No description available.

No description available.

No description available.

Staphylococcus aureus est une bactérie pathogène des animaux et de l'homme causant plusieurs symptômes chez ceux-ci. De plus, elle est responsable d'intoxications alimentaires liées à l'ingestion de nourritures contaminées par des entérotoxines staphylococciques. Avec l'émergence de souches staphylococciques résistantes aux .antibiotiques, l'utilisation de phages virulents est maintenant envisagée comme alternative pour lutter contre les souches pathogènes de S. aureus. Au cours de ce projet, un nouveau phage virulent (LH1) a été isolé à partir d'échantillons de lait cru. L'utilisation de ce dernier et du phage K dans du lait UHT a montré qu'ils sont capables d'éliminer les souches de S. aureus mais que leur activité lytique est inhibée dans le lait cru par un composé encore inconnu. La présence de deux gènes codant pour la toxine leucocidine de Panton-Valentin dans le génome du phage LH1 compromet son utilisation comme agent de biocontrôle dans les applications alimentaires et médicales. Finalement, un arbre phylogénétique a été créé en comparant et regroupant 54 génomes de phages différents de S. aureus disponibles dans GenBank en plus de deux nouveaux phages isolés incluant LH1. L'avancement des connaissances sur des phages de S. aureus pourrait favoriser leur utilisation dans la prévention ou le contrôle des intoxications alimentaires.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de cepas de Staphylococcus aureus no ambiente de ordenha, analisar seu perfil genético e a produção de biofilme, provenientes de 10 propriedades localizadas nas regiões de Franca e Ribeirão Preto, estado de São Paulo, Brasil. Foram analisadas 220 amostras de leite individual de vacas positivas no teste CMT (California Mastitis Test), 120 amostras de leite de tanque de expansão, 389 swabs de utensílios e equipamento relacionados com ordenha e 120 swabs de mãos de manipuladores. As coletas de amostras foram realizadas mensalmente durante o período de agosto/2010 a janeiro/2011. Das 849 amostras analisadas, 56 cepas de S. aureus (6,6%) foram isoladas, sendo 12 (5,4%) de leite individual de vacas, 26 (21,6%) de leite de tanque de expansão, 14 (3,6%) de utensílios e equipamentos e 4 (6,9%) de mãos de manipuladores. Os resultados indicam uma baixa prevalência de S. aureus nas propriedades analisadas, não havendo diferença significativa entre as frequências encontradas nas duas regiões analisadas. A técnica de PFGE (pulsed-field gel electrophoresis) permitiu identificar 31 perfis genéticos (pulsotipos), utilizando-se a enzima de restrição SmaI. Nos ensaios de produção de biofilmes em microplaca, 19 (63,3%) de 30 pulsotipos avaliados foram considerados produtores de biofilme. Nos ensaios conduzidos em aço inox, 13 (43,3%, N=30) foram positivos e, para o silicone, não houve produção de biofilme. O elevado percentual de isolados no leite de tanque de expansão evidencia um problema de saúde pública, considerando que no Brasil muitas vezes o leite é consumido sem pasteurização. A ocorrência de pulsitipos de S. aureus formadores de biofilmes indica a persistência do patógeno em diversos pontos no ambiente de ordenha, bem como provável envolvimento dos mesmos com casos de mastite e sua eliminação no leite, ressaltando a necessidade de práticas higiênicas para prevenir a formação de biofilmes nas propriedades estudadas. / The objective of the present study was to evaluate the occurrence of biofilm-producing strains of Staphylococcus aureus in the milking environment from 10 farms located in the regions of Franca and Ribeirão Preto, state of São Paulo, Brazil. Twohundred twenty samples of milk from individual cows previously tested for CMT (California Mastitis Test), 120 samples of bulk tank milk, 389 swabs of equipments and utensils related to milking and 120 swabs of milk\'s handlers hands were analyzed. A total of 56 (6.6%) S. aureus strains were isolated out of 849 samples analyzed, being 12 (5.4%) from milk samples from individual cows, 26 (21.6%) from bulk tank milk, 14 (3.6%) from swabs of equipments and utensils, and 4 (3.3%) from swabs hands of milk\'s handlers. Results indicated a low prevalence of S. aureus in the dairy farms analyzed, and there was no significant difference between the percentages found in the two regions evaluated. On the basis of PFGE results (using SmaI enzyme), 31 profiles (pulsotypes) were found. In the biofilm-production assay using microplates, 19 (63.3%) of 30 pulsotypes tested were considered positive (biofilm producers). For assays conducted in stainless steel, 13 (43.3%) of pulsotypes were biofilm producers, although no pulsotype was able to produce biofilms on the surface of silicon. Results of this trial showed a high percentage of bulk tank milk samples contaminated with S. aureus, hence indicating a public health problem especially in Brazil were milk is often consumed without pasteurization. The occurrence of S. aureus pulsotypes which were also biofilm-producers suggests the persistence of the pathogen in several sites at the milking environment, as well the probable involvement of S. aureus biofilms with mastitis and its excretion in the milk. The need for adoption of hygienic practices to prevent the formation of biofilms of S. aureus in the dairy farms evaluated is stressed.

