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ABSTRACT Twenty essential oil constituents (EOC′s) from seven structural groups were tested for their antimalarial, antimicrobial (both bacterial and fungal), anti-oxidant, anticholinesterase and toxicity properties. To test for their antimalarial property, the tritiated hypoxanthine incorporation assay was used, while the disc diffusion and minimum inhibitory concentration (MIC) microplate assays were employed for the antimicrobial properties. The 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) method was used to test the anti-oxidant property and their toxicity profile was assessed with the 3-(4,5-dimethyl-2-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) cellular viability assay. The anticholinesterase activity was determined using the thin layer chromatography (TLC) bioautographic method. The EOC´s were found to inhibit the growth of Plasmodium falciparum with IC50 values ranging between 0.9 to 1528.8μM with E- and Z-(±)-nerolidol, (-)-pulegone, (+)-α-pinene and linalyl acetate being the most active. In combination p-cymene (the least active) and E- and Z-(±)-nerolidol (the most active) displayed the most synergistic interaction (ΣFIC = 0.09), with their antimalarial activity comparable to that of the interaction between E- and Z-(±)-nerolidol and quinine (ΣFIC = 0.01). Eugenol had the most favourable safety index and was the only EOC with anti-oxidant activity comparable to vitamin C. Combination studies showed that E- and Z-(±)-nerolidol and (-)-pulegone or quinine, p-cymene and γ-terpinene or (-)-pulegone potentiated each other′s toxicity. The EOC´s inhibited the growth of Gram-positive, Gram-negative bacteria and yeast with MIC values ranging from 1.66 to >238.4mM. When combined, synergism was observed between (+)-β-pinene and carvacrol or γ-terpinene; γ-terpinene and geranyl acetate when tested against Staphylococcus aureus, while (+)-β-pinene and (-)-menthone showed antagonism against C. albicans. The combinations of EOC′s and a standard antimicrobial resulted in synergistic interactions between carvacrol and ciprofloxacin against Bacillus cereus, eugenol and ciprofloxacin against Eschericia coli, carvacrol and amphotericin B against C. albicans. The trans-geraniol and E- and Z-(±)-nerolidol combination demonstrated an additive interaction against B. cereus, while for eugenol and E- and Z-(±)-nerolidol an indifferent interaction against E. coli was noted. These results show that the biological activities of EOC′s can vary when used alone and in combination. They do have the potential to be used as templates for novel drugs and as adjuncts to modern medicines in the combat against drug resistance.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Cognitive impairment is a mental disorder which is associated with neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease (AD), which is the most common form of dementia. Currently there are no consistent evidence who allow support any measure for the prevention of this disease (DAVIGLUS et al., 2010). As for its treatment, there are methods which can provide relative relief of the symptoms, however, only of palliative nature. Thus, this study aimed to evaluate the n-acetylcysteine (NAC), a molecule with neuroprotective properties, in the treatment and prevention of subsequent dementia of AD, using an experimental model of dementia induced by streptozotocin (STZ) in mice. Initially the effect of NAC on the activity of acetylcholinesterase (AChE) activity in vitro mouse brain was evaluated. The ideal dithiobisnitrobenzoate (DTNB) concentration and pH was 0.3 mM and 7.4, respectively. Linearity in enzyme activity was obtained at acetylthiocholine (ATCh) concentrations ranging from 0.025 to 0.450 mM. Sixty sec prior to the addition of ATCh range to avoid interference DTNB NAC interaction was added to the method. NAC interfered with AChE Vmax starting at the concentration of 75 uM without affecting the Km, featuring a non-competitive inhibition. In a second instance, we evaluated the NAC effect on the short-term cognitive impairment in mice. For this, the animals were divided into four groups and were treated with NAC (50 mg/kg /day v.o.) or saline for nine consecutive days, and with STZ (2.5 mg/kg i.c.v.) or aCSF at the first and third days. The results show that NAC treatment: 1) normalized the latency to find the platform in the water maze (MWM) and to get off the platform in passive avoidance (SDPA) that had been altered in animals that received STZ; 2) normalized the AChE and butyrylcholinesterase (BChE) and restored the acetylcholine (ACh) levels in cortical and hippocampal enzymatic activity potentiated by STZ; 3) protected the brain energy metabolism imbalance induced by STZ. Finally, we evaluated the effect of NAC on the long-term cognitive impairment in mice. To this end, animals were treated with NAC (5 mg/kg/day v.o.) or saline for 30 consecutive days, and with STZ (2.5 mg/kg i.c.v.) or aCSF the first and third