<p dir="ltr">The pancreas is composed of a variety of cell types such as acinar, endocrine, and ductal cells, as well as endothelial cells and adipocytes. Whereas we understand the distinct functions of each, there remains an incomplete understanding of the molecular pathways and communications that exist between these cells that may influence development, growth, and function. Given that diabetes is characterized by the destruction or dysfunction of the insulin-producing pancreatic beta cell, a better understanding of the mechanisms that influence cell growth and maintenance in the pancreas is of therapeutic interest. Genome-wide association studies identified eukaryotic initiation factor 5A (eIF5A) to be within a type 1 diabetes susceptibility locus, which also suggests this translation factor may play a role in maintaining beta cell health. EIF5A is active once post-translationally modified by the rate-limiting enzyme deoxyhypusine synthase (DHPS) in a process known as hypusination, producing hypusinated eIF5A (eIF5A^HYP). The functional loss of eIF5A^HYP via pancreas-specific genetic deletion of <i>Dhps</i> or <i>Eif5a</i> within multipotent pancreatic progenitor cells (MPPCs) results in an mRNA translation defect detectable at E14.5 causing the decreased expression of many proteins required for exocrine growth and function. Moreover, DHPS^ΔPANCmice die by 6 weeks-of-age; however, eIF5A^ΔPANCmice survive up to 2 years-of-age. The postnatal phenotype of the eIF5A^Δ^PANCmodel was investigated in this thesis.</p>

Lacase 2 é um gene com função majoritária na esclerotinização e pigmentação da cutícula corporal em insetos e evidências sugerem que desenvolva função na esclerotinização do córion dos ovos de mosquitos vetores de patógenos. A literatura registra que quando a expressão do gene é silenciada em adultos de Aedes albopictus suas fêmeas produzem ovos hialinos e inviáveis. Em teoria, este seria um bom gene-candidato à manipulação em iniciativas de controle biológico baseada em organismos geneticamente modificados. No presente estudo, caracterizamos o perfil expressional e a atividade enzimática de lacase 2 durante o desenvolvimento de Aedes aegypti, bem como silenciamos transcritos do gene em fêmeas adultas para testar se havia prejuízo na formação do córion dos ovos. A técnica de RT-PCR não foi sensível suficiente para detectar amplificação do gene lacase 2 em larvas, contudo, detectamos amplificação nos outros estágios de vida. Pupas e fêmeas adultas após repasto sanguíneo apresentaram perfis de expressão similares entre si. Com a técnica de detecção de atividade enzimática por fluorescência foi possível determinar o perfil de atividade enzimática de lacase 2 e o pH ótimo em todos estágios de desenvolvimento. O maior pico de atividade foi registrado em fêmeas adultas 32 horas após repasto sanguíneo. A atividade enzimática de lacase 2 foi confirmada após separação cromatográfica na amostra de fêmeas adultas 24 horas após repasto sanguíneo. Ambas técnicas, RT-PCR e detecção de atividade enzimática, apontam para maior produção de lacase 2 após repasto sanguíneo em fêmeas adultas, denotando sua importância no desenvolvimento do ovo. Para realização dos experimentos de silenciamento de transcritos foram sintetizados RNAs dupla-fita de lacase 2 e da proteína MSP1, utilizado como controle negativo do silenciamento. Ambos RNAs dupla-fita foram microinjetados em três concentrações, 20ng, 200ng e 1700ng, isoladamente em três grupos experimentais de fêmeas de Ae. aegypti. Em todos os experimentos não houve diferença morfológica entre os ovos das fêmeas microinjetadas com RNA dupla-fita de lacase 2 e MSP1. Os ovos dos grupos experimento e controle iniciaram a pigmentação cerca de 30 minutos após a postura. Entretanto, foram observados alguns ovos com início de pigmentação tardio no grupo experimento no lote de fêmeas microinjetadas com 200ng. Este fenômeno pareceu ter sido um incipiente do silenciamento de transcritos de lacase 2. O efeito da inserção do RNA dupla-fita de lacase 2 não resultou no mesmo efeito reportado na literatura para Ae. albopictus. Ainda assim, os resultados obtidos neste trabalho corroboram a hipótese de que lacase 2 desempenhe alguma função no desenvolvimento do ovo em mosquitos. / Laccase 2 is a gene with major role in body cuticle tanning in insects and evidences suggest laccase 2 may play a role in egg chorion tanning in mosquitoes vectors of pathogens. When the expression of the gene is knocked down in adults of Aedes albopictus their females produce hyaline and inviable eggs. Theoretically, this gene would be a good candidate for manipulation in the context of biological control of vectors based on genetically modified organisms. In the present study, we characterized the expressional profile and enzymatic activity of laccase 2 during the development of Aedes aegypti. We also knocked down the gene in adult females hypothesizing that this could jeopardize egg chorion formation. The RT-PCR technique was not sensitive to detect laccase 2 amplification in larvae, however, we detected amplification in other life stages. Pupae and adults females after