La fusion entre des cellules de rate de souris immunisées avec des suspensions de tumeurs primaires mammaires humaines et des cellules d'une lignée de myélome de souris a permis d’obtenir des anticorps monoclonaux reconnaissant les cellules épithéliales. De cette banque d'anticorps, trois réagissent contre des filaments cytoplasmiques. La caractérisation de ces anticorps monoclonaux a été faite à l'aide de techniques d'immunohistochimie, immunofluorescence et immunoperoxydase, en utilisant différentes lignées cellulaires humaines et différents tissus épithéliaux et non-épithéliaux humains, afin de connaître la spécificité des anticorps. Le poids moléculaire relatif des protéines reconnues par les anticorps a été déterminé par immunodétection de type western après transfert des protéines sur membrane de nitrocellulose. Les résultats présentés dans ce mémoire concernent uniquement la caractérisation d'un anticorps monoclonal, 1B6, qui reconnaît spécifiquement plusieurs cytokératines. Par sa spécificité, cet anticorps est un marqueur des cytokératines, donc des cellules d'origine épithéliale normales et tumorales. Il représente ainsi un outil utile et unique à notre connaissance pour le diagnostic, en pathologie, de métastases d'origine épithéliale. Au niveau de la recherche fondamentale, il constitue un outil intéressant pour l'étude, entre autres de la différenciation cellulaire épithéliale et du rôle des cytokératines. / Montréal Trigonix inc. 2018

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine : Nancy 1 : 2004. / Titre provenant de l'écran-titre.

Les anticorps (Ac) marqués à l'aide de phthalocyanines (Pc) ont un grand potentiel d'applications pour des essais d'immunofluorescence tout comme pour la thérapie photodynamique (PDT). La PDT est une forme relativement nouvelle de traitement du cancer ou d'autres maladies bénignes tel le psoriasis. Cette technique implique l'administration et l'activation par la lumière d'un photosensibilisateur localisé préférentiellement au niveau des cellules cancéreuses ou en croissance intense. La plupart des photosensibilisateurs utilisés pour la PDT sont de type porphyrine tels les Pcs. Dans cette étude, nous utilisons différentes phthalocyanines hautement solubles dans l'eau. Notre étude est basée sur l'utilisation d'anticorps monoclonaux comme vecteur des Pcs et comporte deux volets distincts. Tout d'abord l'utilisation des Pcs comme fluorochrome et finalement l'utilisation des complexes OKT3-AlPcS[indice inférieur 3]A[indice inférieur 1] dans l'amélioration de la PDT. Les Pcs sont liés de façon covalente aux Ac monoclonaux via une chaîne carboxy activée du Pc par la méthode de carbodiimide/N-hydroxysulfosuccinimide. Le complexe OKT3-AlPcS[indice inférieur 3]A[indice inférieur 1] lié à l'antigène de la surface cellulaire des cellules Jurkat CD3+ est visualisé par un trieur en cryométrie de flux (FACSCAN) et la phototoxicité in vitro est déterminée par un essai colorimétrique (test MTT). Nous avons donc produit un Ac de très bonne pureté et confirmé par cryométrie de flux la conservation de l'activité et de la spécificité de la liaison de l'Ac pour le récepteur après liaison covalente avec le Pc. Nous sommes ainsi les premiers à proposer l'utilisation des Pcs comme fluorochrome. Nous avons de plus vérifié la cytotoxicité médiée par le complexe qui s'est avérée non spécifique au clone cellulaire exprimant le récepteur CD3 reconnu par l'Ac. Nous proposons deux mécanismes de liaison du complexe OKT3-AlPcS[indice inférieur 3]A[indice inférieur 1] au niveau des cellules."--Résumé abrégé par UMI.

De part, leur implication dans la prolifération cellulaire, l'invasion et leur surexpression dans de nombreux cancers, les récepteurs à tyrosine kinase de la famille HER constituent des cibles de choix en oncologie. Parmi ces récepteurs, le récepteur HER3 semble pertinent car il est impliqué dans la tumorigenèse de nombreux cancers (sein, ovaire, pancréas, mélanome…) et il est associé à un mauvais pronostic. De plus, la surexpression du récepteur HER3 est souvent associée à l'apparition de résistance aux thérapies ciblées. Nous avons sélectionné plusieurs anticorps anti-HER3 humains et murins respectivement par « phage display » et fusion cellulaire. Ces derniers reconnaissent spécifiqument le récepteur HER3. Parmi les nombreux anticorps découvert, nous avons sélectionné un anticorps anti-HER3 humain H4B-121 et 2 anticorps anti-HER3 murins 9F7-F11 et 16D3-C1. Ces derniers ont la capacité à faire régresser des tumeurs épidermoide, pancréatique et triple négative chez la souris, en présence ou en abscence de neuréguline et indépendamment du status HER2 et P53/PTEN. Cette inhibition est possible grâce à un blocage du cycle cellulaire en phase G1, une inhibition de la prolifération ainsi qu'une induction de l'apoptose. Ces trois anticorps sont capables de bloquer l'hétérodimérisation des récepteurs HER2/HER3 ainsi que la phosphorylation du récepteur HER3. Ils sont aussi capables d'inhiber la phosphorylation de la protéine AKT ainsi que de ses cibles (MDM2, FOXO et XIAP). De plus, nous avons montré que nos anticorps sont capables de lyser les cellules tumorales par ADCC (Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity). Cette étude démontre que ces anticorps anti-HER3 représentent une nouvelle thérapie pour les cancers du pancréas et du sein triple négatif. / Due to their implication in the cellular proliferation, the invasion and their surexpression in numerous cancers, the tyrosine kinase receptors of HER family constitute one of the best targets in oncology. Within this family, the human epidermal growth factor receptor 3 (HER3) plays a role in tumorigenesis of different cancers (Breast, melanoma, pancreas and ovary). This receptor is implicated in drug resistance and he is over expressed in cancers that are not eligible for the currently approved targeted therapies. To this end, we generated specific antibodies (Abs) against domain 1 (D1) and domain 3 (D3) of HER3 that recognize epitopes that do not overlap with the neuregulin-binding site. The fully human H4B-121 Ab and the mouse monoclonal Abs 16D3-C1 and 9F7-F11 inhibited tumor growth in nude mice xenografted with epidermoid, pancreatic, or triple-negative breast cancer cells independently of NRG addiction, HER2 status and p53/PTEN mutations. The combination of one anti-HER3 Ab and trastuzumab improved tumor growth inhibition in mice xenografted with HER2(low) cancer cell lines, for which trastuzumab alone shows no or moderate efficiency. Ab-induced disruption of tumor growth was associated with G1 cell cycle arrest, proliferation inhibition, and apoptosis of cancer cells. Anti-HER3 Abs blocked HER2/HER3 heterodimerization and HER3 phosphorylation at the cell membrane, leading to inhibition of phosphorylation of the downstream AKT targets murine double minute 2, X-linked inhibitor of apoptosis, and forkhead box O1. Anti-HER3 Abs can also induice antibody dependant cell-mediated cytotoxicity. This study demonstrates that anti-HER3 D1 and D3 Abs could represent a new option for immunotherapy of pancreatic and triple-negative breast cancers.

La formation du complexe de fusion qui précède la fusion est essentielle à l’infection de la cellule-cible par le VIH-1. L’inhibition de la formation de ce complexe de fusion peut empêcher l’infection et représenter un moyen de traitement antirétroviral. Plusieurs équipes ont essayé de produire des anticorps neutralisants par immunisation de souris ou de lapins avec des peptides linéaires non conformationnels, mais sans résultat. L’élaboration d’une lignée de cellules eucaryotes exprimant la structure HR1-PID-HR2 TM viral nous a permis de le faire. Cette lignée est un outil susceptible d’engendrer des anticorps monoclonaux (mAb). Trois mAbs contre le complexe de fusion de la région gp41 ont été produits chez la souris. L’activité neutralisante des anticorps produits a été évaluée sur des souches de laboratoires et des isolats primaires de VIH-1 de clades B et C. Ils induisent des réponses neutralisantes à large spectre. Les résultats obtenus montrent aussi que les trois anticorps monoclonaux pouvaient inhiber la formation de syncytia et bloquer l’interaction entre les structures HR1 et HR2 / Envelope glycoprotein is the primary target for human immunodeficiency virus (HIV) vaccine design. The N-terminal and the C-terminal regions of the gp41 interact with each other to form six helix bundle which is responsible for the fusion between the viral membrane and the target cell membrane. Monoclonal antibodies that disrupt the formation of the six helix bundle inhibit the HIV fusion. During the last decade, several human monoclonal antibodies of potent antiviral capacity for neutralizing primary isolates of different clades have been developed. The most broadly neutralizing monoclonal antibodies (mAbs) were screened from HIV-1 seropositive patients and recognized linear epitopes within the membrane proximal region of gp41. In this study, we developed a stable transfected eucaryot cell line expriming a well folded complex. Three mAbs against HIV-1 gp41 were prepared in mice. Our results show that the three mAbs were able to neutralize and inhibit the HIV-1 infection. Two of the mAbs bound to the recombinant folded gp140 and recognized HR1/HR2 regions while one of them recognized linear epitope within the HR2. Interestingly, the results showed that the three mAbs could inhibit the syncytium formation and block the interaction between the HR1 and the HR2 region