days. A treatment with physostigmine (PHY; 0.25 mg / kg / day V.O.) was done in parallel as a positive control measure. Totalizing six groups. Both treatments with NAC and PHY: 1) reduced the latency to find the platform in the water maze (MWM) and increased exploratory time on the new object task (NOR) of those animals that received STZ; 2) normalized the cortical and hippocampal AChE enzymatic activity enhanced by STZ; 3) rescued the synaptic plasticity, recovering the synaptophysin (SYN), microtubule-associated protein type 2 (MAP2) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) levels reduced by STZ. Thus, the NAC treatment protected from the cognitive impairment induced by STZ in mice, normalizing the cholinergic activity and reestablishing synaptic plasticity. / O déficit cognitivo é uma desordem mental que está associado a doenças neurodegenerativas, como é a doença de Alzheimer (DA) a qual é a forma mais comum de demência. Atualmente não existem evidências consistentes quem permitam apoiar qualquer medida para a prevenção desta doença (DAVIGLUS e col., 2010). Já para o seu tratamento, existem métodos os quais proporcionam alívio relativo dos sintomas, contudo, de natureza paliativa1. Assim, o presente trabalho visou avaliar a n-acetilcisteína (NAC), uma molécula com propriedades neuroprotetora, no tratamento e prevenção da demência consequente da DA, utilizando-se de um modelo experimental de demência induzida pela estreptozotocina (STZ) em camundongos. Inicialmente avaliou-se o efeito da NAC sobre a atividade da acetilcolinesterase (AChE) cerebral de camundongos in vitro. A concentração de ditiobisnitrobenzoato (DTNB) e pH ideais foi de 0,3 mM e 7,4, respectivamente. Obteve-se linearidade na atividade enzimática com concentrações de 0,025 a 0,450 mM de acetiltiocolina (ATCh). Foram adicionados 60 sec de intervalo prévios à adição da ATCh para evitar a interferência da interação DTNB-NAC. A NAC interferiu na Vmax da AChE a partir da concentração de 75 μM sem modificar a Km, caracterizando uma inibição de forma não-competitiva. Em uma segunda instância, avaliou-se o efeito da NAC sobre o déficit cognitivo a curto prazo em camundongos. Para isso, os animais foram divididos em quatro grupos e foram tratados com NAC (50 mg/kg/dia v.o.) ou salina por nove dias consecutivos e com STZ (2.5 mg/kg i.c.v.) ou FCEa no primeiro e terceiro dias. Os resultados mostram que o tratamento com NAC: 1) diminuiu a latência para achar a plataforma no labirinto aquático (MWM) e aumentou a latência para descer da plataforma na esquiva passiva (SDPA) dos animais que apresentaram-se alteradas nos animais que receberam STZ; 2) restaurou a atividade enzimática da AChE e butirilcolinesterase (BChE) e os níveis de acetilcolina (ACh) corticais e hipocampais potencializadas pela STZ; e 3) protegeu do desequilíbrio do metabolismo energético cerebral induzido pela STZ. Finalmente, foi avaliado o efeito da NAC sobre o déficit cognitivo a longo prazo em camundongos. Para tal, os animais foram tratados com NAC (5 mg/kg/dia v.o.) ou salina por 30 dias consecutivos e com STZ (2.5 mg/kg i.c.v.) ou FCEa no primeiro e terceiro dias. Um tratamento com fisostigmina (PHY; 0,25 mg/kg/dia v.o.) foi realizado em paralelo como medida de controle positivo. Totalizando assim seis grupos. Ambos os tratamentos com NAC e PHY: 1) diminuíram a latência para achar a plataforma no labirinto aquático (MWM) e aumentaram o tempo de exploração no novo objeto (NOR) que apresentaram-se alteradas nos animais que receberam STZ; 2) normalizaram a atividade enzimática da AChE cortical e hipocampal potencializada pela STZ; 3) resgataram a plasticidade sináptica, recuperando os níveis de sinaptofisina (SYN), proteína associada aos microtúbulos do tipo 2 (MAP2) e proteína ácida fibrilar glial (GFAP) diminuídas pela STZ. Desta forma, o tratamento com NAC protegeu do déficit cognitivo induzido pela STZ em camundongos, normalizando a atividade colinérgica e reestabelecendo a plasticidade sináptica.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-04Bitstream added on 2014-06-13T19:17:26Z : No. of bitstreams: 1 chapla_vm_me_araiq.pdf: 10108428 bytes, checksum: 973c5f6fd78cf8a4c8aa3bfaf65f6843 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Micro-organismos endofíticos habitam os espaços intra e intercelular de um hospedeiro, durante todo ou parte de seu ciclo de vida, sem causar danos aparentes. Esses micro- organismos são considerados uma fonte importante para a produção de metabólitos secundários com ação antimicrobiana, antitumoral, entre outras. Este trabalho descreve o estudo químico e biológico do fungo endofítico Phomopsis sp. associado à espécie vegetal do cerrado Senna spectabilis. Phomopsis sp. foi cultivado em diferentes meios de cultura para avaliar a variação metabólica em relação a composição dos nutrientes. Foram usados 5 meios líquidos comerciais (MBD, YM, Extrato de Malte, Nutrient e Czapek) e 2 meios sólidos (Milho e Arroz). Os extratos brutos Acetato e Acetonitrila obtidos