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Caracterização molecular e expressão heteróloga do alérgeno fosfolipase A1 do veneno de Polybia paulista (Hymenoptera; Vespidae)Pereira, Franco Dani Campos [UNESP] 23 February 2012 (has links) (PDF)
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pereira_fdc_me_rcla.pdf: 1421119 bytes, checksum: 8743dede24fc8cac2d9cc226ac3e63d9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Polybia paulista é uma vespa pertencente à ordem Hymenoptera muito comum no Sudeste do Brasil, especialmente no Estado de São Paulo. Os venenos destes insetos são constituídos por aminas, peptídeos, proteínas de alta massa molecular, sendo estas na sua maioria, enzimas. As fosfolipases são as enzimas de maior abundância entre os alérgenos de veneno dos Hymenoptera sociais, constituindo-se também no alérgeno de maior importância. A sequência completa de 985 pb do cDNA da fosfolipase A1 do veneno da vespa P. paulista foi determinada a partir da clonagem. A proteína deduzida por tradução apresentou 302 resíduos de aminoácidos, PI e MW teóricos de 9,1 e 33 kDa respectivamente. Por meio de ferramentas de bioinformática foi possível identificar o sítio ativo entre os resíduos 131 a 140 (10 aminoácidos) e inferir que se trata de uma proteína da super família das esterases lipases. O cDNA completo foi clonado em vetor de expressão pET-28a em cepas de Escherichia coli BL21–DE3. A PLA1-Rec com cauda de 6x Histidinas no N- terminal foi expressa na forma insolúvel em corpúsculos de inclusão por meio da indução com 1mM de IPTG à 20°C por 6 horas. A purificação foi realizada por cromatografia de afinidade em resina agarose-Ni+2 sob condições desnaturantes na presença de 8 M de uréia e a proteína eluida com tampão gradiente decrescente de pH. As análises de Western blotting revelaram a especificidade dos anticorpos policlonais produzidos em camundongos contra a fração eletroforética de PLA1 natural quando testados com o veneno bruto da própria vespa e com a PLA1- Rec de P. paulista. Além disto, estes anticorpos apresentaram imunoreatividade cruzada com o veneno bruto de outras vespas sociais testadas neste trabalho. Outras proteínas detectadas na membrana de nitrocelulose evidenciaram o reconhecimento dos... / Polybia paulista is a wasp that belongs to the Hymenoptera order very common in southeastern Brazil, especially in São Paulo. The venoms of these insects are composed of amines, peptides, high weight molecular proteins, which are mainly enzymes. The phospholipase enzymes are the most abundant among the allergens of social Hymenoptera venom, and they are also the most important allergen. The complete sequence of 985 bp of phospholipase A1 cDNA from P. paulista venom was determined by cloning. The protein inferred by translation had 302 amino acid residues, PI and theoretical MW of 9.1 and 33 kDa respectively. By means of bioinformatics tools, it was possible to identify the active site between residues 131 to 140 (10 amino acids) and infer that it is a protein that belongs to esterases lipases super family. The complete cDNA was cloned into pET-28a expression vector in strains of BL21-DE3 Escherichia coli. The Rec-PLA1 with 6x histidine tail at the N-terminal was expressed in insoluble form in inclusion corpuscles by induction with 1mM IPTG at 20 ° C for 6 hours. The purification was performed by affinity chromatography on agarose-Ni+2 resin under denaturing conditions in the presence of 8 M urea and the protein eluted with decreasing pH gradient buffer. The Western blotting analyses revealed the specificity of polyclonal antibodies produced in mice against the electrophoretic fraction of natural PLA1 when tested with the crude venom of the wasp itself and with the PLA1- Rec of P. paulista. Besides these antibodies presented cross-immunoreactivity with the crude venom of other social wasps tested in this work. Other proteins detected in the nitrocellulose membrane showed the recognition of antibodies to other isoforms of phospholipase already described in the literature. Obtaining the recombinant form of... (Complete abstract click electronic access below)
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Determinação da seqüência de cDNA da enzima hialuronidase do veneno de Polybia paulista (Hymenoptera : vespidae)Silva, Giselly Pereira da [UNESP] 19 December 2007 (has links) (PDF)
