SAMPAIO, João Paulo Aguiar. Imunoexpressão de Caderina-E no câncer colorretal primário e nas metástases linfonodais. 2013. 69 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-21T11:14:49Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_jpasampaio.pdf: 18070044 bytes, checksum: 26426c1707ecbfd7857d05920f0fdc36 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-21T11:18:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_jpasampaio.pdf: 18070044 bytes, checksum: 26426c1707ecbfd7857d05920f0fdc36 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-21T11:18:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_jpasampaio.pdf: 18070044 bytes, checksum: 26426c1707ecbfd7857d05920f0fdc36 (MD5) Previous issue date: 2013 / E-cadherin is closely related to epitelial-mesenchymal transition and tumor progression in many cancers, including colorectal cancer. The aim of this study is to evaluate the expression of E-cadherin in primary colorectal cancer as well as in lymph node metastasis, establishing also a comparison with the expression of E-cadherin in normal colonic mucosa. We utilized 77 cases of colectomies for colorectal carcinoma and 10 cases of metastatic lymph nodes from the files of the Department of Pathology and Forensic Medicine/Federal University of Ceara. Tissue microarray and immunohistochemistry were performed with monoclonal anti-E-cadherin, evaluated using the following scores: 0 = no staining; 1 = cytoplasmic staining; 2 = mixed staining (cytoplasmic and membranous); 3 = membranous staining. It was used the classification proposed by Jawahri et al. which includes cases of abnormal expression (0, 1 and 2 scores) and cases of normal expression (3 score), and was also used the classification proposed by Almeida et al. which includes cases of non-membranous expression (0 and 1 scores) and membranous expression (2 and 3 scores). Primary tumors presented more cases of abnormal E-cadherin expression in comparison to normal colonic mucosa (p < 0.0001). There were no differences between E-cadherin expression in the primary tumor in comparison to lymph node metastasis. The grouped cell tumors showed increased expression of E-cadherin in comparison to isolated cell tumors, either using the classification proposed by Jawhari et al. (p = 0.0230) and the classification proposed by Almeida et al. (p = 0.0043). In conclusion, abnormal expression of E-cadherin in the primary tumor, with frequent membranar immunostaining associated with the cytoplasmic marking (abnormal heterogeneous or mixed staining), reinforces the evidence that E-cadherin expression change in cancer is more qualitative than quantitative. The predominance of membranar expression in primary tumor and lymph node metastasis, with or without associated cytoplasmatic expression, particularly in cell-grouped tumors, suggests that E-cadherin presence is essential for local invasion and tumor progression, as opposed to the classical paradigm that tumor progression is exacerbated by the loss of this adhesion molecule. / A Caderina-E está intimamente relacionada com a transição epitelial-mesenquimal e com a progressão tumoral em muitos tipos de câncer, inclusive no câncer colorretal. O objetivo deste trabalho foi avaliar a imunoexpressão de Caderina-E no câncer colorretal primário e nas respectivas metástases linfonodais, na mucosa colônica normal, e investigar possíveis correlações desta expressão com parâmetros clínicopatológicos. Setenta e sete casos de colectomias por carcinoma colorretal e dez casos de linfonodos metastáticos, dos arquivos do Departamento de Patologia e Medicina Legal/Universidade Federal do Ceará, foram utilizados. Realizou-se o Tissue Microarray e imunohistoquímica, com anticorpo monoclonal anti-Caderina-E. Foram avaliados os seguintes escores: 0 = ausência de expressão; 1 = expressão citoplasmática; 2 = expressão mista (citoplasmática e membranar); 3 = expressão membranar pura. Foi utilizada tanto a classificação proposta por Jawhari et al., agrupando os casos em expressão anormal (escores 0, 1 e 2) e expressão normal (escore 3), como os critérios propostos por Almeida et al., agrupando os casos como expressão não-membranar (escores 0 e 1) e expressão membranar (escores 2 e 3). Os tumores primários tiveram mais casos de expressão de Caderina-E anormal em comparação com a mucosa normal (p < 0.0001). Não houve diferença significante entre expressão de Caderina-E no tumor intestinal e em metástases linfonodais, embora nestas a expressão membranar tenha sido mais freqüente do que no sítio primário. Tumores de células agrupadas apresentaram maior expressão de Caderina-E membranar do que os de células isoladas, tanto utilizando a classificação de Jawhari et al. (p = 0.0230), como os critérios propostos por Almeida et al. (p = 0.0043). Em conclusão, a expressão anormal de Caderina-E no tumor primário, com persistência freqüente da imunomarcação membranar associada à marcação citoplasmática (marcação anormal heterogênea ou mista), reforça as evidências de que esta alteração no câncer é mais qualitativa do que propriamente quantitativa. O predomínio da expressão membranar no sítio primário da neoplasia e na metástase, com ou sem expressão citoplasmática associada, principalmente em tumores de células agrupadas, sugere que a presença da Caderina-E é essencial para a invasão local e progressão tumoral, em oposição ao clássico paradigma de que a progressão tumoral se exacerba com a perda desta molécula de adesão.