foram avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detector de arranjo de diodos e por Ressonância Magnética Nuclear de 1 H, e submetidos aos ensaios para a avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica. Os resultados evidenciaram extratos com uma variação metabólica intensa e potencialmente bioativos. Destes, os meios MDB e Milho foram selecionados para obtenção dos extratos brutos em escala ampliada. O extrato bruto acetato obtido em MDB foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou à identificação da uracila (1), ácido nitropropanóico (2), citocalasina H (3), tirosol (4), ciclo(L- Pro-L-Leu), (5), ciclo(L-Pro-L-Ile) (6), ciclo(L-Pro-L-Val) (7), ciclo(L-Pro-L-Tyr) (8) e ciclo(L-Pro-L-Phe) (9). Este é o primeiro relato de dicetopiperazinas obtidos de fungos do gênero Phomopsis. Esta classe de substâncias apresenta inúmeras bioatividades, principalmente antimicrobiana. O extrato bruto acetonitrila obtido de milho conduziu ao isolamento da citocalasina H (3), citocalasina J (10), alternariol monometil éter (11).... não descritos / Endophytic microorganisms inhabit the intra and intercellular spaces of a host, during all or part of their life cycle, without causing any apparent damage. Microorganisms are regarded as an important source for the production of secondary metabolites with antimicrobial, antitumoral actions, among others. This work describes the chemical and biological study of endophytic fungus Phomopsis sp. associated with plant species of Cerrado Senna spectabilis. Phomopsis sp. was cultived in different culture media to assess the metabolic variation in relation to nutrient composition. Were used 5 commercial liquid media (PDB, YM, Malt extract, nutrient and Czapek) and 2 solid mediums (Corn and Rice). The acetate and acetonitrile crude extracts were evaluated by High Performance Liquid Chromatography with Diode Array Detector and 1 H Nuclear Magnetic Resonance and subjected to assays for the evaluation of potential antifungal, antioxidant and anticholinesterase. The results showed extracts with an intense metabolic variation and potentially bioactive. From these, the mediums PDB and Corn were selected to obtain the crude extracts on a large scale. The crude acetate extract obtained in PDB was submitted to chromatographic separation and led to the identification of uracil (1), 3-nitropropionic acid (2), cytochalasin H (3), tyrosol (4), cyclo (L- Pro-L-Leu) (5), cyclo (L-Pro-L-Ile) (6), cyclo (L-Pro-L-Val) (7), cyclo (L-Pro-L-Tyr) (8) and cyclo (L-Pro-L-Phe) (9). This is the first report of diketopiperazines obtained from fungi of the Phomopsis genus. This class of substances shows many bioactivities, especially antimicrobial. The crude acetonitrile extract obtained from Corn led to the isolation of cytochalasin H (3), cytochalasin J (10), alternariol monomethyl ether (11), alternariol (12) and 2-hydroxy-alternariol (13), being the last one reported for the first time as a natural product and with NMR data not reported

Orientador: Ângela Regina Araújo / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Jacqueline Aparecida Takahashi / Resumo: Micro-organismos endofíticos habitam os espaços intra e intercelular de um hospedeiro, durante todo ou parte de seu ciclo de vida, sem causar danos aparentes. Esses micro- organismos são considerados uma fonte importante para a produção de metabólitos secundários com ação antimicrobiana, antitumoral, entre outras. Este trabalho descreve o estudo químico e biológico do fungo endofítico Phomopsis sp. associado à espécie vegetal do cerrado Senna spectabilis. Phomopsis sp. foi cultivado em diferentes meios de cultura para avaliar a variação metabólica em relação a composição dos nutrientes. Foram usados 5 meios líquidos comerciais (MBD, YM, Extrato de Malte, Nutrient e Czapek) e 2 meios sólidos (Milho e Arroz). Os extratos brutos Acetato e Acetonitrila obtidos foram avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detector de arranjo de diodos e por Ressonância Magnética Nuclear de 1 H, e submetidos aos ensaios para a avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica. Os resultados evidenciaram extratos com uma variação metabólica intensa e potencialmente bioativos. Destes, os meios MDB e Milho foram selecionados para obtenção dos extratos brutos em escala ampliada. O extrato bruto acetato obtido em MDB foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou à identificação da uracila (1), ácido nitropropanóico (2), citocalasina H (3), tirosol (4), ciclo(L- Pro-L-Leu), (5), ciclo(L-Pro-L-Ile) (6), ciclo(L-Pro-L-Val) (7), ciclo(L-Pro-L-Tyr) (8) e ciclo(L-Pro-L-Phe) (9). Este é o primeiro relato de dicetopiperazinas obtidos de fungos do gênero Phomopsis. Esta classe de substâncias apresenta inúmeras bioatividades, principalmente antimicrobiana. O extrato bruto acetonitrila obtido de milho conduziu ao isolamento da citocalasina H (3), citocalasina J (10), alternariol monometil éter (11).... não descritos / Abstract: Endophytic microorganisms