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silva_gp_dr_rcla.pdf: 1260750 bytes, checksum: f19ff28f2ada22b250d02543a6ad96ca (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Hialuronidases pertencem a um grupo de enzimas hidrolíticas, as quais degradam o ácido hialurônico, um polissacarídeo de alta massa molecular, encontrado em todos os tecidos de mamíferos e fluídos corpóreos. O ácido hialurônico é um componente da matriz extracelular de vertebrados, que preenche os espaços entre células e fibras, e age como lubrificante, bem como uma barreira à penetração de partículas estranhas. Os níveis de ácido hialurônico são marcadamente aumentados durante a embriogênese, inflamação, transformação maligna e em qualquer lugar que seja requerido a rápida substituição de tecido e remodelamento. Os defeitos no metabolismo do ácido hialurônico parecem relacionar-se a várias doenças sugerindo que o seu nível seja altamente controlado. No entanto, surpreendentemente, o estudo de enzimas envolvidas na síntese e degradação do ácido hialurônico tem sido negligenciado. Em venenos de insetos Hymenoptera (abelhas, formigas e vespas), a hialuronidase é uma enzima comum e um dos mais importantes alérgenos, sendo também, o único em potencial, que pode promover reatividade-cruzada entre os venenos de abelhas e vespas, como também entre os de diferentes gêneros e espécies de vespídeos, levando à produção de reações alérgicas mediadas por IgE, umas das maiores causas de anafilaxia em pacientes alérgicos ao veneno. Neste trabalho, através da metodologia de RACE-PCR, foi determinada e caracterizada, a seqüência completa de cDNA do alérgeno - hialuronidase - do veneno da vespa urbana Polybia paulista, a qual, é bastante agressiva e abundante no Estado de São Paulo, sendo responsável por muitos acidentes de importância médica, devido ao seu veneno que, assim como em outros vespídeos, apresenta três conhecidos alérgenos - hialuronidase, fosfolipase e antígeno 5. O cDNA foi obtido a partir do mRNA extraído dos abdomens dos insetos e amplificado por iniciadores gene-específicos.... / Hyaluronidases are a group of hydrolytic enzymes which degrade Hyaluronic acid (HA), the most abundant glycocaminoglycan of vertebrate extracellular space. HA is a high molecular weight polysaccharide found in virtually all mammalian tissues and body fluids, where it fills the space between cells and fibers and acts as a lubrificant as well as a barrier to penetration by foreign particles. Hyaluronic acid levels are markedly increased during the embryogenesis, inflammation, malignant transformation and whenever fast tissue turnover and remodeling is required. Defects in HA metabolism appear to be related to various diseases suggesting that the level of HA must be tightly controlled. Surprisingly, the study of the enzymes involved in HA synthesis and degradation has been greatly neglected. In venoms of Hymenoptera insects (bees, ants and wasps), the hyaluronidase is a common enzyme and one of the most important allergen, being potentially the unique that are able to promote immunological cross-reactivity between venoms from bees and wasps, and also among vespid venoms from different genus and species, producing allergic reactions IgE-mediated, one of the main causes of anaphylaxis in venom-allergic patients. In this work, by the RACE-PCR methodology, the hyaluronidase cDNA complete sequence from the urban wasp Polybia paulista was determined and characterized. This wasp is very aggressive and abundant in the São Paulo state, being responsible for many accidents of medical importance due its venom, which contains, like other vespids, three well known allergens- hyaluronidase, phospholipase and antigen 5. The cDNA was obtained from mRNA extracted from insect abdomens and amplified by gene-specific primers. At first, two consecutive sequences of about 800 and 600 bp were obtained, purified, cloned and sequenced. After, the hyaluronidase cDNA complete sequence of 991pb was obtained, purified and directly sequenced The resulting data were analyzed .
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Implementación y validación de los procedimientos de aseo de una línea de cereales y medición de residuos alergénicos en las líneas de producciónPlatero Chang, Claudia Alejandra January 2009 (has links)
Memoria para optar al título de Ingeniero en Alimentos / No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo / Planta de Cereales CPW (Cereal Partner World Wide) - Maipú, se encuentra en vías de certificación según la Norma ISO 22.000. Dentro de los Pre-requisitos para cumplir con esta Norma se encuentra Procedimientos y Planes de Limpieza y Sanitización, por lo cual se requiere validar los procedimientos de aseos de los equipos de la planta desde el punto de vista microbiológico y de residuos alergénicos.
