Orientador : Delia Rodriguez-Amaya / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-09-11T20:40:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bragagnolo_Neura_M.pdf: 3409317 bytes, checksum: 482fc3a44b777180fcf49e8b8674166a (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Foram determinados pelo método colorimétrico de Bohac et_ al. (1988) os teores de colesterol em carnes de frango, suína e bovina Os valores obtidos para frango cru foram, em média, 58 ± 10, 80 ± 9 e 104 ± 5 mg/100g para carne branca, escura e pele, respectivamente Em frango assado os teores foram 75 ± 17, 124 ± 20 e 139 ± 37 mg/100g para carne branca, escura e pele, respectivamente. As concentrações de colesterol em diferentes cortes de carne suína crua foram em média respectivamente de 49 ± 5, 49 ± 7, 50 ± 6 e 54 ± 6 mg/100g para bisteca, lombinho, pernil e toucinho. Os valores correspondentes para a carne suína cozida foram 97 ± 6, 69 + 12, 82 ± 8 e 56 ± 6 mg/100g, respectivamente Para a carne bovina crua, os teores foram em média 51 ±6, 56 ± 6, 50 ± 4, 52 ± 4 e 51 ± 6 mg/100g para contrafilé, coxão duro, coxão mole, músculo e peito, respectivamente Para contrafilé e músculo cozido foram encontrados os valores de 66 ± 6 e 67 ± 4 mg/100g, respectivamente As perdas por cozimento, calculadas em base seca, foram muito pequenas e em alguns casos desprezíveis. O teor médio de colesterol obtido para ovo foi 190 ± 19 mg/ovo ou 10 ± 1 mg/g de gema pelo método por CLAE . O método colorimétrico recomendado pelo Instituto Adolfo Lutz (IAL.) superestimou os valores (311 ± 16 mg/ovo ou 17 ± 1 mg/g de gema), enquanto que o de Bohac et al, deu resultados (204 ± 18 mg/ovo ou 11 ± 1 mg/g de gema) sem diferença significativa com o de CLAE. Avaliando o uso do teor de colesterol como índice da quanti¬dade de ovo em massas, os métodos colorimétricos (IAL e Bohac et al.) superestimaram os teores de colesterol e, consequentemente, a quantidade de ovo adicionada em todas as massas analisadas. Já o método por CLAE revelou que as massas analisadas continham quantidade de ovo abaixo do mínimo exigido pela legislação vigente. / Abstract: Using the colorimetric method of Bohac et al. (1988), the cholesterol concentrations of meat (chicken, pork and beef) were determined. The mean values obtained for raw chicken meat were 58 ± 10, 80 ± 9 and 104 ± 5 mg/100g for white meat, dark meat and skin, respectively In baked chicken the levels were 75 ± 17, 124 ± 20 and 139 ± 37 mg/100g for white meat, dark meat and skin, respectively The cholesterol concentrations in different cuts of raw pork were on the average 49 ±5, 49 ± 7, 50 ± 6 and 54 ± 6 mg/100g for rib chop, tenderloin, ham and belly, respectively The corresponding values for cooked pork were 97 ±6, 69 ± 12, 82 ± 8 and 56+6 mg/100g, respectively. For raw beef, the mean cholesterol levels were 51 ± 6, 56 ± 6, 50 ± 4, 52 ± 4, 51 ± 6 mg/100g for "longissimus dorsi", "biceps femoris", "semimembranosus", shank and breast, respectively. For cooked "longissimus dorsi" and shank, 66 ±6 and 67±4 mg/100g cholesterol, respectively, were encountered. Losses on cooking, calculated on the dry basis, were very small and in some cases negligible. The mean cholesterol concentration for eggs obtained by an HPLC method was 190 ± 19 mg/egg or 10 ± 1 mg/g egg yolk. The colorimetric method recommended by the Instituto Adolfo Lutz (IAL) overestimated the concentrations (311 ± 16 mg/egg or 17 ± 1.0 mg/g egg yolk) while that of Bohac et al. (204 ± 18 mg/egg or 11 ± 1 mg/g egg yolk) gave results with no significant difference with those of the HPLC method. Evaluating the use of the cholesterol level as index of the amount of eggs in egg noodles, the colorimetric methods of IAL and Bohac et al. overestimated the cholesterol concentration and, consequently, the amount of eggs added in all the samples analyzed The HPLC method revealed that the amount of eggs in the egg noodles analyzed was below the minimum required by existing regulation. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Medicamentos antimicrobianos são cada vez mais utilizados, com finalidades diversas, em medicina veterinária. Esta conduta pode ocasionar a presença de resíduos destes compostos em alimentos de origem animal. Desta forma, o controle da presença destes contaminantes se torna imprescindível do ponto de vista de saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento, validação e posterior utilização de metodologias para análise de antimicrobianos em produtos destinados à alimentação animal e produtos de origem animal destinados ao consumo humano. Diferentes metodologias, com abordagem tanto qualitativa como quantitativa, foram desenvolvidas, contemplando as seguintes classes de antimicrobianos: sulfonamidas, quinolonas, fluorquinolonas, tetraciclinas, beta-lactâmicos, macrolídeos, lincosamidas, além de trimetoprima e bromexina. Os métodos multirresíduos desenvolvidos contemplaram um total de até 46 compostos diferentes numa mesma análise. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas foi utilizada, com diferentes abordagens: cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em modo tandem (LC-MS/MS) e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas híbrida quadrupolo-tempo de voo (LC-QTOF). Os diferentes procedimentos de preparo de amostras foram desenvolvidos com o enfoque comum de reunir eficiência, praticidade, baixo custo e baixa produção de resíduos, combinação ideal para análises de rotina. As metodologias validadas foram aplicadas à análise de 4962 amostras provenientes do Serviço de Inspeção Federal (SIF), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, sendo 2728 amostras de músculos de animais de diferentes espécies, 1105 amostras de leite bovino e 1129 amostras de rações. Foram detectados resíduos em 130 das 1126 amostras de rações, representando 11,25% das amostras analisas. Já para os alimentos de origem animal, o número de amostras contendo resíduos acima do limite de quantificação foi 39, que corresponde a 1,02% do total de amostras analisadas (3833). Entretanto, as amostras não conformes, que são aquelas com concentração de resíduos acima do limite máximo de resíduo estabelecido para o composto naquela matriz, foram apenas 13, representando 0,34% do total de amostras analisadas.Por fim, as metodologias desenvolvidas se mostraram adequadas para detecção simultânea de antimicrobianos em matrizes biológicas, proporcionando maior rapidez, menor custo de análise e geração de resultados confiáveis quando testadas em amostras reais nas condições existentes nos serviços de inspeção. / The objective of this work was the development, validation and subsequent use of methodologies for analyzing antimicrobials in products intended for animal nutrition and products of animal origin for human consumption. Different methodologies, with both qualitative and quantitative approaches, were developed, covering the following classes of antimicrobials: sulfonamides, quinolones, fluoroquinolones, tetracyclines, beta-lactams, macrolides, lincosamides, in addition to trimethoprim and bromexin. Liquid chromatography coupled to mass spectrometry was used with different approaches: liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and liquid chromatography coupled to quadrupole-time hybrid mass spectrometry (LC-QTOF). The different preparation of samples developed with the common approach of to bringing efficiency, practicity, low cost and low waste generation, ideal combination for routine analysis. Developed methodologies were applied to 4962 samples of the Federal Inspection Service (SIF), of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply, 2728 samples of muscles of different species, 1105 samples of bovine milk and 1129 samples of rations. Positive results were obtained in 130 of 1126 feed samples, representing 11.25% of the analyzed samples. For animal origin products, the number of samples above the quantification limit was 39 to 3833 samples analyzed, corresponding to 1.02% of the total. However, non-compliant samples, which are those with a concentration above the maximum residue limit established for the compound in that matrix, were only 13, representing 0.34% of the total samples analyzed. Finally, the methodologies developed were suitable for the simultaneous detection of different antimicrobials of different classes in different foods of animal origin, providing greater speed and lower analytical cost when tested in real samples under conditions in the inspection service.

