Staphylococcus aureus is defined by its ability to agglutinate during exposure to human blood plasma. Although agglutination has long correlated with disease severity, the function of agglutination during infection remains unclear. Increasing evidence suggests the mechanisms of agglutination are highly complex and poorly understood. The goal of this dissertation was to characterize the mechanisms required for S. aureus agglutination in vitro and determine how these factors contribute to pathogenesis. Chapter II focuses on the development of two in vitro agglutination assays, which allow the process to be measured quantitatively. Through these assays, we confirmed the major factors contributing to agglutination are human fibrinogen and the bacterial surface protein, ClfA. Productive interactions between these two factors are required for agglutination to proceed. Surprisingly, we also identified a novel regulatory system that significantly contributed to agglutination. Inactivation of the ArlRS two-component system (TCS) prevents agglutination in both of the developed assays. Studies in Chapter III focused on characterizing the mechanism by which ArlRS inhibits agglutination. To examine regulation, quantitative PCR identified the major output of the ArlRS system as the gene ebh. Surprisingly, transcript levels of known extracellular matrix (ECM) binding proteins did not change. Characterization of ebh indicated that overexpression in an arlRS mutant is the major factor responsible for preventing agglutination. Deletion of ebh restores the ability of the arlRS mutant to agglutinate in both gravity and flow-based agglutination assays. Fluorescence microscopy of clumps indicates wildtype cells bind and incorporate fluorescently labeled human fibrinogen (Fg) displaying co-localization with the clumps. Surprisingly, arlRS mutants also bound human Fg, but these interactions were not productive for clumping, suggesting successful agglutination is more complex than binding ECM proteins. These studies indicate that ArlRS regulates agglutination through a unique mechanism that depends on the surface protein Ebh. Studies in Chapter IV were performed to determine the role ArlRS played in pathogenesis. A rabbit model of infective endocarditis and sepsis was employed to assess ArlRS virulence because this model has been shown to require agglutination for disease progression. Mutants in arlRS displayed reduced virulence in the rabbit model of infective endocarditis, which correlated with the mutant's inability to form a vegetation of the heart valve. These studies provide further insight into the importance of S. aureus agglutination during infection and define a mechanism of regulation through a novel surface protein.

Submitted by Suelen Reis (suziy.ellen@gmail.com) on 2013-05-17T12:18:35Z No. of bitstreams: 2 Tese_Antonia dos Santos v2.pdf: 654873 bytes, checksum: b153dc0654d46438bc4ec3503b5170a0 (MD5) Tese_Antonia dos Santos v1.pdf: 1239837 bytes, checksum: a8be6cda82c020dc396eefb258d81f57 (MD5) / Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-05-23T18:54:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese_Antonia dos Santos v2.pdf: 654873 bytes, checksum: b153dc0654d46438bc4ec3503b5170a0 (MD5) Tese_Antonia dos Santos v1.pdf: 1239837 bytes, checksum: a8be6cda82c020dc396eefb258d81f57 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-23T18:54:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_Antonia dos Santos v2.pdf: 654873 bytes, checksum: b153dc0654d46438bc4ec3503b5170a0 (MD5) Tese_Antonia dos Santos v1.pdf: 1239837 bytes, checksum: a8be6cda82c020dc396eefb258d81f57 (MD5) Previous issue date: 2009 / Este estudo sobre os compostos sintagmáticos nominais com as estruturas VN (Verbo-Nome), NN (Nome-Nome), NA (Nome-Adjetivo), AN (Adjetivo-Nome) e NprepN (Nomepreposição- Nome) na língua portuguesa arcaica, fundamentado em um corpus representativo do ponto de vista da tipologia textual e das sincronias abrangidas (sécs. XIII-XVI), busca contribuir para uma descrição mais abrangente da composição de palavras nesse período da língua, ampliando, dessa forma, o leque de estudos históricos sobre os processos de formação de palavras. Aborda-se, ainda, de forma complementar, alguns lexemas aglutinados registrados nos textos, por tratar-se de antigas justaposições que já constituíam uma unidade semântica e pela importância do papel que essas formas representam no processo de mudança lingüística. No que tange ao tratamento teórico do tema, essas estruturas, em especial NA, AN e NprepN, costumam ser excluídas do âmbito da composição. Nesta tese, contudo, defende-se o seu estatuto legítimo de compostos com base em alguns trabalhos recentes sobre a composição, como o de Ribeiro (2006), e em algumas idéias extraídas do campo da fraseologia. Nesse sentido, adota-se uma perspectiva abrangente do fenômeno compositivo e relaciona-se a aparente realidade