La limpieza de los equipos de la planta comienza con el término de la fabricación de un producto. Estos aseos se realizan en base a un procedimiento, el cual señala los pasos a seguir durante la limpieza, los instrumentos involucrados en el aseo, las responsabilidades del operador del equipo, higiene personal, equipo de protección personal y Check List respectivos de cada sector, entre otros.
Para confeccionar estos procedimientos se llevaron a cabo una serie de pasos. Primeramente se revisó la documentación existente en la planta tanto de CPW como Nestlé. Luego se estudiaron, analizaron y elaboraron nuevos procedimientos en base a toda la información recopilada. En algunos lugares, donde no existían procedimientos de aseo, se confeccionó un procedimiento mediante la observación in situ de la manera en que los operadores realizaban el aseo, como también en base a la información recopilada para los procedimientos actualizados.
Una vez que se elaboraron los procedimientos de aseo, estos fueron enseñados a los operadores, con el fin de capacitar al personal y explicar las razones por las cuales se debe realizar un correcto aseo y sanitización de los equipos. Además se enfatizó sobre el daño que ésto provoca en el consumidor si no se realiza una buena limpieza.
Posteriormente se comprobó la efectividad de los aseos mediante la toma de muestras microbiológicas en las superficies de los equipos, teniendo como referencia el recuento de enterobacterias como indicador de limpieza, según normativas Nestlé.
Por otra parte los productos que se fabrican en esta planta contienen ingredientes alergénicos como: gluten, caseína y almendras, por lo que se midió la cantidad de éstos presente en los ingredientes secos del producto, que provienen del molido de los productos que han sobrado de las fabricaciones anteriores. Este molido se ejecuta en el molino, por lo cual se debe realizar una buena limpieza para que el siguiente producto que se va a moler no se contamine con trazas de alergenos que hayan quedado en el molino. También se toma muestra al producto terminado. Ambas muestras, tanto el molido de cereal y producto terminado, son enviadas al laboratorio para realizar análisis para alergenos.
Finalmente, la elaboración de los nuevos procedimientos y capacitaciones a los operadores permitió validar la gran mayoría de los procedimientos de aseo de la planta como también se logró mantener la cantidad de alergenos presente en los productos, dentro de los límites máximos permitidos, gracias a la buenas limpieza de los equipos.
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Análise imunológica comparada da eficiência e especificidade da hialuronidase recombinante de Polybia paulista (Hymenoptera, Vespidae) expressa em bactéria e leveduraJacomini, Débora Laís Justo [UNESP] 03 May 2013 (has links) (PDF)
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jacomini_dlj_dr_rcla_parcial.pdf: 158359 bytes, checksum: 5b3ccdcc2d04ce3c969f5033ea58d88b (MD5) Bitstreams deleted on 2015-05-28T14:25:07Z: jacomini_dlj_dr_rcla_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-05-28T14:26:12Z : No. of bitstreams: 1
000713709.pdf: 1594949 bytes, checksum: 3eda36f23e8872cc034c5b89501ce98a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A vespa social Polybia paulista tem sido muito estudada nos campos da bioquímica, proteômica e imunologia pelas suas características de habitat, composição de seu veneno e pelas conseqüencias dos acidentes decorrentes de suas ferroadas. O cDNA de hialuronidase (GI: 302201582), um dos principais alérgenos desse veneno, foi clonado em vetores de expressão - pET-28a e pPICZA - em bactéria Escherichia coli DE3 (BL21) e em levedura Pichia pastoris, respectivamente. A proteína Hyal recombinante (Pp-Hyal-rec) de bactéria foi expressa em corpúsculos de inclusão, enquanto que a de levedura na forma solúvel. Ambas foram purificadas por cromatografia de afinidade em resina Ni2+ (Ni-NTA-Agarose). A proteína nativa de Hyal (Pp-Hyal-nat) também foi obtida e purificada até a homogeneidade por meio de cromatografia de troca catiônica em coluna Hiprep FF CM, acoplado a um sistema de Akta FPLC, e as análises realizadas por espectrometria de massa em MALDI ToF/ToF-MS. Anticorpos policlonais foram produzidos em camundongos BALB/c contra a Pp-Hyal-nat e a Pp-Hyal-rec de bactéria, demonstrando alta especificidade nos testes de imunoblotting realizados. Estes alérgenos foram avaliados quanto ao reconhecimento de imunoglobulina E (IgE) Pp-Hyal-específico no soro de pacientes sabidamente alérgicos ao veneno