133f. / Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-04-04T14:49:09Z No. of bitstreams: 1 VERSAO FINAL fORMATADA.pdf: 7065436 bytes, checksum: 7fde708f84e5d67c155e98ec4add8237 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br) on 2013-04-29T16:03:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 VERSAO FINAL fORMATADA.pdf: 7065436 bytes, checksum: 7fde708f84e5d67c155e98ec4add8237 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-29T16:03:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VERSAO FINAL fORMATADA.pdf: 7065436 bytes, checksum: 7fde708f84e5d67c155e98ec4add8237 (MD5) Previous issue date: 2009 / CAPES / Este trabalho descreve o estudo fitoquímico dos extratos orgânicos das folhas de Cratylia mollis Mart. ex. Benth e do caule e folhas de Eriope blanchetti xxxx, pertencentes as famílias Leguminosae e Lamiaceae, respectivamente. A Cratylia mollis é um arbusto pertencente à subfamília Faboideae (Papilionoideae) que se distribui em toda América do Sul. Sendo a espécie mais abundante no semi-árido nordestino, onde é conhecida popularmente como “Camaratuba” e “caramatu” e tem sido utilizada como forrageira, principalmente na alimentação do gado e caprinos. Já a Eripoe blanchetti é uma espécie endêmica das regiões de restinga, encontrada principalmente na restinga do parque metropolitano da Lagoa do Abaeté na cidade de Salvador-BA. Este trabalho teve como objetivo o isolamento dos constituintes químicos a partir de Cratylia mollis e Eriope blanchetti, além da investigação das atividades, antioxidante e anticolinesterásica das substâncias isoladas. O extratos metanólico de ambos vegetais foram particionados entre MeOH: Hex e MeOH/ H2O: CHCl3 e fracionados através de técnicas cromatográficas em colunas e em camada delgada preparativa sob sílica gel. As substâncias foram identificadas através de métodos espectrométricos (RMN, IV, EM) e comparação dos dados da literatura. Dos extratos orgânicos de Cratylia mollis foram isolados nove substâncias com destaque para um novo nor-isoprenoide, (4S*, 6S*)-4-but-1-enil-4,6-diidróxi-3,5,5-trimetil-ciclo-hex-2-enona, o dipetídeos, N-benzoilfenilalaninoil- fenilalaninolacetato e o Ester, 4-[3-(4-hidroxi-fenil)-acriloiloxi] acido benzóico, sendo este último descrito pela segunda vez na literatura. A partir de Eriope blanchetti foram isoladas doze substâncias com destaque para a podofilitoxina. Todas as substâncias isoladas de ambos os vegetais foram avaliados para atividade antioxidante e inibição AChE. Onde foi verificada na avaliação de inibição da enzima AChE que o Nbenzoil- fenilalaninoil-fenilalaninolacetato apresentou uma inibição satisfatória comparado com CI50=111,34 μmol.L-1 comparado com a substância padrão Fisostigmina, CI50= 141,51 μmol.L-1. / Salvador

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Cognitive impairment is a mental disorder which is associated with neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease (AD), which is the most common form of dementia. Currently there are no consistent evidence who allow support any measure for the prevention of this disease (DAVIGLUS et al., 2010). As for its treatment, there are methods which can provide relative relief of the symptoms, however, only of palliative nature. Thus, this study aimed to evaluate the n-acetylcysteine (NAC), a molecule with neuroprotective properties, in the treatment and prevention of subsequent dementia of AD, using an experimental model of dementia induced by streptozotocin (STZ) in mice. Initially the effect of NAC on the activity of acetylcholinesterase (AChE) activity in vitro mouse brain was evaluated. The ideal dithiobisnitrobenzoate (DTNB) concentration and pH was 0.3 mM and 7.4, respectively. Linearity in enzyme activity was obtained at acetylthiocholine (ATCh) concentrations ranging from 0.025 to 0.450 mM. Sixty sec prior to the addition of ATCh range to avoid interference DTNB NAC interaction was added to the method. NAC interfered with AChE Vmax starting at the concentration of 75 uM without affecting the Km, featuring a non-competitive inhibition. In a second instance, we evaluated the NAC effect on the short-term cognitive impairment in mice. For this, the animals were divided into four groups and were treated with NAC (50 mg/kg /day v.o.) or saline for nine consecutive days, and with STZ (2.5 mg/kg i.c.v.) or aCSF at the first and third days. The results show that NAC treatment: 1) normalized the latency to find the platform in the water maze (MWM) and to get off the platform in passive avoidance (SDPA) that had been altered in animals that received STZ; 2) normalized the AChE and butyrylcholinesterase (BChE) and restored the acetylcholine (ACh) levels in cortical and hippocampal enzymatic activity potentiated by STZ; 3) protected the brain energy metabolism imbalance induced by STZ. Finally, we evaluated the effect of NAC on the long-term cognitive impairment in mice. To this end, animals were treated with NAC (5 mg/kg/day v.o.) or saline for 30 consecutive days, and with STZ (2.5 mg/kg i.c.v.) or aCSF the first and third days. A treatment with physostigmine (PHY; 0.25 mg / kg / day V.O.) was done in parallel as a positive control measure. Totalizing six groups. Both treatments with NAC and PHY: 1) reduced the latency to find the platform in the water maze (MWM) and increased exploratory time on the new object task (NOR) of those animals that received STZ; 2) normalized the cortical and hippocampal AChE enzymatic activity enhanced by STZ; 3) rescued the synaptic plasticity, recovering the synaptophysin (SYN), microtubule-associated protein type 2 (MAP2) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) levels reduced by STZ. Thus, the NAC treatment protected from the cognitive impairment induced by STZ in mice, normalizing the cholinergic activity and reestablishing synaptic plasticity. / O déficit cognitivo é uma desordem mental que está associado a doenças neurodegenerativas, como é a doença de Alzheimer (DA) a qual é a forma mais comum de demência. Atualmente não existem evidências consistentes quem permitam apoiar qualquer medida para a prevenção desta doença (DAVIGLUS e col., 2010). Já para o seu tratamento, existem métodos os quais proporcionam alívio relativo dos sintomas, contudo, de natureza paliativa1. Assim, o presente trabalho visou avaliar a n-acetilcisteína (NAC), uma molécula com propriedades neuroprotetora, no tratamento e prevenção da demência consequente da DA, utilizando-se de um modelo experimental de demência induzida pela estreptozotocina (STZ) em camundongos. Inicialmente avaliou-se o efeito da NAC sobre a atividade da acetilcolinesterase (AChE) cerebral de camundongos in vitro. A concentração de ditiobisnitrobenzoato (DTNB) e pH ideais foi de 0,3 mM e 7,4, respectivamente. Obteve-se linearidade na atividade enzimática com concentrações de 0,025 a 0,450 mM de acetiltiocolina (ATCh). Foram adicionados 60 sec de intervalo prévios à adição da ATCh para evitar a interferência da interação DTNB-NAC. A NAC interferiu na Vmax da AChE a partir da concentração de 75 μM sem modificar a Km, caracterizando uma inibição de forma não-competitiva. Em uma segunda instância, avaliou-se o efeito da NAC sobre o déficit cognitivo a curto prazo em camundongos. Para isso, os animais foram divididos em quatro grupos e foram tratados com NAC (50 mg/kg/dia v.o.) ou salina por nove dias consecutivos e com STZ (2.5 mg/kg i.c.v.) ou FCEa no primeiro e terceiro dias. Os resultados mostram que o tratamento com NAC: 1) diminuiu a latência para achar a plataforma no labirinto aquático (MWM) e aumentou a latência para descer da plataforma na esquiva passiva (SDPA) dos animais que apresentaram-se alteradas nos animais que receberam STZ; 2) restaurou a atividade enzimática da AChE e butirilcolinesterase (BChE) e os níveis de acetilcolina (ACh) corticais e hipocampais potencializadas pela STZ; e 3) protegeu do desequilíbrio do metabolismo energético cerebral induzido pela STZ. Finalmente, foi avaliado o efeito da NAC sobre o déficit cognitivo a longo prazo em camundongos. Para tal, os animais foram tratados com NAC (5 mg/kg/dia v.o.) ou salina por 30 dias consecutivos e com STZ (2.5 mg/kg i.c.v.) ou FCEa no primeiro e terceiro dias. Um tratamento com fisostigmina (PHY; 0,25 mg/kg/dia v.o.) foi realizado em paralelo como medida de controle positivo. Totalizando assim seis grupos. Ambos os tratamentos com NAC e PHY: 1) diminuíram a latência para achar a plataforma no labirinto aquático (MWM) e aumentaram o tempo de exploração no novo objeto (NOR) que apresentaram-se alteradas nos animais que receberam STZ; 2) normalizaram a atividade enzimática da AChE cortical e hipocampal potencializada pela STZ; 3) resgataram a plasticidade sináptica, recuperando os níveis de sinaptofisina (SYN), proteína associada aos microtúbulos do tipo 2 (MAP2) e proteína ácida fibrilar glial (GFAP) diminuídas pela STZ. Desta forma, o tratamento com NAC protegeu do déficit cognitivo induzido pela STZ em camundongos, normalizando a atividade colinérgica e reestabelecendo a plasticidade sináptica.