heterogênea dos produtos composicionais com a atuação de fatores de fixação e opacificação – sintática e semântica –, o que promove a intersecção entre compostos e outras unidades plurilexicais com caráter nominal, como colocações e expressões idiomáticas, motivando a discussão, neste trabalho, dos conceitos relacionados com esses termos. Antes da descrição e análise dos compostos do português arcaico, busca-se saber que tipo de estrutura – VN, NN, NA, AN e NprepN – está presente na língua latina. Afinal, além dos compostos morfológicos, a língua latina conhecia também os justapostos, estruturas que identificamos com os compostos sintagmáticos do português. A descrição e análise dos compostos observa a caracterização morfológica dos elementos que constituem o composto, a identificação do tipo de relação sintático-semântica que se desenvolve no interior do composto, a leitura sintático-semântica do composto enquanto produto e o seu grau de aproximação ou distanciamento em relação à área léxico-semântica dos constituintes, buscando-se, assim, sistematizar de modo mais coerente a composição sintagmática na língua portuguesa arcaica. / Salvador

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-08-05Bitstream added on 2014-06-13T20:35:31Z : No. of bitstreams: 1 lopes_bp_me_jabo.pdf: 2441029 bytes, checksum: 9d91faa58722dae99b55f32ecfbd0b52 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O Clostridium chauvoei é o agente causador do carbúnculo sintomático, doença que acomete bovinos e ovinos. É um dos principais problemas sanitários que ocorre nos rebanhos pecuários em todo o mundo. A vacinação dos animais jovens é a medida profilática indicada, visto que esta medida preventiva nos sistemas de produção é de extrema importância econômica e reconhecida pelos produtores, mesmo sendo de aplicação voluntária. Três grupos de bovinos, contendo 20 animais em cada grupo, foram vacinados com três vacinas comerciais contra o carbúnculo sintomático para a avaliação sorológica dos mesmos por meio do teste de aglutinação rápida em placa. Os animais foram vacinados no dia 0, e o reforço vacinal foi realizado 30 dias após a primeira dose. Após 21 dias do reforço, o sangue foi coletado da veia jugular, e o soro foi obtido a temperatura ambiente quando ocorreu a coagulação sanguínea e separação do soro. Foi comparada a resposta de indução de anticorpos nos grupos de animais reagentes a esse teste com antígenos obtidos de duas cepas, uma de referência (MT) do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) e outra cepa de campo. Os resultados demonstraram que a resposta dos animais imunizados frente à cepa de referência foi satisfatória, não existindo diferença entre as três vacinas testadas. No entanto, quando este mesmo teste foi realizado com antígenos produzidos com a cepa de campo identificada por PCR, verificou-se a ausência de anticorpos aglutinantes na maioria dos bovinos avaliados. Na análise estatística ficou comprovado que existem diferenças significativas nos resultados dos testes de aglutinação rápida em placa quando se utilizam cepas distintas de Clostridium chauvoei, provavelmente em decorrência de diferenças antigênicas existentes entre as cepas. / The Clostridium chauvoei is the agent which causes black leg, a disease that attacks the bovine and ovine. It is one of the main sanitary problems that occur with cattle-raising flocks in the world. The vaccination of young animals is the best prevention measure in production systems and is of extreme economic importance and is recognized by producers even if the application is voluntary. Three bovine groups, containing 20 animals each group, were vaccinated using three commercial vaccines against the black leg, for evaluation of bovine serological by tests of plate agglutination. The cattle were treated on day 0 and another dose was given on day 30. After 21 days, the blood was colleted of jugular vein and serum was obtained at 25°C, by blood coagulation. The comparison was made by detection of antibodies response between the animals that react to the test with antigens obtained from two strains which were used, one referred (MT) as Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) and another strain isolated from the field cases. The results determined that the response of the immunized animals faced by the referred strain was satisfactory with non-existing differences between the three tested vaccines. However, when the same test was conducted with antigens obtained from the field strain identified by PCR, it was verified the absence of agglutinating antibodies agglutinants in the majority of the bovines evaluated. In the statistics analysis were confirmed that significant differences were obtained in the agglutination plate test when different strains of Clostridium chauvoei were used, maybe because of the occurrence of antigenic difference, between the two strains tested.