desta vespa. Os soros imunes foram capazes de reconhecer especificamente, em maior intensidade as bandas correspondentes à proteína Pp-Hyal-rec de bactéria (43 kDa) e a Pp-Hyal-rec de levedura (37 kDa) em relação ao alérgeno Pp-Hyal-nat (39 kDa). No extrato de veneno bruto de P. paulista, os soros reconheceram outras proteínas provavelmente correspondentes aos demais alérgenos do veneno, tais como Fosfolipase (37 kDa), Antígeno 5 (25 kDa), e proteases. Os dados aqui obtidos com ambos... / The social wasp Polybia paulista has been well studied in fields of biochemistry, proteomics and immunology due to its habitat characteristics, venom composition and the consequences of accidents arising from their stings. The hyaluronidase cDNA (GI: 302201582), one of the major venom allergens, was cloned into expression vectors - pET-28a and pPICZA - in Escherichia coli DE3 (BL21) and yeast Pichia pastoris, respectively. The recombinant protein Hyal (Pp-Hyal-rec) of bacteria was expressed in inclusion corpuscles, whereas the yeast in soluble form. Both were purified by affinity chromatography on Ni2+ (Ni-NTA-Agarose) resin. The native protein Hyal (Pp-Hyal-nat) was also obtained and purified to homogeneity by cation exchange chromatography on Hiprep CM FF column, to an Akta FPLC coupled system, and the analysis performed by mass spectrometry MALDI ToF / ToF-MS. Polyclonal antibodies were produced in BALB/c mice against Pp-Hyal-nat and Pp-Hyal-rec from bacteria, demonstrating an high specificity in the immunoblotting tests performed. These allergens were evaluated for recognition of immunoglobulin E (IgE) Pp-Hyal-specific in serum from patients known to be allergic to the venom of this wasp. The immune sera were able to recognize specifically in a higher intensity the bands corresponding to protein Pp-Hyal-rec of bacteria (43 kDa) and Pp-Hyal-rec of yeast (37 kDa) in relation to the allergen Pp-Hyal-nat (39 kDa). In the P. paulista crude venom extract, all sera recognized other proteins probably corresponding to other venom allergens, such as phospholipase (37 kD), antigen 5 (25 kDa), and protease. The data obtained here with both recombinant allergens strongly suggest the possibility of using... (Complete abstract click electronic access below)
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Caracterização do antígeno-5, alérgeno do veneno da vespa social Polybia paulista com uma abordagem proteômicaPinto, José Roberto Aparecido dos Santos [UNESP] 03 March 2011 (has links) (PDF)
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pinto_jras_me_rcla.pdf: 1057969 bytes, checksum: 2e29026d533c6190983ed253a062779d (MD5) / Os venenos dos insetos da ordem Hymenoptera contêm uma variedade de proteínas alergênicas. As ferroadas desses insetos podem induzir reações alérgicas e ocasionalmente, anafilaxias fatais. Há um crescente interesse nos componentes químicos dos venenos desses insetos, sobretudo no campo da alergia e imunologia clínica. As principais reações desses venenos são as reações inflamatórias e/ou imunológicas em suas vítimas, podendo ocorrer alguns efeitos sistêmicos. Dentre os Hymenoptera sociais, os venenos de abelhas e vespas têm sido extensivamente estudados e muitos de seus componentes moleculares já foram isolados e identificados. Fosfolipase, hialuronidase, antígeno-5 e serinoprotease são proteínas antigênicas de elevada massa molecular que, quando injetadas durante o ato de ferroar, iniciam uma resposta imune peculiar, sensibilizando alguns indivíduos. Porém, poucos estudos têm sido realizados para a identificação e o mapeamento dos epítopos desses alérgenos. O conhecimento sobre a interação molecular dos principais alérgenos destes venenos certamente deverá contribuir para o aperfeiçoamento dos diagnósticos de alergia, bem como para o desenvolvimento de tratamentos mais seletivos de reações alérgicas mediadas por IgE. No presente estudo identificamos e mapeamos os epítopos lineares de células-B do antígeno-5 do veneno da vespa social Polybia paulista. O antígeno-5 é conhecido como um dos principais alérgenos do veneno de Hymenoptera com massa molecular em torno de 23 kDa e função biológica desconhecida, porém muitos estudos demonstram a sua alergenicidade. Tendo conhecimento da sequência primária do antígeno-5, a identificação e o mapeamento dos epítopos foram realizados através da síntese múltipla de peptídeos, utilizando as técnicas do SPOT-Synthesis, imunodetecção e método indireto do ELISA com soro de pacientes sensíveis... / The venom insects of Hymenoptera order contain a variety