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Interação angiotensina-(1-7) e bradicinina na microcirculação mesentérica, in vivo in situ. / Synergistic effect of angiotensin-(1-7) on bradykinin arteriolar dilation in vivo.Oliveira, Maria Aparecida de 11 July 2000 (has links)
Interação entre angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] e bradicinina (BK) foi determinada no mesentério de ratos Wistar anestesiados utilizando-se microscopia intravital. Aplicação tópica de BK e Ang-(1-7) induziram vasodilatação que foi abolida por HOE-140 e A-779, respectivamente. Ang-(1-7) (100 pmol) potencializou a vasodilatação de BK (1 pmol) mas não a vasodilatação promovida por acetilcolina, nitroprussiato de sódio, histamina e ácido araquidônico. O efeito potencializador de Ang-(1-7) sobre BK foi abolido por A-779, HOE-140, indometacina, L-NAME e TEA, entretanto, losartan não bloqueou este efeito. Enalaprilato aumentou a resposta vasodilatadora de BK e Ang-(1-7) e não alterou o efeito potencializador do segundo sobre o primeiro. Conclui-se que: 1)efeito potencializador de Ang-(1-7) sobre BK depende da interação de ambos com seus respectivos receptores; 2)é dependente de óxido nítrico, produtos da cicloxigenase e hiperpolarização de membrana via canais de potássio; 3) o mecanismo de potencialização parece não depender da atividade catalítica da ECA. / The interaction between angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] and bradykinin (BK) was determined in the mesentery of anesthetized Wistar rats using intravital microscopy. The response-induced by topical application of BK (1, 10 and 30 pmol), Ang-(1-7) (1, 10, 100 and 1000 pmol) and Ang-(1-7) (100 pmol) + BK (1 pmol) was determined in mesenteric arterioles (15-20 mm diameter). The BK (1 pmol)- and Ang-(1-7) (100 pmol)- induced vasodilation was abolished by BK B2 receptor antagonist HOE-140 (100 pmol applied during 60 seconds) and the Ang-(1-7) antagonist [d-Ala7]-Ang-(1-7)] (A-779) (100 pmol applied during 15 seconds), respectively. Indomethacin (5 mg/kg; IM, 30 min before), a cyclooxygenase inhibitor; L-NAME (10 nmol; topical application, 3 min before), a NO synthase inhibitor, decreased the Ang-(1-7)-induced vasodilation. However, TEA (90 pmol; topical application), a non specific K+ channels blocker, did not alter the response to BK or Ang-(1-7). BK (1 pmol)-induced vasodilation, however, was potentiated by Ang-(1-7) 100 pmol. Sodium nitroprusside (38 pmol), acetylcholine (1,6 nmol), histamine (5,4 nmol) and arachdonic acid (10 nmol) responses were not modified by Ang-(1-7) 100 pmol. The Ang-(1-7)-potentiating effect on BK-induced vasodilation was abolished by A-779, HOE-140, indomethacin, L-NAME and TEA. Losartan (15 mg/kg.IV, 40 min before), an AT1 angiotensin receptor antagonist was without effect. On the other hand, enalaprilat treatment (10 mg/kg; IV, 30 min before), to inhibit angiotensin-converting enzyme (ACE), enhanced the BK and Ang-(1-7)-induced vasodilation but did not modify the effect of Ang-(1-7) on BK vasodilation. In conclusion, the potentiation of BK-induced vasodilation by Ang-(1-7) is a receptor-mediated phenomenon dependent on cyclooxygenase-related products, NO release and K+ channel-mediated membrane hyperpolarization. The potentiating mechanism, apparently, is not related to ACE catalytic activity.
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Os efeitos da angiotensina-(1-7) sobre o trocador Na+/H+ (isoforma NHE3) e a [Ca2+]i em túbulos proximais renais de ratos espontaneamente hipertensos. / The effects of Angiotensin-(17) on the Na+/H+ exchanger (isoform NHE3) and on [Ca2+]i in proximal tubules of spontaneously hypertensive rats.Branco, Regiane Cardoso Castelo 19 September 2016 (has links)
A ação aguda direta da Ang-(1-7) sobre o fluxo reabsortivo de bicarbonato (JHCO3-) foi avaliada por microperfusão estacionária in vivo em túbulos proximais de ratos utilizando microelétrodo sensível a H+. Em ratos WKY, a Ang-(1-7) tem efeito bifásico sobre o NHE3: em baixas concentrações causa queda do JHCO3-, enquanto que em altas concentrações estimula o JHCO3-. Em ratos SHR, a Ang-(1-7) demonstrou efeitos opostos aos dos ratos WKY; a Ang-(1-7; 10-9 M) aumentou o JHCO3-, enquanto a Ang (1-7; 10-6 M) causou significante queda do JHCO3-. Em adição, monitoramos fluorimétricamente a concentração de cálcio citosólico ([Ca2+]i) em túbulos proximais isolados, por meio do probe sensivél a cálcio FURA-2-AM. Nossos dados indicam que a [Ca2+]i em ratos WKY no controle é 99,7 ± 2,28 nM; a Ang-(1-7) aumenta esse valor. Em animais SHR o controle é 94,3 ± 1,66 nM; a Ang-(1-7) aumenta esse valor. Em conclusão, nossos dados indicam que a interação dos efeitos opostos dose dependente da Ang-(1-7) e Ang II sobre JHCO3- e a [Ca2+]i representa importante mecanismo de regulação fisiológica do volume e do pH intra-extracelular. / Direct acute effects of Ang-(1-7) on the resorptive bicarbonate flow (JHCO3-) was evaluated by stationary microperfusion in vivo in proximal tubules using microelectrode sensitive to H+. In WKY control rats, Ang-(1-7) has biphasic effects on Na+/H+ exchanger isoform 3 (NHE3): at low dose inhibits and at higher one stimulates the NHE3. In SHR rats, Ang-(1-7) displayed opposite effects on SHR when compared to WKY rats: Ang- (1-7) at low dose increases JHCO3- whereas Ang (1-7) at higher dose reduces JHCO3-. In addition, we have fluorimetrically monitored cytosolic calcium ([Ca2+]i) in isolated proximal tubule through FURA-2-AM. Our data show that [Ca2+]i in the WKY control group is 99.7 ± 2.28 nM. Ang-(1-7) at 10-9 or 10-6 M increases [Ca2+]i. In SHR control rats [Ca2+]i is 94.3 ± 1.66 nM; Ang-(1-7) increase [Ca2+]i. Thus, our data are indicating that the interaction of the opposing dose-dependent effects of Ang-(1-7) and Ang II on JHCO3- and [Ca2+]i may represent an important physiological mechanism for regulating the intra and extracellular volume and pH in normotensive and hypertensive individuals.