blood meal exhibited equivalent expressional profiles. Using the technique of enzymatic activity detection by fluorescence, it was possible to determine the laccase 2 enzymatic activity profile and the optimum pH in all stages of development. The highest activity peak was registered in adult females 32 hours after blood meal. The laccase 2 enzymatic activity was confirmed by chromatographic separation in the adults females 24 hours after blood meal sample. Both techniques (RT-PCR and enzymatic activity detection) point to a higher production of laccase 2 after blood meal in adult females, suggesting the importance of laccase 2 for egg development. For the knocking down experiments we synthesized double-stranded RNA of laccase 2 and protein MSP1 (negative control). Both double-stranded RNAs were injected at three concentrations, 20ng, 200ng and 1700ng, in three experimental groups of Ae. aegypti females. No significant morphological differences between eggs from females injected with laccase 2 and MSP1 double-stranded RNA were observed. Pigmentation of the eggs started 30 minutes after they were laid (experimental and control group). However, the pigmentation started slightly later in those eggs of experiment females injected with 200ng. This apparent developmental delay may be related to the silencing of laccase 2. The effect of insertion of double-stranded RNA of laccase 2 did not result in the same effect reported in the literature for Ae. albopictus. Even so, the results obtained in this study corroborate the hypothesis that laccase 2 plays a role in egg development in mosquitoes.

O desenvolvimento embrionário requer um rigoroso controle da expressão de inúmeros genes que devem ser ativados no momento e local apropriados para o correto estabelecimento das estruturas e órgãos do organismo. Com a análise das seqüências expressas (Expressed Sequence Tags, EST) é possível identificar os genes expressos em tecidos específicos em diferentes estádios do desenvolvimento. A fim de identificar genes expressos durante o desenvolvimento embrionário de Gallus gallus, EST foram obtidas a partir da extremidade 5' dos clones de três bibliotecas de cDNA construídas a partir de (1) embrião inteiro, (2) membros anteriores e posteriores e (3) somitos e tubo neural. As EST foram analisadas pelos programas Phred, Cap3 e Consed para avaliação de qualidade das bases e clusterização. A análise dos dados resultou em 4998 EST válidas segundo parâmetros estabelecidos para este estudo. Todas as seqüências consenso dos clusters e singletons foram comparadas com as seqüências disponíveis no GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) e classificadas em doze categorias segundo sua função. A categorização revelou que 25% dos genes não apresentaram homólogos no banco utilizado (Low e No hit). Aproximadamente 15% dos genes não apresentaram função definida (hipotéticos conservados). Os 60% restantes permitiram identificar genes envolvidos com a somitogênese, com a formação da musculatura esquelética e com a formação dos brotos de membros em vertebrados, além de genes de manutenção e estrutura celular. O conjunto das EST identificadas neste projeto possibilitou a construção de um banco com cerca de 5.000 EST de estádios embrionários de Gallus gallus, fonte para a identificação de novos genes, para a elucidação dos processos reguladores do desenvolvimento embrionário e para a identificação de SNPs (Single Nucleotide Polymorphism). / Embryo development requires rigorous control of expression of various genes, which may become active at an adequate time and site for the correct establishment of organ and structure of the organism. Identification of Expressed Sequence Tags (EST) allows the determination of genes expressed in specific tissues at various stages of development. To identify genes expressed during embryonic development of Gallus gallus, EST were obtained from 5' end of clones from three cDNA libraries, derived from (1) whole embryos, (2) limb buds (hindlimb and forelimb), and (3) somites and neural tube. EST sequences were analyzed using the softwares Phred, Cap3 and Consed to evaluate base quality and clustering, resulting in 4998 valid EST, according to the parameters established. All consensus sequences of clusters and singletons obtained were compared with sequences available at GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) and classified into twelve categories according to function. Categorization revealed that about 25% of the genes were not described in the database consulted (Low and No hit). About 15% of the genes had no defined function (conserved hypothetical). The remaining sixty percent permitted identification of genes involved with somitogenesis, skeletal muscle and limb bud development in vertebrates and cellular maintenance and structure. The set of EST identified in this project resulted in a database with around 5000 EST of Gallus gallus embryonic stages, which is a new source of gene identification to facilitate investigation of regulatory processes in embryo development and identification of Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs).