A intoxicação alimentar causada por toxinas de Staphylococcus aureus é uma das principais causas de Doenças Transmitidas por Alimentos, principalmente em locais onde se preparam grandes quantidades de refeições, sendo o homem considerado a principal fonte de contaminação dos alimentos por este patógeno, pois de 30 a 50 % das pessoas sadias são portadoras desse microrganismo. O presente trabalho teve como objetivo comparar geneticamente cepas de S. aureus isoladas das mãos de manipuladores de alimentos, com cepas da mesma bactéria, recuperadas de alimentos e veiculadas por formigas. As cepas recuperadas dos manipuladores foram obtidas a partir das mãos destes utilizando-se a técnica de suabe e as cepas recuperadas de alimentos e veiculadas por formigas pertenciam à coleção de culturas do Laboratório de Microbiologia e Biologia Molecular do Departamento de Prática de Saúde Publica da Faculdade de Saúde Publica da USP. Todas as amostras foram submetidas às técnicas de PCR para verificação da presença de plasmídios e do gene sea. As análises microbiológicas revelaram que 18,4% dos manipuladores albergavam S. aureus em suas mãos. A confirmação da espécie aureus por PCR revelou somente 15,4% das cepas recuperadas dos manipuladores e 62,5% e 100% das recuperadas de alimentos e veiculadas por formigas, respectivamente. O perfil plasmidial revelou a existência de 2 grupos de cepas com perfis semelhantes e a PCR para o gene sea, que codifica a produção da enterotoxina SEA, demonstrou sua presença em 78,6% das cepas. A caracterização das cepas por ERIC-PCR evidenciou que todas as cepas apresentaram uma porcentagem de semelhança maior que 84% e que, as cepas de maior similaridade, apresentaram cerca de 90% de semelhança. Conclui-se que é de extrema importância a confirmação da espécie por método molecular, uma vez que este apresenta maior especificidade e sensibilidade do que os métodos microbiológicos; cepas isoladas de manipuladores, alimentos e veiculadas por formigas apresentavam certas semelhanças em relação ao perfil plasmidial, entretanto, a presença de plasmídio não esteve ligada necessariamente à presença do gene sea, normalmente relacionados; a técnica de ERIC-PCR constitui ferramenta importante para caracterização genética de cepas e elucidação de surtos de DTAs. / The food poisoning caused by toxins of Staphylococcus aureus is one of the main causes of illnesses transmitted by foods, mainly in places where there is prepare of great amounts of meals, since human being is considered the main source of contamination of foods for this microrganism, therefore of 30% to 50 % of the healthy people are S. aureus carriers. The present work had as objective to compare genetically strains of S. aureus isolated from hands of food handlers, with strains of the same bacteria, recovered from foods and carried by ants. Strains recovered from food handlers were obtained by technique of swab and strains recovered from foods and carried by ants belong to collection of cultures of the Laboratory of Microbiology and Molecular Biology of Department of Practical of Public Health of College of Public Health - USP. All strains were submitted to PCR for verification of the presence of plasmids and sea gene. The microbiological analyses had observed that 18,4% of the food handlers were S. aureus carriers. The confirmation of aureus species by PCR had shown only 15.4% of strais recovered from food handlers and 62.5% and 100% recovered from foods and propagated for ants, respectively. The plasmidial profile revealed presence of 2 groups of strains with similar profiles and PCR for verification of sea gene, that it codifies the production of SEA enterotoxin, demonstrated that 78,6% of strains were positive. The caracterization of strains by ERIC-PCR revealed that all of them had similarity above 84% and, strains that were very similar, presented 90% of similarity. It is concluded that it´s extremely important confirmation of species by molecular methods, since performed higher especificity and sensitivity than microbiological methods; strains isolated from food handlers, foods and carried by ants presented relative similarities in relation to the plasmidial profile, however, plasmid presence was not linked, necessarily, to presence of sea gene, normally related; ERIC-PCR is important tool to genetic diferentiating strains and to solve outbreaks.

