Com o objetivo de se aperfeiçoar a PCR para detecção de Brucella spp. em leite bubalino, foram estudados diferentes protocolos de extração de DNA em leite bubalino experimentalmente contaminado com Brucella abortus amostra 1119-3. Esses protocolos basearam-se na utilização de isotiocianato de guanidina, fervura e proteinase K, com algumas variações. O critério de avaliação utilizado foi a sensibilidade analítica. O protocolo utilizando fervura com filtração inicial da amostra em colchão de sacarose a 40% apresentou sensibilidade analítica de 103 UFC/ml. Os protocolos utilizando proteinase K para extração de DNA apresentaram sensibilidade analítica de 104 UFC/ml. A maior sensibilidade analítica (10 UFC/ml) e a melhor visualização do produto amplificado foram obtidos com a utilização de isotiocianato de guanidina com precipitação imediata em álcool sem adição de Tween 20 na lavagem inicial da amostra. / To improve the PCR performance for detection of Brucella spp. in buffalo milk, different DNA extraction protocols were carried out in buffalo milk spiked with Brucella abortus strain 1119-3. These protocols were based on utilization of guanidine isothiocyanate, boil and proteinase K, with some variations. The analytical sensitivity was the evaluation criteria. Boiling with initial filtration of the sample through a solution of sacarosis 40% presented analytical sensitivity of 103 CFU/ml. The protocols based on proteinase K presented analytical sensitivity of 104 CFU/ml. The highest analytical sensitivity (10 CFU/ml) and best visualization of the amplified product were verified for the protocol using guanidine isothyocianate with immediate precipitation in alcohol without addition of Tween 20 in the initial sample wash.

Foi conduzido um inquérito soroepidemiológico da brucelose bovina no Estado do Espírito Santo através de parceria firmada entre o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), o Instituto de Defesa Agropecuária e Florestal do Estado do Espírito Santo (IDAF-ES) e o Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS) da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ) da Universidade de São Paulo (USP). O Estado foi dividido em dois estratos amostrais, conforme o tipo de exploração predominante e a capacidade operacional do IDAF-ES para a condução do trabalho de campo. A amostragem foi delineada para a determinação da prevalência de propriedades positivas (focos) e de animais soropositivos para a brucelose bovina por estrato amostral. Foi realizada uma seleção aleatória de 300 propriedades (unidades primárias) por estrato amostral, e dentro das unidades primárias, foram amostradas, aleatoriamente, 10 fêmeas bovinas com idade igual ou superior a 24 meses (unidades secundárias) quando o rebanho foi constituído por até 99 fêmeas da mesma faixa etária, ou todas as fêmeas existentes nessa faixa etária se não totalizassem 10 animais; quando o rebanho foi constituído por mais de 99 fêmeas com idade igual ou superior a 24 meses, foram amostradas 15 fêmeas da mesma faixa etária. Ao todo foi colhido sangue de 5370 fêmeas bovinas provenientes de 636 propriedades distribuídas nos dois estratos amostrais. Na ocasião da colheita, foi aplicado um questionário epidemiológico por propriedade e as coordenadas geográficas foram obtidas com um aparelho de GPS. Para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina, foi utilizado o teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) como prova de triagem e o teste do 2-mercaptoetanol como prova confirmatória. Uma propriedade foi considerada foco quando apresentou pelo menos um animal soropositivo. As análises realizadas foram: (a) determinação das prevalências de focos e de animais soropositivos; (b) identificação de fatores de risco para a brucelose bovina; e (c) análise de agrupamentos espaciais de focos. As prevalências de focos de brucelose bovina e de animais soropositivos no Estado do Espírito Santo foram de 9,00% [6,97% - 11,55%] e 3,53% [1,93% - 6,37%], respectivamente. No estrato amostral 1, as prevalências de focos e de animais soropositivos foram de 6,80% [4,47% - 10,21%] e 3,43% [1,33% - 8,57%], respectivamente. No estrato amostral 2, a prevalência de focos foi de 10,86% [7,86% - 14,84%] e a prevalência de animais soropositivos foi de 3,69% [2,13% - 6,33%]. Os fatores de risco para a brucelose bovina no Estado foram utilização de inseminação artificial (OR = 7,05) e confinamento/semi-confinamento dos animais (OR = 2,98). No estrato amostral 1, as propriedades com mais de 15 fêmeas com idade ≥ 24 meses (OR = 5,18), que alugam pasto (OR = 2,85) e que utilizam inseminação artificial (OR = 6,76) possuíram maior chance de serem focos. No estrato amostral 2, a existência de mais de 42 bovinos no rebanho (OR = 5,31), utilização de inseminação artificial (OR = 11,72), compra de reprodutores em exposição (OR = 16,7) e confinamento/semi-confinamento dos animais (OR = 2,99) foram os fatores mais associados com a presença da doença. A vacinação de fêmeas entre três e oito meses de idade foi um fator protetor contra a doença nos dois estratos amostrais e em todo o Estado. Não houve tendência de formação de agrupamentos espaciais de focos em relação às propriedades livres. / As result of a partnership joining the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the Animal and Plant Health Institute of the State of Espírito Santo (IDAF-ES) and the Department of Preventive Veterinary Medicine and Animal Health (VPS) of the Faculty of Veterinary Medicine and Zootechny (FMVZ) of the University of São Paulo (USP), a seroepidemiological survey of bovine brucellosis was conducted in State of Espírito Santo, Southeast region of Brazil. The State was stratified in two sampling strata according to the predominant farm enterprise and the operational capacity of the IDAF-ES to conducting the field work. The sampling was delineated for the determination of the prevalence of positive herds and seropositive animals for bovine brucellosis per sampling