Lacase 2 é um gene com função majoritária na esclerotinização e pigmentação da cutícula corporal em insetos e evidências sugerem que desenvolva função na esclerotinização do córion dos ovos de mosquitos vetores de patógenos. A literatura registra que quando a expressão do gene é silenciada em adultos de Aedes albopictus suas fêmeas produzem ovos hialinos e inviáveis. Em teoria, este seria um bom gene-candidato à manipulação em iniciativas de controle biológico baseada em organismos geneticamente modificados. No presente estudo, caracterizamos o perfil expressional e a atividade enzimática de lacase 2 durante o desenvolvimento de Aedes aegypti, bem como silenciamos transcritos do gene em fêmeas adultas para testar se havia prejuízo na formação do córion dos ovos. A técnica de RT-PCR não foi sensível suficiente para detectar amplificação do gene lacase 2 em larvas, contudo, detectamos amplificação nos outros estágios de vida. Pupas e fêmeas adultas após repasto sanguíneo apresentaram perfis de expressão similares entre si. Com a técnica de detecção de atividade enzimática por fluorescência foi possível determinar o perfil de atividade enzimática de lacase 2 e o pH ótimo em todos estágios de desenvolvimento. O maior pico de atividade foi registrado em fêmeas adultas 32 horas após repasto sanguíneo. A atividade enzimática de lacase 2 foi confirmada após separação cromatográfica na amostra de fêmeas adultas 24 horas após repasto sanguíneo. Ambas técnicas, RT-PCR e detecção de atividade enzimática, apontam para maior produção de lacase 2 após repasto sanguíneo em fêmeas adultas, denotando sua importância no desenvolvimento do ovo. Para realização dos experimentos de silenciamento de transcritos foram sintetizados RNAs dupla-fita de lacase 2 e da proteína MSP1, utilizado como controle negativo do silenciamento. Ambos RNAs dupla-fita foram microinjetados em três concentrações, 20ng, 200ng e 1700ng, isoladamente em três grupos experimentais de fêmeas de Ae. aegypti. Em todos os experimentos não houve diferença morfológica entre os ovos das fêmeas microinjetadas com RNA dupla-fita de lacase 2 e MSP1. Os ovos dos grupos experimento e controle iniciaram a pigmentação cerca de 30 minutos após a postura. Entretanto, foram observados alguns ovos com início de pigmentação tardio no grupo experimento no lote de fêmeas microinjetadas com 200ng. Este fenômeno pareceu ter sido um incipiente do silenciamento de transcritos de lacase 2. O efeito da inserção do RNA dupla-fita de lacase 2 não resultou no mesmo efeito reportado na literatura para Ae. albopictus. Ainda assim, os resultados obtidos neste trabalho corroboram a hipótese de que lacase 2 desempenhe alguma função no desenvolvimento do ovo em mosquitos. / Laccase 2 is a gene with major role in body cuticle tanning in insects and evidences suggest laccase 2 may play a role in egg chorion tanning in mosquitoes vectors of pathogens. When the expression of the gene is knocked down in adults of Aedes albopictus their females produce hyaline and inviable eggs. Theoretically, this gene would be a good candidate for manipulation in the context of biological control of vectors based on genetically modified organisms. In the present study, we characterized the expressional profile and enzymatic activity of laccase 2 during the development of Aedes aegypti. We also knocked down the gene in adult females hypothesizing that this could jeopardize egg chorion formation. The RT-PCR technique was not sensitive to detect laccase 2 amplification in larvae, however, we detected amplification in other life stages. Pupae and adults females after blood meal exhibited equivalent expressional profiles. Using the technique of enzymatic activity detection by fluorescence, it was possible to determine the laccase 2 enzymatic activity profile and the optimum pH in all stages of development. The highest activity peak was registered in adult females 32 hours after blood meal. The laccase 2 enzymatic activity was confirmed by chromatographic separation in the adults females 24 hours after blood meal sample. Both techniques (RT-PCR and enzymatic activity detection) point to a higher production of laccase 2 after blood meal in adult females, suggesting the importance of laccase 2 for egg development. For the knocking down experiments we synthesized double-stranded RNA of laccase 2 and protein MSP1 (negative