inhabit the intra and intercellular spaces of a host, during all or part of their life cycle, without causing any apparent damage. Microorganisms are regarded as an important source for the production of secondary metabolites with antimicrobial, antitumoral actions, among others. This work describes the chemical and biological study of endophytic fungus Phomopsis sp. associated with plant species of Cerrado Senna spectabilis. Phomopsis sp. was cultived in different culture media to assess the metabolic variation in relation to nutrient composition. Were used 5 commercial liquid media (PDB, YM, Malt extract, nutrient and Czapek) and 2 solid mediums (Corn and Rice). The acetate and acetonitrile crude extracts were evaluated by High Performance Liquid Chromatography with Diode Array Detector and 1 H Nuclear Magnetic Resonance and subjected to assays for the evaluation of potential antifungal, antioxidant and anticholinesterase. The results showed extracts with an intense metabolic variation and potentially bioactive. From these, the mediums PDB and Corn were selected to obtain the crude extracts on a large scale. The crude acetate extract obtained in PDB was submitted to chromatographic separation and led to the identification of uracil (1), 3-nitropropionic acid (2), cytochalasin H (3), tyrosol (4), cyclo (L- Pro-L-Leu) (5), cyclo (L-Pro-L-Ile) (6), cyclo (L-Pro-L-Val) (7), cyclo (L-Pro-L-Tyr) (8) and cyclo (L-Pro-L-Phe) (9). This is the first report of diketopiperazines obtained from fungi of the Phomopsis genus. This class of substances shows many bioactivities, especially antimicrobial. The crude acetonitrile extract obtained from Corn led to the isolation of cytochalasin H (3), cytochalasin J (10), alternariol monomethyl ether (11), alternariol (12) and 2-hydroxy-alternariol (13), being the last one reported for the first time as a natural product and with NMR data not reported / Mestre

Os inibidores da enzima acetilcolinesterase constituem o principal tratamento da doença de Alzheimer e fontes de substâncias naturais com potencial anticolinesterásico vêm sendo amplamente estudadas. Dentre os frutos com benefícios para a saúde, a romã é evidenciada como excelente fonte de compostos antioxidantes, sendo que maior parte dos compostos se concentram em sua casca. Com base nisso, o objetivo desta pesquisa foi buscar novas substâncias naturais com potencial anticolinesterásico, através da avaliação de extratos de casca de romã. Quatro extratos com diferentes concentrações de etanol foram analisados quanto à atividade antioxidante, quantidade de compostos fenólicos, taninos e atividade anticolinesterásica. Do presente estudo foi constatado que a casca da romã apresentou elevada capacidade antioxidante, independente da concentração do solvente de extração empregado. O extrato formulado com 80% de etanol se destacou perante os demais pelo seu poder de inibição da acetilcolinesterase. Houve correlação negativa entre a atividade anticolinesterásica e a atividade antioxidante dos extratos. A atomização do extrato não acarretou mudanças em sua atividade anticolinesterásica e nem na sua capacidade antioxidante. Da mesma forma, a adição das micropartículas a um suco elaborado a partir de um preparado em pó não modificou suas características sensoriais. Diante do exposto, a elaboração de micropartículas de extrato de casca de romã constitui alternativa viável para a incorporação em diversos produtos, com a finalidade de prevenir ou reduzir risco da doença de Alzheimer. / The acetylcholinesterase inhibitors are the primary treatment of Alzheimer\'s disease and sources of natural substances with potential anticholinesterase have been widely studied. Among the fruits with health benefits, the pomegranate is evidenced as an excellent source of antioxidant compounds, and most compounds are concentrated in its peel. Based on this, the objective of this research was to find new substances with potential anticholinesterase, through the evaluation of pomegranate peel extracts. Four extracts with different concentrations of ethanol were analyzed for their antioxidant activity, amount of phenolic compounds, tannins and anticholinesterase activity. From this study it was found that pomegranate peel showed high antioxidant capacity, independent of the concentration of the solvent extraction employed. The extract formulated with 80% ethanol in relation to other stood out by his power of acetylcholinesterase inhibition. There was a negative correlation between acetylcholinesterase activity and antioxidant activity of the extracts. Microencapsulation of extract did not cause changes in their anticholinesterase activity and antioxidant capacity. The same way, the addition of microcapsules to a powder preparation for refreshment not changed their sensory characteristics. Given the above, the preparation of microcapsules of pomegranate peel extract is a viable alternative for incorporation into various products, in order to prevent or reduce risk of Alzheimer\'s disease.