stratum. It was made a random selection of 300 herds (primary units) per sampling stratum, and inside the primary units, if the herd was constituted by up to 99 cows over 24 months of age, 10 cows of the same age (secondary units) were randomly sampled, or all existing cows if they did not totalize 10 cows; if the herd was constituted by more than 99 cows over 24 months of age, 15 cows of the same age were randomly sampled. A total of 5370 blood samples of cows from 636 herds distributed in the sampling strata were collected. On the occasion of the blood collection, an epidemiological questionnaire was applied in each herd and the geographical coordinates were obtained with a GPS. For the serological diagnosis, the Rose Bengal Test was applied as a screening method and the 2-mercaptoetanol test as a confirmatory method. Herds with at least one test-positive animal were considered positive. The following analyses were carried out: (a) determination of the prevalence of positive herds and eropositive animals; (b) identification of risk factors for bovine brucellosis; and (c) spatial clustering analysis of positive herds. The prevalence of positive herds and seropositive animals in the State of Espírito Santo were 9.00% [6.97% - 11.55%] and 3.53% [1.93% - 6.37%], respectively. In sampling stratum 1, the prevalence of positive herds and seropositive animals were 6.80% [4.47% - 10.21%] and 3.43% [1.33% - 8.57%], respectively. In sampling stratum 2, the prevalence of positive herds was 10.86% [7.86% - 14.84%] and the prevalence of seropositive animals was 3.69% [2.13% - 6.33%]. The risk factors for bovine brucellosis in State were utilization of artificial insemination (OR = 7.05) and intensive/semi-intensive management systems (OR = 2.98). In sampling stratum 1, herds with more than 15 cows over 24 months of age (OR = 5.18), which rent pasturage (OR = 2.85) and that use artificial insemination (OR = 6.76) presented larger chance of being positive. The risk factors for bovine brucellosis in sampling stratum 2 were: existence of more than 42 bovine in the herd (OR = 5.31), utilization of artificial insemination (OR = 11.72), purchase of bovine reproducers in exhibitions (OR = 16.7) and intensive/semi-intensive management systems (OR = 2.99). The vaccination of heifers between three and eight months of age was a protective factor against the disease in the sampling strata and in State. There was no tendency for spatial clustering of positive herds.

O presente trabalho é resultante de uma parceria estabelecida entre o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), a Coordenadoria de Defesa Agropecuária do Estado de São Paulo (CDA) e o Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo (VPS-FMVZ-USP). O Estado de São Paulo foi estratificado em sete circuitos produtores de bovinos e 150 rebanhos com atividade reprodutiva foram aleatóriamente selecionados em cada um deles. Em cada rebanho foi aplicado um questionário epidemiológico, foram aletoriamente coletadas amostras de soro de 10 ou 15 fêmeas com idade maior ou igual a 24 meses (em rebanhos com < 100 fêmeas, e rebanhos &ge; 100 fêmeas, respectivamente) e as coordenadas geográficas foram obtidas com um aparelho GPS. Os soros foram submetidos a um protocolo de testes em série, tendo o Rosa Bengala como método de triagem e a fixação de complemento como método confirmatório. A prevalência estimada de rebanhos com, ao menos, um animal soropositivo foi de 9,7% [7,8%; 11,6%], enquanto que a prevalência estimada de animais soropositivos foi 3,8% [0,7%; 6,9%], no Estado de São Paulo. Foi elaborado um mapa temático georreferenciado do Estado de São Paulo, no qual evidenciou-se a ausência de agrupamentos espaciais de rebanhos infectados. A análise também procurou medir o grau de associação das características de criação com a presença da doença, sendo que propriedades com 87 ou mais bovinos (OR = 2,25) e compra de reprodutores (OR = 1,56) foram as mais associadas. O modelo matemático proposto nesse trabalho mostrou que deverá ser intensificado o esforço para a vacinação de fêmeas e que, mesmo assim, os benefícios advindos da adoção desta medida, em termos de queda da prevalência da doença e diminuição do número de abortos, só se darão em prazos que podem alcançar décadas. / The present work is the result of a partnership established by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the Animal and Plant Health Service of the State of São Paulo (CDA) and the Department of Preventive Veterinary Medicine and Animal Health of the University of São Paulo (VPS-FMVZ-USP). The State of São Paulo was stratified in seven cattle production regions and 150 herds with reproductive activity were randomly sampled within each one. In each herd was applied an epidemiological questionnaire, 10 or 15 cows over 24 months of age (on herds with < 100 cows, and herds &ge; 100 cows, respectively) were bled at random and the geographical coordinates were recorded with a GPS. Sera were tested using a serial test-ing procedure with the Rose Bengal Test as the screening method and the Complement Fixation as the con-firmatory method. The estimated prevalence of herds with at least one test-positive animal was 9.7% [7.8%; 11.6%], whereas the estimated prevalence of test-positive cattle was 3.8% [0.7%; 6.9%]. It was developed a georeferenced thematic map of the state of São Paulo, which revealed the absence of spatial clusters of infected herds. The analysis looked into the likely association of herd characteristics with the presence of the infection. The most associated characteristics were farms with more than 87 bovines (OR = 2.25) and reproduction animals reposition (OR = 1.56). A mathematical model was proposed in the present work, in wich the female vaccination effort was proposed to be intensificated, but according to the same model, the benefits of this measure will only be noticed, in terms of brucellosis prevalence and number of abortions decrease, in a matter of decades.