control). Both double-stranded RNAs were injected at three concentrations, 20ng, 200ng and 1700ng, in three experimental groups of Ae. aegypti females. No significant morphological differences between eggs from females injected with laccase 2 and MSP1 double-stranded RNA were observed. Pigmentation of the eggs started 30 minutes after they were laid (experimental and control group). However, the pigmentation started slightly later in those eggs of experiment females injected with 200ng. This apparent developmental delay may be related to the silencing of laccase 2. The effect of insertion of double-stranded RNA of laccase 2 did not result in the same effect reported in the literature for Ae. albopictus. Even so, the results obtained in this study corroborate the hypothesis that laccase 2 plays a role in egg development in mosquitoes.

O desenvolvimento embrionário requer um rigoroso controle da expressão de inúmeros genes que devem ser ativados no momento e local apropriados para o correto estabelecimento das estruturas e órgãos do organismo. Com a análise das seqüências expressas (Expressed Sequence Tags, EST) é possível identificar os genes expressos em tecidos específicos em diferentes estádios do desenvolvimento. A fim de identificar genes expressos durante o desenvolvimento embrionário de Gallus gallus, EST foram obtidas a partir da extremidade 5' dos clones de três bibliotecas de cDNA construídas a partir de (1) embrião inteiro, (2) membros anteriores e posteriores e (3) somitos e tubo neural. As EST foram analisadas pelos programas Phred, Cap3 e Consed para avaliação de qualidade das bases e clusterização. A análise dos dados resultou em 4998 EST válidas segundo parâmetros estabelecidos para este estudo. Todas as seqüências consenso dos clusters e singletons foram comparadas com as seqüências disponíveis no GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) e classificadas em doze categorias segundo sua função. A categorização revelou que 25% dos genes não apresentaram homólogos no banco utilizado (Low e No hit). Aproximadamente 15% dos genes não apresentaram função definida (hipotéticos conservados). Os 60% restantes permitiram identificar genes envolvidos com a somitogênese, com a formação da musculatura esquelética e com a formação dos brotos de membros em vertebrados, além de genes de manutenção e estrutura celular. O conjunto das EST identificadas neste projeto possibilitou a construção de um banco com cerca de 5.000 EST de estádios embrionários de Gallus gallus, fonte para a identificação de novos genes, para a elucidação dos processos reguladores do desenvolvimento embrionário e para a identificação de SNPs (Single Nucleotide Polymorphism). / Embryo development requires rigorous control of expression of various genes, which may become active at an adequate time and site for the correct establishment of organ and structure of the organism. Identification of Expressed Sequence Tags (EST) allows the determination of genes expressed in specific tissues at various stages of development. To identify genes expressed during embryonic development of Gallus gallus, EST were obtained from 5' end of clones from three cDNA libraries, derived from (1) whole embryos, (2) limb buds (hindlimb and forelimb), and (3) somites and neural tube. EST sequences were analyzed using the softwares Phred, Cap3 and Consed to evaluate base quality and clustering, resulting in 4998 valid EST, according to the parameters established. All consensus sequences of clusters and singletons obtained were compared with sequences available at GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) and classified into twelve categories according to function. Categorization revealed that about 25% of the genes were not described in the database consulted (Low and No hit). About 15% of the genes had no defined function (conserved hypothetical). The remaining sixty percent permitted identification of genes involved with somitogenesis, skeletal muscle and limb bud development in vertebrates and cellular maintenance and structure. The set of EST identified in this project resulted in a database with around 5000 EST of Gallus gallus embryonic stages, which is a new source of gene identification to facilitate investigation of regulatory processes in embryo development and identification of Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs).