This work describes the chemical and biological studies carried out using two species of plants, which belongs to the Polygonaceae family: Coccoloba mollis Casaretto (1844) and Triplaris americana Linnaeus. The study aimed to monitoring the antioxidant (DPPH, total phenolic content, reduction power by Fe3+-Fe2+ and total oxidation by FTC method), anticholinesterasic and larvicidal (4th larval instars of the Aedes aegypti) activities of extracts and isolated compounds from C. mollis and T. americana. Phytochemical investigation of some extracts with promising results in at least one of the activities mentioned above of C. mollis lead to the isolation of two phytosteroids (sitosterol and sitostenone), a diterpene (transphytol), a triterpene (simiarenol) and a benzenoid (vanilic acid); while from T. americana were isolated two benzenoids (gallic acid and protocatechuic acid methyl ester), a phenetylamide (moupinamide), a phenylpropanoid derivative (vanicoside D), two phytosteroids (sitosterol and sitostenone), two flavonols (quercetin and 3-O-α-arabinofuranosylquercetin) and two triterpenes (friedelin and friedelinol). In general, these results have been contributed to extend the chemiotaxonomic profile of the genera Coccoloba and Triplaris, and as a consequence it increased the knowledge of the Polygonaceae. These compounds were identified on the basis of spectroscopic analyses (IR, MS and NMR, including DEPT, APT, COSY, HSQC and HMBC). Regarding the to antioxidant assays, fractions from fruits, leaves, stem and roots of T. americana showed comparable results to those presented by the standards (α-tocopherol, BHT and ascorbic acid). From active fractions extracts of the fruits were isolated four compounds that were also active (gallic acid, vanicoside D, quercetin and 3-O-α- arabinofuranosylquercetin). The qualitative assays used to demonstrate the inhibition of the enzyme acetylcholinesterase by fractions from partition and filtration on silica gel of C. mollis (bark, leaves and stem) and of T. americana (fruits, leaves, stem and roots) showed positive results as well. Chromatographic guided-fractionation of some these fractions resulted in the isolation of seven compounds five of them (sitosterol, vanilic acid, gallic acid, protocatechuic acid methyl ester and vanicoside D) showed positive results. In the assays against 4th larval instars of the Aedes aegypti, the fractions promising more were derived from hexane extracts of stem, leaves and bark of C. mollis and from stem and roots, as well as EtOAc sub-fraction from the CHCl3 extract of fruits of T. americana. Conclusion, these results presented data that can be used in further studies. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente trabalho descreve o estudo químico, monitorado pelas atividades antioxidantes (DPPH, quantificação de fenóis totais, poder de redução Fe3+-Fe2+ e oxidação total pelo método FTC), anticolinesterásica e larvicida (larvas do 4o ínstar do Aedes aegypti), de extratos e substâncias isoladas das espécies Coccoloba mollis Casaretto (1844) e Triplaris americana Linnaeus (Polygonaceae). A investigação fitoquímica de alguns dos extratos com resultados promissores em pelo menos uma das atividades acima mencionadas de C. mollis conduziu ao isolamento de dois fitoesteróides (sitosterol e sitostenona), um diterpeno (transfitol), um triterpeno (simiarenol) e de um benzenóide (ácido vanílico); enquanto que da espécie T. americana foram isolados dois benzenóides (ácido gálico e éster metílico do ácido protocatecóico), uma fenetilamida (moupinamida), um derivado fenilpropanóide (vanicosídeo D), dois fitoesteróides (sitosterol e sitostenona), dois flavonóis (quercetina e 3-O-α-arabinofuranosilquercetina) e dois triterpenos (fridelina e fridelinol). De um modo geral, este resultado contribuiu para ampliar o perfil químiotaxonômico dos gêneros Coccoloba e Triplaris e, conseqüentemente da química de Polygonaceae. Estas substâncias foram identificadas com base na análise de dados espectroscópicos (IV, EM e RMN, incluindo DEPT, APT, COSY, HSQC e HMBC). Em relação aos ensaios antioxidantes, as frações oriundas dos frutos, folhas, caule e raízes de T. americana apresentaram resultados comparáveis aos dos padrões utilizados (α-tocoferol, BHT e ácido ascórbico). Das frações ativas dos frutos foram isoladas quatro substâncias que também foram ativas (ácido gálico, vanicosídeo D, quercetina e 3-O-α-arabinofuranosilquercetina). No que diz respeito aos ensaios qualitativos frente à enzima acetilcolinesterase, frações oriundas de partição e de filtração em gel de sílica de C. mollis (cascas, folhas e caule) e de T. americana (frutos, folhas, caule e raízes) forneceram resultados positivos. O fracionamento cromatográfico monitorado de alguns dessas frações resultou no isolamento de sete substâncias, das quais cinco (sitosterol, ácido vanílico, ácido gálico, éster metílico do ácido protocatecóico e vanicosídeo D) forneceram resultados positivos. Nos ensaios frente larvas do 4º ínstar do Aedes aegypti, as frações mais promissoras foram em hexano do caule, folhas e cascas de C. mollis e em hexano de caule e raízes e a subfração em AcOEt, oriunda da filtração da fração em CHCl3 dos frutos de T. americana. De um modo geral, esses resultados forneceram dados que poderão servir de base para estudos posteriores.