Orientador: Leonardo Pezza / Banca: Fabíola Manhas Verbi Pereira / Banca: Edilene Cristina Ferreira / Banca: Aline Theodoro Toci / Banca: Danilo Luiz Flumignan / Resumo: Este trabalho descreve o desenvolvimento de métodos analíticos ambientalmente mais amigáveis utilizando sistemas de screening e procedimentos de análise por injeção em fluxo para a detecção e quantificação de antibióticos, da classe das tetraciclinas, em amostras de medicamentos veterinários e alimentos de origem animal como leite bovino e suplementos de ovos. Os métodos desenvolvidos foram baseados na reação de acoplamento diazo obtida entre as tetraciclinas e o ácido p-sulfanílico diazotado em meio básico, resultando na formação de azo compostos com máximos de absorção em torno de 435 nm, permitindo determinar esses antibióticos por espectrofotometria. As condições analíticas foram otimizadas através de análise multivariada utilizando planejamentos experimentais fatoriais e o desempenho dos métodos propostos foi avaliado através de parâmetros como linearidade, efeito matriz, precisão, exatidão, limite de detecção, limite de quantificação, recuperação e estudo de interferências. O primeiro trabalho desenvolvido fez uso de um procedimento de injeção em fluxo contínuo para a rápida determinação de tetraciclinas em formulações veterinárias comerciais, visando maior eficiência no controle de qualidade na indústria farmacêutica. Na sequência, foi desenvolvido um método de screening mediante análise por injeção em fluxo empregando uma cela capilar de longo caminho óptico (LWCC) para a detecção de resíduos de tetraciclinas em amostras de leite bovino, sem a necessidade de passos de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work describes the development of environmentally friendly analytical methods using screening systems and flow injection procedures for detection and quantification of tetracycline antibiotics in veterinary pharmaceuticals and animal-derived foods such as bovine milk and egg-based protein supplements. The developed methods were based on the diazo coupling reaction between the tetracyclines and diazotized p-sulfanilic acid in basic medium, resulting in the formation of azo compounds that present maximum absorption around 435 nm, which allows determining these antibiotics by spectrophotometry. The analytical conditions were optimized by means of multivariate analysis using factorial experimental designs. Performance of the proposed methods was assessed through parameters such as linearity, selectivity, precision, accuracy, detection limit, quantification limit, matrix effect and recovery. The first developed work used a continuous flow injection procedure for the rapid determination of tetracyclines in commercial veterinary formulations, aiming greater efficiency in quality control in the pharmaceutical industry. Thereafter, it was developed a screening method by flow injection analysis using a liquid waveguide capillary cell (LWCC) for detecting tetracyclines residues in bovine milk samples, without the need for expensive extraction steps that are time-consuming or complicated sample treatments. Finally, a new ultrasound-assisted dispersive liquid-liquid microextraction (... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A morcilha é uma iguaria muito consumida no sul do Brasil, porém a falta de estudos avaliando a potencial virulência de estafilococos isolados destas preparações é motivo de preocupação para o consumidor. O objetivo do estudo foi identificar os estafilococos manitol positivo isolados de morcilhas artesanais; verificar a resistência antimicrobiana; analisar e correlacionar o perfil fenotípico e genotípico da coagulase nos isolados, detectar o polimorfismo do gene coa e seu padrão de restrição enzimática; investigar através de técnica de PCR a presença dos genes das enterotoxinas clássicas e determinar se a técnica multiplex PCR pode ser empregada como ferramenta útil na identificação destes genes. Foram obtidos 82 isolados, destes 75,61 % eram estafilococos coagulase negativos e 24,3 % estafilococos coagulase positivos. Através do perfil bioquímico foram identificadas 9 espécies, sendo S. saprophyticus e S. carnosus as mais prevalentes. O fenótipo de resistência à tetraciclina e eritromicina foi o mais observado e 13 isolados apresentaram multirresistência. O gene coa foi detectado em 16 isolados e identificados 11 perfis de restrição enzimática. 33 isolados foram positivos para pelo menos um gene de enterotoxina e as espécies mais frequentes foram S. saprophyticus e S. carnosus. Os genes sea, seb e sec foram os mais prevalentes e a multiplex PCR amplificou os genes seb, sec e see. Conclui-se que a microbiota das morcilhas analisadas consiste de espécies do grupo coagulase negativo representando bactérias potencialmente patogênicas devido à resistência antimicrobiana e à presença de genes de enterotoxinas, chamando a atenção para este grupo de estafilococos. / The morcilla is a delicacy consumed in Southern Brazil, but the lack of studies evaluating the potential virulence of staphylococci isolated from these preparations is of concern to the consumer. The aim of the study was mannitol positive staphylococci isolated from artisanal morcilla; antibiotic resistance, analyze and correlate the phenotypic profile and genotype in isolates of coagulase, to detect the polymorphism of coa gene and its pattern of restriction enzyme, and to investigate the technique of PCR the presence of enterotoxin genes and determine whether the multiplex PCR technique can be employed as a useful tool in identifying these genes. We obtained 82 isolates, 75.61% of these were coagulase negative and coagulase positive 24.3%. Through biochemical profile were identified 9 species, S. saprophyticus and S. xylosus being most prevalent. The phenotype of resistance to tetracycline and erythromycin was the most observed and 13 isolates showed multidrug resistance. The coa gene was detected in 16 isolates and identified 11 profiles of restriction enzyme. 33 isolates were positive for at least one enterotoxin gene and the most frequent species were S. saprophyticus and S. carnosus. The genes sea, seb and sec were most prevalent and multiplex PCR amplified genes seb, sec and see. We conclude that the microbiota of morcilla analyzed consists of species of coagulase-negative group representing potentially pathogenic bacteria due to antimicrobial resistance and the presence of enterotoxin genes, calling attention to this group of staphylococci.

Medicamentos antimicrobianos são cada vez mais utilizados, com finalidades diversas, em medicina veterinária. Esta conduta pode ocasionar a presença de resíduos destes compostos em alimentos de origem animal. Desta forma, o controle da presença destes contaminantes se torna imprescindível do ponto de vista de saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento, validação e posterior utilização de metodologias para análise de antimicrobianos em produtos destinados à alimentação animal e produtos de origem animal destinados ao consumo humano. Diferentes metodologias, com abordagem tanto qualitativa como quantitativa, foram desenvolvidas, contemplando as seguintes classes de antimicrobianos: sulfonamidas, quinolonas, fluorquinolonas, tetraciclinas, beta-lactâmicos, macrolídeos, lincosamidas, além de trimetoprima e bromexina. Os métodos multirresíduos desenvolvidos contemplaram um total de até 46 compostos diferentes numa mesma análise. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas foi utilizada, com diferentes abordagens: cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em modo tandem (LC-MS/MS) e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas híbrida quadrupolo-tempo de voo (LC-QTOF). Os diferentes procedimentos de preparo de amostras foram desenvolvidos com o enfoque comum de reunir eficiência, praticidade, baixo custo e baixa produção de resíduos, combinação ideal para análises de rotina. As metodologias validadas foram aplicadas à análise de 4962 amostras provenientes do Serviço de Inspeção Federal (SIF), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, sendo 2728 amostras de músculos de animais de diferentes espécies, 1105 amostras de leite bovino e 1129 amostras de rações. Foram detectados resíduos em 130 das 1126 amostras de rações, representando 11,25% das amostras analisas. Já para os alimentos de origem animal, o número de amostras contendo resíduos acima do limite de quantificação foi 39, que corresponde a 1,02% do total de amostras analisadas (3833). Entretanto, as amostras não conformes, que são aquelas com concentração de resíduos acima do limite máximo de resíduo estabelecido para o composto naquela matriz, foram apenas 13, representando 0,34% do total de amostras analisadas.Por fim, as metodologias desenvolvidas se mostraram adequadas para detecção simultânea de antimicrobianos em matrizes biológicas, proporcionando maior rapidez, menor custo de análise e geração de resultados confiáveis quando testadas em amostras reais nas condições existentes nos serviços de inspeção. / The objective of this work was the development, validation and subsequent use of methodologies for analyzing antimicrobials in products intended for animal nutrition and products of animal origin for human consumption. Different methodologies, with both qualitative and quantitative approaches, were developed, covering the following classes of antimicrobials: sulfonamides, quinolones, fluoroquinolones, tetracyclines, beta-lactams, macrolides, lincosamides, in addition to trimethoprim and bromexin. Liquid chromatography coupled to mass spectrometry