Com o objetivo de se aperfeiçoar a PCR para detecção de Brucella spp. em leite bubalino, foram estudados diferentes protocolos de extração de DNA em leite bubalino experimentalmente contaminado com Brucella abortus amostra 1119-3. Esses protocolos basearam-se na utilização de isotiocianato de guanidina, fervura e proteinase K, com algumas variações. O critério de avaliação utilizado foi a sensibilidade analítica. O protocolo utilizando fervura com filtração inicial da amostra em colchão de sacarose a 40% apresentou sensibilidade analítica de 103 UFC/ml. Os protocolos utilizando proteinase K para extração de DNA apresentaram sensibilidade analítica de 104 UFC/ml. A maior sensibilidade analítica (10 UFC/ml) e a melhor visualização do produto amplificado foram obtidos com a utilização de isotiocianato de guanidina com precipitação imediata em álcool sem adição de Tween 20 na lavagem inicial da amostra. / To improve the PCR performance for detection of Brucella spp. in buffalo milk, different DNA extraction protocols were carried out in buffalo milk spiked with Brucella abortus strain 1119-3. These protocols were based on utilization of guanidine isothiocyanate, boil and proteinase K, with some variations. The analytical sensitivity was the evaluation criteria. Boiling with initial filtration of the sample through a solution of sacarosis 40% presented analytical sensitivity of 103 CFU/ml. The protocols based on proteinase K presented analytical sensitivity of 104 CFU/ml. The highest analytical sensitivity (10 CFU/ml) and best visualization of the amplified product were verified for the protocol using guanidine isothyocianate with immediate precipitation in alcohol without addition of Tween 20 in the initial sample wash.

Foi conduzido um inquérito soroepidemiológico da brucelose bovina no Estado do Espírito Santo através de parceria firmada entre o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), o Instituto de Defesa Agropecuária e Florestal do Estado do Espírito Santo (IDAF-ES) e o Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS) da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ) da Universidade de São Paulo (USP). O Estado foi dividido em dois estratos amostrais, conforme o tipo de exploração predominante e a capacidade operacional do IDAF-ES para a condução do trabalho de campo. A amostragem foi delineada para a determinação da prevalência de propriedades positivas (focos) e de animais soropositivos para a brucelose bovina por estrato amostral. Foi realizada uma seleção aleatória de 300 propriedades (unidades primárias) por estrato amostral, e dentro das unidades primárias, foram amostradas, aleatoriamente, 10 fêmeas bovinas com idade igual ou superior a 24 meses (unidades secundárias) quando o rebanho foi constituído por até 99 fêmeas da mesma faixa etária, ou todas as fêmeas existentes nessa faixa etária se não totalizassem 10 animais; quando o rebanho foi constituído por mais de 99 fêmeas com idade igual ou superior a 24 meses, foram amostradas 15 fêmeas da mesma faixa etária. Ao todo foi colhido sangue de 5370 fêmeas bovinas provenientes de 636 propriedades distribuídas nos dois estratos amostrais. Na ocasião da colheita, foi aplicado um questionário epidemiológico por propriedade e as coordenadas geográficas foram obtidas com um aparelho de GPS. Para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina, foi utilizado o teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) como prova de triagem e o teste do 2-mercaptoetanol como prova confirmatória. Uma propriedade foi considerada foco quando apresentou pelo menos um animal soropositivo. As análises realizadas foram: (a) determinação das prevalências de focos e de animais soropositivos; (b) identificação de fatores de risco para a brucelose bovina; e (c) análise de agrupamentos espaciais de focos. As prevalências de focos de brucelose bovina e de animais soropositivos no Estado do Espírito Santo foram de 9,00% [6,97% - 11,55%] e 3,53% [1,93% - 6,37%], respectivamente. No estrato amostral 1, as prevalências de focos e de animais soropositivos foram de 6,80% [4,47% - 10,21%] e 3,43% [1,33% - 8,57%], respectivamente. No estrato amostral 2, a prevalência de focos foi de 10,86% [7,86% - 14,84%] e a