Orientador: Deilson Elgui Oliveira / Resumo: Presente em aproximadamente 95% da população mundial o Vírus de Esptein-Barr (Epstein-Barr Virus - EBV) está relacionado com 1,5% dos casos de câncer no mundo com destaque para o carcinoma de nasofaringe (Nasopharyngeal Carcinoma – NPC) o qual segundo a Organização Mundial da Saúde, 90% dos carcinomas indiferenciados estão associados ao EBV. Expresso durante o ciclo de latência III e II a proteína latente de membrana 1 (Latent Membrane Protein 1, LMP1), um dos principais produtos oncogênicos do EBV mimetiza o receptor CD40 e mantém-se constitutivamente ativa na célula. Com papel importantíssimo no desenvolvimento do carcinoma de nasofaringe, LMP1 atua na imortalização e proliferação de linfócitos B por meio da deflagração de vias de sinalização intracelular como NFkB e PI3K/AKT. Atualmente são conhecidas sete variantes do gene BNLF1 que codifica LMP1 e apresentam diferenças nas sequências nucleotídicas e aminoacídicas, ambas consideradas oncogênicas por conservarem os domínios CTARs. Essas diferenças encontradas nas variantes de LMP1 podem estar relacionadas à agressividade dos tumores. Entre as variantes de LMP1 foram avaliadas no presente estudo as variantes B95.8 e M81, ambas associadas ao desenvolvimento de NPC. As propriedades transformantes dessas variantes de LMP1 foram analisadas frente ao programa biológico transição epitelial- mesenquimal (Epithelial-Mesenckymal Transition – EMT) que está diretamente relacionado com a progressão dos carcinomas. A avaliação das v... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by Programa de Pós-Graduação em Odontologia Saúde (mestrodo@ufba.br) on 2017-03-13T12:31:55Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO FINAL MESMO_Lia Porto_UFBA (com fotos)__CORRIGIDA 210914.pdf: 2438506 bytes, checksum: c90bea353f9f17081cb87d9108e4bbeb (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-03-23T13:04:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO FINAL MESMO_Lia Porto_UFBA (com fotos)__CORRIGIDA 210914.pdf: 2438506 bytes, checksum: c90bea353f9f17081cb87d9108e4bbeb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T13:04:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO FINAL MESMO_Lia Porto_UFBA (com fotos)__CORRIGIDA 210914.pdf: 2438506 bytes, checksum: c90bea353f9f17081cb87d9108e4bbeb (MD5) / CAPES / A transição epitelial-mesenquimal (TEM) representa o processo em que as células epiteliais perdem suas características e adquirem propriedades de células mesenquimais típicas. A dissociação das células tumorais devido à alteração na adesão célula-célula representa um dos princípios chave da invasão tumoral e da TEM. O tumor odontogênico queratocístico (TOQ) tem como características principais o seu comportamento clínico agressivo e altas taxas de recorrência. O conhecimento das características moleculares da TEM no TOQ pode fornecer marcadores úteis que auxiliem no prognóstico e na condução terapêutica individualizada desse tumor odontogênico. O presente estudo analisou a imunoexpressão das proteínas E-caderina, N-caderina, Snail, Slug e Vimentina, por estarem envolvidas no processo da TEM, em casos de TOQ em comparação com cistos radiculares (CRs) e folículo dentais (FDs) a fim de fornecer melhores perspectivas na compreensão do comportamento agressivo desses tumores. Foram utilizados 32 casos de TOQ, 15 CRs e 08 FDs para a técnica imunoistoquímica. A análise do perfil de imunoexpressão nos TOQs demonstrou expressão preservada de E-caderina na maioria dos casos, sendo que a N-caderina demonstrou um ganho de expressão em epitélio tumoral em relação ao estroma, o que esteve correlacionado com a expressão positiva de Slug em epitélio, e este por sua vez com a expressão positiva de Snail. No estroma dos TOQs, a N-caderina correlacionou-se positivamente com Slug, e a Vimentina com o Snail no epitélio. Ao comparar os três grupos estudados, a imunoexpressão das proteínas foi influenciada de forma marcante pela inflamação. As expressões aumentadas de N-caderina no epitélio e no estroma, do Slug no epitélio e da Vimentina no estroma estiveram associadas com a localização em mandíbula. A grande maioria dos casos que apresentaram localização posterior (quer isoladamente ou em conjunto com a anterior) apresentou expressão preservada de E-caderina. Estas proteínas provavelmente desempenham papéis diferenciados na mediação da invasividade local em TOQs. Apesar da expressão da E-caderina estar preservada na maioria dos TOQs, há indícios de ocorrência da TEM nesses tumores. A alta intensidade de marcação do Slug nos TOQs sugere que esta proteína é provavelmente o fator de transcrição principal envolvido na indução de TEM nos TOQs. / The epithelial-mesenchymal transition (EMT) is the process where cells lose their epithelial features and acquire properties of typical mesenchymal cells. The dissociation of tumor cells due to changes in cell-cell adhesion is one of the key principles of tumor invasion and EMT. The keratocyst odontogenic tumor (KOT) has as main features its aggressive clinical behavior and high recurrence rates. Knowledge of the molecular features of EMT in KOT can provide useful markers to aid in the prognosis and individualized therapeutic management of this odontogenic tumor. The present study examined the immunoreactivity of proteins E-cadherin, Ncadherin, Snail, Slug and vimentin, as they are involved in the process of EMT, in cases of KOT compared with radicular cysts (RCs) and dental follicles (DFs) to provide better perspectives in understanding the aggressive behavior of these tumors. Thirty-two cases of KOTs, 15 RCs and 08 DFs were used for immunohistochemistry. The analysis of immunoreactivity profile in KOTs showed preserved expression of E-cadherin in most cases, and N-cadherin showed a gain of expression in tumor epithelium relative to stroma which has been positively correlated with the expression of Slug in epithelium, and this in turn with positive expression of Snail. In the stroma of KOTs, N-cadherin correlated positively with Slug and vimentin, and this with Snail in the epithelium. When comparing the three groups, the immunoreactivity of the proteins was markedly influenced by inflammation. Increased expression of N-cadherin in the epithelium and stroma, Slug in the epithelium and vimentin in the stroma were associated with the location in the jaw. The majority of patients who had tumors in posterior location (either alone or in combination with the anterior) showed preserved expression of E-cadherin. These proteins probably play different roles in mediating local invasiveness in KOTs. Despite the expression of E-cadherin being preserved in most KOTs, there is evidence of the occurrence of EMT in these tumors. The high intensity staining of Slug in KOTs suggests that this protein is probably the main transcription factor involved in induction of MET in KOTs.