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Interação angiotensina-(1-7) e bradicinina na microcirculação mesentérica, in vivo in situ. / Synergistic effect of angiotensin-(1-7) on bradykinin arteriolar dilation in vivo.Maria Aparecida de Oliveira 11 July 2000 (has links)
Interação entre angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] e bradicinina (BK) foi determinada no mesentério de ratos Wistar anestesiados utilizando-se microscopia intravital. Aplicação tópica de BK e Ang-(1-7) induziram vasodilatação que foi abolida por HOE-140 e A-779, respectivamente. Ang-(1-7) (100 pmol) potencializou a vasodilatação de BK (1 pmol) mas não a vasodilatação promovida por acetilcolina, nitroprussiato de sódio, histamina e ácido araquidônico. O efeito potencializador de Ang-(1-7) sobre BK foi abolido por A-779, HOE-140, indometacina, L-NAME e TEA, entretanto, losartan não bloqueou este efeito. Enalaprilato aumentou a resposta vasodilatadora de BK e Ang-(1-7) e não alterou o efeito potencializador do segundo sobre o primeiro. Conclui-se que: 1)efeito potencializador de Ang-(1-7) sobre BK depende da interação de ambos com seus respectivos receptores; 2)é dependente de óxido nítrico, produtos da cicloxigenase e hiperpolarização de membrana via canais de potássio; 3) o mecanismo de potencialização parece não depender da atividade catalítica da ECA. / The interaction between angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] and bradykinin (BK) was determined in the mesentery of anesthetized Wistar rats using intravital microscopy. The response-induced by topical application of BK (1, 10 and 30 pmol), Ang-(1-7) (1, 10, 100 and 1000 pmol) and Ang-(1-7) (100 pmol) + BK (1 pmol) was determined in mesenteric arterioles (15-20 mm diameter). The BK (1 pmol)- and Ang-(1-7) (100 pmol)- induced vasodilation was abolished by BK B2 receptor antagonist HOE-140 (100 pmol applied during 60 seconds) and the Ang-(1-7) antagonist [d-Ala7]-Ang-(1-7)] (A-779) (100 pmol applied during 15 seconds), respectively. Indomethacin (5 mg/kg; IM, 30 min before), a cyclooxygenase inhibitor; L-NAME (10 nmol; topical application, 3 min before), a NO synthase inhibitor, decreased the Ang-(1-7)-induced vasodilation. However, TEA (90 pmol; topical application), a non specific K+ channels blocker, did not alter the response to BK or Ang-(1-7). BK (1 pmol)-induced vasodilation, however, was potentiated by Ang-(1-7) 100 pmol. Sodium nitroprusside (38 pmol), acetylcholine (1,6 nmol), histamine (5,4 nmol) and arachdonic acid (10 nmol) responses were not modified by Ang-(1-7) 100 pmol. The Ang-(1-7)-potentiating effect on BK-induced vasodilation was abolished by A-779, HOE-140, indomethacin, L-NAME and TEA. Losartan (15 mg/kg.IV, 40 min before), an AT1 angiotensin receptor antagonist was without effect. On the other hand, enalaprilat treatment (10 mg/kg; IV, 30 min before), to inhibit angiotensin-converting enzyme (ACE), enhanced the BK and Ang-(1-7)-induced vasodilation but did not modify the effect of Ang-(1-7) on BK vasodilation. In conclusion, the potentiation of BK-induced vasodilation by Ang-(1-7) is a receptor-mediated phenomenon dependent on cyclooxygenase-related products, NO release and K+ channel-mediated membrane hyperpolarization. The potentiating mechanism, apparently, is not related to ACE catalytic activity.