was used with different approaches: liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and liquid chromatography coupled to quadrupole-time hybrid mass spectrometry (LC-QTOF). The different preparation of samples developed with the common approach of to bringing efficiency, practicity, low cost and low waste generation, ideal combination for routine analysis. Developed methodologies were applied to 4962 samples of the Federal Inspection Service (SIF), of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply, 2728 samples of muscles of different species, 1105 samples of bovine milk and 1129 samples of rations. Positive results were obtained in 130 of 1126 feed samples, representing 11.25% of the analyzed samples. For animal origin products, the number of samples above the quantification limit was 39 to 3833 samples analyzed, corresponding to 1.02% of the total. However, non-compliant samples, which are those with a concentration above the maximum residue limit established for the compound in that matrix, were only 13, representing 0.34% of the total samples analyzed. Finally, the methodologies developed were suitable for the simultaneous detection of different antimicrobials of different classes in different foods of animal origin, providing greater speed and lower analytical cost when tested in real samples under conditions in the inspection service.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-02Bitstream added on 2014-08-13T18:00:16Z : No. of bitstreams: 1 000763118_20150114.pdf: 153770 bytes, checksum: 8808c1e4fc1d83eb3fc7457e09120fc2 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-16T10:37:50Z: 000763118_20150114.pdf,Bitstream added on 2015-01-16T10:38:35Z : No. of bitstreams: 1 000763118.pdf: 264466 bytes, checksum: 2836b77555704f1bfedbaf8b5f478d83 (MD5) / Analisou-se dentro de uma linha de fabricação de lingüiças frescais mistas, o papel da matéria-prima e de cada ingrediente empregado na elaboração do produto, como fonte de contaminação por Salmonella spp. Foram analisadas 19 partidas de lingüiça, sendo que Salmonella spp. foi isolada em 9 delas (47,3%), em pelo menos uma das matérias-primas testadas. Nas 19 amostras de massa antes do embutimento, isolou-se o patógeno em 6 (31,6%) e no produto final pronto para o consumo, em 3 (15,8%). A matéria-prima de origem suína (cortes, recortes e toucinho) foram os principais responsáveis pela contaminação observada, já que nas 9 partidas em que ela foi detectada, eram eles que se encontravam contaminados. Em relação à carne bovina, em apenas uma amostra detectou-se Salmonella, sendo que nesse dia de produção os recortes suínos também encontravam-se positivos. Nenhum outro ingrediente mostrou-se contaminado pelo patógeno nas 19 partidas do produto. Todas as amostras do produto final quando novamente analisadas pela técnica dos tubos múltiplos, mostraram valores < 3,0 células de Salmonella / g do produto. Conclui-se que na indústria em questão, a contaminação do produto final dá-se exclusivamente pela matéria-prima animal, especialmente a de origem suína. Embora esta contaminação ocorra por um número pequeno de células, as lingüiças frescais contaminadas representam um perigo à saúde do consumidor / There were analyzed 19 portions of fresh sausage, each one of them corresponding to different lots and days of production. Salmonella spp was isolated in 9 of these portions (47,3%). On the 19 dough samples before the stuffing, the pathogen was isolated in 6 (31,6%) and on the final stuffed and ready for consumption product, in 3 (15,8%). The cuts of pork meat and bacon were the great responsible for the contamination observed, since on the 9 ones where it was detected, these were the raw material that were contaminated. On what concerns the beef meat, just in one sample it was found Salmonella, and on that production day the pork scraps were also contaminated. Any of the other ingredients has presented contaminated by the pathogen on the 19 portions of the product. When analyzed again through the multiple tubes technique (MNP), all the samples of the final product have shown values < 3,0 of Salmonella cells/g of the product. The contamination of fresh sausages on the present study has occurred basically for products of pork origin (meat scraps and bacon) used on the product elaboration. On the case of the plant in question, only a more rigorous control of the pork raw material acquired may reduce the contamination risk on the final product. Although this contamination occurs for a small number of cells, the fresh sausages endanger the consumer health