This work involved the synthesis of N-methylcarbamates, including preparation of this class of compounds from the anacardic acids (7), a main constituent of cashew nut shell liquid (CNSL). The carbamates synthesized and their synthetic intermediates were anticholinesterase and molluscicidal potential evaluated. Thus, this work begins with a literature review that addresses the LCC in then was discuss some methodologies related to the synthesis of carbamates. The preliminary phase of work included the study experimental synthetic route for the preparation of amino N-methylcarbamates (152) from m-cresol (151). Obtaining the first synthesis intermediates (9) was initiated by carbamatation of the m-cresol (151). The intermediary then had obtained his position benzylic bromine to produce alkyl halide (176), which was subsequently amine to complete the synthesis of amino N-methylcarbamates (152) sought. Giving following the work, and already knowing the reaction conditions for synthesis of amino N-methylcarbamates from phenols, were initiated experiments to obtain the amino N-methylcarbamates (8) from anacardic acids (7), a constituent of CNSL. At first, the cardanols (12) were prepared from the decarboxylation of anacardic acids (7) and then it was hydrogenated to obtain a phenol, the cardanol hydrogenated (18). The cardanol hydrogenated (18) underwent carbamatation using methyl isocyanate (173), carbamate obtained (177) had its benzylic position bromine and the alkyl halide (178) generated was finally amine with dimethylamine (159). After the four steps synthetic succession, the desired product was obtained with 17% yield overall. Since the successful preparation of 1'-dimethylamino N-methyl hidrocardanilcarbamate (8), were synthesized other carbamates using methyl isocyanate (173). Among these are carbaryl (2) and metolcarbe (9), commercial pesticides and their analogues (10) and (11). N-methylcarbamates (177) and (181) derived from the CNSL, were also prepared using the same methodology. The ability to inhibit AChE and molluscicidal activity of carbamates were then prepared evaluated, and the amino N-methylcarbamates (8) showed an IC50 of 0.17 mM, slightly higher than acetylcholinesterase activity than the metolcarbe (9), whose IC50 value is equal to 0.90 mM. The amino N-methylcarbamates (8) also showed moderate potential to eliminate the mollusk species B. glabrata, and its lethal concentration, LC10, LC50 and LC90 of 7.22 ppm (0.0178 mmol / L), 12.81 ppm (0.0317 mmol / L) and 22.73 ppm (0.0562 mmol / L), respectively. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho envolveu a síntese de N-metilcarbamatos, incluindo a preparação de compostos dessa classe a partir dos ácidos anacárdicos (7), um dos principais constituintes do Líquido da Castanha de Caju (LCC). Os carbamatos sintetizados e os intermediários de síntese tiveram seu potencial anticolinesterásico e moluscicida avaliados. Desta maneira, esta tese tem início com uma revisão bibliográfica que aborda o LCC, em seguida são discutidas algumas metodologias relacionadas com a síntese de carbamatos. A fase preliminar do trabalho compreendeu o estudo experimental da rota sintética para a preparação do amino N-metilcarbamato (152) a partir do m-cresol (151). A obtenção do primeiro intermediário de síntese (9) foi iniciada pela carbamatação do m-cresol (151). O intermediário obtido teve então sua posição benzílica bromada para produzir o bromocomposto (176), o qual foi posteriormente aminado para finalizar a síntese do amino N-metilcarbamato (152) almejado. Dando sequência ao trabalho, e já conhecendo as condições reacionais para a síntese de amino N-metilcarbamatos a partir de fenóis, foram iniciados os experimentos para obtenção do amino N-metilcarbamato (8) a partir dos ácidos anacárdicos (7), constituinte do LCC. A princípio, os cardanóis (12) foram preparados a partir da descarboxilação dos ácidos anacárdicos (7) e em seguida este foi hidrogenado para obter um fenol, o cardanol hidrogenado (18). O cardanol hidrogenado (18) foi submetido à carbamatação utilizando isocianato de metila (173), o carbamato obtido (177) teve sua posição benzílica bromada e o bromocomposto (178) gerado foi finalmente aminado com dimetilamina (159). Após as 4 etapas sintéticas sucessivas, o produto almejado foi obtido com 17% de rendimento global. Visto o sucesso na preparação do 1'-dimetilamino N-metil-hidrocardanilcarbamato (8), foram sintetizados outros carbamatos utilizando isocianato de metila (173). Dentre estes estão o carbaril (2) e metolcarbe (9), pesticidas comerciais, e seus respectivos análogos (10) e (11). Os N-metilcarbamatos (177) e (181) derivados do LCC, também foram preparados utilizando a mesma metodologia. A capacidade de inibir a AChE e a atividade moluscicida dos carbamatos preparados foram então avaliadas, sendo que o amino N-metilcarbamato (8) revelou uma CI50 de 0,17 mM, atividade anticolinesterásica ligeiramente superior que a do metolcarbe (9), cujo valor de CI50 é igual a 0,90 mM. O amino N-metilcarbamato (8) também apresentou potencial moderado em eliminar o molusco da espécie B. glabrata, sendo suas concentrações letais, CL10, CL50 e CL90 de 7,22 ppm (0,0178 mmol/L), 12,81 ppm (0,0317 mmol/L) e 22,73 ppm (0,0562 mmol/L), respectivamente.

Os inibidores da enzima acetilcolinesterase constituem o principal tratamento da doença de Alzheimer e fontes de substâncias naturais com potencial anticolinesterásico vêm sendo amplamente estudadas. Dentre os frutos com benefícios para a saúde, a romã é evidenciada como excelente fonte de compostos antioxidantes, sendo que maior parte dos compostos se concentram em sua casca. Com base nisso, o objetivo desta pesquisa foi buscar novas substâncias naturais com potencial anticolinesterásico, através da avaliação de extratos de casca de romã. Quatro extratos com diferentes concentrações de etanol foram analisados quanto à atividade antioxidante, quantidade de compostos fenólicos, taninos e atividade anticolinesterásica. Do presente estudo foi constatado que a casca da romã apresentou elevada capacidade antioxidante, independente da concentração do solvente de extração empregado. O extrato formulado com 80% de etanol se destacou perante os demais pelo seu poder de inibição da acetilcolinesterase. Houve correlação negativa entre a atividade anticolinesterásica e a atividade antioxidante dos extratos. A atomização do extrato não acarretou mudanças em sua atividade anticolinesterásica e nem na sua capacidade antioxidante. Da mesma forma, a adição das micropartículas a um suco elaborado a partir de um preparado em pó não modificou suas características sensoriais. Diante do exposto, a elaboração de micropartículas de extrato de casca de romã constitui alternativa viável para a incorporação em diversos produtos, com a finalidade de prevenir ou reduzir risco da doença de Alzheimer. / The acetylcholinesterase inhibitors are the primary treatment of Alzheimer\'s disease and sources of natural substances with potential anticholinesterase have been widely studied. Among the fruits with health benefits, the pomegranate is evidenced as an excellent source of antioxidant compounds, and most compounds are concentrated in its peel. Based on this, the objective of this research was to find new substances with potential anticholinesterase, through the evaluation of pomegranate peel extracts. Four extracts with different concentrations of ethanol were analyzed for their antioxidant activity, amount of phenolic compounds, tannins and anticholinesterase activity. From this study it was found that pomegranate peel showed high antioxidant capacity, independent of the concentration of the solvent extraction employed. The extract formulated with 80% ethanol in relation to other stood out by his power of acetylcholinesterase inhibition. There was a negative correlation between acetylcholinesterase activity and antioxidant activity of the extracts. Microencapsulation of extract did not cause changes in their anticholinesterase activity and antioxidant capacity. The same way, the addition of microcapsules to a powder preparation for refreshment not changed their sensory characteristics. Given the above, the preparation of microcapsules of pomegranate peel extract is a viable alternative for incorporation into various products, in order to prevent or reduce risk of Alzheimer\'s disease.

This work describes the isolation of some chemical constituents from the extracts of leaves and stems of Guettarda grazielae M.R.V. Barbosa, guided by larvicidal, anticholinesterase and antioxidant activities. Furthermore, a review of the biological activities of extracts and substances described in species this genus, and a compilation of triterpenes reported in the Rubiaceae species was also made. The leaves and stems, after drying and grounded, were extracted by maceration with acetone and/or ethanol. The extracts were submitted to a liquid partition between MeOH-H2O 3:2 and solvents of different polarity (hexane, chloroform and ethyl acetate). The crude extracts, as well as the fractions from this procedure, were evaluated for their potential larvicidal (larvae of the 4th stage of Aedes aegypti), antioxidant (total phenols content and DPPH) and anticholinesterase. The hexane and EtOAc fractions from ethanol extract of the leaves and stem, respectively, were the most promising in larvicidal assays, LC50 131.73 ppm and LC50 58.18 ppm. In comparison with caffeine (standard), the crude acetone extract from the leaves, as well as some of its sub-fractions from filtering into the silica gel of the fractions in hexane and chloroform, were qualitatively effective in inhibiting the action of the enzyme acetylcholinesterase. On the other hand, in the antioxidants tests, MeOH-H2O from stem (347.75 ± 0.02 GAE/g) and EtOAc fractions from the leaves (298.03 ± 0002 GAE/g) exhibit higher phenolic content. Of these, only the EtOAc fraction showed moderately active (IC50 164.85 ± 2.76 μg/mL) against DPPH. The other fractions showed weak activity or were inactive. Some of the fractions from leaves and stems that were considered promising in these assays were investigated and led to the isolation and identification structural (NMR, including DEPT) of a phytosteroid (Sitostenone) and five triterpenes (Cicloartenone, 3β,19α,23- trihydroxy-urs-12-ene, 3β,6β,19α,23-tetrahydroxy-urs-12-en-28-oic acid, 3-O-β-Dglucopyranosylquinovic acid and ursolic acid), that in general will help to expand the chemical profile of the genus Guettarda as well as of the family Rubiaceae. The review of the triterpenes that occurs in the family Rubiaceae revealed that among all species investigated, it was isolated a total of 373 triterpenes with 12 different types of skeletons and being oleanane and ursane the most representatives. Regarding the genus Guettarda, the literature records the occurrence of 44 different compounds distributed in ten species, which alkaloids and triterpenes are the most abundant compounds. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho descreve o isolamento, monitorado pelas atividades larvicida, anticolinesterásica e antioxidante, de alguns dos constituintes químicos presentes em extratos das folhas e do caule de Guettarda grazielae M.R.V. Barbosa. Ademais, também foi efetuada uma revisão das atividades biológicas observadas para extratos e substâncias descritas em espécies deste gênero, bem como uma compilação dos triterpenos relatados em Rubiaceae. Folhas e caule, após secagem e trituração, foram extraídos através de maceração com acetona e/ou etanol. Os extratos obtidos foram então particionados entre MeOH-H2O 3:2 e solventes de diferentes polaridades (hexano, clorofórmio e acetato de etila). Os extratos brutos, bem como as frações provenientes deste procedimento, foram avaliados quanto ao potencial larvicida (larvas do 4º estádio de Aedes aegypti), anticolinesterásico e antioxidante (teor de fenóis totais e DPPH). As frações em hexano e em AcOEt, oriundas dos extratos em etanol das folhas e do caule foram as mais promissoras nos ensaios larvicidas (CL50 131,73 e 58,18 ppm, respectivamente). O extrato bruto em acetona das folhas, bem como algumas das suas subfrações provenientes de filtração em gel de sílica das frações em hexano e em clorofórmio, foram efetivas em inibir qualitativamente a ação da enzima acetilcolinesterase, quando comparados com a cafeína. Por outro lado, nos ensaios antioxidantes, as frações em MeOHH2O do caule (347,75 ± 0,02 EAG/g) e em AcOEt das folhas (298,03 ± 0,002 EAG/g) foram as mais ricas em compostos fenólicos. Destas, somente a fração em AcOEt foi moderadamente ativa (CI50 164,85 ± 2,76 μg/mL) frente ao DPPH. As demais frações apresentaram fraca atividade ou foram inativas. Algumas das frações das folhas e do caule, consideradas promissores nestes ensaios, foram investigadas e conduziram ao isolamento e identificação estrutural (RMN, incluindo DEPT) de um fitoesteróide (Sitostenona) e de cinco triterpenos (Cicloartenona, 3β,19α,23-triidroxi-urs-12-eno, ácido 3β,6β,19α,23-tetrahidroxi-urs-12-en- 28-óico, ácido 3-O-β-D-glicopiranosilquinóvico e ácido ursólico) que de um modo geral, irão contribuir para ampliar o perfil químico do gênero Guettarda, bem como da família Rubiaceae. O levantamento bibliográfico dos triterpenos que ocorrem na família Rubiaceae revelou que dentre as espécies até então investigadas, um total de 373 triterpenos com 12 diferentes tipos de esqueletos, sendo oleanano e ursano os mais representativos, foram até então isolados. Em relação ao gênero Guettarda, a literatura registra a ocorrência de 44 diferentes compostos distribuídos em dez espécies, sendo os alcalóides e os triterpenos os mais abundantes.

