1 showed lower risk of death (OR -7.02, -0.4, -1.3 and -3.02). CONCLUSION: Was established a potential gene signature of 24 genes involved in the EMT process and capable of predicting the histological aggressiveness, invasion and metastasis in neuroendocrine and non-neuroendocrine variants of lung carcinomas

Orientador: Norma Sueli Pinheiro Módolo / Resumo: Introdução: a lesão renal aguda (LRA) é prevalente em pacientes hospitalizados e responsável por alta morbimortalidade. No entanto, ainda não há um marcador precoce e acurado para seu diagnóstico. Pacientes idosos estão em risco de desenvolver LRA no pós-operatório de grandes cirurgias. Objetivos: avaliar o biomarcador cistatina C plasmática como preditor precoce de LRA no período pós-operatório de cirurgia para correção de fratura de fêmur em idosos. Método: cinquenta e nove pacientes idosos submetidos à cirurgia de correção de fratura de fêmur foram estudados prospectivamente por 48 horas do pós-operatório. Amostras de sangue foram coletadas para análise de cistatina C plasmática nos seguintes tempos: logo ao término da cirurgia, no período de 4 e 24 horas depois. Amostras da creatinina foram coletadas na admissão hospitalar, ao término da cirurgia, 4, 24 e 48 horas no pós-operatório. Para a determinação do diagnóstico e estadiamento de LRA foi utilizado o critério KDIGO (Kidney Disease Improve Global Outcomes Acute Kidney Injury Workgroup). Foi analisada a precocidade e acurácia, esta última por meio da área sob a curva receiver operating characteristic (AUC ROC), da molécula de cistatina C plasmática para diagnóstico de LRA (KDIGO ≥1). Resultados: vinte e um pacientes (35,5%) apresentaram LRA. A cistatina C plasmática foi um marcador precoce de LRA elevando-se 4 horas após o fim da cirurgia (p < 0,003). Obteve uma AUC ROC em 4 horas de 0,750 (IC 95% de 0,610 a 0,860) e de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor