Orientadores: Fernanda Garanhani de Castro Surita, José Guilherme Cecatti / Texto em português e inglês / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T19:09:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Figueira_CamillaOlivares_M.pdf: 1964790 bytes, checksum: 9f40cd5a6b3e989c4a5740350753fde4 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Objetivo: Estudar longitudinalmente os parâmetros Dopplervelocimétricos de artérias fetais e uterinas em mulheres com gestação de baixo risco, construindo intervalos de referência para as artérias uterinas (AUT), umbilical (AU), cerebral média (ACM), e renal (AR), correlacionando esta última com índice de líquido amniótico. Métodos: estudo de coorte longitudinal descritivo em 63 mulheres com gestação de baixo risco no Hospital prof. Dr. José Aristodemo Pinotti ¿ Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher- CAISM/UNICAMP. Foram aferidos o índice de pulsatilidade (IP) e a velocidade sistólica (VS) dos vasos estudados em intervalos de 4 semanas até a 36ª. semana e após, a cada 2 semanas até o parto para construção do intervalo longitudinal dos parâmetros. Para análise estatística foram calculadas as médias por intervalos de idade gestacional, valores dos percentis 5, 50 e 95 para cada parâmetro estudado e ainda, os índices de correlação intra classe e inter classe para cada artéria estudada. Foi estabelecido um nível de significância de 5% e para os procedimentos de análise foram utilizados os programas Epi.Info e SAS. Resultados: Foram construídos intervalos de referência e estabelecidos os percentis 5, 50 e 95 para IP e VS das artérias uterinas, umbilical, cerebral média e renais ao longo da gestação. A evolução dos parâmetros dopplervelocimétricos na população estudada foi semelhante ao padrão encontrado na literatura, entretanto foram observadas algumas diferenças nos valores absolutos. O ILA foi aferido e correlacionado ao Doppler da artéria renal, porém não houve associação entre eles. O Coeficiente de Correlação intra classe mostrou valores adequados pra a maioria dos parametros, indicando boa reprodutibilidade. Conclusões: Foram estabelecidos valores de intervalos de referência para a avaliação de VS e IP das principais artérias estudadas durante a gestação em um seguimento longitudinal. Os intervalos de referência mostram a evolução esperada dos parâmetros de uma gestação de baixo risco e são úteis no acompanhamento das gestações de alto risco. As avaliações intra e inter observador indicaram boa reprodutibilidade do método / Abstract: Objective: To study longitudinal Dopplervelocimetry parameters of uterine and fetal arteries in women of low risk pregnant women, and to develop reference interval values for uterine (UtA), umbilical (UA), middle cerebral (MCA), and renal arteries (RA) and correlate the latter with amniotic fluid index (AFI). Methods: longitudinal cohort study with 63 low risk pregnant women at prof. Dr. José Aristodemo Pinotti Hospital- CAISM/UNICAMP. Pultasility index (PI) and sistolic velocity (SV) of the arteries studied were measured at a 4 week interval until 36 weeks and then every 2 weeks to construct the longitudinal interval. Means for intervals of gestational age and percentiles 5, 50 and 95 were calculated for each parameter and Spearman correlation index was used to correlate the AFI with RA parameters. The Intra Class Correlation Coefficients were also calculated to evaluate the intra and inter observer variability for each vessel. A 5% significance level was established and programs Epi.Info and SAS were used for analysis. Results: Longitudinal reference intervals were constructed and the 5th, 50th and 95th percentiles for PI and SV of uterines, umbilical, middle cerebral and renal arteries established during pregnancy. AFI was measured and correlated with renal artery Doppler, but we found no association between these two parameters. The Intraclass Correlation Coefficient showed adequate values for the majority of the parameters, indicating good reproducibility. Conclusions: We have established a curve of reference intervals for the assessment of SV and PI of the main arteries studied during pregnancy after a longitudinal follow up. Reference intervals show the expected evolution of low risk pregnancy parameters and are useful in monitoring high risk pregnancies. Intra and inter observer evaluation indicated good reproducibility of the method / Mestrado / Saúde Materna e Perinatal / Mestra em Ciências da Saúde

A membrana amniótica humana vem assumindo um papel de extrema importância na medicina regenerativa nos últimos anos, principalmente na área de dermatologia e oftalmologia, sendo seu uso promissor no tratamento de doenças cuja terapêutica atual é pouco eficaz. Além disso, na membrana amniótica humana encontram-se células-tronco mesenquimais, que apresentam plasticidade e vem sendo aplicadas para a regeneração de tecidos. Entretanto, muito pouco se sabe sobre a capacidade plástica e o uso de células-tronco de membrana amniótica de animais, já que a literatura a este respeito, não é tão ampla quanto à de humanos. Neste projeto estabelecemos a cultura de células-tronco de membrana amniótica (MA) de fetos caninos, caracterizando as células in vitro e in vivo. As células de MA foram obtidas a partir de um procedimento cirúrgico de histerectomia em cadelas prenhas, durante campanhas de castração da prefeitura da cidade de São Paulo. As células de MA foram caracterizadas in vitro, observando-se características semelhantes a outras células-tronco mesenquimais. Porém, quando foi analisado o seu comportamento in vivo, observamos a formação de um tumor de crescimento rápido, aproximadamente um mês, após o inóculo dessas células em 10 camundongos imunossuprimidos nude, sendo o tumor identificado histologicamente como um carcinoma embrionário. Diante do comportamento biológico formando um tumor in vivo, inferimos que células-tronco provenientes de membrana amniótica de cães não devem ser usadas para aplicação com objetivos terapêuticos em animais, pelo menos até que novas coletas sejam realizadas para que se possa confirmar ou não este comportamento. / The human amniotic membrane has taken an extremely important role in regenerative medicine in recent years, especially in dermatology and ophthalmology, and its promising use in treating diseases for which current therapy is ineffective. In addition, the amniotic membrane has human mesenchymal stem cells, which exhibit plasticity and have been applied to tissue regeneration. However, very little is known about the plastic capacity and the use of stem cells from amniotic membrane of animals, since the literature in this regard, it is not as broad as those of humans. In this project we established a culture of amniotic stem cells of dog, characterizing these cells in vitro and in vivo. The cells were obtained from a surgical procedure for hysterectomy in pregnant bitches, during castration\'s campaigns of the São Paulo\'s municipality. The cells were characterized in vitro, observing characteristics similar to other mesenchymal stem cells. In spite of their behavior, in vivo we observed the formation of a fast-growing tumor about a month after the inoculation of these cells in 10 immunosuppressed mice, being the tumor identified histologically as an embryonic carcinoma. Considering the biological behavior of forming a tumor in vivo, we infer that stem cells from amniotic membrane of dogs should not be used for application for therapeutic purposes in animals, at least until other collections are carried out so that it can be confirmed or not.

Background: Temporary mechanical circulatory support device without sternotomy has been highly advocated for severe cardiogenic shock patient but little is known when coupled with amniotic stem cell therapy. Case presentation: This case reports the first dual therapy of temporary left ventricular extracorporeal device CentriMag with distal banding technique and human amniotic stem cell injection for treating a severe refractory cardiogenic shock of an 68-year-old female patient. A minimally-invasive off-pump LVAD was established by draining from the left ventricle and returning to the right axillary artery with distal arterial banding to prevent right upper extremity hyperperfusion. Amniotic stem cells were injected intramyocardially at the left ventricular apex, lateral wall, inferior wall, and right subclavian vein. Conclusion: The concomitant use of the temporary minimally-invasive off-pump CentriMag placement and stem cell therapy not only provided an alternative to cardiopulmonary bypass and full-median sternotomy procedures but may have also synergistically enhanced myocardial reperfusion and regeneration.

Orientador: Jose Guilherme Cecatti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T02:22:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dertkigil_MarciaSanJuan_M.pdf: 457919 bytes, checksum: d1358d139b645249677efe81ba78ad49 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Objetivo - Avaliar as possíveis mudanças no volume de líquido amniótico em gestantes submetidas à imersão em água durante atividade física moderada. Método: Foi realizado um estudo prospectivo comparando o ILA (índice de líquido amniótico) antes e depois da imersão em água e atividade física. Foram selecionadas gestantes do Ambulatório de Pré Natal Normal do Hospital das Clínicas da Universidade Estadual de Campinas, que aceitaram participar do estudo sobre atividade física na gestação. As gestantes foram alocadas aleatoriamente em dois grupos (com ou sem hidroginástica, respectivamente grupo A ou B). As gestantes do grupo A praticaram atividade física moderada na água, em imersão subtotal, três vezes por semana, com cinqüenta minutos cada sessão, em piscina aquecida a 30º C, desde o segundo trimestre da gestação até o parto. Foram excluídas mulheres com antecedentes de duas ou mais cesáreas, gravidez de risco ou condições que contra-indicassem a prática de atividade física (hipertensão arterial, placenta prévia e história de abortos de repetição, etc.). As gestantes foram avaliadas semanalmente, a partir de 20 semanas, para estimativa do ILA e edema pré-imersão (antes da sessão de hidroginástica) e pós-imersão (após a hidroginástica). Um segundo avaliador também obtinha dados do ILA das gestantes para avaliação da variabilidade inter-observador. Para os procedimentos de análise, foram utilizados os programas Epi.Info 2000 e SAS. Na análise estatística, as variáveis quantitativas foram comparadas através do teste t de Student ou do teste não paramétrico de Wilcoxon. Para a comparação da variabilidade das medidas inter-observador, foi utilizado o coeficiente de correlação linear. Foi estabelecido um nível de significância de 5%. Resultados: No total, 25 gestantes participaram do estudo, entre 19 e 36 anos, entre maio de 2003 e dezembro de 2004, tendo sido realizadas 232 avaliações do ILA pré e pós-imersão nestas gestantes, com uma média de 9,28 avaliações por mulher. Verificou-se aumento do ILA pós-imersão em relação ao ILA pré-imersão em todas as idades gestacionais estudadas, variando entre 8,8 e 21,5 % de aumento. Essa variação foi significativa para a grande maioria das idades gestacionais e não houve uma tendência significativa de aumento ou diminuição desta diferença com a idade gestacional. Houve uma boa correlação das medidas do ILA pré e pós-imersão entre os dois examinadores, com coeficiente de correlação entre os examinadores respectivamente de 0,78 e de 0,70. O edema de membros inferiores esteve presente em cerca de 23% das observações após a 29º semana, e regrediu após a imersão. Conclusões: houve um aumento significativo do ILA em quase todas as idades gestacionais, podendo ser efetivo o tratamento de imersão em água para aumentar o ILA / Abstract: Objective - To evaluate possible changes in the amniotic fluid index (AFI) among pregnant women practicing moderate physical activity in water immersion. Method: a prospective study was performed, comparing the AFI pre and post immersion in water for physical activity. Pregnant women from the Pre Natal Outpatient Clinic in the hospital of the University of Campinas who accepted to participate in the study on physical activity during pregnancy were selected. They were randomly allocated in two groups (with and without water aerobic, respectively group A and B). The women in group A practiced moderate physical activity in