Submitted by CLEITON SILVA MARQUES null (biocleitond2@yahoo.com.br) on 2017-06-14T16:42:05Z No. of bitstreams: 1 MS 201513939-9 Dissertação Cleiton Silva Marques.pdf: 1951878 bytes, checksum: 324f65b41f0660609ec022c77b81f85e (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-06-19T13:53:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marques_cs_me_bot.pdf: 1951878 bytes, checksum: 324f65b41f0660609ec022c77b81f85e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T13:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marques_cs_me_bot.pdf: 1951878 bytes, checksum: 324f65b41f0660609ec022c77b81f85e (MD5) Previous issue date: 2017-05-15 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Presente em aproximadamente 95% da população mundial o Vírus de Esptein-Barr (Epstein-Barr Virus - EBV) está relacionado com 1,5% dos casos de câncer no mundo com destaque para o carcinoma de nasofaringe (Nasopharyngeal Carcinoma – NPC) o qual segundo a Organização Mundial da Saúde, 90% dos carcinomas indiferenciados estão associados ao EBV. Expresso durante o ciclo de latência III e II a proteína latente de membrana 1 (Latent Membrane Protein 1, LMP1), um dos principais produtos oncogênicos do EBV mimetiza o receptor CD40 e mantém-se constitutivamente ativa na célula. Com papel importantíssimo no desenvolvimento do carcinoma de nasofaringe, LMP1 atua na imortalização e proliferação de linfócitos B por meio da deflagração de vias de sinalização intracelular como NFkB e PI3K/AKT. Atualmente são conhecidas sete variantes do gene BNLF1 que codifica LMP1 e apresentam diferenças nas sequências nucleotídicas e aminoacídicas, ambas consideradas oncogênicas por conservarem os domínios CTARs. Essas diferenças encontradas nas variantes de LMP1 podem estar relacionadas à agressividade dos tumores. Entre as variantes de LMP1 foram avaliadas no presente estudo as variantes B95.8 e M81, ambas associadas ao desenvolvimento de NPC. As propriedades transformantes dessas variantes de LMP1 foram analisadas frente ao programa biológico transição epitelial- mesenquimal (Epithelial-Mesenckymal Transition – EMT) que está diretamente relacionado com a progressão dos carcinomas. A avaliação das variantes de LMP1 foi feito por meio de transfecção transiente de células HEK293 e NP69. Células expressando as variantes de LMP1 apresentaram maior capacidade de migração e invasão em relação ao grupo controle. Ainda, células expressando as variantes de LMP1 demonstraram alteração para alguns genes relacionados ao processo de EMT. No entanto, as variantes de LMP1 não apresentam diferenças significativas na regulação do programa de EMT. / FAPESP: 2015/13939-9

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-04-06T16:12:19Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_ Lia Pontes Arruda Porto.pdf: 2438506 bytes, checksum: c90bea353f9f17081cb87d9108e4bbeb (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-29T15:09:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_ Lia Pontes Arruda Porto.pdf: 2438506 bytes, checksum: c90bea353f9f17081cb87d9108e4bbeb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T15:09:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_ Lia Pontes Arruda Porto.pdf: 2438506 bytes, checksum: c90bea353f9f17081cb87d9108e4bbeb (MD5) / Capes / A transição epitelial-mesenquimal (TEM) representa o processo em que as células epiteliais perdem suas características e adquirem propriedades de células mesenquimais típicas. A dissociação das células tumorais devido à alteração na adesão célula-célula representa um dos princípios chave da invasão tumoral e da TEM. O tumor odontogênico queratocístico (TOQ) tem como características principais o seu comportamento clínico agressivo e altas taxas de recorrência. O conhecimento das características moleculares da TEM no TOQ pode fornecer marcadores úteis que auxiliem no prognóstico e na condução terapêutica individualizada desse tumor odontogênico. O presente estudo analisou a imunoexpressão das proteínas E-caderina, N-caderina, Snail, Slug e Vimentina, por estarem envolvidas no processo da TEM, em casos de TOQ em comparação com cistos radiculares (CRs) e folículo dentais (FDs) a fim de fornecer melhores perspectivas na compreensão do comportamento agressivo desses tumores. Foram utilizados 32 casos de TOQ, 15 CRs e 08 FDs para a técnica imunoistoquímica. A análise do perfil de imunoexpressão nos TOQs demonstrou expressão preservada de E-caderina na maioria dos casos, sendo que a N-caderina demonstrou um ganho de expressão em epitélio tumoral em relação ao estroma, o que esteve correlacionado com a expressão positiva de Slug em epitélio, e este por sua vez com a expressão positiva de Snail. No estroma dos TOQs, a N-caderina correlacionou-se positivamente com Slug, e a Vimentina com o Snail no epitélio. Ao comparar os três grupos estudados, a imunoexpressão das proteínas foi influenciada de forma marcante pela inflamação. As expressões aumentadas de N-caderina no epitélio e no estroma, do Slug no epitélio e da Vimentina no estroma estiveram associadas com a localização em mandíbula. A grande maioria dos casos que apresentaram localização posterior (quer isoladamente ou em conjunto com a anterior) apresentou expressão preservada de E-caderina. Estas proteínas provavelmente desempenham papéis diferenciados na mediação da invasividade local em TOQs. Apesar da expressão da E-caderina estar preservada na maioria dos TOQs, há indícios de ocorrência da TEM nesses tumores. A alta intensidade de marcação do Slug nos TOQs sugere que esta proteína é provavelmente o fator de transcrição principal envolvido na indução de TEM nos TOQs.