Malgré les récentes avancées dans la prise en charge des neuroblastomes de haut risque, le pronostic des patients qui en sont atteints reste péjoratif. Les modalités thérapeutiques sont agressives et de nombreux enfants souffrent des effets secondaires de celles-ci, dégradant de ce fait leur qualité de vie. L’immunothérapie anti-GD2 offre dans ce contexte une alternative thérapeutique, permettant d’améliorer le pronostic de ces tumeurs, mais leur utilisation est néanmoins limitée par la présence d’une toxicité des molécules existantes. Le GD2 O-acétylé n’étant pas exprimé à la surface des fibres nerveuses périphériques, le choisir comme cible thérapeutique peut s’avérer efficace tout en diminuant la toxicité de l’immunothérapie. Nous avons vérifié l’expression du GD2 O-acétylé à la surface des cellules de 4 lignées cellulaires de neuroblastome (LAN1, LAN5, IMR5, NXS2). Cette expression n’est pas modifiée par les traitements par chimiothérapie utilisés dans les traitements des neuroblastomes de haut grade (cisplatine, doxorubicine et topotecan). Nous montrons que l’anticorps murin 8B6 spécifique du GD2 O-acétylé a une relation synergique in vitro avec les molécules de chimiothérapie testées (cisplatine, doxorubicine et topotecan). Nous montrons par la suite que cet anticorps augmente l’efficacité de la doxorubicine et du topotecan in vivo chez la souris sans diminuer la tolérance globale du traitement multimodal. Nos résultats montrent qu’un traitement combinant chimiothérapie et immunothérapie peut augmenter l’efficacité et la tolérance cliniques des chimiothérapies dans le traitement des neuroblastomes de haut grade. / Despite recent advances in high-risk neuroblastoma therapy, the prognosis for patients remains poor. In addition, many patients suffer from complications related to available therapies that are highly detrimental to their quality of life. New treatment modalities are, thus, urgently needed to further improve the efficacy and reduce the toxicity of existing therapies. Since antibodies specific for Oacetyl GD2 ganglioside display pro-apoptotic activity against neuroblastoma cells, we hypothesized that combination of immunotherapy could enhance tumor efficacy of neuroblastoma chemotherapy. We demonstrate here that combination of anti-Oacetyl GD2 monoclonal antibody 8B6 with topotecan synergistically inhibited neuroblastoma cell proliferation, as shown by the combination index values. Mechanistically, we evidence that mAb 8B6 induced plasma cell membrane lesions, consistent with oncosis. Neuroblastoma tumour cells treated with mAb 8B6 indeed showed an increased uptake of topotecan by the tumor cells and a more profound tumor cell death evidenced by increased caspase-3 activation. We also found that the combination with topotecan plus monoclonal antibody 8B6 showed a more potent anti-tumor efficacy in vivo than either agent alone. Importantly, we used low-doses of topotecan with no noticeable side effect. Our data suggest that chemoimmunotherapy combinations may improve the clinical efficacy and safety profile of current chemotherapeutic modalities of neuroblastoma.

Mémoire de D.E.S. : Pharmacie hospitalière et des collectivités : Université de Nantes : 2007. Thèse d'exercice : Pharmacie : Université de Nantes : 2007. / Bibliogr.

Thèse doctorat : Dispositifs de l'Electronique Intégrée : Villeurbanne, INSA : 1996. / Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. p. [103]-106.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine : Nancy 1 : 2003. / Titre provenant de l'écran-titre.

Thèse de doctorat : Biologie Cellulaire : Nancy 1 : 2008. / Titre provenant de l'écran-titre.