A morcilha é uma iguaria muito consumida no sul do Brasil, porém a falta de estudos avaliando a potencial virulência de estafilococos isolados destas preparações é motivo de preocupação para o consumidor. O objetivo do estudo foi identificar os estafilococos manitol positivo isolados de morcilhas artesanais; verificar a resistência antimicrobiana; analisar e correlacionar o perfil fenotípico e genotípico da coagulase nos isolados, detectar o polimorfismo do gene coa e seu padrão de restrição enzimática; investigar através de técnica de PCR a presença dos genes das enterotoxinas clássicas e determinar se a técnica multiplex PCR pode ser empregada como ferramenta útil na identificação destes genes. Foram obtidos 82 isolados, destes 75,61 % eram estafilococos coagulase negativos e 24,3 % estafilococos coagulase positivos. Através do perfil bioquímico foram identificadas 9 espécies, sendo S. saprophyticus e S. carnosus as mais prevalentes. O fenótipo de resistência à tetraciclina e eritromicina foi o mais observado e 13 isolados apresentaram multirresistência. O gene coa foi detectado em 16 isolados e identificados 11 perfis de restrição enzimática. 33 isolados foram positivos para pelo menos um gene de enterotoxina e as espécies mais frequentes foram S. saprophyticus e S. carnosus. Os genes sea, seb e sec foram os mais prevalentes e a multiplex PCR amplificou os genes seb, sec e see. Conclui-se que a microbiota das morcilhas analisadas consiste de espécies do grupo coagulase negativo representando bactérias potencialmente patogênicas devido à resistência antimicrobiana e à presença de genes de enterotoxinas, chamando a atenção para este grupo de estafilococos. / The morcilla is a delicacy consumed in Southern Brazil, but the lack of studies evaluating the potential virulence of staphylococci isolated from these preparations is of concern to the consumer. The aim of the study was mannitol positive staphylococci isolated from artisanal morcilla; antibiotic resistance, analyze and correlate the phenotypic profile and genotype in isolates of coagulase, to detect the polymorphism of coa gene and its pattern of restriction enzyme, and to investigate the technique of PCR the presence of enterotoxin genes and determine whether the multiplex PCR technique can be employed as a useful tool in identifying these genes. We obtained 82 isolates, 75.61% of these were coagulase negative and coagulase positive 24.3%. Through biochemical profile were identified 9 species, S. saprophyticus and S. xylosus being most prevalent. The phenotype of resistance to tetracycline and erythromycin was the most observed and 13 isolates showed multidrug resistance. The coa gene was detected in 16 isolates and identified 11 profiles of restriction enzyme. 33 isolates were positive for at least one enterotoxin gene and the most frequent species were S. saprophyticus and S. carnosus. The genes sea, seb and sec were most prevalent and multiplex PCR amplified genes seb, sec and see. We conclude that the microbiota of morcilla analyzed consists of species of coagulase-negative group representing potentially pathogenic bacteria due to antimicrobial resistance and the presence of enterotoxin genes, calling attention to this group of staphylococci.

Orientador: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Roberto de Oliveira Roça / Banca: Bernadette Dora Gombossy de Melo Franco / Resumo: Analisou-se dentro de uma linha de fabricação de lingüiças frescais mistas, o papel da matéria-prima e de cada ingrediente empregado na elaboração do produto, como fonte de contaminação por Salmonella spp. Foram analisadas 19 partidas de lingüiça, sendo que Salmonella spp. foi isolada em 9 delas (47,3%), em pelo menos uma das matérias-primas testadas. Nas 19 amostras de massa antes do embutimento, isolou-se o patógeno em 6 (31,6%) e no produto final pronto para o consumo, em 3 (15,8%). A matéria-prima de origem suína (cortes, recortes e toucinho) foram os principais responsáveis pela contaminação observada, já que nas 9 partidas em que ela foi detectada, eram eles que se encontravam contaminados. Em relação à carne bovina, em apenas uma amostra detectou-se Salmonella, sendo que nesse dia de produção os recortes suínos também encontravam-se positivos. Nenhum outro ingrediente mostrou-se contaminado pelo patógeno nas 19 partidas do produto. Todas as amostras do produto final quando novamente analisadas pela técnica dos tubos múltiplos, mostraram valores < 3,0 células de Salmonella / g do produto. Conclui-se que na indústria em questão, a contaminação do produto final dá-se exclusivamente pela matéria-prima animal, especialmente a de origem suína. Embora esta contaminação ocorra por um número pequeno de células, as lingüiças frescais contaminadas representam um perigo à saúde do consumidor / Abstract: There were analyzed 19 portions of fresh sausage, each one of them corresponding to different lots and days of production. Salmonella spp was isolated in 9 of these portions (47,3%). On the 19 dough samples before the