Submitted by MARIA EDUARDA CHIARADIA FURQUIM null (mecfurquim@yahoo.com.br) on 2016-12-12T22:31:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Maria Eduarda Chiaradia Furquim 2016.pdf: 2147185 bytes, checksum: 9cbd94cd959a4435ddb99f33983dbb76 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-12-15T15:41:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 furquim_mec_me_jabo.pdf: 2147185 bytes, checksum: 9cbd94cd959a4435ddb99f33983dbb76 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T15:41:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 furquim_mec_me_jabo.pdf: 2147185 bytes, checksum: 9cbd94cd959a4435ddb99f33983dbb76 (MD5) Previous issue date: 2016-11-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Com o intuito avaliar a frequência de aglutinas anti-Leptospira dentre as amostras analisadas no Laboratório de Brucelose e Leptospirose da Unesp, Câmpus Jaboticabal, realizou- se uma investigação retrospectiva dos resultados de exames sorológicos para diagnóstico de leptospirose entre os anos de 2007 e 2015. Neste período foram recebidas 24.483 amostras bovinas, 1.855 amostras equinas, 819 amostras caninas, 532 amostras ovinas, 230 amostras caprinas e 123 amostras suínas. As amostras bovinas provinham de 21 estados brasileiros e a frequência de reagentes foi de 35,30% (IC 95%: 34,70% - 35,90%), sendo o sorogrupo Sejroe o mais relevante. Das amostras caninas, a maioria foi originaria do Estado de São Paulo e a frequência de amostras reagentes foi de 23,93% (IC 95%: 21,01% - 26,85%), sendo o sorogrupo Canicola o mais relevante. Nos equinos, a frequência de amostras reagentes encontrada foi de 46,95% (IC 95%: 44,68% - 49,23%), sendo o sorogrupo Icterohaemorrhagiae o mais importante nesta espécie. A frequência de reagentes encontrada nas amostras das espécies ovina, caprina e suína foi 7,32% (IC 95%: 5,12% - 9,55%), 1,30% (IC 95%: 0,0044% - 3,764%) e 6,03% (IC 95%: 1,70% - 10,37%), respectivamente, e o sorogrupo de maior ocorrência nesses animais foi Icterohaemorrhagiae. Tais resultados permitem confirmar o caráter endêmico da leptospirose em território brasileiro, bem como evidenciar a importância dos hospedeiros de manutenção do agente na disseminação da doença. / In order to evaluate the frequency of anti-Leptospira agglutinins among the samples analyzed in the Leptospirosis and Brucellosis Laboratory, Unesp, Jaboticabal Campus, a retrospective investigation of the results of serological tests for leptospirosis between the years 2007 and 2015 was performed. During this period, 24,483 bovine samples, 1,855 equine samples, 819 canine samples, 532 sheep samples, 230 goats samples and 123 swine samples were received. Bovine samples came from 21 Brazilian states and the frequency of reactors was 35.30% (95% CI: 34.70% - 35.90%) and serogroup Sejroe was the most relevant. Of canine samples, most were originally from the state of São Paulo and the frequency of reacting samples was 23.93% (95% CI: 21.01% - 26.85%), the serogroup Canicola was the most relevant. In horses, the frequency of reagent samples was found to be 46.95% (95% CI: 44.68% - 49.23%), the serogroup Icterohaemorrhagiae was the most important in this species. The frequency of reactors among of sheep, goats and swine samples was 7.32% (95% CI: 5.12% - 9.55%), 1.30% (95% CI: 0.0044% - 3.764%) and 6.03% (95% CI: 1.70% - 10.37%), respectively, and the serogroup most frequent in these animals was Icterohaemorrhagiae. These results confirm the endemicity of leptospirosis in Brazil, as well as highlight the importance of the agent maintenance hosts in the dissemination of the disease.