A intoxicação alimentar causada por toxinas de Staphylococcus aureus é uma das principais causas de Doenças Transmitidas por Alimentos, principalmente em locais onde se preparam grandes quantidades de refeições, sendo o homem considerado a principal fonte de contaminação dos alimentos por este patógeno, pois de 30 a 50 % das pessoas sadias são portadoras desse microrganismo. O presente trabalho teve como objetivo comparar geneticamente cepas de S. aureus isoladas das mãos de manipuladores de alimentos, com cepas da mesma bactéria, recuperadas de alimentos e veiculadas por formigas. As cepas recuperadas dos manipuladores foram obtidas a partir das mãos destes utilizando-se a técnica de suabe e as cepas recuperadas de alimentos e veiculadas por formigas pertenciam à coleção de culturas do Laboratório de Microbiologia e Biologia Molecular do Departamento de Prática de Saúde Publica da Faculdade de Saúde Publica da USP. Todas as amostras foram submetidas às técnicas de PCR para verificação da presença de plasmídios e do gene sea. As análises microbiológicas revelaram que 18,4% dos manipuladores albergavam S. aureus em suas mãos. A confirmação da espécie aureus por PCR revelou somente 15,4% das cepas recuperadas dos manipuladores e 62,5% e 100% das recuperadas de alimentos e veiculadas por formigas, respectivamente. O perfil plasmidial revelou a existência de 2 grupos de cepas com perfis semelhantes e a PCR para o gene sea, que codifica a produção da enterotoxina SEA, demonstrou sua presença em 78,6% das cepas. A caracterização das cepas por ERIC-PCR evidenciou que todas as cepas apresentaram uma porcentagem de semelhança maior que 84% e que, as cepas de maior similaridade, apresentaram cerca de 90% de semelhança. Conclui-se que é de extrema importância a confirmação da espécie por método molecular, uma vez que este apresenta maior especificidade e sensibilidade do que os métodos microbiológicos; cepas isoladas de manipuladores, alimentos e veiculadas por formigas apresentavam certas semelhanças em relação ao perfil plasmidial, entretanto, a presença de plasmídio não esteve ligada necessariamente à presença do gene sea, normalmente relacionados; a técnica de ERIC-PCR constitui ferramenta importante para caracterização genética de cepas e elucidação de surtos de DTAs. / The food poisoning caused by toxins of Staphylococcus aureus is one of the main causes of illnesses transmitted by foods, mainly in places where there is prepare of great amounts of meals, since human being is considered the main source of contamination of foods for this microrganism, therefore of 30% to 50 % of the healthy people are S. aureus carriers. The present work had as objective to compare genetically strains of S. aureus isolated from hands of food handlers, with strains of the same bacteria, recovered from foods and carried by ants. Strains recovered from food handlers were obtained by technique of swab and strains recovered from foods and carried by ants belong to collection of cultures of the Laboratory of Microbiology and Molecular Biology of Department of Practical of Public Health of College of Public Health - USP. All strains were submitted to PCR for verification of the presence of plasmids and sea gene. The microbiological analyses had observed that 18,4% of the food handlers were S. aureus carriers. The confirmation of aureus species by PCR had shown only 15.4% of strais recovered from food handlers and 62.5% and 100% recovered from foods and propagated for ants, respectively. The plasmidial profile revealed presence of 2 groups of strains with similar profiles and PCR for verification of sea gene, that it codifies the production of SEA enterotoxin, demonstrated that 78,6% of strains were positive. The caracterization of strains by ERIC-PCR revealed that all of them had similarity above 84% and, strains that were very similar, presented 90% of similarity. It is concluded that it´s extremely important confirmation of species by molecular methods, since performed higher especificity and sensitivity than microbiological methods; strains isolated from food handlers, foods and carried by ants presented relative similarities in relation to the plasmidial profile, however, plasmid presence was not linked, necessarily, to presence of sea gene, normally related; ERIC-PCR is important tool to genetic diferentiating strains and to solve outbreaks.

Depuis quelques années, les plaquettes sanguines sont reconnues comme un véritable élément de l’immunité. En effet, de nombreux rôles clés lors du processus inflammatoire sont attribués aux plaquettes, tels que la détection d’un signal, la libération de nombreux immunomodulateurs ou une forte interaction avec les autres cellules immunitaires. Le constat clinique d’une corrélation entre le taux plaquettaire et la mortalité du sepsis permet de relever l’importance de cette cellule dans la physiopathologie du sepsis. Ainsi ce travail doctoral a eu pour objectif de mettre en relief la part inflammatoire des plaquettes lors des interactions entre les facteurs de virulence de Staphylococcus aureus (S.aureus) que sont différentes exotoxines ou de souches de S. aureus issues de bactériémies de patients septiques. Un modèle expérimental de sepsis murin nous a permis de comprendre la composante inflammatoire jouée par les plaquettes ainsi que leurs implications dans la dysfonction pulmonaire issue lors du sepsis. Enfin, nous avons évalué la modulation de molécules antiplaquettaires, et particulièrement de l’acide acétylsalicylique, sur les nombreux rôles pathogéniques des plaquettes durant cette pathologie. / During some years, platelets are recognized as an key element of immunity. In fact, platelets play several roles, as signal detection, immunomodulator release and interaction with other immunity cells. The clinical significance of a correlation between platelet rate and sepsis mortality reveals the importance of this cell in the pathophysiology of sepsis. Thus, the purpose of this doctoral work was to highlight the inflammatory role of platelets in the interactions between the virulence factors of Staphylococcus aureus (S. aureus) that are different exotoxins or strains of S. aureus from bacteremia of septic patients. An experimental model of murine sepsis allowed us to understand the inflammatory component played by platelets as well as their implications in pulmonary dysfunction resulting from sepsis. Finally, we evaluated the modulation of antiplatelet molecules, particularly acetylsalicylic acid, on the numerous pathogenic roles of platelets during this pathology.

A mastite é um sério problema em rebanhos leiteiros com consideráveis conseqüências econômicas. Embora alguns patógenos possam causar essa doença, Staphylococcus aureus é o mais importante agente etiológico em mastites bovinas e ovinas. O surgimento de linhagens resistentes a diferentes antibióticos e a presença de múltiplos fatores de virulência dificultam o tratamento das infecções causadas por essa espécie. Neste estudo, foram analisados 70 isolados de estafilococos coagulase positivos de origem animal: 52 provenientes de amostras de leite de bovinos portadores de mastite subclínica, do óstio dos tetos desses animais e de insufladores de três fazendas de exploração leiteira do Estado de São Paulo. Os outros 18 isolados foram provenientes de ovinos da região do agreste do Estado de PE, sendo 6 de casos de mastite clínica e 12 de casos de mastite subclínica. Por meio da eletroforese de campo pulsado (PFGE), pôde-se concluir que houve alta diversidade genética entre as linhagens de S. aureus isoladas das diferentes fontes analisadas das três fazendas do Estado de SP. No entanto, um perfil clonal comum foi identificado nas amostras de leite de duas dessas fazendas e, em uma terceira fazenda, houve a predominância de outro perfil clonal de S. aureus entre os isolados de leite bovino proveniente de animais portadores de mastite subclínica. Em relação às outras espécies coagulase positivas, todas originadas de óstios bovinos, foi possível determinar os perfis clonais dos isolados S. schleiferi spp coagulans e S. delphini e identificar a ocorrência de dois perfis distintos entre as linhagens de S. intermedius. Os isolados S. aureus provenientes de ovinos mostraram baixa diversidade genética com três perfis clonais comuns aos casos de mastite clínica e subclínica. Observou-se, em relação à combinação dos fatores de virulência de bovinos e ovinos, a ocorrência do gene cflA em 100% das amostras, o que indica o seu envolvimento no processo de colonização da glândula mamária, independente do hospedeiro. Dois clones bovinos destacaram-se por apresentar multiplicidade dos genes codificadores dos fatores de virulência. No entanto, houve pouca ocorrência dos genes relacionados ao processo