CDKs são proteínas responsáveis pela ativação e progressão do ciclo celular e também apresentam função na ativação e alongamento na transcrição. Dentre elas, CDK7 atua em ambas as funções, fosforilando as CDKs do ciclo celular e fazendo parte do fator geral de transcrição TFIIH como subunidade catalítica. A partir de uma biblioteca de ESTs de glândula salivar, construído com mRNAs presentes durante o período em que ocorre o início do último ciclo replicativo da politenização e início da amplificação gênica, foram encontradas poucas mensagens relacionadas diretamente com o ciclo celular, correspondendo a 3.11% do ESTs. Dentre elas, foram encontradas as mensagens de Cdc2-like e Cdk7; portanto, foi realizada a caracterização do gene Cdk7 e a análise de sua atuação durante o desenvolvimento larval de Rhynchosciara americana. O gene Cdk7 apresenta 4 éxons, mais que em vertebrados. A sequência completa do mRNA foi obtida a partir de RACE, apresentando 1230 bases e uma ORF de 1020 bases. Perfis de expressão foram determinados por RT-PCR e Western blots. Modificações pós-traducionais foram analisadas por imunoblots em 2D. Seu perfil de expressão de mRNA e proteína apresentam variações durante o ciclo celular e entre os tecidos analisados; os imunoblots mostram a presença de uma fosforilação e possíveis modificações na cadeia lateral de alguns aminoácidos. O estudo de proteínas relacionadas ao ciclo celular nesse modelo é importante para um melhor entendimento dos ciclos celulares incomuns presentes em diferentes tecidos de insetos. / CDKs are proteins responsible for activation and progression of cell cycle and also work on the activation and elongation of transcription. Among them, CDK7 acts in both functions, phosphorylating cell cycle CDKs and as a part of general transcription factor TFIIH as its catalytic subunit. From an EST library of salivary gland, constructed with mRNAs present during the period when the beginning of the last polyteny replicative cycle occurs, it was found only few messages directly related to cell cycle, corresponding to 3.11% of the ESTs. Among them, it was found Cdc2-like and Cdk7; therefore, it was performed the characterisation of Cdk7 gene and the analysis of its role during the larval development of Rhynchosciara americana. Cdk7 gene presents 4 exons, more than in vertebrates. Complete mRNA sequence was obtained via RACE, presenting 1230 bases and an 1020 bases ORF. Expression profiles were determined by RT-PCR and Western blots. Posttranslational modifications were analysed by 2D immunoblots. Its mRNA and protein expression profiles presented variations during cell cycle and between the studied tissues; immunoblots showed the presence of one phosphorylation and possible modifications on the side chain of some amino acids. The study of proteins related to cell cycle in this model is important for a better understanding of uncommon cell cycles in different insect tissues.