stuffing, the pathogen was isolated in 6 (31,6%) and on the final stuffed and ready for consumption product, in 3 (15,8%). The cuts of pork meat and bacon were the great responsible for the contamination observed, since on the 9 ones where it was detected, these were the raw material that were contaminated. On what concerns the beef meat, just in one sample it was found Salmonella, and on that production day the pork scraps were also contaminated. Any of the other ingredients has presented contaminated by the pathogen on the 19 portions of the product. When analyzed again through the multiple tubes technique (MNP), all the samples of the final product have shown values < 3,0 of Salmonella cells/g of the product. The contamination of fresh sausages on the present study has occurred basically for products of pork origin (meat scraps and bacon) used on the product elaboration. On the case of the plant in question, only a more rigorous control of the pork raw material acquired may reduce the contamination risk on the final product. Although this contamination occurs for a small number of cells, the fresh sausages endanger the consumer health / Mestre

Medicamentos antimicrobianos são cada vez mais utilizados, com finalidades diversas, em medicina veterinária. Esta conduta pode ocasionar a presença de resíduos destes compostos em alimentos de origem animal. Desta forma, o controle da presença destes contaminantes se torna imprescindível do ponto de vista de saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento, validação e posterior utilização de metodologias para análise de antimicrobianos em produtos destinados à alimentação animal e produtos de origem animal destinados ao consumo humano. Diferentes metodologias, com abordagem tanto qualitativa como quantitativa, foram desenvolvidas, contemplando as seguintes classes de antimicrobianos: sulfonamidas, quinolonas, fluorquinolonas, tetraciclinas, beta-lactâmicos, macrolídeos, lincosamidas, além de trimetoprima e bromexina. Os métodos multirresíduos desenvolvidos contemplaram um total de até 46 compostos diferentes numa mesma análise. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas foi utilizada, com diferentes abordagens: cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em modo tandem (LC-MS/MS) e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas híbrida quadrupolo-tempo de voo (LC-QTOF). Os diferentes procedimentos de preparo de amostras foram desenvolvidos com o enfoque comum de reunir eficiência, praticidade, baixo custo e baixa produção de resíduos, combinação ideal para análises de rotina. As metodologias validadas foram aplicadas à análise de 4962 amostras provenientes do Serviço de Inspeção Federal (SIF), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, sendo 2728 amostras de músculos de animais de diferentes espécies, 1105 amostras de leite bovino e 1129 amostras de rações. Foram detectados resíduos em 130 das 1126 amostras de rações, representando 11,25% das amostras analisas. Já para os alimentos de origem animal, o número de amostras contendo resíduos acima do limite de quantificação foi 39, que corresponde a 1,02% do total de amostras analisadas (3833). Entretanto, as amostras não conformes, que são aquelas com concentração de resíduos acima do limite máximo de resíduo estabelecido para o composto naquela matriz, foram apenas 13, representando 0,34% do total de amostras analisadas.Por fim, as metodologias desenvolvidas se mostraram adequadas para detecção simultânea de antimicrobianos em matrizes biológicas, proporcionando maior rapidez, menor custo de análise e geração de resultados confiáveis quando testadas em amostras reais nas condições existentes nos serviços de inspeção. / The objective of this work was the development, validation and subsequent use of methodologies for analyzing antimicrobials in products intended for animal nutrition and products of animal origin for human consumption. Different methodologies, with both qualitative and quantitative approaches, were developed, covering the following classes of antimicrobials: sulfonamides, quinolones, fluoroquinolones, tetracyclines, beta-lactams, macrolides, lincosamides, in addition to trimethoprim and bromexin. Liquid chromatography coupled to mass spectrometry was used with different approaches: liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and liquid chromatography coupled to quadrupole-time hybrid mass spectrometry (LC-QTOF). The different preparation of samples developed with the common approach of to bringing efficiency, practicity, low cost and low waste generation, ideal combination for routine analysis. Developed methodologies were applied to 4962 samples of the Federal Inspection Service (SIF), of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply, 2728 samples of muscles of