prevalência de animais soropositivos foi de 3,69% [2,13% - 6,33%]. Os fatores de risco para a brucelose bovina no Estado foram utilização de inseminação artificial (OR = 7,05) e confinamento/semi-confinamento dos animais (OR = 2,98). No estrato amostral 1, as propriedades com mais de 15 fêmeas com idade &ge; 24 meses (OR = 5,18), que alugam pasto (OR = 2,85) e que utilizam inseminação artificial (OR = 6,76) possuíram maior chance de serem focos. No estrato amostral 2, a existência de mais de 42 bovinos no rebanho (OR = 5,31), utilização de inseminação artificial (OR = 11,72), compra de reprodutores em exposição (OR = 16,7) e confinamento/semi-confinamento dos animais (OR = 2,99) foram os fatores mais associados com a presença da doença. A vacinação de fêmeas entre três e oito meses de idade foi um fator protetor contra a doença nos dois estratos amostrais e em todo o Estado. Não houve tendência de formação de agrupamentos espaciais de focos em relação às propriedades livres. / As result of a partnership joining the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the Animal and Plant Health Institute of the State of Espírito Santo (IDAF-ES) and the Department of Preventive Veterinary Medicine and Animal Health (VPS) of the Faculty of Veterinary Medicine and Zootechny (FMVZ) of the University of São Paulo (USP), a seroepidemiological survey of bovine brucellosis was conducted in State of Espírito Santo, Southeast region of Brazil. The State was stratified in two sampling strata according to the predominant farm enterprise and the operational capacity of the IDAF-ES to conducting the field work. The sampling was delineated for the determination of the prevalence of positive herds and seropositive animals for bovine brucellosis per sampling stratum. It was made a random selection of 300 herds (primary units) per sampling stratum, and inside the primary units, if the herd was constituted by up to 99 cows over 24 months of age, 10 cows of the same age (secondary units) were randomly sampled, or all existing cows if they did not totalize 10 cows; if the herd was constituted by more than 99 cows over 24 months of age, 15 cows of the same age were randomly sampled. A total of 5370 blood samples of cows from 636 herds distributed in the sampling strata were collected. On the occasion of the blood collection, an epidemiological questionnaire was applied in each herd and the geographical coordinates were obtained with a GPS. For the serological diagnosis, the Rose Bengal Test was applied as a screening method and the 2-mercaptoetanol test as a confirmatory method. Herds with at least one test-positive animal were considered positive. The following analyses were carried out: (a) determination of the prevalence of positive herds and eropositive animals; (b) identification of risk factors for bovine brucellosis; and (c) spatial clustering analysis of positive herds. The prevalence of positive herds and seropositive animals in the State of Espírito Santo were 9.00% [6.97% - 11.55%] and 3.53% [1.93% - 6.37%], respectively. In sampling stratum 1, the prevalence of positive herds and seropositive animals were 6.80% [4.47% - 10.21%] and 3.43% [1.33% - 8.57%], respectively. In sampling stratum 2, the prevalence of positive herds was 10.86% [7.86% - 14.84%] and the prevalence of seropositive animals was 3.69% [2.13% - 6.33%]. The risk factors for bovine brucellosis in State were utilization of artificial insemination (OR = 7.05) and intensive/semi-intensive management systems (OR = 2.98). In sampling stratum 1, herds with more than 15 cows over 24 months of age (OR = 5.18), which rent pasturage (OR = 2.85) and that use artificial insemination (OR = 6.76) presented larger chance of being positive. The risk factors for bovine brucellosis in sampling stratum 2 were: existence of more than 42 bovine in the herd (OR = 5.31), utilization of artificial insemination (OR = 11.72), purchase of bovine reproducers in exhibitions (OR = 16.7) and intensive/semi-intensive management systems (OR = 2.99). The vaccination of heifers between three and eight months of age was a protective factor against the disease in the sampling strata and in State. There was no tendency for spatial clustering of positive herds.