Submitted by RAFAEL MASSA null (rmassavet@yahoo.com.br) on 2017-01-25T17:36:12Z No. of bitstreams: 1 TESE versão final.pdf: 300203 bytes, checksum: 56039d51bf4b813ec825d1d9f0da7f3e (MD5) / Rejected by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido não contém o certificado de aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-01-27T13:23:12Z (GMT) / Submitted by RAFAEL MASSA null (rmassavet@yahoo.com.br) on 2017-01-27T16:30:18Z No. of bitstreams: 1 Tese_Rafael_Massa.pdf: 774602 bytes, checksum: 777b45d4c1d3d2fb5b52fd11f14af8ad (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-01-30T16:06:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 massa_r_dr_jabo.pdf: 774602 bytes, checksum: 777b45d4c1d3d2fb5b52fd11f14af8ad (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-30T16:06:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 massa_r_dr_jabo.pdf: 774602 bytes, checksum: 777b45d4c1d3d2fb5b52fd11f14af8ad (MD5) Previous issue date: 2017-01-17 / Com o objetivo de analisar as diferentes formas de interpretação dos resultados em pesquisas epidemiológicas com Leptospira spp., em quatro espécies de hospedeiros, as concordâncias entre os resultados da soroaglutinação microscópica (SAM) contra 24 sorovariedades foram testadas por meio do coeficiente Kappa. Os resultados obtidos com o cálculo clássico da soroprevalência, o método da sorovariedade mais provável (SMP) com 24 e oito antígenos e três variações do SMP foram comparados por meio da intersecção entre os intervalos de confiança de 95%. As concordâncias entre sorovariedades nos resultados da SAM indicam que a maioria das coaglutinações ocorre dentro do esperado pelo acaso e que não é possível atribuí-las apenas a reações cruzadas. O SMP resultou em soroprevalências menores que as obtidas pelo método clássico. Quanto mais antígenos são utilizados na SAM, menores serão a soroprevalências para cada sorovariedade, demonstrando que a bateria de antígenos interfere nos resultados. As diferentes formas de calcular o resultado do SMP mostraram ser coeficientes diferentes, que podem confundir os leitores, caso não sejam bem definidos nos trabalhos. Conclui-se que o método clássico de cálculo da soroprevalência seria o mais indicado, respeitando-se as limitações da SAM na conclusão das pesquisas. / Aiming to analyze the different ways of interpreting the results of epidemiological research with Leptospira spp. in four host species, the agreement between the results in the microscopic agglutination test (MAT) against 24 serovars was tested by the Kappa coefficient. The results with the classic seroprevalence method, the most likely serovar method (SMP) with 24 and eight antigens and three variations of the SMP were compared by the intersection of the 95% confidence intervals. Agreements between serovars in the results of MAT indicate that most co-agglutinations occur randonly, and cross-reactions can not assign as the only cause of them. The SMP resulted in lower seroprevalences than those obtained by the classical method. The more antigens are used in MAT, lower the seroprevalences for each serovar, demonstrating that the antigen battery interferes with the results. The different ways of calculating the result of the SMP proved to be different coefficients, which may confuse readers, if they are not well defined in the research. It was concluded that the classic seroprevalence would be the most appropriate method of calculation, respecting the limitations of the MAT in the research's conclusions.