water under subtotal immersion, three times a week, in sessions of 50 minutes each, in swimming pool heated at 30º C, from the second trimester of pregnancy until delivery. Women with history of two or more cesarean sections, high risk pregnancy or conditions contra-indicating physical activity practice (hypertension, placenta previa, history of recurrent abortions, etc.) were excluded. The women were evaluated weekly with an ultrasound exam in order to estimate the pre and post immersion AFI and also a clinical screening for edema. A second examiner also obtained the AFI values in order to evaluate the inter observer variability. For statistical analysis the programs Epi.Info 2000 and SAS were used. The quantitative variables were compared with Student t or non parametric Wilcoxon test. For evaluation of inter observer variability of the measures, the linear correlation coefficient was used. A 5% significance level was previously determined. Results: a total of 25 pregnant women participated in the study between May 2003 and December 2004, with age ranging from 19 to 36 years and 232 ultrasound evaluations of pre and post immersion AFI, with a mean of 9.28 exams per woman. An increase in the post immersion AFI compared to pre immersion was observed in all gestational ages studied, ranging from 8.8 and 21.5%. These changes were significant for the vast majority of gestational ages and there was not a significant trend of increase or decrease of this difference with gestational age. There was a good agreement on pre and post immersion AFI values between both examiners, with a correlation coefficient of respectively 0.78 and 0.70. The edema of legs was detected in around 23% of weekly observations after 29 weeks and decreased after immersion. Conclusions: there was a significant increase of AFI in almost all gestational ages, then the treatment of immersion in water for increasing the AFI could be effective / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第22322号 / 医博第4563号 / 新制||医||1041(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 竹内 理, 教授 椛島 健治, 教授 安達 泰治 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

No description available.

No description available.

Yes / The gold standard substrate for the ex vivo expansion of human limbal stem cells (LSCs) remains the human amniotic membrane (HAM) but this is not a defined substrate and is subject to biological variabil-ity and the potential to transmit disease. To better define HAM and mitigate the risk of disease transmis-sion, we sought to determine if decellularisation and/or c-irradiation have an adverse effect on culture growth and LSC phenotype. Ex vivo limbal explant cultures were set up on fresh HAM, HAM decellularised with 0.5 M NaOH, and 0.5% (w/v) sodium dodecyl sulfate (SDS) with or without c-irradiation. Explant growth rate was measured and LSC phenotype was characterised by histology, immunostaining and qRT-PCR (ABCG2, DNp63, Ki67, CK12, and CK13). Ƴ-irradiation marginally stiffened HAM, as measured by Brillouin spectromicroscopy. HAM stiffness and c-irradiation did not significantly affect the LSC phe-notype, however LSCs expanded significantly faster on Ƴ-irradiated SDS decellularised HAM (p < 0.05) which was also corroborated by the highest expression of Ki67 and putative LSC marker, ABCG2. Colony forming efficiency assays showed a greater yield and proportion of holoclones in cells cultured on Ƴ-irradiated SDS decellularised HAM. Together our data indicate that SDS decellularised HAM may be a more efficacious substrate for the expansion of LSCs and the use of a c-irradiated HAM allows the user to start the manufacturing process with a sterile substrate, potentially making it safer.