O presente trabalho é resultante de uma parceria estabelecida entre o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), a Coordenadoria de Defesa Agropecuária do Estado de São Paulo (CDA) e o Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo (VPS-FMVZ-USP). O Estado de São Paulo foi estratificado em sete circuitos produtores de bovinos e 150 rebanhos com atividade reprodutiva foram aleatóriamente selecionados em cada um deles. Em cada rebanho foi aplicado um questionário epidemiológico, foram aletoriamente coletadas amostras de soro de 10 ou 15 fêmeas com idade maior ou igual a 24 meses (em rebanhos com < 100 fêmeas, e rebanhos &ge; 100 fêmeas, respectivamente) e as coordenadas geográficas foram obtidas com um aparelho GPS. Os soros foram submetidos a um protocolo de testes em série, tendo o Rosa Bengala como método de triagem e a fixação de complemento como método confirmatório. A prevalência estimada de rebanhos com, ao menos, um animal soropositivo foi de 9,7% [7,8%; 11,6%], enquanto que a prevalência estimada de animais soropositivos foi 3,8% [0,7%; 6,9%], no Estado de São Paulo. Foi elaborado um mapa temático georreferenciado do Estado de São Paulo, no qual evidenciou-se a ausência de agrupamentos espaciais de rebanhos infectados. A análise também procurou medir o grau de associação das características de criação com a presença da doença, sendo que propriedades com 87 ou mais bovinos (OR = 2,25) e compra de reprodutores (OR = 1,56) foram as mais associadas. O modelo matemático proposto nesse trabalho mostrou que deverá ser intensificado o esforço para a vacinação de fêmeas e que, mesmo assim, os benefícios advindos da adoção desta medida, em termos de queda da prevalência da doença e diminuição do número de abortos, só se darão em prazos que podem alcançar décadas. / The present work is the result of a partnership established by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the Animal and Plant Health Service of the State of São Paulo (CDA) and the Department of Preventive Veterinary Medicine and Animal Health of the University of São Paulo (VPS-FMVZ-USP). The State of São Paulo was stratified in seven cattle production regions and 150 herds with reproductive activity were randomly sampled within each one. In each herd was applied an epidemiological questionnaire, 10 or 15 cows over 24 months of age (on herds with < 100 cows, and herds &ge; 100 cows, respectively) were bled at random and the geographical coordinates were recorded with a GPS. Sera were tested using a serial test-ing procedure with the Rose Bengal Test as the screening method and the Complement Fixation as the con-firmatory method. The estimated prevalence of herds with at least one test-positive animal was 9.7% [7.8%; 11.6%], whereas the estimated prevalence of test-positive cattle was 3.8% [0.7%; 6.9%]. It was developed a georeferenced thematic map of the state of São Paulo, which revealed the absence of spatial clusters of infected herds. The analysis looked into the likely association of herd characteristics with the presence of the infection. The most associated characteristics were farms with more than 87 bovines (OR = 2.25) and reproduction animals reposition (OR = 1.56). A mathematical model was proposed in the present work, in wich the female vaccination effort was proposed to be intensificated, but according to the same model, the benefits of this measure will only be noticed, in terms of brucellosis prevalence and number of abortions decrease, in a matter of decades.

Caracterizou-se a brucelose bovina em Mato Grosso por um estudo transversal realizado em 2003 pelo Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento, Instituto de Defesa Agropecuária do Estado de Mato Grosso e o Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. O Estado foi estratificado em 4 circuitos pecuários (CP1, CP2, CP3, CP4) e 1152 rebanhos foram sorteados aleatoriamente. Foram utilizados os testes RTB (Teste de Rosa Bengala) para a triagem e RTB e 2-mercaptoetanol concomitantemente para o resultado conclusivo. A constante sistemática da prova foi 10 amostras em rebanhos até 99 fêmeas e 15 naqueles com 100 ou mais fêmeas com idade igual ou superior a 24 meses. Analisaram-se 1115 rebanhos bovinos, descartando-se 37 rebanhos (34 inconclusivos nas provas e 3 com bubalinos). Para o Estado, a prevalência estimada em propriedades foi de 41,19% e nos quatro circuitos pecuários foi de 36,91%, 27,25%, 40,4% e 50,33%, respectivamente. A prevalência estimada em animais foi 10,25% para o Estado, e 7,92%, 4,11%, 8,13% e 15,26% nos quatro circuitos pecuários, respectivamente. Um rebanho bubalino e 428 bovinos foram soropositivos para brucelose. Registraram-se as coordenadas geográficas das sedes das propriedades por ocasião da colheita que permitiu a análise epidemiológica espacial, mas não foram identificados agrupamentos de focos de brucelose no Estado de Mato Grosso. Na análise univariada estudaram-se 28 variáveis independentes e mantiveram-se as variáveis com P<0,20 para a análise de regressão múltipla. Foram variáveis associadas: exploração corte (OR=1,8), exploração mista (OR =1,8), propriedades com 11 a 50 fêmeas (OR=4,81), propriedades com 51 ou mais fêmeas (OR=6,8), e ocorrência de aborto (OR =1,7) para o Estado; produção de leite acima de 50 litros (OR=5,4) e presença de aborto (OR=2,7) no CP1; propriedades com mais de 242 fêmeas (OR=3,6) e propriedades que realizam teste de brucelose apenas quando compram animais ou quando