Submitted by Programa de Pós-Graduação em Odontologia Saúde (mestrodo@ufba.br) on 2018-09-05T14:56:42Z No. of bitstreams: 1 Tese Final REBECA.pdf: 4431734 bytes, checksum: 07c03f057f035f7cfc830f968ac47ee6 (MD5) / Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2018-09-12T20:57:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Final REBECA.pdf: 4431734 bytes, checksum: 07c03f057f035f7cfc830f968ac47ee6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-12T20:57:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Final REBECA.pdf: 4431734 bytes, checksum: 07c03f057f035f7cfc830f968ac47ee6 (MD5) / INTRODUÇÃO/OBJETIVO: A via Hedgehog (HH) está ativada no Carcinoma Escamocelular de Boca (CEB) e pode estar relacionada a transição epitelialmesenquimal (TEM) e a proliferação celular neste tumor. Diante disso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a TEM e potencial proliferativo em CEBs com a via HH ativada. MATERIAL E MÉTODOS: Vinte e três casos de CEBs GLI1 positivos foram submetidos à reação imuno-histoquímica para as proteínas Snail, Slug, Ncaderina, E-caderina, β-catenina e MCM3. As análises da imunoexpressão foram realizadas em front de invasão e ilhas tumorais e os dados clínico-patológicos foram avaliados e comparados. RESULTADOS: No front de invasão, os casos de CEBs apresentaram expressão positiva para Snail, Slug e MCM3 no núcleo das células tumorais e observou-se perda de expressão membranar e citoplasmática de E-caderina e β-catenina. A expressão positiva para N-caderina foi observada em 31,78% dos casos. Imunoexpressão de GLI1 foi associada com a perda de expressão de E-caderina (p<0,001), β-catenina membranar (p<0,001) e β-catenina citoplasmática (p=0,02). Nas ilhas tumorais, observou-se expressão nuclear GLI1, Snail, Slug e MCM3. E-caderina e β-catenina exibiram marcação positiva membranar restabelecida. Observou-se uma correlação positiva e estatisticamente significante entre GLI1 e Snail (p=0,05), Ecaderina (p=0,01) e β-catenina citoplasmática (p=0,04). A expressão de β-catenina membranar estava relacionada com presença de metástase em linfonodos e estadiamento clínico e GLI1 apresentou associação com o estadiamento clínico. CONCLUSÕES: A via HH pode atuar na regulação da expressão de fenótipo mesenquimal. A perda de expressão de E-caderina e β-catenina está relacionada a região de front, enquanto que a adesão celular se encontra reestabelecida em ilhas tumorais, de forma independente de MCM3. O padrão de expressão de N-caderina e Slug não refletem de forma significante o processo de TEM em CEBs com a via HH ativada. / INTRODUCTION/OBJECTIVE: The Hedgehog (HH) pathway is activated in the Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) and may be related to the epithelialmesenchymal transition (EMT) and cellular proliferation in this tumor. The aim of the present study was to evaluate the EMT and the cell proliferative potential in OSCC with the activated HH pathway. MATERIAL AND METHODS: Twenty-three positive GLI1 OSCC cases were submitted to the immunohistochemical reaction for Snail, Slug, N-cadherin, E-cadherin, β-catenin and MCM3 proteins. Immunoexpression analyzes were performed in front of invasion and tumor nests and the clinical and pathological data were evaluated and compared. RESULTS: At the invasive front, OSCC cases showed positive expression for Snail, Slug and MCM3 in the nucleus of tumor cells and the loss of membrane and cytoplasmic expression of E-cadherin and β-catenin were observed. Positive expression for N-cadherin was observed in 31.78% of the cases. Immunoexpression of GLI1 was associated with loss of E-cadherin expression (p <0.001), membrane β-catenin (p <0.001) and cytoplasmic β-catenin (p = 0.02). In the tumor nests, it observes nuclear expression GLI1, Snail, Slug and MCM3. E-cadherin and β-catenin showed re-established membrane positive expression There was a positive and statistically significant correlation between GLI1, Snail (p = 0.05), Ecadherin (p = 0.01) and cytoplasmic β-catenin (p = 0.04). The expression of β-catenin membrane was related to the presence of matastasis in lymph nodes and to clinical staging and GLI1 was associated with clinical staging. CONCLUSIONS: The HH pathway may act to regulate the expression of mesenchymal phenotype. The loss of Ecadherin and β-catenin expression is related to the front region, while cell adhesion is re-established in tumor nests independently of MCM3. The expression pattern of Ncadherin and Slug do not significantly reflect the TEM process in positive GLI1 OSCC

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-06-05T21:48:08Z No. of bitstreams: 1 LarissaSantosAmaralRolim_DISSERT.pdf: 2305138 bytes, checksum: 14b3b617e544762c66ebb1f48bfcb9de (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-06-11T19:21:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LarissaSantosAmaralRolim_DISSERT.pdf: 2305138 bytes, checksum: 14b3b617e544762c66ebb1f48bfcb9de (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-11T19:21:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LarissaSantosAmaralRolim_DISSERT.pdf: 2305138 bytes, checksum: 14b3b617e544762c66ebb1f48bfcb9de (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Introdução: O Carcinoma de Células Escamosas Oral (CCEO) é um grande problema de saúde pública em todo o mundo. Acredita-se que o mecanismo responsável pela progressão tumoral seja baseado na invasão coletiva ou de células individuais, chamado de Transição Epitelial-Mesenquimal (TEM), onde ocorre uma diminuição da expressão de biomarcadores epiteliais e aumento da expressão de biomarcadores mesenquimais, como Twist. A Podoplanina (PDPN), uma glicoproteína transmembranar, está envolvida na motilidade das células neoplásicas que estão passando pela TEM para orientar o complexo