of allergenic proteins. The stings of these insects can induce allergic reactions and occasionally fatal anaphylaxis. There is a growing interest in the knowledge about the chemical components of the venom of these insects, especially in the field of allergy and clinical immunology. The main reactions of these venoms are inflammation and / or the induction of immune process in the victims; sometimes systemic effects also may be observed. Among the social Hymenoptera, the venoms of bees and wasps have been extensively studied and many of their molecular components have been isolated and identified. Phospholipase, hyaluronidase, antigen-5 and serine protease are antigenic proteins of high molecular weight, which may initiate a peculiar immune response to sensitize some individuals. However, few studies have been performed for the identification and mapping of the epitopes these allergens. The knowledge about the molecular interaction of the major allergens of these venoms with IgG and/or IgE will certainly contribute for improving the diagnosis of allergy, as well as to develop more selective treatments of reactions IgE-mediated allergy. In this study we identified and mapped the linear epitopes of B-cells of the antigen-5 from the venom of the social wasp Polybia paulista. The antigen-5 is known as one of the major allergens from Hymenoptera venoms with molecular weight around 23 kDa and unknown biological function, but many studies show its allergenicity. The aim of this study was to identify and to map the linear epitopes of B-cells of this allergen. Taking into account the knowledge the primary sequence of antigen-5, the identification and mapping of epitopes was performed by using multiple synthesis of peptides with the combination of different protocols: SPOT-Synthesis, immunoblotting and indirect method of ELISA with the sera... (Complete abstract click electronic access below)
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Hidrolisados de isolado proteico do soro de leite obtidos com Alcalase livre e imobilizada : caracterização e detecção de proteínas alergênicas / Hydrolyzed whey protein isolate by free and immobilized Alcalase : characterization and allergic proteins detectionPessato, Tássia Batista, 1989- 24 August 2018 (has links)
Orientador: Flavia Maria Netto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-24T21:18:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2014 / Resumo: O leite bovino é um dos alimentos mais alergênicos na primeira infância, sendo as caseínas e as duas principais proteínas do soro - ?-lactoalbumina (?-La) e ?-lactoglobulina (?-Lg) - os principais alérgenos. A hidrólise enzimática reduz a antigenicidade de proteínas e pode ser realizada com enzima livre ou imobilizada. A enzima imobilizada não requer inativação ao final da hidrólise, sendo retirada por filtração enquanto que a enzima livre precisa ser inativada, geralmente por aquecimento, para interromper a reação. Diferenças na atividade catalítica e de inativação podem acarretar em características diferentes dos hidrolisados formados. O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da hidrólise do isolado proteico de soro de leite bovino (IPS) com Alcalase livre (AL) e imobilizada em glioxil-agarose (AIm) nas características dos hidrolisados e na detecção de ?-La e ?-Lg por teste ELISA. As melhores condições de hidrólise do IPS com AL ou AIm foram estabelecidas por delineamento composto central rotacional (DCCR) 22. As variáveis independentes foram pH (7,0 a 9,0) e temperatura (45 a 65°C), a variável dependente foi grau de hidrólise (GH), determinado pelo método de pH-stat. Os hidrolisados foram caracterizados quanto ao perfil de hidrofilicidade por cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa (CLAE-FR) e, as análises posteriores, foram realizadas em hidrolisados tanto com AL (HAL) quanto com AIm (HAIm) obtidos em três condições de hidrólise. O perfil de massa molecular (MM) foi avaliado por cromatografia líquida de alta eficiência de exclusão molecular (CLAE-EM) e eletroforese (SDS-PAGE e SDS-PAGE/Tricina). A agregação dos hidrolisados foi estimada por turbidez e hidrofobicidade superficial (S0) e a detecção dos alérgenos foi realizada pelo método de Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) utilizando kits comerciais. Sob as mesmas condições de hidrólise, os valores de GH obtidos nos ensaios do DCCR com a AIm (9,5 a 22,2 %) foram, menores do que os obtidos com a AL (18 a 24 %), possivelmente em função de impedimentos estéricos resultantes da imobilização. As