é exigido para trânsito (OR=3,8) no CP2; propriedades com 135 a 333 fêmeas (OR=2,4), propriedades que abatem as fêmeas no final da vida reprodutiva em estabelecimento com inspeção (OR=4,0), propriedades que abatem as fêmeas no final da vida reprodutiva em estabelecimento sem inspeção ou na própria fazenda (OR=2,5) no CP3; exploração mista (OR=2,7), propriedades com 38 a 96 fêmeas (OR=2,6), e acima de 361 fêmeas (OR =4,1) no CP4. Essa análise nos permite verificar que a brucelose está homogeneamente distribuída no Estado de Mato Grosso, favorecendo a utilização de medidas sanitária uniformes no território matogrossense. Os fatores de risco com valores mais elevados de OR estão relacionados a propriedades com rebanhos maiores, o que justifica a adoção de medidas sanitárias específicas para estas propriedades. Como medida adicional homogênea para o Estado, sugere-se a intensificação da vacinação de fêmeas, sendo que, com base em estudos anteriores, os benefícios advindos desta medida poderão levar décadas. / To characterize bovine brucellosis in Mato Grosso State, a transversal study was carried out in 2003 by the Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento, Instituto de Defesa Agropecuária do Estado de Mato Grosso, and Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. The State was stratified in 4 cattle production regions (CP1, CP2, CP3, CP4) and 1152 herds were randomly sampled. Sera were tested using a serial testing procedure with the Rose Bengal Test as the screening method and both Rose Bengal Test and 2-mercaptoethanol as the confirmatory method. The systematic constant of the test was 10 samples in herds up to 99 females and 15 in those with 100 or more females over 24 months of age. 1115 bovine were analysed and 37 herds were not considered (34 with inconclusive tests and 3 with buffaloes). In the State, the estimated prevalence of herds 41.19%, and 36.91%, 27.25%, 40.4% and 50.33% in the four cattle regions, respectively. The estimated prevalence of animals was 10.25% in the State and 7.92%, 4.11%, 8.13%, 15.26% in the four regions, respectively. A buffalo and 428 bovine herds tested positive for brucellosis. Geographic coordinates of the farms were obtained, but no cluster of positive herds was observed in the spatial analysis. In the univariate analysis 28 independent variables were analysed, but only those with P<0.20 were kept for the multiple regression analysis. The herd characteristics most associated with the presence of disease were: beef cattle farming (OR=1.8), mixed (beef and dairy) cattle farming (OR=1.8), farms with 11 to 50 females (OR=4.8), farms with more than 51 females (OR=6.8) and presence of abortion (OR=1.7), for the whole State; milk production above 50 liters (OR=5.4) and presence of abortion (OR=2.7) in CP1; farms with more than 242 females (OR=3.6) and farms that perform brucellosis tests only when animals are bought or when it is required for animal transportation (OR=3.8) in CP2; farms with 135 to 333 females (OR=2.4), farms that slaughter females by the end of their reproductive lives in inspected slaughterhouses (OR=4.0) and farms that slaughter females by the end of their reproductive lives in uninspected slaughterhouses or in the farm (OR=2.5) in CP3; mixed cattle farming (OR=2.7), farms with 38 to 96 females (OR=2.6) and with more than 361 females (OR=4.1) in CP4. Once brucellosis is homogeneously distributed in Mato Grosso State, uniform sanitary measures might be adopted for the whole State. Risk factors with the highest OR values are related to farms with big herd sizes, what justifies the adoption of sanitary measures specific for these farms. As a homogeneous additional measure for the State, we suggest the intensification of the females vaccination, whose results, based on previous studies, might take decades to be observed.

Com o objetivo de se conhecer a situação epidemiológica da brucelose bovina no Estado de Santa Catarina, o mesmo foi subdividido em cinco áreas epidemiológicas. Para o planejamento amostral foi utilizada a amostragem aleatória sistemática. Além do cálculo da prevalência da brucelose bovina, foi realizada a caracterização epidemiológica das propriedades em cada uma das cinco áreas e verificada a possibilidade de agrupamento de algumas delas de acordo com as semelhanças existentes. Para o estudo foram colhidas amostras de soro de 7756 animais e questionários epidemiológicos foram aplicados em 1579 propriedades. As prevalências de focos e de animais soropositivos para brucelose bovina no Estado de Santa Catarina foram 0,02% (0,00-0,15%) e 0,06% (0,01-0,40%), respectivamente. Nas áreas 1 e 2, a prevalência de focos foi de 0,00% (0,00-1,23%); na área 3 foi de 0,00% (0,00-0,93%), na área 4 foi de 0,34% (0,00-1,86%) e na área 5 foi de 0,00% (0,00-1,26%). Em relação à prevalência de animais soropositivos para brucelose bovina, com exceção da área 4, cuja prevalência foi de 0,89% (0,13-5,76%), as demais áreas tiveram prevalência de 0,00% (0,00-0,00%). A maioria das propriedades das cinco áreas possui criação extensiva e bovinos mestiços, utiliza ordenha manual e não utiliza inseminação artificial. Com exceção da área 5, cuja maioria é de exploração leiteira, as demais são predominantemente de exploração mista. A área 3, que possui a maior mediana de produção diária de leite (7,5 litros), é a única cuja maioria das propriedades fazem o resfriamento do leite. A área 1 é a que possui maior mediana do número de bovinos (16 