celular durante a invasão. Objetivo: Realizar uma análise comparativa entre a imunoexpressão da PDPN e do Twist em 40 casos de CCEs de lábio inferior (CCELI) e 36 casos de língua oral (CCELO), para analisar possíveis associações com parâmetros clínicos-patológicos (tamanho do tumor primário, metástase linfonodal regional e à distância, estadiamento clínico, grau histológico de malignidade e padrão histológico de invasão). Métodos: Para avaliação do grau histopatológico de malignidade, utilizou-se o sistema proposto por Brandwein-Gensler et al (2005). Para os dois marcadores, quatro tipos de análises imuno-histoquímica foram realizados: análise do front de invasão, das áreas compressivas do tumor, das grandes ilhas tumorais (>15 células neoplásicas) e dos ninhos/células dissociadas (<15 células neoplásicas). Para a análise das relações entre os parâmetros clínicos e histopatológicos e as imunoexpressões de PDPN e Twist, foi utilizado o teste não paramétrico de Mann-Whitney. Para verificar possíveis correlações entre as imunoexpressões de PDPN e Twist, foi realizado o teste de correlação de Spearman (r). Para todos os testes estatísticos, foi estabelecido um nível de significância de 5% (p < 0,05). Resultados: Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas na imunoexpressão de PDPN e Twist em relação ao tamanho do tumor, metástase e estadiamento clínico de CCELI (p > 0,05). Porém foram encontradas diferenças estatisticamente significativas na imunoexpressão citoplasmástica de PDPN em relação aos padrões de invasão tipo 4 e 5 (p = 0,032) de Brandwein-Gensler et al. (2005). Também não foram observadas diferenças estatisticamente significativas na imunoexpressão de PDPN e Twist em relação ao tamanho do tumor, metástase e estadiamento clínico de CCELO (p > 0,05). Observou-se diferenças estatisticamente significativas entre a expressão citoplasmática (p = 0,006), membranar (p = 0,030) e geral (p = 0,025) de PDPN nos CCELO com os padrões de invasão tipo 4 e 5 de Brandwein-Gensler et al. (2005). Além disso, foram observadas correlações negativas estatisticamente significativas entre a expressão membranar da PDPN e as expressões geral (r = -0,356; p = 0,024) e citoplasmática do Twist (r = -0,336; p = 0,034) nos CCELI. Conclusões: A expressão da PDPN está inversamente relacionada com o Twist em CCELI, além de demonstrar que ambas proteínas estão associadas com um pior padrão de invasão nos CCELI e CCELO. Também, levantou-se a hipótese de que a relação da PDPN com o Twist em CCELI e CCELO possa estar mais envolvida com uma transição parcial do fenótipo epitelial para o mesenquimal do que uma transição completa coordenada pela PDPN. / Introduction: Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) is a major public health problem worldwide. It is believed that the mechanism responsible for tumor progression is based on collective invasion of cell groups or individual cells, called Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT), where there is a decrease in the expression of epithelial biomarkers and increased expression of mesenchymal biomarkers as Twist. Podoplanin (PDPN), a transmembrane glycoprotein, is assumed to be involved in the motility of neoplastic cells that are undergoing through EMT to guide the cell complex during an invasion. Objective: To perform a comparative analysis of the immunoexpression of PDPN and Twist among 40 cases of lower lip CCEs and 36 cases of oral tongue, (primary tumor size, regional and distal lymph node metastasis, clinical staging, histological grade of malignancy and histological pattern of invasion). Methods: To evaluate the histopathological grade of malignancy, the system proposed by Brandwein-Gensler et al. (2005) was used. For the two markers, four types of immunohistochemical analysis were performed: analysis of the invasion front, tumor compressive areas, large tumor islands (> 15 neoplastic cells) and nests/dissociated cells (<15 neoplastic cells). The non-parametric Mann-Whitney test was used for the analysis of the relationships between the clinical and histopathological parameters and the PDPN and Twist immunoexpressions. To verify possible correlations between the PDPN and Twist immunoexpressions, the Spearman (r) correlation test was performed. For all statistical tests, a significance level of 5% (p <0.05) was established. Results: No statistically significant differences were found between PDPN and Twist immunoexpression and tumor size, metastasis, and clinical staging on lower lip SCC (p > 0.05). However, statistically significant differences were found between the cytoplasmic immunoexpression of PDPN and the invasion patterns type 4 and 5 (p = 0.032) of Brandwein-Gensler et al. (2005). Also, no statistically significant differences were found between PDPN and Twist immunoexpression and tumor size, metastasis and clinical staging on oral tongue SCC (p > 0.05). Statistically significant differences were observed between the cytoplasmic (p = 0.006), membrane (p = 0.030) and general (p = 0.025) PDPN expression in oral tongue SCC with the invasion patterns type 4 and 5 of Brandwein-Gensler et al. (2005). In addition, the Spearman correlation test demonstrated statistically significant negative correlations between PDPN membrane expression and Twist general expression (r = -0.356, p = 0.024) and Twist cytoplasmic expression (r = -0.336; p = 0.034) in the lower lip SCCs. Conclusions: PDPN expression is inversely related to Twist in lower lip SCC, it was demonstrated that both proteins are associatved with a worse invasion pattern in SCC. It has also been hypothesized that the relationship of PDPN with Twist in OSCC may be more involved with a partial transition from the epithelial to the mesenchymal phenotype than a complete transition coordinated by PDPN.