Dentre os mamíferos, a ordem Primates é caracterizada por uma gestação longa e, normalmente, nascimento de um único filhote por período reprodutivo. Ainda assim, as fêmeas primatas dão a luz a filhotes pouco desenvolvidos, que requerem grande investimento parental, realizado principalmente por elas. O prolongado período pós-parto, em que o filhote depende integralmente de seu cuidador para alimentação, transporte e proteção, é chamado de infância e perdura até o momento em que o indivíduo é capaz de sobreviver sozinho. Nesse período é possível observar o estilo de cuidado materno, medido através do investimento da mãe em cuidados para seu filhote. É nesse mesmo período que as relações afetivas entre mãe e filhote e com os outros membros do grupo são estabelecidas. Em algumas espécies de mamíferos, incluindo primatas, há diferença entre o investimento materno das mães em relação ao sexo do filhote ou a paridade e posição hierárquica delas. Nesse trabalho, verifiquei o efeito da paridade da mãe e do sexo do filhote sobre o estilo de cuidado materno e desenvolvimento físico e social dos filhotes de um grupo semi-livre de macacos-prego. Além disso, a presente pesquisa deu continuidade a um estudo anterior, com o mesmo grupo, também sobre estilo de cuidado materno e desenvolvimento dos filhotes. Assim, também foi objetivo deste trabalho comparar estas variáveis em função de mudanças na demografia do grupo e nas condições ambientais. Os dados foram coletados no Parque Ecológico do Tietê entre setembro de 2006 e abril de 2008, através dos métodos de animal-focal e todas as ocorrências, e analisados através de análises de agrupamentos e de variância. O estilo de cuidado materno parece estar relacionado com a paridade da mãe, mães primíparas têm maior investimento, de maneira geral, em amamentação, transporte e manutenção da proximidade de seus filhotes, enquanto multíparas investem mais em catação, mas as diferenças não foram significativas. O desenvolvimento físico e social dos filhotes não foi afetado pela mudança na demografia do grupo, mas sim pela mudança das condições ambientais. Uma alteração na disponibilidade do alimento provisionado provocou aumento nas taxas de locomoção do grupo em busca de alimento. O aumento na distância entre mães e filhotes também foi observado e esteve relacionado ao crescimento das redes familiares que promovem a proteção do filhote por indivíduos aparentados que não somente suas mães. O investimento materno foi maior em filhotes machos. Quanto ao desenvolvimento, filhotes fêmeas se alimentaram e se locomoveram independentemente mais que filhotes machos, ainda que a locomoção independente tenha sido maior para machos no início do desenvolvimento. Filhotes fêmeas, no entanto, mantiveram relações de proximidade mais fortes com a mãe e com os outros membros do grupo. O maior investimento materno em machos, independente da paridade das mães, é esperado em populações de primatas em que a oferta de alimento não é limitante do sucesso reprodutivo das fêmeas e em que, portanto, o sexo com maior variabilidade de sucesso reprodutivo em função de habilidades competitivas é o masculino. / In comparison with other mammals, the order Primates is characterized by a prolonged gestation and by the birth of a single offspring in each reproductive period. Besides, female primates give birth to very immature infants that require great parental investment performed mainly by the mothers. Infancy is the post-partum period in which the young is completely dependent on its care-giver for feeding, transportation and protection, and lasts up until the individual is capable of surviving on its own. During this period we can observe the style of maternal care by measuring the mothers investment in care given to her offspring. The affiliative relationship between the infant and its mother, as well as with other members of the social group are established throughout this same period. In some mammal species, including primates, maternal care can differ according to the sex of the infant, and on female parity and hierarchical position. In this study I investigate the effect of mothers parity and on infants sex on the style of maternal care and on the physical and social development of the offspring in a group of semi-free tufted capuchin monkeys. Furthermore, this research followed a previous study, carried out with the same group of monkeys, also regarding the style of maternal care and development of young. Therefore it is also the goal of this study to compare these variables considering differences in group demography and in the environmental conditions between the two study periods. Data were collected at Parque Ecológico do Tietê from September 2006 to April 2008. Data were collect through focal-animal and all occurrences methods, and analyzed by cluster and variance analysis. The style of maternal care seems to be related to the parity of the mother. Primiparous mothers generally invest more in nursing, transportation and in maintaining proximity with their offspring while multiparous mothers invest more in grooming. However the differences were not statistically significant. The physical and social development of the young were not affected by the demographic changes undergone by the group, but were, on the other hand, affected by changes in environmental conditions. An alteration in the availability of provisioned food resulted in an increase in the rate of locomotion of the group in search for food. An increase in the distance between mother and offspring was also noted and was related to the growth of family networks, leading to the protection of the young by kin related individuals besides their mother. There was greater maternal investment in male infants. Regarding infant development, female infants had higher frequencies of independent feeding and locomotion than male infants, even though independent locomotion was greater for males at the beginning of their development. Female infants also maintained greater proximity with their mothers and with other members of the group than male infants. A greater maternal investment in male offspring, independent of the parity of mothers, is expected in primate populations living in areas where food supply is not limiting of females reproductive success, which is the case of the study area, because in such populations males present greater variability than females in reproductive success.