bovinos por propriedade). De acordo com as análises realizadas, sugere-se que as áreas 3 e 4 sejam agrupadas. / For this study Santa Catarina has been divided in five epidemiological areas in order to know the epidemiological situation of bovine brucellosis in this state. Systematic random sampling was used for the sampling design. The prevalence of bovine brucellosis was determined as well as the epidemiological characterization of the farms in each of the five areas, and the possibility of grouping some of them according to existent similarity was tested. Serum samples of 7756 animals were collected and an epidemiological survey using questionnaires was carried out in 1579 farms. The prevalence of positive holdings and animals for bovine brucellosis in Santa Catarina state were 0,02% (0,00-0,15%) and 0,06% (0,01-0,40%), respectively. In areas 1 and 2, the prevalence of positive holdings was 0,00% (0,00-1,23%); in area 3 it was 0,00% (0,00-0,93%), in area 4 it was 0,34% (0,00-1,86%) and in area 5 it was 0,00% (0,00-1,26%). Regarding prevalence of serum-positive animals for bovine brucellosis, all areas had prevalence 0,00% (0,00-0,00%), except area 4, which had prevalence 0,89% (0,13-5,76%). Most of the farms of five areas raise the animals extensively, grow mixed-breed cattle, make use of manual milking and do not use artificial insemination. The great majority of the areas develop mixed exploration except area 5 in which most farms grow dairy cattle. Area 3, which has the highest median of dairy milk production (7,5 liters), is the only one where the cooling of the milk is practiced in most of the farms. Area 1 has the highest median of number of bovine (16 bovines per farm). According to the analysis developed, it is suggested that areas 3 and 4 be grouped

Foram desenhados três pares de primers, sendo um deles dirigido ao gene que codifica uma proteína periplasmática da Brucella (BP26) e dois outros dirigidos para a região interespaçadora entre os gene 16S e 23S do RNA ribossômico (ITS). Com os primers acima, foram padronizadas três PCRs, potencialmente capazes de detectar qualquer espécie de Brucella e denominadas PCR-ITS1, PCR-ITS2 e PCR-BP26. Soluções de DNA de sangue de cão livre de Brucella foram contaminadas com quantidades decrescentes de DNA de B. canis (RM6/66) e, então, submetidas às PCRs descritas anteriormente. Para a avaliação das PCRs quanto à capacidade de detecção de Brucella spp. em sangue de animais naturalmente infectados, foram utilizadas 75 amostras de sangue de cães provenientes de canis comerciais onde foram registrados casos clínicos sugestivos de infecção por Brucella. As 75 amostras de sangue de cães foram colhidas com anti-coagulante (citrato de sódio) por punção da veia jugular. As amostras foram separadas em duas alíquotas, uma das quais (2 ml) foi submetida ao isolamento e identificação bacteriológica e a outra alíquota (1ml), às PCRs. O DNA total das amostras de sangue foi extraído por método baseado em digestão com proteinase K, SDS e CTAB seguido de purificação com fenol e clorofórmio. Considerando os resultados da PCR de melhor desempenho (PCR-ITS1), entre as 35 amostras positivas pelo isolamento bacteriano, 30 (85,71%) foram positivas pela técnica de PCR, enquanto entre as 40 amostras negativas pelo cultivo bacteriológico, 11 (27,5%) foram positivas pela PCR. A PCR-ITS1 foi capaz de detectar um mínimo de 3,78fg de DNA bacteriano misturado a 450ng de DNA de cão, o que representa, teoricamente, a massa genômica de 1,26 bactérias. Pela aparente superior capacidade de classificar animais positivos que o método de cultura bacteriológica, a PCR-ITS1 parece ser uma técnica promissora para o diagnóstico direto da brucelose em cães. / Three pair of primers were designed against Brucella genetic sequences. Two of them were directed to 16S-23S rRNA interspacer and the other was directed to a periplasmatic protein coding gene (BP26). Three PCRs assays named PCR-ITS1, PCR-ITS2 and PCR-BP26, each one putatively capable of amplifying DNA from any Brucella species were tested using the aforementioned primers. Nucleic acid extracts from whole-blood from naïve dogs were spiked with decreasing amounts of B. canis (RM6/66) DNA and the resulting solutions were tested by PCR. The capability of the PCRs to amplify Brucella spp. genetic sequences from naturally infected dogs was evaluated by using 75 whole-blood samples from dogs raised in commercial kennels were clinically affected animals have already been detected with signs suggestive of Brucella infection. The whole-blood samples were collected with sodium citrate as anti-coagulant by venal puncturing the jugular vein. The samples were split into two aliquots, one of them (2mL) being submitted to bacterial isolation and identification and the remaining sample (1mL) to PCR. The DNA from whole-blood was extracted by using proteinaseK, SDS and CTAB following phenol-chloroform purification. Considering the results from the PCR with the best performance (PCR-ITS1), within 35 isolation positive samples, 30 were positive by PCR. Within 40 isolation negative samples, 11 were positive by PCR. PCR-ITS1 was capable of detecting as few as 3.78fg of bacterial DNA mixed to 450ng of host DNA. Theoretically, 3.78fg of Brucella DNA represents the total genomic mass of 1.26 bacterial cells. The superior ability of PCR-ITS1 on classifying positive animals suggest that PCR-ITS1 is a promising tool for the direct detection of canine brucellosis.