Linfedema é uma condição crônica que predispõe a uma substancial morbidade e perda da função do órgão ou tecido afetado. Ele não tem cura e em longo prazo leva a dificuldades físicas e psicológicas ao paciente, tornando-se um grande desafio para os médicos. Infelizmente, é triste constatar que aproximadamente 400 anos após a descoberta dos vasos linfáticos, não há cura para o linfedema, sendo o tratamento baseado em drenagem linfática manual através de massagem e limitadas intervenções de fisioterapia, ambas visando redução do volume de edema, o que fornece alívio parcial para os indivíduos afetados que não garantem o desaparecimento da fibrose, aparentemente irreversível. Por isso, estudos que proporcionem novas intervenções, como a terapia celular com células-tronco, são de grande interesse. Neste trabalho tivemos como objetivo realizar terapia celular de linfedema murino utilizando células-tronco da membrana amniótica. Em um primeiro momento, a obtenção do modelo de insuficiência linfática foi feita com base em Tabibiazar et al., 2006 onde uma microablação de 2 mm em toda a circunferência foi feita na cauda do animal. Entretanto, após 30 dias de indução uma regressão espontânea foi observada inviabilizando a utilização deste modelo. Após vasta pesquisa na literatura outro modelo de indução de linfedema (Shimizu et al., 2012) foi encontrado, onde os autores fazem uma microablação cirúrgica, mantendo um flap de 4 mm na região ventral. Neste trabalho os autores obtiveram um linfedema estável por no mínimo 30 dias. Com base nestes achados, o modelo de linfedema murino induzido baseado em Shimizu foi realizado e após a comprovação desta estabilidade por 60 dias, esse modelo foi utilizado para indução do linfedema. Após esta caracterização, os animais que tiveram o linfedema induzido foram submetidos a terapia celular utilizando 0,5X106 células-tronco da membrana amniótica humana (MAh) ou saco vitelino canino (SVc) no momento da indução. Animais sem lesão, com lesão (SHAM) e tratados apenas com solução fisiológica (placebo) também foram analisados. O monitoramento do linfedema na cauda foi feito através de acompanhamento clínico, registro fotográfico e mensura do diâmetro caudal a cada 2-3 dias. Ao final do estudo, os animais foram eutanasiados, tiveram suas caudas removidas e foram submetidos a avaliação dos efeitos terapêuticos da terapia celular através de análise do exsudato, análises histológicas (HE, picrossírius) e imuno-histoquímicas. A histológica obtida por coloração de HE além de apresentar o melhor resultado quando comparado com as demais técnicas, possibilitou avaliar as alterações patológicas pertinentes de cada amostra, revelando efeitos benéficos da terapia quando comparados com SHAM e placebo. Já, a coloração Picrossírius permitiu visualizar além das alterações estruturais, a inversão da predominância da expressão de colágeno do tipo I, por colágeno do tipo III nos tecidos estruturalmente comprometidos. O resultado do conjunto de análises das amostras apresentou o padrão linfedematoso esperado para os grupos SHAM e placebo, porém também mostrou um processo inflamatório muito menor e mais curto nos grupos MAh, e SVc, permitindo sugerir que a terapia celular causou um impacto favorável e os animais apresentaram resultados muito próximos aos padrões exibidos pelo grupo controle. / Lymphedema is a chronic condition, which predisposes to substantial morbidity and loss of function of the affected organ or tissue. It has no cure and, in the long term, leads patients to physical and psychological problems, which is a major challenge for doctors. Unfortunately, it is sad to realize that, approximately 400 years after the discovery of the lymphatic vessels, there is no cure for lymphedema. The treatment is based on manual lymphatic drainage through massage and limited physiotherapy interventions. Both techniques aim at reducing the volume of the edema, which provides partial relief for affected individuals, but do not guarantee the disappearance of the fibrosis, which is, apparently, irreversible. Therefore, studies that provide new interventions, such as stem cell therapy, are of great interest. In this study, we carried out induced murine lymphedema using human amniotic membrane stem cells. At first, we obtained the model of lymphatic insufficiency based on Tabibiazar et al., 2006, in which a 2 mm microablation throughout the circumference was made in the tail of the animal. However, after 30 days of induction, a spontaneous regression was observed, making this model unusable. After extensive literature research, another model of lymphedema induction (Shimizu et al., 2012) was found. In this model, the authors perform a surgical microablation, maintaining a 4 mm flap in the ventral region. The authors obtained stable lymphedema for at least 30 days. Based on these findings, the model of induced murine lymphedema, based on Shimizu et al., 2012, was performed and, after proving this stability for 60 days, this model was used for the induction of murine lymphedema. After this characterization, the animals that have had induced lymphedema were subjected to cell therapy using 0.5X106 human amniotic membrane stem cells (MAh) or canine yolk sac (SVc) at the time of induction. Animals without lesion, with lesion (SHAM) and treated only with solution were also analyzed. The monitoring of lymphedema in the tail was done through clinical follow-up, photographic record and caudal diameter measurement every 2-3 days. At the end of the study, the animals were euthanized, had their tails removed, and were subjected to evaluation of the therapeutic effects of the cell therapy through exudate analysis, histological analysis (HE, picrosirius) and immunohistochemistry analysis. The histological obtained by HE staining, besides presenting the best result when compared to the other techniques, allowed to evaluate the pertinent pathological alterations of each sample, revealing beneficial effects of the therapy when compared to SHAM and placebo. Picrosirius staining allowed to visualize, in addition to the structural alterations, the reversal of the predominance of type I collagen expression by type III collagen in structurally compromised tissues. The result of the sample analysis showed the expected lymphomatoid pattern for the SHAM and placebo groups, but also showed a much shorter and shorter inflammatory process in the MAh and SVc groups, suggesting that the cell therapy had an impact and the animals presented results very close to the standards presented by the control group.