Dentre os mamíferos, a ordem Primates é caracterizada por uma gestação longa e, normalmente, nascimento de um único filhote por período reprodutivo. Ainda assim, as fêmeas primatas dão a luz a filhotes pouco desenvolvidos, que requerem grande investimento parental, realizado principalmente por elas. O prolongado período pós-parto, em que o filhote depende integralmente de seu cuidador para alimentação, transporte e proteção, é chamado de infância e perdura até o momento em que o indivíduo é capaz de sobreviver sozinho. Nesse período é possível observar o estilo de cuidado materno, medido através do investimento da mãe em cuidados para seu filhote. É nesse mesmo período que as relações afetivas entre mãe e filhote e com os outros membros do grupo são estabelecidas. Em algumas espécies de mamíferos, incluindo primatas, há diferença entre o investimento materno das mães em relação ao sexo do filhote ou a paridade e posição hierárquica delas. Nesse trabalho, verifiquei o efeito da paridade da mãe e do sexo do filhote sobre o estilo de cuidado materno e desenvolvimento físico e social dos filhotes de um grupo semi-livre de macacos-prego. Além disso, a presente pesquisa deu continuidade a um estudo anterior, com o mesmo grupo, também sobre estilo de cuidado materno e desenvolvimento dos filhotes. Assim, também foi objetivo deste trabalho comparar estas variáveis em função de mudanças na demografia do grupo e nas condições ambientais. Os dados foram coletados no Parque Ecológico do Tietê entre setembro de 2006 e abril de 2008, através dos métodos de animal-focal e todas as ocorrências, e analisados através de análises de agrupamentos e de variância. O estilo de cuidado materno parece estar relacionado com a paridade da mãe, mães primíparas têm maior investimento, de maneira geral, em amamentação, transporte e manutenção da proximidade de seus filhotes, enquanto multíparas investem mais em catação, mas as diferenças não foram significativas. O desenvolvimento físico e social dos filhotes não foi afetado pela mudança na demografia do grupo, mas sim pela mudança das condições ambientais. Uma alteração na disponibilidade do alimento provisionado provocou aumento nas taxas de locomoção do grupo em busca de alimento. O aumento na distância entre mães e filhotes também foi observado e esteve relacionado ao crescimento das redes familiares que promovem a proteção do filhote por indivíduos aparentados que não somente suas mães. O investimento materno foi maior em filhotes machos. Quanto ao desenvolvimento, filhotes fêmeas se alimentaram e se locomoveram independentemente mais que filhotes machos, ainda que a locomoção independente tenha sido maior para machos no início do desenvolvimento. Filhotes fêmeas, no entanto, mantiveram relações de proximidade mais fortes com a mãe e com os outros membros do grupo. O maior investimento materno em machos, independente da paridade das mães, é esperado em populações de primatas em que a oferta de alimento não é limitante do sucesso reprodutivo das fêmeas e em que, portanto, o sexo com maior variabilidade de sucesso reprodutivo em função de habilidades competitivas é o masculino. / In comparison with other mammals, the order Primates is characterized by a prolonged gestation and by the birth of a single offspring in each reproductive period. Besides, female primates give birth to very immature infants that require great parental investment performed mainly by the mothers. Infancy is the post-partum period in which the young is completely dependent on its care-giver for feeding, transportation and protection, and lasts up until the individual is capable of surviving on its own. During this period we can observe the style of maternal care by measuring the mothers investment in care given to her offspring. The affiliative relationship between the infant and its mother, as well as with other members of the social group are established throughout this same period. In some mammal species, including primates, maternal care can differ according to the sex of the infant, and on female parity and hierarchical position. In this study I investigate the effect of mothers parity and on infants sex on the style of maternal care and on the physical and social development of the offspring in a group of semi-free tufted capuchin monkeys. Furthermore, this research followed a previous study, carried out with the same group of monkeys, also regarding the style of maternal care and development of young. Therefore it is also the goal of this study to compare these variables considering differences in group demography and in the environmental conditions between the two study periods. Data were collected at Parque