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Conseqüências do estresse crônico ou agudo sobre as ações vasculares do Angiotensia II e da Angiotensina 1-7 em carótidas de ratos / Consequences of acute or chronic stress on the vascular actions of angiotensin II and angiotensin 1-7 in the rat carotid artery.Banin, Tamy Midori 17 June 2011 (has links)
O estresse crônico ou agudo pode alterar diversas funções relacionadas ao sistema cardiovascular, ocasionando doenças cardíacas. O sistema renina-angiotensina (SRA), importante participante do controle dessas funções, é profundamente afetado em resposta ao estresse. A angiotensina II (Ang II) é reconhecida como hormônio multifuncional que influencia diversos processos celulares importantes para a regulação da função vascular, incluindo regulação do tônus vascular, crescimento celular, dentre outros. Outro componente do SRA é a angiotensina 1-7 (Ang 1-7), suas ações vasculares envolvem aumento na produção de prostanóides vasodilatadores, óxido nítrico e fator hiperpolarizante derivado do endotélio. O objetivo do presente trabalho foi avaliar as conseqüências do estresse, agudo ou crônico, sobre as atividades vasomotoras da Ang II e da Ang 1-7, os mecanismos envolvidos na contração e relaxamento induzidos, respectivamente, por estes peptídeos e as modificações na expressão dos receptores AT1, AT2 e Mas, em carótida de ratos. O estresse crônico levou à diminuição do ganho de peso corpóreo dos animais, promoveu remodelamento das artérias carótidas, com significativo aumento da camada média acompanhada de redução da resposta de relaxamento da Ang 1-7, embora a expressão de seus receptores, do tipo Mas, estivesse aumentada. A maior expressão de receptores de Ang II, AT1 e AT2, desencadeada pelo estresse agudo não alterou a resposta contrátil deste peptídeo. Em carótidas de animais submetidos ao estresse crônico observa-se redução do Emax da Ang II e da Ang 1-7 após incubação com indometacina, sugerindo que prostanóides estão envolvidos na resposta vascular tanto da Ang II quanto da Ang 1-7 em situações de exposição prolongada ao estresse. A maior expressão de nitrotirosina em carótidas de animais expostos tanto ao estresse agudo quanto crônico, demonstra que o óxido nítrico e estresse oxidativo parecem estar relacionados às alterações vasomotoras, em resposta aos peptídeos Ang II e Ang 1-7. Foi evidenciado que o estresse agudo eleva significativamente os níveis plasmáticos de corticosterona e a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). Estes dados sugerem que os estresses agudo e crônico, por imobilização, alteram a expressão de receptores do SRA e a vasoatividade de carótidas em resposta à Ang II e Ang 1-7 em função de diferentes mecanismos celulares. / The chronic or acute stress can alter various functions of the cardiovascular system, causing heart disease. The renin-angiotensin system (RAS), a major participant in control of these functions, is profoundly affected in response to stress. Angiotensin II (Ang II) is recognized as a multifunctional hormone that influences many cellular processes important for the regulation of vascular function, including regulation of vascular tone, cell growth, among others. Another component of the RAS is angiotensin 1-7 (Ang 1-7), their actions involve an increase in vascular production of prostanoid vasodilators, nitric oxide and endothelium-derived hyperpolarizing factor. The aim of this study was to evaluate the consequences of chronic or acute stress on vasomotor activity of Ang II and Ang 1-7, the mechanisms involved in contraction and relaxation induced, respectively, by these peptides and the changes in the expression of AT1, AT2 and Mas in rat carotid artery. Chronic stress has led to decreased body weight gain of animals, promoted remodeling of carotid arteries with a significant increase in the medial layer accompanied by a reduction of the relaxation response to Ang 1-7, although the expression of their receptors (Mas) was increased. The highest expression of Ang II receptors, AT1 and AT2, triggered by acute stress did not alter the contractile response of this peptide. In carotid arteries of animals subjected to chronic stress is observed reduction of Emax of Ang II and Ang 1-7 after incubation with indomethacin, suggesting that prostanoids are involved in the vascular response of both Ang II and Ang 1-7 in exposed situations prolonged stress. The greater expression of nitrotyrosine in carotids from animals exposed to both acute or chronic stress, demonstrates that nitric oxide and oxidative stress appear to be related to vasomotor changes in response to peptides Ang II and Ang 1-7. It was shown that acute stress increases plasma levels of corticosterone and the production of reactive oxygen species (ROS). These data suggest that acute and chronic stress by immobilization, alter the expression of receptors of RAS and vasomotor activity in carotid artery in response to Ang II and Ang 1-7 by different cellular mechanisms.
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Papel da alça ECA2/Ang 1-7/Mas na prevenção da doença hepática gordurosa não alcoólica por meio do treinamento físico aeróbio / Role of the ACE2/Ang 1-7/Mas in the prevention of non-alcoholic fatty liver disease through aerobic physical trainingLima, Vanessa Cristina Fortunato 06 December 2017 (has links)