Caracterizou-se a brucelose bovina em Mato Grosso por um estudo transversal realizado em 2003 pelo Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento, Instituto de Defesa Agropecuária do Estado de Mato Grosso e o Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. O Estado foi estratificado em 4 circuitos pecuários (CP1, CP2, CP3, CP4) e 1152 rebanhos foram sorteados aleatoriamente. Foram utilizados os testes RTB (Teste de Rosa Bengala) para a triagem e RTB e 2-mercaptoetanol concomitantemente para o resultado conclusivo. A constante sistemática da prova foi 10 amostras em rebanhos até 99 fêmeas e 15 naqueles com 100 ou mais fêmeas com idade igual ou superior a 24 meses. Analisaram-se 1115 rebanhos bovinos, descartando-se 37 rebanhos (34 inconclusivos nas provas e 3 com bubalinos). Para o Estado, a prevalência estimada em propriedades foi de 41,19% e nos quatro circuitos pecuários foi de 36,91%, 27,25%, 40,4% e 50,33%, respectivamente. A prevalência estimada em animais foi 10,25% para o Estado, e 7,92%, 4,11%, 8,13% e 15,26% nos quatro circuitos pecuários, respectivamente. Um rebanho bubalino e 428 bovinos foram soropositivos para brucelose. Registraram-se as coordenadas geográficas das sedes das propriedades por ocasião da colheita que permitiu a análise epidemiológica espacial, mas não foram identificados agrupamentos de focos de brucelose no Estado de Mato Grosso. Na análise univariada estudaram-se 28 variáveis independentes e mantiveram-se as variáveis com P<0,20 para a análise de regressão múltipla. Foram variáveis associadas: exploração corte (OR=1,8), exploração mista (OR =1,8), propriedades com 11 a 50 fêmeas (OR=4,81), propriedades com 51 ou mais fêmeas (OR=6,8), e ocorrência de aborto (OR =1,7) para o Estado; produção de leite acima de 50 litros (OR=5,4) e presença de aborto (OR=2,7) no CP1; propriedades com mais de 242 fêmeas (OR=3,6) e propriedades que realizam teste de brucelose apenas quando compram animais ou quando é exigido para trânsito (OR=3,8) no CP2; propriedades com 135 a 333 fêmeas (OR=2,4), propriedades que abatem as fêmeas no final da vida reprodutiva em estabelecimento com inspeção (OR=4,0), propriedades que abatem as fêmeas no final da vida reprodutiva em estabelecimento sem inspeção ou na própria fazenda (OR=2,5) no CP3; exploração mista (OR=2,7), propriedades com 38 a 96 fêmeas (OR=2,6), e acima de 361 fêmeas (OR =4,1) no CP4. Essa análise nos permite verificar que a brucelose está homogeneamente distribuída no Estado de Mato Grosso, favorecendo a utilização de medidas sanitária uniformes no território matogrossense. Os fatores de risco com valores mais elevados de OR estão relacionados a propriedades com rebanhos maiores, o que justifica a adoção de medidas sanitárias específicas para estas propriedades. Como medida adicional homogênea para o Estado, sugere-se a intensificação da vacinação de fêmeas, sendo que, com base em estudos anteriores, os benefícios advindos desta medida poderão levar décadas. / To characterize bovine brucellosis in Mato Grosso State, a transversal study was carried out in 2003 by the Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento, Instituto de Defesa Agropecuária do Estado de Mato Grosso, and Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. The State was stratified in 4 cattle production regions (CP1, CP2, CP3, CP4) and 1152 herds were randomly sampled. Sera were tested using a serial testing procedure with the Rose Bengal Test as the screening method and both Rose Bengal Test and 2-mercaptoethanol as the confirmatory method. The systematic constant of the test was 10 samples in herds up to 99 females and 15 in those with 100 or more females over 24 months of age. 1115 bovine were analysed and 37 herds were not considered (34 with inconclusive tests and 3 with buffaloes). In the State, the estimated prevalence of herds 41.19%, and 36.91%, 27.25%, 40.4% and 50.33% in the four cattle regions, respectively. The estimated prevalence of animals was 10.25% in the State and 7.92%, 4.11%, 8.13%, 15.26% in the four regions, respectively. A buffalo and 428 bovine herds tested positive for brucellosis. Geographic coordinates of the farms were obtained, but no cluster of positive herds was observed in the spatial analysis. In the univariate analysis 28 independent variables were analysed, but only those with P<0.20 were kept for the multiple regression analysis. The herd characteristics most associated with the presence of disease were: beef cattle farming (OR=1.8), mixed (beef and dairy) cattle farming (OR=1.8), farms with 11 to 50 females (OR=4.8), farms with more than 51 females (OR=6.8) and presence of abortion (OR=1.7), for the whole State; milk production above 50 liters (OR=5.4) and presence of abortion (OR=2.7) in CP1; farms with more than 242 females (OR=3.6) and farms that perform brucellosis tests only when animals are bought or when it is required for animal transportation (OR=3.8) in CP2; farms with 135 to 333 females (OR=2.4), farms that slaughter females by the end of their reproductive lives in inspected slaughterhouses (OR=4.0) and farms that slaughter females by the end of their reproductive lives in uninspected slaughterhouses or in the farm (OR=2.5) in CP3; mixed cattle farming (OR=2.7), farms with 38 to 96 females (OR=2.6) and with more than 361 females (OR=4.1) in CP4. Once brucellosis is homogeneously distributed in Mato Grosso State, uniform sanitary measures might be adopted for the whole State. Risk factors with the highest OR values are related to farms with big herd sizes, what justifies the adoption of sanitary measures specific for these farms. As a homogeneous additional measure for the State, we suggest the intensification of the females vaccination, whose results, based on previous studies, might take decades to be observed.