Orientadores: José Antonio Rocha Gontijo, Flávia Fernandes Mesquita Vieira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T00:59:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Block_DanielBueno_M.pdf: 3824410 bytes, checksum: 3f680ece69f85c5b515f67c4ee1f67b4 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O ambiente em que vivemos tem grande influência no desenvolvimento e na vida adulta do feto, sendo que a alimentação ou o tabagismo vêem como hábitos e estilo de vida que estão diretamente relacionados a modificações na organogênese fetal. O tabagismo é um dos fatores de maior preocupação das autoridades em saúde pública, devido aos graves problemas à saúde causados pelo cigarro, os custos sociais e econômicos decorrentes destas afecções e, atualmente às possíveis implicações epigenéticas dada incidência do tabagismo em gestantes que pode repercutir sobre gerações futuras. Vários estudos tratam dos efeitos danosos e das repercussões do cigarro no organismo de gestantes e no desenvolvimento do feto, tais como hipertensão arterial, doenças cardiovasculares, maior prevalência de aborto espontâneo, morbidade intrauterina , retarde no crescimento fetal, entre outros. A inalação de monóxido de carbono (CO) pelas gestantes, através do cigarro, causa no feto um estado de hipóxia que pode ser, muitas vezes, fatal. Em resposta a este déficit de oxigênio alguns mecanismos fisiológicos podem ser observados, como: o aumento da expressão do hormônio endógeno eritropoietina (EPO) que regula a eritropoiese e consequentemente, os níveis de hemoglobina e a hematose dos tecidos. O fator induzível por hipóxia (HIF-1) atua na regulação da expressão EPO, sobre a angiogênese, e na viabilidade e proliferação celular vascular entre outras funções. Nesta emaranhada rede de estímulos, está intimamente envolvido o fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) que tem na hipóxia um dos principais estímulos a sua expressão. Este fator é o mais importante mediador do desenvolvimento vascular renal, principalmente do processo de diferenciação do corpúsculo glomerular. Observamos que a inalação de tabaco não modificou significativamente a evolução da massa corporal das mães durante a prenhes (figura 6). No entanto, a prole de animais submetidos ao fumo apresentou uma expressiva redução da massa corporal ao nascer - Ct 7,2± 0,05DPM g vs. Fm 6,3± 0,24DPM g (figura 7), e da nona e décima semana de vida - Ct 322± 20,5DPM g vs. Fm 286± 32,3DPM g e Ct 329± 20,4DPM g vs. Fm 294± 32,6DPM g, respectivamente (figura 8). Os resultados referente à função renal na prole Ct e Fm na 5ª semana de vida não mostraram diferenças significativas na filtração glomerular (CCr) tão pouco na reabsorção proximal de sódio. Contudo, a prole Fm apresentou um aumento significativo na excreção de sódio (FENa+ 24,5%, FEK 13,8%, FEPPNa+ 25,3% e CENa+ 20%) quando comparado ao Ct (figura 13). Por outro lado, na 10ª semana de vida, observamos um aumento significativo (p=0,01) no CCr - 13,9% e na CENa+ - 17,7%, na prole Fm vs. Ct. Nestes animais não houve diferença na reabsorção de Na+ no túbulo proximal e pós-proximal, consequentemente não observamos diferenças significativas na FENa+ e FEK (figura 14). Nos animais Fm de 13 semanas de vida nenhum dos parâmetros das provas funcionais renais se alteraram (figura 15). Contudo, estritamente nesta idade podemos observar um elevação na pressão arterial (p=0,02) entre os grupos Ct e Fm - 134± 9,79DPM mmHg e 146± 11,07DPM mmHg, respectivamente (figuras 11). Não observamos modificações significativas, através da estereologia renal, no volume renal (Ct 0,12 ±0,01 vs. Fm 0,11 ±0,004), na massa renal (Ct 0,43 ±0,03 vs. Fm 0,37 ±0,01) nos animais com 12 dias de vida. Embora, não estatisticamente significativo, a prole Fm apresentou uma redução de 10% no volume glomerular (Ct 16420 ±2411 vs. Fm 15860 ±1078) e 8,2% menos glomérulos (Ct 10450 ±2030 vs. Fm 8628 ±900) quando comparados ao Ct (figuras 16 a 19). Os resultados quantitativos das proteínas envolvidas na angiogênese e eritropoiese - VEGF e EPO, dados pelo ensaio de western blotting, não apresentaram diferenças significativas entre os grupos (figuras 20 a 22). Contudo, os resultados semi-quantitativos por imunolocalização mostrou uma elevada intensidade fluorocrômica do VEGF nos animais Fm e de HIF1? nos animais Ct no período embrionário - E17 (figuras 23 a 27). Observamos, também, uma expressiva modificação na estrutura da matriz extracelular por deposição de proteínas no sitio intersticial e perivascular renal nos animais Fm de 16 semanas vida comparadas ao Ct dadas pela histoquímica de picrossíruis e imunofluorêscencia de fibronectina (figura 29 a 32). Assim, podemos concluir que, a exposição intrauterina ao fumo e seus componentes, podem levar a uma modificação morfofuncional renal na vida adulta que reflete diretamente na manutenção da pressão arterial / Abstract: Prior study about developmental plasticity hypothesis