toxigênico entre os isolados dessa espécie animal, ao contrário das cepas provenientes de ovinos. Em relação ao sistema regulador agr, o grupo II foi associado aos perfis clonais que apresentaram maior combinação dos genes codificadores dos fatores de virulência em isolados S. aureus provenientes de bovinos. Já o grupo III e agr negativos, aos isolados portadores de poucos desses genes. A presença do gene eta, pouco freqüente em linhagens animais, foi associada tanto com cepas bovinas agr negativas como do grupo II. Assim como nos isolados bovinos, o grupo II de agr, em ovinos, também foi relacionado com o perfil que apresentou maior combinação dos fatores de virulência, incluindo a associação dos genes sec e tst, mas também com perfis portadores de poucos genes de adesinas ou de nenhum gene para exotoxinas. O mesmo foi observado para o grupo I em linhagens ovinas. As cepas resistentes à oxacilina (BORSA), provenientes de isolados bovinos e de insufladores, apresentaram concentração inibitória mínima ≥1 - ≤ 16 µg/ml com múltipla resistência a outros antimicrobianos, mas foram negativas para o gene mecA, o que indica que sejam portadoras de outros mecanismos de resistência aos beta-lactâmicos, diferente da produção de PBP2a. / Mastitis is a serious problem in dairy herds with considerable economic consequences. Although some pathogens may cause this disease, Staphylococcus aureus is the most important etiologic agent in bovine and ovine mastitis. The appearance of antibiotic resistant strains and the presence of multiple factors of virulence, make the treatment of the infections caused by these species very difficult. In this study, we analyzed 70 isolates of coagulase positive Staphylococcus sp of animal origin: 52 from milk samples of subclinic mastitis, bovine teats and milking linners collected in three dairy farms from São Paulo State. The other 18 isolates were from the agreste region ovine in the State of Pernanbuco, with 6 strains from cases of clinic mastitis and 12 cases of subclinic mastitis. By pulsed-field electrophoresis (PFGE), we found high genetic diversity among S. aureus strains from different sources analyzed in the three farms from São Paulo State. However, a common S. aureus cloning profile was identified in the milk samples from two farms and, the third farm, presented a predominance of different profile from two previous farms. The six coagulase positive isolates from bovine teats were identified as S. schleiferi spp coagulans (1), S. delphini (1) and S. intermedius (4). This last specie presented two distinct profiles among strains. The ovine S. aureus strains showed a low genetic diversity presenting three common profiles in both clinic and subclinic mastitis. The cflA gene occurred in 100% of the bovine and ovine strains, showing its involvement in the process of colonization of the mammary glands independent of host species. Two bovine clones was notable for presenting multiplicity of virulence factors genes. However, there was a low occurrence of toxin encoding genes among bovine strains, unlike the ovine strains. The group II agr regulatory systems of S. aureus from bovine strains was associated to a wider combination of the virulent factors encoding genes. However, group III and negative agr was associated to few combination genes. Although the gene eta is, in general, less frequent in animal strains, in this study it was associated in both agr negative and group II agr bovine strains. In ovine, agr group II, as in the bovine isolates, it was also related to a wider combination of virulence factors, including the association of sec and tst genes. It was also found a few genes encoding adhesion and exotoxins in this group, occurring the same in agr group I in ovine strains. The borderline oxacillin-resistant Staphylococcus aureus (BORSA) strains isolated from bovine ostium, milk and milking apparatus line presented minimum inhibitory concentration ≥1 - ≤ 16 µg/ml with multiple resistance to other antimicrobial, but they were negative to the mecA gene, suggesting they are carrying other resistance mechanisms to beta-lactam antibiotics, different from the production of PBP2a.

Thesis (Ph. D., Animal Physiology)--University of Idaho, January 2007. / Major professor: Mark A. McGuire. Includes bibliographical references. Also available online (PDF file) by subscription or by purchasing the individual file.