A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) consiste na alteração morfofisiológica do fígado decorrente do acúmulo de lipídios nos hepatócitos. O desenvolvimento de DHGNA pode estar associado à obesidade e o diabetes tipo 2, e um dos possíveis mecanismos mediadores é a hiperatividade da alça ECA/Ang II/AT1 do sistema renina angiotensina (SRA). Por outro lado, evidências mais recentes mostraram que a ativação da alça ECA2/Ang 1-7/Mas do SRA age na direção oposta, podendo atenuar as manifestações clínicas das doenças metabólicas. O treinamento físico aeróbio (TFA) tem sido amplamente recomendado para a prevenção e o tratamento de doenças metabólicas, inclusive da DHGNA, e parte das respostas benéficas podem estar associadas com a melhora do metabolismo oxidativo. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar se a prevenção da DHGNA por meio do TFA é mediada pela melhora do metabolismo hepático associada à ativação da alça do SRA ECA2/ Ang1-7/ Mas. Para isso, camundongos C57BL/6 foram separados em grupos (n=10/grupo) sedentários (SED) alimentados com dieta normocalórica (NO) ou de cafeteria (CAF) (SED-NO e SED-CAF, respectivamente) e submetidos ao TFA alimentados com dieta NO ou CAF (TF-NO e TF-CAF, respectivamente). O grupo SED-CAF apresentou maior ganho de peso corporal, conteúdo de lipídios e de IL-6 no fígado, e o TFA previniu esses aumentos no grupo TF-CAF. Não houve diferença na concentração sérica das enzimas ALT e AST, na expressão de genes relacionados com o metabolismo lipídico e na expressão das proteínas AMPK, PGC1- , SIRT-1, ACC e receptor Mas no fígado. Os grupos TF-NO e TF-CAF apresentaram maior atividade da ECA2 no soro comparados ao SED-NO e SED-CAF, porém a atividade da ECA2 e o conteúdo do peptídio Ang1-7 não foram diferentes entre os grupos. O TF-NO apresentou menor atividade da enzima ECA no fígado comparado ao grupo TF-CAF. Coletivamente, os dados obtidos permitem afirmar que o TFA preveniu a DHGNA evidenciado pelo menor conteúdo de lipídios e citocina pró-inflamatória IL-6, no entanto, essa resposta foi independente de mudanças na expressão de genes e de proteínas reguladoras do metabolismo hepático associada à alça do SRA ECA2/ Ang1-7/ Mas / Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) consists in the morphophysiological alteration of the liver due to the accumulation of lipids in the hepatocytes. The development of NAFLD may be associated with obesity and type 2 diabetes, and one of the possible mediating mechanisms is the hyperactivity of the ACE/Ang II/AT1 axis of the renin angiotensin system (RAS). On the other hand, evidence have shown that the activation of the ACE2/Ang 1-7/Mas have opposite effect, being able to attenuate clinical manifestations of the metabolic diseases. Aerobic physical training (APT) has been widely recommended for the prevention and treatment of metabolic diseases, including NAFLD, and some of the beneficial responses may be associated with improved oxidative metabolism. Thus, the aim of this study was to investigate whether the prevention of NAFLD by APT is mediated by the improvement of the metabolism associated with the activation of the RAS ACE2/Ang1-7/Mas axis. For this, C57BL/6 mice were separated into sedentary groups (SED) fed normocaloric (NO) or cafeteria (CAF) diet (SED-NO and SED-CAF, respectively) and trained with APT fed NO or CAF diet (TF-NO and TF-CAF, respectively). The SED-CAF group presented higher body weight gain, lipid and IL-6 content in the liver, and APT prevented these increases in the TF-CAF group. No differences were observed in the concentration of ALT and AST enzymes, in the expression of genes related to lipid metabolism and in the expression of AMPK, PGC1- , SIRT-1, ACC and receptor Mas in the liver. TF-NO and TF-CAF groups had higher serum ACE2 activity compared to SED-NO and SED-CAF, however ACE2 activity and Ang1-7 content were not different among groups. TF-NO showed lower ACE activity in the liver compared to the TF-CAF group. Collectively, the results showed that APT prevented NAFLD evidenced by the lower lipid content and pro-inflammatory cytokine IL-6, however, this response is independent of changes in gene expression and in hepatic metabolism regulatory proteins expression associated with the SRA ACE2/Ang1-7/Mas axis
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Avaliação dos efeitos cardíacos da angiotensina 1-7 em modelo animal de hipertireoidismo. / Evaluation of cardiac effects of angiotensin 1-7 in an animal model of hyperthyroidism.Senger, Nathalia 17 August 2015 (has links)
A hipótese do presente estudo é que as ações cardioprotetoras da Angiotensina1-7 (Ang1-7) consigam atenuar os efeitos cardíacos dos hormônios tireoidianos. Ratos selvagens ou transgênicos que superexpressam Ang1-7 foram induzidos ao hipertireoidismo por injeções intraperitoneais de triiodotironina (T3) (7µg/100g/dia). Parâmetros de morfologia e função cardíaca foram avaliados, bem como os componentes do Sistema-Renina-Angiotensina no coração. Os elevados níveis de Ang1-7 nos animais transgênicos atenuaram os efeitos tróficos do T3 e o hiperdinamismo cardíaco, além de promover a melhora da função cardíaca. Os animais hipertireoideos apresentaram aumento da Angiotensina II, do receptor AT1 e da atividade da ECA2 no coração. In vitro, o tratamento com Ang1-7 (1000nM) foi capaz de impedir o aumento da área de superfície celular em cultura primária de cardiomiócitos neonatos tratados com T3 (10nM) por 24 horas. Sendo assim, estes dados demonstram, pela primeira vez na literatura, ações cardioprotetoras da Ang1-7 frente às ações cardíacas e hipertróficas do T3. / The aim of this study is to verify if Angiotensin1-7 (Ang1-7) may influence the cardiovascular effects induced by thyroid hormone. Wild or Transgenic rats that constitutively overexpress Ang1-7 (TGR-L3292) received intraperitoneal injections of T3 (7µg/100g/day) for 14 days in order to develop hyperthyroidism. Cardiac morphology, function parameters and RAS components were evaluated in the heart. High levels of Ang1-7 attenuated cardiac hypertrophy and hemodynamic parameters induced by T3. Ang1-7 treatment improved the cardiac function of hyperthyroid animals. Moreover, high levels of T3 increased Angiotensin II levels, AT1 receptor and ACE2 activity in the heart. Anti-hypertrophic effects of Ang1-7 were also observed in vitro. Ang1-7 treatment (1000nM) prevented the increase in cell surface area in primary cultures of neonatal cardiomyocytes treated with T3 (10nM) for 24 hours. For the first time, cardioprotective actions of Ang1-7 were observed in the heart of hyperthyroid animals.