melhores condições de hidrólise do IPS com AIm, dentro das faixas de pH e temperatura estudadas, foram obtidas em temperaturas acima de 60°C. O DCCR com a AL não resultou em modelo devido à pequena variação dos resultados entre os ensaios. Os perfis cromatográficos (CLAE-FR) dos HAIm apresentaram mais picos na região de baixa hidrofilicidade do que os HAL. Os HAIm apresentaram peptídeos de MM maiores que os HAL, o que está relacionado aos menores GH produzidos com a AIm. Os HAL apresentaram menores valores de S0 que os HAIm, sugerindo a ocultação de sítios hidrofóbicos no interior dos agregados. As análises de turbidez em diferentes solventes mostraram que interações hidrofóbicas, pontes de hidrogênio e pontes dissulfeto são as principais forças envolvidas na formação dos agregados. A hidrólise com AL e AIm diminuiu significativamente a detecção das proteínas alergênicas. A detecção dessas proteínas foi maior nos HAIm devido, possivelmente, aos menores GH desses hidrolisados. Porém, os resultados sugerem que as características dos hidrolisados resultantes das condições de hidrólise e a formação de agregados estabilizados por diferentes interações também tiveram efeito na detecção dos alérgenos / Abstract: Cow's milk is one of the most allergenic foods in infancy, with the two major caseins and whey proteins - ?-lactalbumin (?-La) and ?-lactoglobulin (?-Lg) - the main allergens. Enzymatic hydrolysis considerably reduces the antigenicity of proteins, and can be performed with free or immobilized enzyme. The immobilized enzyme does not require inactivation at the end of hydrolysis and can be removed by filtration, while the free enzyme must be inactivated, usually by heating, to stop the reaction. Differences in catalytic activity and inactivation may result in hydrolysates with distinct characteristics. The objective of this study was to evaluate the effects of hydrolysis of whey protein isolate (WPI) with free Alcalase (AL) and Alcalase immobilized on glyoxyl agarose (Alm) on the characteristics of hydrolysates and detection of ?-La e ?-Lg by ELISA test. The best conditions for the hydrolysis of WPI using AL or Alm were established by 22 central composite rotational design (CCRD). The independent variables were pH (7.0 and 9.0) and temperature (45 to 65 °C), whereas the dependent variable was the degree of hydrolysis (DH) determined by the pH-stat method. All hydrolysates were characterized for the hydrophilicity profile by reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC), and the subsequent analyses were performed in both hydrolysates by AL (HAL) and Alm (HAlm) from three conditions of hydrolysis. The molecular weight profile (MW) was assessed by size exclusion high performance liquid chromatography (SE-HPLC) and electrophoresis (SDS-PAGE and SDS-PAGE/Tricine). The aggregation of hydrolysates was estimated by turbidity and surface hydrophobicity (S0) and the allergens ?-La and ?-Lg in the hydrolysates were detected by the Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) method using commercial kits. Under the same hydrolysis conditions, the DH values obtained with the Alm as defined by CCRD (9.5 to 22.2%) were lower than the values found for AL (18 to 24%), possibly due to the steric hindrance resulting from immobilization. The best conditions for hydrolysis of WPI by Alm within the pH and temperature ranges of this study were found at temperatures above 60 °C. The CCRD with the AL did not provide a model due to the little variation between trials. The chromatographic profiles (RP-HPLC) of HAlm exhibited more peaks in the hydrophilic low-complexity region than HAL. HAlm showed peptides with higher MW than HAL, which is related to the lower DH produced with Alm. The HAL had lower S0 values than HAlm, suggesting the hiding of hydrophobic sites in the interior part of the aggregates. The turbidity analyses showed that hydrophobic interactions, hydrogen bonds, and disulfide bonds were the main forces involved in the formation of aggregates. The hydrolysis with AL and Alm significantly decreased the detection of the allergenic proteins, which was higher in HAlm probably due to the lower DH of these hydrolysates. However, the results suggested that the characteristics of the hydrolysates resulting from the conditions of hydrolysis, and the formation of aggregates stabilized by different interactions also had an effect on the detection of allergens / Mestrado / Nutrição Experimental e de Alimentos / Mestra em Alimentos e Nutrição
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