Ecológico do Tietê from September 2006 to April 2008. Data were collect through focal-animal and all occurrences methods, and analyzed by cluster and variance analysis. The style of maternal care seems to be related to the parity of the mother. Primiparous mothers generally invest more in nursing, transportation and in maintaining proximity with their offspring while multiparous mothers invest more in grooming. However the differences were not statistically significant. The physical and social development of the young were not affected by the demographic changes undergone by the group, but were, on the other hand, affected by changes in environmental conditions. An alteration in the availability of provisioned food resulted in an increase in the rate of locomotion of the group in search for food. An increase in the distance between mother and offspring was also noted and was related to the growth of family networks, leading to the protection of the young by kin related individuals besides their mother. There was greater maternal investment in male infants. Regarding infant development, female infants had higher frequencies of independent feeding and locomotion than male infants, even though independent locomotion was greater for males at the beginning of their development. Female infants also maintained greater proximity with their mothers and with other members of the group than male infants. A greater maternal investment in male offspring, independent of the parity of mothers, is expected in primate populations living in areas where food supply is not limiting of females reproductive success, which is the case of the study area, because in such populations males present greater variability than females in reproductive success.

CDKs são proteínas responsáveis pela ativação e progressão do ciclo celular e também apresentam função na ativação e alongamento na transcrição. Dentre elas, CDK7 atua em ambas as funções, fosforilando as CDKs do ciclo celular e fazendo parte do fator geral de transcrição TFIIH como subunidade catalítica. A partir de uma biblioteca de ESTs de glândula salivar, construído com mRNAs presentes durante o período em que ocorre o início do último ciclo replicativo da politenização e início da amplificação gênica, foram encontradas poucas mensagens relacionadas diretamente com o ciclo celular, correspondendo a 3.11% do ESTs. Dentre elas, foram encontradas as mensagens de Cdc2-like e Cdk7; portanto, foi realizada a caracterização do gene Cdk7 e a análise de sua atuação durante o desenvolvimento larval de Rhynchosciara americana. O gene Cdk7 apresenta 4 éxons, mais que em vertebrados. A sequência completa do mRNA foi obtida a partir de RACE, apresentando 1230 bases e uma ORF de 1020 bases. Perfis de expressão foram determinados por RT-PCR e Western blots. Modificações pós-traducionais foram analisadas por imunoblots em 2D. Seu perfil de expressão de mRNA e proteína apresentam variações durante o ciclo celular e entre os tecidos analisados; os imunoblots mostram a presença de uma fosforilação e possíveis modificações na cadeia lateral de alguns aminoácidos. O estudo de proteínas relacionadas ao ciclo celular nesse modelo é importante para um melhor entendimento dos ciclos celulares incomuns presentes em diferentes tecidos de insetos. / CDKs are proteins responsible for activation and progression of cell cycle and also work on the activation and elongation of transcription. Among them, CDK7 acts in both functions, phosphorylating cell cycle CDKs and as a part of general transcription factor TFIIH as its catalytic subunit. From an EST library of salivary gland, constructed with mRNAs present during the period when the beginning of the last polyteny replicative cycle occurs, it was found only few messages directly related to cell cycle, corresponding to 3.11% of the ESTs. Among them, it was found Cdc2-like and Cdk7; therefore, it was performed the characterisation of Cdk7 gene and the analysis of its role during the larval development of Rhynchosciara americana. Cdk7 gene presents 4 exons, more than in vertebrates. Complete mRNA sequence was obtained via RACE, presenting 1230 bases and an 1020 bases ORF. Expression profiles were determined by RT-PCR and Western blots. Posttranslational modifications were analysed by 2D immunoblots. Its mRNA and protein expression profiles presented variations during cell cycle and between the studied tissues; immunoblots showed the presence of one phosphorylation and possible modifications on the side chain of some amino acids. The study of proteins related to cell cycle in this model is important for a better understanding of uncommon cell cycles in different insect tissues.