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Efeitos da Angiotensina-(1-7) e Angiotensina II no inotropismo cardíaco e vasomotricidade coronariana: um complexo envolvimento entre os receptores angiotensinérgicos / Effects of Angiotensin-(1-7) and Angiotensin II in the cardiac inotropism and coronary vasomotricity: the complex involvement between angiotensinergic receptorsNunes, Allancer Divino de Carvalho 26 April 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-04-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Despite Angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] and Angiotensin II (Ang II) be
considered important regulators of the cardiovascular system, its direct effects
on cardiac contractility remain unclear and even controversial. Several studies,
using different preparations, have showed that Ang-(1-7) or Ang II produce
positive, negative or no inotropic effects. Thus, the aim of this study was to
increase the knowledge about the effect of the low concentration of Ang-(1-7)
and Ang II on cardiac contractility, coronary vascular function and the possible
receptors and mechanisms of action involved in these effects. The in vivo
effects of Ang-(1-7) and Ang II on cardiac contractility were evaluated in
anesthetized rats. The Ang-(1-7) 4 nmol/L and Ang II 40 nmol/L caused
negative inotropism in anesthetized rats. None of the peptides were able to
change heart rate or arterial blood pressure in anesthetized rats. The direct
effects of the Ang-(1-7) and Ang II on cardiac contractility were evaluated in
isolated perfused rat hearts. After a basal period (30-40 minutes), the hearts
were perfused for an additional 15 min with Ang-(1-7) and Ang II (20 pmol/L) in
presence or absence of Mas receptor antagonist A-779 (2 nmol/L), AT2
receptor antagonist PD1233190 (2 nmol/L), AT1 receptor antagonist Losartan
(1μmol/L), MrgD receptor antagonist D-PRO (2 nmol/L), ACE2 inhibitor DX600
(2nmol/L), Nitric Oxide synthase (NOS) inhibitor L-Name (10 nmol/L), Guanylyl
cyclase (GC) inhibitor ODQ (200 nmol/L) and Adenylyl cyclase (AC) inhibitor
MDL 12,330A (1μmol/L). Low concentrations of Ang-(1-7) and Ang II reduced
the left ventricular end-systolic pressure (LVESP). The A-779 did not blocked
the effect of Ang-(1-7) or Ang II. PD123319 and Losartan inhibited the Ang-(1-7)
but not Ang II-induced negative inotropic effects. On the other hand, D-PRO
was able to block the negative inotropic effect of the Ang II and Ang-(1-7).
Furthermore, L-Name, ODQ and MDL 12,330A inhibited the Ang-(1-7) but not
Ang II-induced negative inotropic effects. Similarly, low concentrations of Ang-
(1-7) and Ang II-induced coronary vasodilatation. The A-779, D-PRO, L-Name,
MDL 12,330A blocked the effect of Ang-(1-7) or Ang II. The DX600 blocked the
vasodilatation induced by Ang II. PD123319, Losartan and ODQ inhibited the
Ang-(1-7) but not Ang II-induced coronary vasodilatation. In addiction, the
pharmacological blocked and gene silencing of AT1 receptor in endothelial
human cells stimulated with Ang-(1-7) decreased AKT phosphorilation induced
by Ang-(1-7). These data demonstrate that Ang-(1-7) and Ang II, at picomolar
concentrations, induce significant and similar negative inotropic and coronary
vasodilatation effects involving complex interaction mechanisms between many
different receptors, altering intracellular signaling and their constitutive activity. / Embora a Angiotensina-(1-7) e Angiotensina II sejam considerados
importantes peptídeos para regulação do sistema cardiovascular, seus efeitos
sobre a contratilidade cardíaca ainda não estão totalmente elucidados.
Diversos estudos, utilizando diferentes preparações, têm demonstrado que a
Ang II e a Ang-(1-7) promovem efeito inotrópico positivo, negativo ou nenhum
efeito inotrópico. Diante disso, o objetivo deste estudo foi ampliar os
conhecimentos sobre os efeitos da Ang II e Ang-(1-7) no controle da
contratilidade ventricular e função vascular coronariana. Além disso,
avaliaremos o envolvimento dos receptores envolvidos nestes efeitos e os
possíveis mecanismos de ação. Os efeitos in vivo da Ang-(1-7) e Ang II na
contratilidade cardíaca foram avaliados em ratos anestesiados com uretana
através da canulação intraventricular esquerda. A infusão de Ang-(1-7) 4
nmol/L e Ang II 40 nmol/L promoveram inotropismo negativo em corações de
ratos anestesiados. Nenhum dos peptídeos foram capazes de alterar a pressão
arterial e frequência cardíaca em ratos anestesiados. Os efeitos diretos da Ang-
(1-7) e Ang II na contratilidade cardíaca foram avaliados em corações isolados
de ratos. Após o período basal (30-40 minutos), os corações foram perfundidos
durante 15 minutos com Ang-(1-7) ou Ang II na concentração de 20 pmol/L na
presença ou ausência de antagonista do receptor Mas A-779 (2 nmol/L),
antagonista do receptor AT2 PD123319 (2 nmol/L), antagonista do receptor
AT1 Losartan (1μmol/L), antagonista do receptor MrgD D-PRO (2
nmol/L),inibidor da enzima ECA2 DX600 (2nmol/L), inibidor de Óxido nítrico
sintase (NOS) L-Name (10 nmol/L), inibidor de Guanilato Ciclase (GC) ODQ
(200 nmol/L) e inibidor de Adenilato Ciclase (AC) MDL 12,330A (1μmol/L).
Concentrações picomolares de Ang-(1-7) e Ang II reduziram a pressão
intraventricular sistólica (PIS). O A-779 não bloqueou os efeitos da Ang-(1-7) ou
Ang II. PD123319 e Losartan inibiram somente o efeito inotrópico da Ang-(1-7).