This work describes the isolation of some chemical constituents besides the evaluation of toxicity against Artemia salina Leach, total phenolic content, using Folin-Ciocalteu reagent, inhibition of acetylcholinesterase and antioxidant (DPPH) activities of extracts of leaves of Lindackeria paraensis Kulhm (Flacourtiaceae). In the antioxidant assays, some of the extracts and chromatographic fractions tested showed high total phenolic content, when compared to positive controls used (ascorbic acid, α-tocopherol and BHT) free radicals scavenger. In the anticholinesterasic assays, some these extracts were effective to inhibit the enzyme. On the other hand, in the toxicity assay against Artemia salina, among samples tested, only three were non toxic (LC50 upper to 1000 mg/mL) and seven showed high toxicity (LC50 under to 500 mg/mL), suggesting that this species must be evaluated for other activities, such as insecticidal, pesticide, cercaricidal and others that dependent of citotoxicity. Phytochemical study with some these active extracts conduced to the isolation of two pentacyclic triterpenes (fridelin and fridelinol) and four flavones (5-Hydroxy-7,4 -dimethoxyflavone, 5,4 -Dihydroxy- 7-methoxy-flavone, 5,7,4 -Trihydroxy-3 -methoxyflavone, and 5,4 -Dihydroxy-7,3 - dimethoxyflavone). All isolated compounds were identified on the basis of the NMR spectral data and by comparison with literature data and are being described for the first time in the genus Lindackeria. The flavones identified as 5,7,4 -trihydroxy-3 -methoxyflavone, 5- hydroxy-7,4 -dimethoxy-flavone and 5,4 -Dihydroxy-7-methoxyflavone free scavenging radicals against DPPH and 5,4 -dihydroxy-7-methoxyflavone inhibited the action of anticholinesterase enzyme. / O presente trabalho descreve o isolamento de alguns constituintes químicos, a avaliação da toxicidade frente à Artemia salina Leach, o conteúdo de fenóis totais (reagente Folin-Ciocalteu) e as atividades anticolinesterásica e antioxidante, utilizando o DPPH, de extratos e frações das folhas de Lindackeria paraensis Kuhlm (Flacourtiaceae). Nos ensaios antioxidantes, alguns dos extratos e frações testados forneceram altos teores de fenóis totais e, quando comparados com os padrões positivos utilizados (ácido ascórbico, α-tocoferol e BHT), seqüestraram radicais e DPPH. Alguns desses extratos foram eficazes em inibir o efeito da enzima acetilcolinesterase. Nos ensaios de toxicidade frente à Artemia salina, dentre as amostras que foram avaliadas, somente três foram atóxicas (CL50 superior a 1000 mg/mL) e sete mostraram alta toxicidade (CL50 inferior a 500 mg/mL), sugerindo que esta espécie possui outras atividades biológicas, tais como inseticida, pesticida, cercaricida e outras que dependam de citotoxicidade. O estudo fitoquímico efetuado com alguns dos extratos ativos conduziu ao isolamento de dois triterpenos pentacíclicos (Fridelina e Fridelinol) além de quatro flavonas (5-Hidroxi-7,4 -dimetoxiflavona, 5,4 -Dihidroxi-7-metoxyflavona, 5,7,4 - Trihidroxi-3 -metoxi-flavona e 5,4 -Dihidroxi-7,3 -dimetoxiflavona). Estas substâncias tiveram suas estruturas identificadas com base na análise dos dados de RMN e pela comparação com dados da literatura e todas estão sendo relatadas pela primeira vez no gênero Lindackeria. As flavonas identificadas como 5,7,4 -trihidroxi-3 -metoxiflavona, 5-Hidroxi- 7,4 -dimetoxiflavona e 5,4 -Dihidroxi-7-metoxi-flavona frente ao DPPH sequestraram o radical e nos ensaios anticolinesterásicos, somente a flavona identificada como 5,4 - Dihidroxi-7-metoxiflavona inibiu a ação desta enzima.