suggests that various adverse intra-uterine exposures lead to persistent fetal developmental adaptations. Maternal smoking is a very important modifiable adverse fetal exposure in western countries and leads to a decrease in the offspring's birth weight. Thus far, the specific adverse fetal smoking exposures and mechanisms underlying these associations on renal development and functional disorder are unclear. The present study investigates, in adult male rats, the effect of smoking exposure (Sk) in utero on blood pressure (BP), and its association with nephron structure and function changes. In the current study, showed in 13-week old Sk offspring enhanced arterial blood pressure, reduced nephron number are associated with higher TGF-?1 glomerular expression. Sk glomeruli also presented an upregulated collagen and fibronectin deposition intrinsically related to fibrotic process as compared to age-matched control group. From our present knowledge, these are the first data showing renal morphological and functional modifications in the gestational smoking model of fetal programming. The fetal-programmed adult rats showed structural kidney disorders associated with a striking stage of fibrosis, which led us to state that the glomerular overflow and subsequently TGF-?1 activity inducing fibrotic protein expression that may cause glomerular EMT / Mestrado / Fisiopatologia Médica / Mestre em Ciências

Introdução: Os marcadores moleculares têm sido utilizados para identificar subgrupos de tumores com comportamento clínico distinto, inclusive quanto ao padrão de recidiva. Objetivo: Caracterizar a expressão imunoistoquímica de vimentina (VIM) e E-caderina (CDH1) em carcinomas ductais invasivos (CDI) de mama e sua associação com a expressão de citoqueratina 5 (CK5), e características clínico-patológicas. Métodos: Microarranjos teciduais (TMA) foram construídos a partir de 82 amostras de CDI de mama. Imunoistoquímica (IHQ) foi realizada para determinar os receptores hormonais (RH; receptores de estrógeno e progesterona) e receptor do fator de crescimento epidérmico humano 2 (HER2), VIM, CDH1, CK5 e Ki-67. Os tumores foram classificados como luminal A (RH+, HER2-), luminal B (RH+, HER2+ ou Ki-67 alto), HER2 hiperexpresso (RH-, HER2+) e triplo negativo (TN; RH-, HER2-). Resultados: O fenótipo VIM+/CDH1-/low não foi observado nos tumores luminal A, B e HER2 hiperexpresso, enquanto que este fenótipo estava presente em 61,9% dos TN (p= 0,0001). A mediana de Ki-67 em tumores VIM+/CDH1-/low foi 13,6 (variação, 17,8-45,4), em comparação com 9,8 (variação de 4,1-38,1) nos não- VIM+/CDH1-/low (p= 0,0007). O acometimento linfonodal foi menos freqüente em pacientes com VIM+/CDH1-/low do que nos não- VIM+/CDH1-/low (23% X 61%, teste de 2, p = 0,01). A sobrevida livre de doença em 5 anos foi de 61,5% e 83,7% (teste de log-rank, p= 0,02) e a sobrevida global em 5 anos foi de 51,2% e 83,5% (teste de log-rank, p= 0,03) em pacientes com tumores com fenótipo VIM+/CDH1-/low e não VIM+/CDH1-/low, respectivamente. Conclusão: A expressão de VIM e CDH1 identificaram um subconjunto de CDI de mama com fenótipo mesenquimal com alto grau histológico e alto índice mitótico. / Introduction: Molecular markers have been used to identify subgroups of tumors with distinct clinical behavior, including recurrence pattern. Objective: To characterize the immunohistochemical expression of vimentin (VIM) and E-cadherin (CDH1) in invasive ductal carcinoma (IDC) of the breast and its association with cytokeratin 5 (CK5) expression and clinicopathological features. Methods: A tissue microarray was constructed from 82 IDC breast cancer specimens. Immunohistochemistry (IHC) was used to determine hormone receptor (HR; estrogen and progesterone receptors) status and human epidermal growth factor receptor 2 (HER2), VIM, CDH1, CK5, and Ki-67 expression. Tumors were classified as luminal A (HR+, HER2-), luminal B (HR+, HER2+ or high Ki-67), HER2 enriched (HR-, HER2+), and triple negative (TNBC; HR-, HER2-). Results: The VIM+/CDH1-/low phenotype was not observed in luminal A, luminal B and HER2 enriched tumors, whereas this phenotype was present in 61.9% of triple negative (TNBC) tumors (p = 0.0001). The median Ki-67 index in VIM+/CDH1-/low tumors was 13.6 (range, 17.8-45.4) compared with 9.8 (range, 4.1-38.1) in non-VIM+/CDH1-/low tumors (p= 0.0007). The presence of lymph node metastasis was less frequent in patients with VIM+/CDH1-/low tumors than in those with non-VIM+/CDH1-/low tumors (23% vs. 61%; 2 test, p= 0.01). The 5-years disease-free survival was 61.5% and 83.7% (log-rank test; p= 0.02) and the 5-year overall survival was 51.2% and 83.5% (log-rank test; p= 0.03) in patients with VIM+/CDH1-/low phenotype and non-VIM+/CDH1-/low phenotype tumors, respectively. Conclusion: The expression of VIM and CDH1 identified a subset of IDC breast cancer of the mesenchymal phenotype with high histological grade and high mitotic index.