Por outro lado, D-PRO foi capaz de bloquear o efeito inotrópico de ambos os
peptídeos angiotensinérgicos. Além disso, L-Name, ODQ e MDL 12,330A
bloquearam apenas o efeito inotrópico da Ang-(1-7). Semelhantemente, baixas
concentrações de Ang-(1-7) e Ang II induziram vasodilatação coronariana. O A-
779, D-PRO, L-Name, MDL 12,330A bloquearam a vasodilatação induzida por
Ang-(1-7) e Ang II. O DX600 bloqueou a vasodilatação coronariana induzida
por Ang II. PD 123319, Losartan e ODQ inibiram apenas a vasodilatação
coronariana induzida por Ang-(1-7). Além disso, o bloqueio farmacológico e o
silenciamento gênico do receptor AT1 em células endoteliais humanas
estimuladas com Ang-(1-7) reduziram a fosforilação de AKT promovida por este
peptídeo. Esses resultados demonstram que Ang-(1-7) e Ang II, em
concentrações picomolares induzem significante e similar efeito inotrópico
negativo e vasodilatação coronariana, envolvendo complexos mecanismos de
interação entre os receptores.
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Análises celulares e moleculares dos efeitos do peptídeo vasoativo angiotensina-(1-7) no processo tumoral pulmonar e a atuação do microrna 21-5P / Cellular and molecular analysis of the effects of the vasoactive peptide angiotensin-(1-7) in lung tumor process and the role of microrna 21-5PLima, Kelvin Furtado [UNESP] 15 April 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-04-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os diferentes tipos de cânceres estão entre as principais causas de morbidade e mortalidade em todo mundo, contabilizando 8,2 milhões de óbitos no ano de 2012. Dentre eles, o câncer de pulmão é o mais recorrente, sendo que o subtipo denominado câncer pulmonar de células não-pequenas (non-small cell lung cancer – NSCLC) é diagnosticado em 85% dos casos. Dada a importância epidemiológica do câncer pulmonar, associado ao platô atingido pelos tratamentos com quimioterapia e radioterapia, novas estratégias terapêuticas têm sido buscadas e neste contexto, o peptídeo vasoativo Angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] tem se mostrado bastante promissor. Além da participação em uma gama de processo fisiológicos no organismo, a Ang-(1-7) está sendo cada vez mais exploradas nos processos patológicos devidos suas funções vasodilatadora, anti-hipertensiva, anti-proliferativa e antitumoral. Outros estudos apontam ainda que uma melhor compreensão da regulação gênica nos processo tumorais poderia direcionar o desenvolvimento de outros métodos terapêuticos para o câncer de pulmão. Neste sentido, os microRNAs assumem posição ímpar por sua capacidade regulatória pós-transcriocional de vários genes, a citar o miR-21-5p superexpresso em vários tipos tumorais, incluindo o NSCLC. Portanto, o presente trabalho investigou os efeitos bioquímicos, moleculares e fisiológicos decorrentes do tratamento da linhagem celular tumoral A549 com Ang-(1-7), concomitantemente a análises comparativas dos efeitos da superexpressão do miR-21-5p nas células tumorais. Para isso foram utilizados os grupos celulares A549 controle e tratamento [10-7 M de Ang-(1-7)], e os clones A549-pEP-miR-Controle e A549-pEP-miR-21-5p. Análises bioquímicas mostraram que a presença do heptapeptídeo no grupo tratamento, e as condições de cultura dos clones estudados, causaram um aumento na síntese de lactato pelas células A549. Foi observado também que a Ang-(1-7) retarda o crescimento celular. Análises de expressão gênica não apontaram ativação do processo apoptótico em nenhuma das condições estudadas, entretanto o peptídeo Ang-(1-7) modula positivamente a expressão do gene tjp1 e negativamente a transcrição dos genes itgb8 e mmp-8, sugerindo que o tratamento celular com o heptapeptídeo fortaleça as interações celulares e dificulte os processo de migração e invasão celular. Estes dados são corroborados pelo ensaio de cicatrização da ferida o qual evidenciou que a Ang-(1-7) diminui a taxa de migração celular em comparação ao grupo controle. Por sua vez, a superexpressão do miR-21-5p intensifica consideravelmente a capacidade invasiva das células tumorais como observado no ensaio da gota de agarose. Conjuntamente, os resultados apontam para o potencial terapêutico da Ang-(1-7) no controle dos processos de adesão, migração e invasão celular, e corrobora o papel do miR-21-5p na evolução e intensificação dos processos tumorais. / The different types of cancers are among the leading causes of morbidity and mortality worldwide, accounting for 8.2 million deaths in 2012. Among them, lung cancer is the most frequent, and the subtype called non-small cell lung cancer (NSCLC) is diagnosed in 85% of cases. Given the epidemiological importance of lung cancer, associated with the plateau reached by chemotherapy and radiation therapies, new therapeutic strategies have been pursued and in this context, the vasoactive peptide Angiotensin-(1-7) [Ang- (1-7)] has shown quite promising. Besides participating in a range of physiological process in the body, Ang- (1-7) is being increasingly exploited in pathological processes due to its vasodilator, anti-hypertensive, anti-proliferative and anti-tumor functions. Other studies also indicate that a better understanding of gene regulation in tumor process could direct the development of other therapeutic methods for lung cancer. In this sense, microRNAs assume unique position due to its post-transcriocional regulatory capacity of several genes, for exemple the miR-21-5p upregulated in several tumor types, including NSCLC. Therefore, this study investigated the biochemical, molecular and physiological effects of Ang-(1-7) treatment on tumor cell line A549, concurrently to the comparative analysis of the effects of upregulation of miR-21-5p in tumor cells. In order to do this, the cell groups A549 control and treatment [10-7 M of Ang-(1-7)], and the A549-pEP-miR-control and A549-pEP-miR-21-5p clones were used. Biochemical analyzes showed that the presence of the heptapeptide in treatment group, and the culture conditions of the studied clones, caused an increase in lactate synthesis on A549 cells. It was also observed that Ang-(1-7) slows cell growth. Gene expression analysis showed no activation of apoptotic process in any of the conditions studied, though the peptide Ang-(1-7) positively modulates the expression of tjp1 gene and negatively the transcription of itgb8 and mmp-8 genes, suggesting that the cell treatment with the heptapeptide strengthen cell interactions and prevents cell migration and invasion. These data are corroborated by wound healing assay which showed that Ang-(1-7) decreases cell migration rate compared to the control group. In turn, the upregulation of miR-21-5p considerably enhances tumor cells invasiveness as observed in the agarose spot assay. Collectively, the results point to Ang-(1-7) therapeutic potential in controling cell adhesion, migration and invasion, and supports miR-21-5p role in the evolution and enhancement of tumor processes. / CNPq: 132514/2014-1
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Eixo ECA2/ANG-(1-7)/mas e sua regulação no processo de ovulação / Eca2/ang-(1-7)/mas axis and its regulation during the process of ovulationSantos, Joabel Tonellotto dos 28 February 2011 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The Renin-Angiotensin System (RAS) has been associated with various reproductive
functions, including the ovulatory cascade. Unlike angiotensin II (AngII), the role of
angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] has not been characterized in the ovary of mono-ovulatory
species. The objective of this study was to determine the Ang-(1-7) concentration in follicular
fluid and Ang-(1-7)-related enzymes and MAS receptor mRNA expression during the
ovulatory process in cattle. Forty cows were synchronized and those with follicular diameter
≥ 12 mm received GnRH analog (i.m.) to induce a LH peak and were ovariectomized at
different periods (0, 3, 6, 12 and 24 h). Follicular fluid was stored to measure Ang-(1-7).