Orientador: Luis Antonio Mathias / Coorientador: Raphaella Barbosa Meireles Bartoli / Banca: Anna Monteiro Correia Lima / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Resumo: A leptospirose é uma zoonose que causa grandes prejuízos para a saúde pública e para a saúde animal. O objetivo deste trabalho foi estudar a ocorrência de anticorpos contra 20 sorogrupos de Leptospira spp. em diferentes espécies de animais de vida livre do Pantanal do Mato Grosso do Sul. Foram utilizadas 224 amostras de soro de animais de vida livre das sub-regiões de Nhecolândia e Paiaguás, no Mato Grosso do Sul, provenientes de um banco de soros da Embrapa Pantanal. As amostras foram submetidas ao teste de soroaglutinação microscópica (SAM), utilizando diluição inicial de 1/50 para os animais selvagens e 1/100 para os suínos ferais. As frequências de reagentes de acordo com o sexo e de acordo com a faixa etária foram comparadas por meio do teste exato de Fisher e os cálculos foram realizados com o auxílio do programa R. Dos 35 cachorros-do-mato (Cerdocyon thous), 37,14% foram considerados reagentes e os sorogrupos mais frequentes foram Pomona, Pyrogenes, Grippotyphosa e Canicola. Entre os quatis (Nasua nasua), 22,22% apresentaram reação na SAM, e quanto aos sorogrupos, Pomona foi o mais frequente. Dos 95 veados-campeiros (Ozotoceros bezoarticus) avaliados, 31,58% foram reagentes, sendo os sorogrupos mais frequentes o Pomona e o Autumnalis. Para os suínos em estado feral (Sus scrofa), 36,84% foram sororreagentes e os sorogrupos mais encontrados foram Pomona e Icterohaemorrhagiae. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre as frequências de reagen... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leptospirosis is a zoonotic disease that causes great damage to public health and animal health. The objective of this investigation was to study the occurrence of antibodies against 20 Leptospira spp. serogroups in different species of free-ranging animals of Pantanal, Mato Grosso do Sul, Brazil. Serum samples of 224 animals from the subregions of Nhecolândia and Paiaguás in Mato Grosso do Sul were collected and tested through the microscopic agglutination test (MAT), at an initial dilution of 1/50 for wild animals and 1/100 for feral swine. The frequencies of reagents according to sex and according to age group were compared using Fisher's exact test, and the calculations were performed with the software R. Of the 35 crabeating foxes, 37.14% reacted to Leptospira, and the most frequent serogroups were Pomona, Pyrogenes and Canicola. For coatis, of the 18 samples examined, only four 22.22% showed reaction in MAT, and Pomona was the most frequent serogroup. Of the 95 deer evaluated, 31.58% were reactors, and the most common serogroups were Pomona and Autumnalis. For feral pigs, of the 76 samples analyzed, 36.84% were reactors and the most frequent serogroups were Pomona and Icterohaemorrhagiae. There was no significative difference between the frequency of male and female reactors, and among the age groups in any of the animal species studied. This study found high frequencies of wild animals and feral swine reactors. For all species, the highest proportion of reactions was o... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luís Antonio Mathias / Resumo: Com o intuito avaliar a frequência de aglutinas anti-Leptospira dentre as amostras analisadas no Laboratório de Brucelose e Leptospirose da Unesp, Câmpus Jaboticabal, realizou- se uma investigação retrospectiva dos resultados de exames sorológicos para diagnóstico de leptospirose entre os anos de 2007 e 2015. Neste período foram recebidas 24.483 amostras bovinas, 1.855 amostras equinas, 819 amostras caninas, 532 amostras ovinas, 230 amostras caprinas e 123 amostras suínas. As amostras bovinas provinham de 21 estados brasileiros e a frequência de reagentes foi de 35,30% (IC 95%: 34,70% - 35,90%), sendo o sorogrupo Sejroe o mais relevante. Das amostras caninas, a maioria foi originaria do Estado de São Paulo e a frequência de amostras reagentes foi de 23,93% (IC 95%: 21,01% - 26,85%), sendo o sorogrupo Canicola o mais relevante. Nos equinos, a frequência de amostras reagentes encontrada foi de 46,95% (IC 95%: 44,68% - 49,23%), sendo o sorogrupo Icterohaemorrhagiae o mais importante nesta espécie. A frequência de reagentes encontrada nas amostras das espécies ovina, caprina e suína foi 7,32% (IC 95%: 5,12% - 9,55%), 1,30% (IC 95%: 0,0044% - 3,764%) e 6,03% (IC 95%: 1,70% - 10,37%), respectivamente, e o sorogrupo de maior ocorrência nesses animais foi Icterohaemorrhagiae. Tais resultados permitem confirmar o caráter endêmico da leptospirose em território brasileiro, bem como evidenciar a importância dos hospedeiros de manutenção do agente na disseminação da doença. / Mestre