INTRODUÇÃO: As recidivas e as metástases são os fatores responsáveis pela morte de pacientes com câncer de pulmão (representando 90% dos casos), indicando a necessidade de conhecer as múltiplas vias sinalizadoras envolvidas em sua patogênese, progressão, invasão e metástase. Adenocarcinomas e carcinomas de grandes células invadem primariamente vasos sanguíneos e linfáticos, metastatizando à distância. Já os carcinomas de células escamosas envolvem diretamente o mediastino, sobretudo, linfonodos e pericárdio. Carcinomas neuroendócrinos de baixo grau (carcinoides típicos e atípicos) invadem e metastatizam apesar de serem indolentes, enquanto que carcinomas neuroendócrinos de alto grau (carcinoma neuroendócrino de grandes células e carcinoma de pequenas células), rapidamente metastatizam à distância. Esse espectro diferencial de invasividade nos carcinomas de pulmão ainda não pôde ser definitivamente demarcado por biomarcadores, sobretudo nas variantes neuroendócrinas. Neste aspecto, acredita-se que a EMT esteja mais intimamente envolvida no processo de invasão, despontando como potencial biomarcador. OBJETIVO: Realizar o mapeamento genético da EMT nos carcinomas pulmonares, estabelecendo uma assinatura gênica capaz de prever o potencial de invasão nos diferentes tipos histológicos do câncer de pulmão. MÉTODOS: Espécimes de tumores ressecados cirurgicamente e criopreservados de 60 pacientes foram submetidos a análise de expressão gênica através da qPCR em tempo real, por meio do kit RT2 Profiler PCR array para a EMT com 84 genes de interesse. RESULTADOS: Observou-se a elevada expressão de 24 genes (AKT1, COL1A2, COL3A1, COL5A2, DSP, EGFR, FR11, GSK3B, ILK, ITGA5, ITGAV, ITGB1, JAG1, MAP1B, MMP2, MMP3, SNAI2, SPARC, SPP1, STAT3, TCF3, TGF?3, VPS13A, WNT5A) que participam do processo da EMT e atuam no desenvolvimento da neoplasia pulmonar. Tumores em estádio avançado e com metástases linfonodais apresentaram significante maior expressão dos seguintes genes, COL1A2, COL5A2, DSP, EGFR, FR11, GSK3B, ILK, ITGAV, ITGB1, MAP1B, SNAI2 e VPS13A. Comparando-se carcinomas nãoneuroendócrinos (CEC e AD) e neuroendócrinos (CT, CA, CPPC, CNEGC), observou-se que os neuroendócrinos apresentaram elevada expressão significativa dos genes: FR11, GSK3B, ILK, ITGB1, JAG1, MAP1B e VPS13A. Em relação à sobrevida, a análise univariada demonstrou menor sobrevida para pacientes em estádio avançado do tumor com metástase linfonodal e portador de carcinoma neuroendócrino que apresenta a hiperxpressão de todos os 24 genes da EMT, com exceção dos genes COL3A1 e SPP1. Pela análise multivariada demonstrou-se que pacientes com carcinomas neuroendócrinos com expressão elevada de MMP2 e SPARC apresentaram maior risco de morte (OR 5,41 e 4,94, respectivamente), enquanto que pacientes portadores de carcinomas de células escamosas ou adenocarcinomas com baixa expressão gênica de ILK, SPP1, COL1A2, ITGB1 apresentaram menor risco de morte (OR -7,02; -0,4, -1,3 e -3,02). CONCLUSÃO: Através do presente estudo estabeleceu-se uma assinatura gênica de 24 genes capaz de prever o potencial de agressividade histológica, de invasão e de metástases nos carcinomas pulmonares neuroendócrinos e não-neuroendócrinos / INTRODUCTION: Metastasis are responsible for the death of 90% of patients with lung cancer, indicating the need to know the multiple signaling pathways involved. Adenocarcinomas (Adc) and large cell carcinomas primarily invade blood vessels with distant metastasis, whereas squamous cell carcinoma (SqCC) involves the mediastinal lymph nodes. Neuroendocrine carcinomas of low-grade (typical and atypical carcinoid) are indolent, while high-grade neuroendocrine carcinoma (large cell neuroendocrine carcinoma and small cell carcinoma) metastasize rapidly. Biomarkers of aggressiveness in lung carcinomas remain to be determined, especially in neuroendocrine variants. In these fields, Epithelial to mesenchymal transition (EMT) genes profile emerge promise as an indicator of invasion and metastasis. AIMS: Carry out the genetic mapping of EMT in lung cancer, establishing a gene signature capable of predicting the invasion potential of different histological types of lung cancer. METHODS: Were included specimens of 60 patients and the EMT gene expression was quantified with a quantitative real-time (RT)- PCR carried out on StepOnePlus(TM) Real-Time PCR System (Applied Biosystems) with RT2 Profiler PCR Array System for the EMT pathway wih 84 target genes. (Qiagen, Dusseldorf, Germany). Associations of the gene signature and clinicopathological features, as well as prognostic factors were evaluated. RESULTS: Was observed high expression of 24 genes (AKT1, COL1A2, COL3A1, COL5A2, DSP, EGFR, FR11, GSK3B, ILK, ITGA5, ITGAV, ITGB1, JAG1, MAP1B, MMP2, MMP3, SNAI2, SPARC, SPP1, STAT3, TCF3, TGFbeta3, VPS13A, WNT5A) that are involved in the EMT process and act in the development of pulmonary neoplasia. Tumors at the advanced stage and with lymph node metastasis shown a significant higher expression of the genes COL1A2, COL5A2, DSP, EGFR, FR11, GSK3B, ILK, ITGAV, ITGB1, MAP1B, SNAI2 and VPS13A. Comparing the histological subtypes non-neuroendocrine (SqCC and AD) and neuroendocrine carcinomas (TC, AT, SCLC, LCNEC), was observed that the neuroendocrine variant shown a higher significant expression of the genes FR11, GSK3B, ILK, ITGB1, JAG1, MAP1B and VPS13A. Regarding survival, univariate analysis showed lower survival for patients in the advanced tumor stage, with lymph node metastasis and with neuroendocrine carcinoma histology that presenting overexpression for all 24 EMT genes, with the exception of the COL3A1 and SPP1 genes. Cox regression controlled by, histological types and gene expression of ILK, MMP2, SPP1, SPARC, COL1A2 and ITGB1 showed that patients with neuroendocrine carcinomas with higher expression of MMP2 and SPARC had a higher risk of death (OR 5.41 and 4.94, respectively), whereas patients with squamous cell carcinomas or adenocarcinomas with lower gene expression of ILK, SPP1, COL1A2, ITGB1 showed lower risk of death (OR -7.02, -0.4, -1.3 and -3.02). CONCLUSION: Was established a potential gene signature of 24 genes involved in the EMT process and capable of predicting the histological aggressiveness, invasion and metastasis in neuroendocrine and non-neuroendocrine variants of lung carcinomas