Theca and granulosa cells were collected to evaluate gene expression by RT-qPCR assay. In a
second experiment, the effect of Ang-(1-7) and A-779 (MAS receptor inhibitor) on the
epiregulin mRNA expression by granulosa cells was evaluated in vitro. In the third
experiment, the hypothesis that Ang-(1-7) is essential for ovulation was tested using an in
vivo model by injecting A-779 intrafollicularly. Twenty synchronized cows were
intrafollicularly injected with A-779 or saline 0.9% (control group) when the follicles reached
a diameter of at least 12 mm and were challenged with an IM application of GnRH analogs.
The levels of Ang-(1-7) increased in the follicular fluid at 24 h post-treatment (p < 0.05).
Messenger RNA expression of MAS, ECA2, NEP and PEP was detected in theca and
granulosa cells at all periods after GnRH injection. In granulosa cells, ACE2, NEP and PEP
mRNA expression was regulated in different moments after GnRH treatment (p < 0.05). The
addition of Ang-(1-7) or A-779 was not able to change the pattern of Ereg mRNA expression
in our granulosa cell culture system. The intrafollicular application of A-779 (10-5M) did not
block ovulation when performed before the expected peak of LH (100% of cows ovulated in
treated and control groups). Differential expression of ACE2, NEP and PEP in granulosa cells
and increased concentrations Ang-(1-7) next ovulation may indicate a role of this peptide in
ovulation in cattle. / O Sistema Renina-Angiotensina (RAS) tem sido relacionado com diversas funções
reprodutivas, incluindo a cascata ovulatória. Ao contrário da Angiotensina II (AngII), a
função da Angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] ainda não está caracterizada no ovário de espécies
mono-ovulares como a bovina. Este estudo teve por objetivo determinar se os diferentes tipos
celulares de folículos pré ovulatórios expressam o receptor MAS para Ang-(1-7) e a enzima
conversora de angiotensina 2 (ECA2). Além disso, foi investigado se esses genes são
induzidos por LH durante o processo ovulatório. Quarenta vacas foram sincronizadas e
aquelas que alcançaram diâmetro folicular ≥ 12 mm receberam uma aplicação IM de GnRH e
foram ovariectomizadas via colpotomia em diferentes momentos (0, 3, 6, 12 e 24 h) após o
GnRH. O líquido folicular foi recuperado para dosagem de Ang-(1-7). As células da teca e da
granulosa foram isoladas e submetidas à extração de RNA e transcrição reversa. A expressão
relativa dos genes foi realizada por PCR em tempo real. Em um segundo experimento,
utilizando um modelo in vitro de cultivo de células de folículos ≥ 12mm, buscou-se avaliar o
efeito da Ang-(1-7) ou do bloqueio de seu receptor (MAS) na expressão de RNAm para
epirregulina (Ereg). No terceiro experimento, utilizando o modelo de injeção intrafolicular in
vivo, foi testada a hipótese de que Ang-(1-7) é essencial para a ovulação em bovinos. Vinte
vacas foram sincronizadas e quando os folículos atingiram um diâmetro mínimo de 12 mm,
receberam os tratamentos com A-779 (inibidor do receptor MAS) ou solução salina 0,9%
(grupo controle) e foram no momento da injeção intrafolicular desafiados com uma aplicação
IM de análogo de GnRH. Foi detectada a presença de Ang-(1-7) no líquido folicular, sendo
que seus níveis foram constantes até 12 h após o GnRH e aumentando (P <0,05), às 24 h após
o tratamento. A expressão de RNAm para MAS, ECA2, NEP e PEP foi detectada em células
da teca e granulosa em todos os períodos após a aplicação de GnRH. A expressão de RNAm
para ECA2, NEP e PEP, foi regulada nas células da granulosa em diferentes momentos após
tratamento com GnRH (P <0,05). Folículos pré-ovulatórios possuem Ang-(1-7) no líquido
folicular, bem como expressam RNAm para MAS, ECA2, NEP e PEP nas células da teca e
granulosa durante o processo ovulatório. A suplementação com Ang-(1-7), ou o bloqueio de
seu receptor nas doses utilizadas não foi capaz de alterar o padrão de expressão de RNAm
para Ereg em nosso sistema de cultivo de pedaços de folículos ≥ 12 mm. A aplicação
intrafolicular de A-779 (10-5 M) não bloqueou a ovulação quando realizada antes do início do
pico esperado de LH (100% das vacas ovularam nos grupos A-779 e controle). A expressão
diferencial das enzimas formadoras da Ang-(1-7) (ECA2, NEP e PEP) nas células da
granulosa e o aumento nas concentrações Ang-(1-7) no líquido folicular próximos a ovulação
podem indicar um papel desse peptídeo na ovulação em bovinos.