A reciclagem de resíduos sólidos tem se tornado cada vez mais relevante devido a alguns fatores como os impactos ambientais ocasionados com o seu descarte inadequado, ao rigor crescente de legislação específica e ao custo elevado para o gerenciamento apropriado destes resíduos. Na área de materiais poliméricos, os resíduos poliméricos podem ser de origem pósconsumo ou pós-industrial. Alguns rejeitos industriais poliméricos possuem características estruturais ou químicas que impossibilitam o seu reaproveitamento direto no processo que o gerou, como é o caso filmes multicamadas de polietileno de baixa densidade (PEBD) com poliamida 6 (PA6), usados para a produção de embalagens. O presente trabalho teve como objetivo central o reaproveitamento de rejeitos de filmes multicamadas de PEBD com PA6 na forma de blendas recicladas destes polímeros, fazendo uso de agente compatibilizante e variação na composição das blendas com a incorporação de PA6 virgem, a fim de produzir materiais com propriedades adequadas e custo compatível para a aplicação comercial. O desenvolvimento experimental foi dividido em três etapas que consistiram na avaliação do teor mais adequado de agente compatibilizante de fases da blenda (etapa 1), na determinação do comportamento das propriedades das blendas não compatibilizadas em diferentes composições de rejeito do filme multicamada e PA6 virgem (etapa 2) e na associação do uso de compatibilizante com variação das composições das blendas (etapa 3). A partir da execução experimental das atividades das etapas 1 e 2 do trabalho foi possível determinar que o teor de 2,5% do agente compatibilizante polietileno grafitizado com anidrido maleico (PEg- AM) é o mais adequado para compatibilizar as blendas poliméricas e que a maioria das suas propriedades das blendas apresentam um comportamento próximo ao aditivo linear, que leva em consideração somente as propriedades iniciais dos componentes poliméricos PEBD e PA6 isolados. Os diversos materiais gerados no desenvolvimento desta pesquisa apresentam desempenho de propriedades e custo de produção variáveis em função do teor de PA6 nas blendas, que podem viabilizar o uso deste material reciclado em aplicações comerciais específicas. / Recycling of solid waste has been an important issue due to some factors such as environmental damage caused by inappropriate discards, increasing rigor of specific legislation and high cost to the appropriate management of these waste. Polymeric waste can be originated from post-consume or post-industrial sources. Some polymeric waste have chemical or structural characteristics that difficult their direct reuse in the same productive process such as multilayer film of low density polyethylene (LDPE) and polyamide 6 (PA6), which are used for packing. The aim of this work has been the study the mechanical recycling of multilayer films of PEBD and PA6 as PEBD/PA6 blends with adequate properties and compatible cost for commercial applications. The experimental development has been performed in 3 steps, which correspond to evaluation of more adequate content of compatibilizer agent for interface of blends (step 1), determination of behavior of the properties of blends without compatibilizer agent on different compositions of waste form multilayer films (step 2) and production of blends with compatibilizer agent graphitized polyethylene with maleic anhydride (PE-g-MA) (step 3). Has been verified that the content of 2.5% of PE-g-MA is more adequate to be used in the compatibilization of recycled PEBD/PA blends and that the performance of the blends dependents of the content of PA6 in the material. The recycled materials have potential for commercial applications.