O cão é um excelente modelo pré-clínico para o estudo de doenças, testes farmacológicos e novas terapias para futura aplicação em humanos. Desta forma, estudamos o modelo canino como fonte de células tronco de anexos fetais, o líquido amniótico, alantóide e conteúdo vitelino. Uma vez que hoje, as células tronco apresentam uma esperança na cura de diversas doenças tanto nos cães, como no ser humano. Sendo assim, caracterizamos e estudamos o potencial de diferenciação dessas células, isoladas após a técnica de ovário salpingo histerectomia, de cadelas em campanhas de castração. Após o isolamento e a caracterização, somente foi estabelecida a cultura do líquido amniótico e alantóide. Para caracterizar as células, isoladas no intuito de comprovar que são células tronco verdadeiras, os seguintes Imunomarcadores foram usados, vimentina, nestina, citoqueratina-18 e oct-4, sendo os três primeiros positivos para células do líquido amniótico e alantóide. Induzimos a diferenciação dessas células para osso, cartilagem e gordura, utilizando protocolos previamente estabelecidos. As células tronco do líquido amniótico limitaram-se à diferenciação condrogênica e osteogênica enquanto que as células tronco do alantóide, limitaram-se a diferenciação condrogênica. Ao mesmo tempo, ambos os tipos celulares, não prosseguiram à diferenciação adipogênica. Surpreendentemente, o meio de diferenciação para gordura, induziu a mudança morfológica nestas células que passaram a apresentar a morfologia típica de células neuronais. Podemos concluir que provavelmente para diferenciação adipogênica, é preciso desenvolver outro meio de cultura, por outro lado, esse resultado sugere que devemos explorar o potencial neurogênico desses tipos celulares. / The dog is an excellent preclinical model for the study of diseases, pharmacological tests and new therapies for future application in humans. Thus, we studied the canine model as a source of stem cells from fetal membranes, amniotic fluid, allantois and fluid yolk. Since today, stem cells have a hope in curing various diseases in both dogs and humans. Therefore, we characterize and study the differentiation potential of these cells, isolated after the technique of ovarian salpingo hysterectomy. After the isolation and characterization, was only established the culture of amniotic and allantois fluid. To characterize the cells isolated in order to demonstrate that they are true stem cells, the following were used antibodies, vimentin, nestin, cytokeratin-18 and oct-4. The cells were reactive positively to vimentin, nestin, cytokeratin. We induced the differentiation of these cells osteogenic, chondrogenic, adipogenic, using previously established protocols. Stem cells from amniotic fluid were restricted to chondrogenic and osteogenic differentiation while the stem cells of the allantois, limited to chondrogenic differentiation. At the same time, both cell types, were not able to adipogenic differentiation. Surprisingly, the means of adipogenic differentiation, induced the typical morphology of neuronal cells. We can conclude that probably for adipogenic differentiation, we must develop other culture media, on the other hand, this result suggests that we should explore the neurogenic potential these cell types.