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Receptor Mas contribui para o desenvolvimento do remodelamento cardíaco / Mas receptor contributes to pregnancy-induced cardiacSilva, Cintia do Carmo e 21 March 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-03-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Previous studies have demonstrated a protective effect of the Ang-(1-7)/Mas receptor
axis on pathological cardiac hypertrophy. Also, the involvement of Mas receptor in the
exercise-induced cardiac hypertrophy has been suggested. However, the role of the
Ang-(1-7)/Mas receptor on pregnancy-induced cardiac remodeling remains unknown.
Thus, the aim of this study was to evaluate the participation of the Mas receptor in the
development of pregnancy and hypertrophy, fibrosis and cardiac function during
pregnancy. Female Wistar rats were randomly shared in 3 groups: control (W-NP),
pregnant (W-P), and pregnant treated with A-779 (W-P + A-779). Wild type and Masknockout
mice were distributed in non-pregnant (WT and KO) and pregnant (WT-P and
KO-P) groups. Gestational parameters such as, maternal weight, placental weight, fetus
weight, fetus/placenta ratio, fertility, Loss pre embryonic, Loss pos embryonic were
evaluated. Systolic blood pressure (SBP) was measured by tail-cuff plethysmography.
The medial part of the left ventricle (LV) was collected for cardiomyocytes morphometry
analysis and extracellular matrix proteins deposition. Echocardiographic analysis was
used to evaluate the cardiac function. Mas receptor blockade or genetic deletion of Mas
did not alter the fertility or embryonic and fetal development. However, the Mas receptor
antagonist decreased placental weight and increased fetus placenta ratio in rats. The
pregnant KO mice presented a decreased maternal and fetal weight and increased
fetus/placenta ratio. SBP was not changed by pregnancy or A-779 treatment in the
Wistar rats. Pharmacological blockade or genetic deletion of Mas receptor attenuates
the pregnancy-induced myocyte hypertrophy. The A-779 treatment or genetic deletion
of the Mas receptor increased the collagen III deposition in LV from pregnant animals.
KO mice presented a lower ejection fraction, fraction shortening, stroke volume and
higher end systolic volume compared to WT. Interestingly, the pregnancy restored these
parameters. In conclusion, these data show that Mas receptor can alter gestational and
maternal parameters, and this is involved in the cardiomyocyte hypertrophy and in the
control of the collagen III deposition in pregnancy condition. These alterations are
associated with improvement of the cardiac function through Mas-independent
mechanism. / Estudos anteriores mostraram que o eixo Ang- (1-7) / receptor Mas possue efeito
protetor na hipertrofia cardíaca patológica. Além disso, o envolvimento de receptor Mas
na hipertrofia cardíaca induzida por exercício tem sido sugerida. No entanto, o papel da
Ang- (1-7) / receptor Mas no remodelamento cardíaco induzido pela gestação
permanece desconhecido. Diante disto, o objetivo desse estudo foi avaliar a
participação do receptor Mas no desenvolvimento da gestação e na hipertrofia, fibrose
e função cardíaca durante a gestação. Ratas Wistar foram randomizadas
aleatoriamente em 3 grupos: controle (W-NP), gestante (W-P) e gestante tratada com
A-779 (W-P + A-779). Camundongas Wild type e Knockout para o receptor Mas foram
randominazadas em grupos não-grávidas (WT e KO) e grávidas (WT-P e KO-P).
Parâmetros gestacionais como peso materno, peso placentário, peso fetal, razão
feto/placenta, fertilidade, perda pré-embrionária e perda pós-embrionária foram
avaliados. A pressão arterial sistólica (PAS) foi medida por pletismografia de cauda. A
parte medial do ventrículo esquerdo (VE) foi coletado para análise morfométrica do
cardiomiócito e deposição de proteínas na matriz extracelular. Análise por
ecocardiografia foi utilizada para avaliar a função cardíaca. O bloqueio ou a deleção
genética do Mas não altera a fertilidade, o desenvolvimento embrionário ou fetal. No
entanto, o bloqueio do Mas reduziu o peso placentário e aumentou a relação
feto/placenta nas ratas. Já nos animais KO gestantes foi observado menor ganho de
peso materno e fetal, o que acarretou em aumento da razão feto/placenta. A PAS não
foi alterada pela gestação ou tratamento com A-779 nas ratas Wistar. O bloqueio
farmacológico ou deleção genética de receptor Mas atenuou a hipertrofia dos miócitos
induzida pela gravidez. O tratamento A-779 ou deleção genética do receptor Mas
aumentou a deposição de colágeno III do VE das gestantes. KO apresentaram uma
menor fração de ejeção, fração de encurtamento, volume sistólico e aumento do volume
sistólico final em comparação com WT. Curiosamente, a gravidez restaurou esses
parâmetros. Em conclusão, estes dados demonstraram que o receptor Mas pode alterar
parâmetros maternos e gestacionais, bem como está envolvido na hipertrofia dos
cardiomiócitos e no controle da deposição de colágeno III na gestação. Essas
alterações estão associadas com a melhora da função cardíaca por meio de
mecanismos independente do Mas
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