different species, 1105 samples of bovine milk and 1129 samples of rations. Positive results were obtained in 130 of 1126 feed samples, representing 11.25% of the analyzed samples. For animal origin products, the number of samples above the quantification limit was 39 to 3833 samples analyzed, corresponding to 1.02% of the total. However, non-compliant samples, which are those with a concentration above the maximum residue limit established for the compound in that matrix, were only 13, representing 0.34% of the total samples analyzed. Finally, the methodologies developed were suitable for the simultaneous detection of different antimicrobials of different classes in different foods of animal origin, providing greater speed and lower analytical cost when tested in real samples under conditions in the inspection service.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-06-23T01:18:07Z No. of bitstreams: 1 2012_AnaClaudiaFariaBorgesdeCampos.pdf: 1878171 bytes, checksum: bea1e564ad3d0ca46c9d93489614ae27 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-27T12:43:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_AnaClaudiaFariaBorgesdeCampos.pdf: 1878171 bytes, checksum: bea1e564ad3d0ca46c9d93489614ae27 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-27T12:43:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_AnaClaudiaFariaBorgesdeCampos.pdf: 1878171 bytes, checksum: bea1e564ad3d0ca46c9d93489614ae27 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi realizar o isolamento de cepas de Enterococcus de carcaças de frango resfriadas e congeladas, comercializadas no Distrito Federal, analisar o perfil de resistência antimicrobiana através da realização de antibiograma, promover uma pesquisa de genes de resistência antimicrobiana e diferenciação das espécies Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium através da reação em cadeia da polimerase. Foram analisadas 100 carcaças de frango congeladas e resfriadas, das quais foram isoladas 50 cepas de Enterococcus spp, sendo 42% de E. faecalis e 2% de E. faecium. O teste de susceptibilidade antimicrobiana demonstrou que todas as cepas isoladas apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano, dos quais 90,47% das cepas de E. faecalis, 100% das cepas de E. faecium e 82,14% dos Enterococcus spp apresentaram resistência à Tetraciclina; 80,95% das cepas de E. faecalis e 35,71% das cepas de Enterococcus spp foram resistentes à Eritromicina; 39,28% dos Enterococcus spp e 23,80% dos E. faecalis à Ciprofloxacina e 28,57% dos E. faecalis apresentaram resistência ao Cloranfenicol. Foram detectados os genes de resistência antimicrobiana tet(M), sendo o mais encontrado, seguido pelo erm(B), vanC-1, aph(3’)-llla, ant(6)-la, vanB, vanA, aac(6’)- le-aph(2’’)-la e erm(A). O isolamento de cepas de Enterococcus com resistência antimicrobiana em carcaças de frango, observados neste estudo, pode acarretar sérios problemas para a saúde pública, devido à resistência propriamente dita, e devido a esses microrganismos terem a capacidade de transmitir genes de resistência antimicrobiana para outros microrganismos presentes na microbiota intestinal de humanos e animais, podendo inviabilizar o uso destas drogas para uso clínico. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this work was to detect Enterococcus from cooled and frozen poultry carcasses commercialized at the Federal District area, analyze the profile of antimicrobial resistance by antibiotic susceptibility test, detect the antimicrobial resistance genes and differentiate Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium by polymerase chain reaction. Were analyzed 100 poultry carcasses cooled and frozen that were isolated 50 strains of Enterococcus spp, being 42% of E. faecalis and 2% of E.faecium. The antimicrobial susceptibility testing showed that all isolates were resistant to at least one antimicrobial. In 90,47% of E. faecalis, 100% of E. faecium and 82,14% of Enterococcus spp were resistant to Tetracycline; 80,95% of E. faecalis and 35,71% of Enterococcus spp strains were resistant to Erythromycin; 39,28% of Enterococcus spp and 23,80% of E. faecalis to Ciprofloxacin and 28,57% of E. faecalis were resistant to Chloramphenicol. Were detected genes of antimicrobial resistance as tet(M), being this gene most verified. Were detected the genes erm(B), vanC-1, aph(3’)-llla, ant(6)-la, vanB, vanA, aac(6’)-le-aph(2’’)-la and erm(A). The antimicrobial resistance observed in Enterococcus from poultry carcasses, observed in this study, might suggest serious problems for public health due the high resistance, due these microorganisms have ability to transmit genes for antimicrobial resistance to other microorganisms presents in the intestinal tract of humans and animals, can hinder the use of these drugs for clinical use.