Les particules superparamagnétiques constituent un outil puissant pour de nombreuses applications biomédicales, ce potentiel est souvent restreint à cause de leur stabilité limitée dans les milieux biologiques ou du piégeage orientationnel sous champ magnétique. Dans cette thèse, ces problèmes ont été résolus en créant une nouvelle génération de particules à interfaces liquides fonctionnalisées. Ces particules sont formulées en utilisant des émulsions de ferrofluides qui incorporent des phospholipides fonctionnalisés, notamment biotinylés pour permettre la capture de streptavidine. La taille est contrôlée grâce à la microfluidique, permettant la production d'émulsions uniformes. L'utilisation de streptavidine fluorescente révèle que la capture est influencée par les propriétés du cosurfactant et du ligand ainsi que par le nombre de ligands disponibles. La mobilité des ligands est démontrée par l'adhésion observée entre les gouttelettes liées par de la streptavidine et le mouvement des billes couvertes de streptavidine capturées à l'interface. Enfin, le potentiel de ces particules est exploré en créant un dosage pour le diagnostic. La présence d'analytes en solution est indiquée par l’agglutination. Dans ce travail l'agglutination est provoquée par la complexation entre des émulsions biotinylés et  la streptavidine (ou des billes couvertes de streptavidine). L’utilisation de gouttelettes de taille calibrée permet de compter avec précision des agrégats spécifiques par cytométrie de flux, la limite de détection étant dans la gamme femtomolaire. Cela surpasse la gamme picomolaire atteint généralement par des billes solides. / Colloidal superparamagnetic particles are a powerful tool in biotechnology, yet their applications are often hindered by limited stability in biological media or by orientation trapping under applied magnetic fields. In this thesis, these problems are addressed by developing novel magnetic particles bearing ligands at a liquid interface. Magnetic particle analogues are formulated using ferrofluidic emulsions, which incorporate functionalised phospholipids. Droplet size is controlled using microfluidic membrane emulsification to produce highly uniform populations. Ligands are modelled using biotinylated lipids, permitting the capture of streptavidin at the droplet interface. Fluorescently labelled proteins reveal that capture efficiency is influenced by the cosurfactant interfacial activity and the polymer spacer length of the ligand. Overall, capture saturation is found to be related to the number of ligands available at the interface. Ligand mobility is demonstrated by the formation of adhesion plaques between streptavidin cross-linked droplets and the motion of streptavidin coated beads caught at the interface. Finally, an application is explored by creating a new immunoassay. Polyvalent proteins or beads crosslink ligand functionalised droplets forming aggregates. Using size calibrated droplets specific aggregates can be accurately counted using flow cytometry and the limit of detection is found to be in the femtomolar range, this surpasses the picomolar range typically achieved using solid beads.

Submitted by Adriana Martinez (amartinez@unoeste.br) on 2017-08-31T19:39:30Z No. of bitstreams: 1 Paula Marioto.pdf: 1937783 bytes, checksum: c8d05805d5d9ba92ed3e0712c1e36797 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-31T19:39:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula Marioto.pdf: 1937783 bytes, checksum: c8d05805d5d9ba92ed3e0712c1e36797 (MD5) Previous issue date: 2017-04-26 / The objective of this study was to standardize a quantitative technique to evaluate the in vitro capacity of agglutination of different mannanoligosaccharides (MOS) to the strain of Escherichia coli isolated from cases of infantile diarrhea in children from 0 to 5 years of age. The research for the expression of fimbria Type 1 present in the isolates was performed by the microhemoagglutination test. For the oligosaccharide agglutination assays three MOS markers were extracted from S. cerevisae, groups 1, 2 and 3, filtered through a microfilter, later diluted for surface sowing in chromogenic Agar E. coli. For microscopic evaluation of binder capacity of the MOS were subjected to slide agglutination tests. In order to estimate the total bacterial count (CBT), the counts of the three-plate set were calculated. Assumptions of homogeneity of variances and normality of data were validated, respectively, by the Levene and Shapiro-Wilk test. Homozygous variables were compared by analysis of variance in one way (ANOVA one-way), with contrasts by the Tukey method. Heterocedastic variables were compared with one-way ANOVA with application of the Welche contrast contrasts by the Games-Howell method. Correlations between CBTs, Titres hemagglutinants, diameters and areas of the globules were evaluated by the Pearson correlation test. All analyzes were conducted in software R, considering probability of error type 1 = 5% Of the 30 strains tested, 25 (83.3%) expressed hemagglutinating capacity with titers ranging from 1: 4 to 1: 16. The results suggest that the MOS showed effective action on the agglutination of the bacteria, since the estimates of CBTs of the strains treated with MOS were inferior the counts of the pure sample. The degree of agglutination may vary according to the composition of the MOS, since product 1 showed higher CBTs than the others, indicating that the agglutinated beads were not able to retain bacteria in the pores of the filters similarly to products 2 and 3. It was observed significant correlation between mannose-sensitive haemagglutination and MOS agglutination for products 1 and 2, suggesting that the intensity of bacterial agglutination may be related to the expression of type 1 fimbriae. It is concluded that the filtration and culture technique can be used to evaluate different degrees of agglutination of MOS products and the amount of bacteria retained in the filters appears to be more related to the expression of mano-sensitive type 1 fimbriae than to the sizes of the globules produced. / O objetivo deste estudo foi padronizar uma técnica quantitativa para avaliar a capacidade in vitro de aglutinação de diferentes mananoligossacarídeos (MOS) à cepa de Escherichia coli isoladas de casos de diarreia infantil, de crianças de 0 a 5 anos de vida. A pesquisa para a expressão da fímbria tipo 1 presente nos isolados foi realizada pelo teste de microhemoaglutinação. Para realização dos ensaios de aglutinação de oligossacarídeos utilizou-se três marcas comerciais de MOS, extraídos de S. cerevisae, grupos 1, 2 e 3, filtrados através de um microfiltro, posteriormente diluídos para semeadura superficial em Ágar cromogênico E. coli. Para avaliação microscópica da capacidade aglutinante do MOS foram submetidas a testes de aglutinação em lâmina.Para estimar a contagem bacteriana total (CBT), calculou-se a média das contagens do conjunto de três placas. Pressupostos de homogeneidade de variâncias e normalidade de dados foram validados, respectivamente, pelo teste de Levene e Shapiro-Wilk. Variáveis homocedásticas foram comparadas por análise de variância em uma via (ANOVA one-way), com contrastes pelo método de Tukey. Variáveis heterocedásticas foram comparadas com ANOVA one-way com aplicação da correção de Welche contrastes pelo método de Games-Howell. As correlações entre CBTs, Títulos hemaglutinantes, diâmetros e áreas dos glóbulos foram avaliados pelo teste de correlação de Pearson. Todas as análises foram conduzidas no software R, considerando-se probabilidade de erro tipo 1= 5%. Das 30 cepas testadas, 25 (83,3%) expressaram capacidade hemaglutinante com títulos variando entre 1:4 e 1:16. Os resultados sugerem que o MOS apresentou ação efetiva na aglutinação das bactérias, visto que as estimativas de CBTs das cepas tratadas com MOS foram inferiores as contagens da amostra pura. O grau de aglutinação pode variar segundo a composição do MOS, visto que o produto 1 apresentou CBTs superiores aos demais, denotando que os glóbulos aglutinados não foram capazes de reter bactérias nos poros dos filtros de forma similar aos produtos 2 e 3.Observou-se correlação significativa e negativa entre a hemaglutinação sensível à manose e aglutinação de MOS para os produtos 1 e 2, o que sugere que intensidade da aglutinação por bactérias pode estar relacionada a expressão de fímbrias do tipo 1. Conclui-se que a técnica de filtragem e cultura pode ser utilizada para avaliar diferentes graus de aglutinação de produtos a base de MOS e a quantidade de bactérias retidas nos filtros parece estar relacionada mais com a expressão de fímbrias tipo 1 mano-sensíveis do que com os tamanhos dos glóbulos produzidos.