Os neutrófilos são células fagocíticas do sistema imunológico mobilizadas principalmente no combate a infecções. Estas células são capazes de matar os micro-organismos através da desgranulação, que leva à liberação de moléculas antimicrobianas, e da produção de espécies reativas de oxigênio. Embora o recrutamento de neutrófilos seja essencial para a proteção do organismo, sua ativação excessiva resulta na intensa liberação de moléculas citotóxicas no meio extracelular, o que pode desencadear o desenvolvimento e/ou agravar o quadro clínico de doenças autoimunes e inflamatórias, como a artrite reumatoide. Uma possível abordagem terapêutica para o tratamento destas doenças é a modulação das funções efetoras dos neutrófilos. Estudos prévios mostraram que o extrato etanólico das folhas de Baccharis dracunculifolia (EEBd) possui grande potencial terapêutico, uma vez que apresenta expressiva atividade antioxidante frente ao metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Para dar continuidade à investigação da atividade anti-inflamatória e/ou imunomoduladora deste extrato, o presente trabalho avaliou, na primeira etapa, o seu efeito modulatório sobre importantes funções efetoras de neutrófilos que medeiam o reconhecimento a e eliminação de patógenos - fagocitose, desgranulação e atividade microbicida - e sobre a atividade de enzimas lisossomais. Verificou-se que o EEBd, dependendo da concentração, inibe o metabolismo oxidativo dos neutrófilos sem alterar a capacidade de defesa das células. Na segunda etapa, foi avaliada a atividade antioxidante de sete compostos isolados do EEBd - ácido cafeico, ácido cumárico, ácido ferúlico, ácido cinâmico, aromadendrina-4?-metil éter, isosacuranetina e hispidulina - frente ao metabolismo oxidativo dos neutrófilos, a fim de propor possíveis marcadores químicos para as atividades biológicas do extrato. Os resultados apontaram o ácido cafeico como um potencial marcador químico da atividade biológica em questão. Na terceira etapa, com o intuito de aumentar a biodisponibilidade e favorecer o uso terapêutico dos produtos naturais estudados, o EEBd e o ácido cafeico foram incorporados em lipossomas, e constatou-se que a incorporação não alterou suas atividades antioxidantes frente aos neutrófilos, quando comparado às respectivas amostras na forma livre. Por fim, foi avaliado o efeito terapêutico do EEBd e do ácido cafeico, ambos na forma livre e incorporada em lipossomas, em um modelo animal de artrite. Verificou-se que as amostras na forma livre melhoraram expressivamente os parâmetros inflamatórios nas articulações, promovendo redução do edema e da migração de células totais e de neutrófilos, e discreta diminuição da concentração das citocinas inflamatórias TNF-?, IL-6 e IL-1?. Além disso, a incorporação do EEBd e do ácido cafeico em lipossomas pode auxiliar na redução das suas concentrações necessárias para a obtenção dos efeitos terapêuticos desejados. Assim, pode-se concluir que o EEBd tem grande potencial para se tornar um agente terapêutico adjuvante no tratamento de doenças inflamatórias mediadas por neutrófilos, sendo o ácido cafeico um possível marcador químico para a atividade anti-inflamatória do extrato. / Neutrophils are phagocytic immune cells mobilized primarily to fight against infections. These cells are capable to kill microorganisms through degranulation, which leads to the release of antimicrobial molecules, and production of reactive oxygen species. Although neutrophil recruitment is essential for host protection, excessive activation of these cells culminates in intense discharge of cytotoxic molecules to the extracellular milieu, which can elicit the development of and/or aggravate the clinical condition in autoimmune and inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. Modulation of the effector functions of neutrophils is a possible therapeutic approach to treat these diseases. Previous studies have shown that the ethanolic extract of Baccharis dracunculifolia leaves (EEBd) has a great therapeutic potential due to its significant antioxidant effect towards the oxidative metabolism of neutrophils. To continue investigating the anti-inflammatory and/or immunomodulatory action of such extract, the first part of the present work examined its modulator effect on three important effector functions of human neutrophils that mediate recognition and clearance of pathogens - phagocytosis, degranulation, and microbial killing - and on the activity of lysosomal enzymes. EEBd inhibited the oxidative metabolism of neutrophils without affecting their defense ability, depending on the extract concentration used. To propose possible chemical markers for the biological effects of the extract, the second part of this study evaluated the antioxidant activity of seven compounds isolated from EEBd - caffeic acid, coumaric acid, ferulic acid, cinnamic acid, aromadendrin-4\'-methyl ether, isosakuranetin, and hispidulin - towards the oxidative metabolism of neutrophils. The results pointed to caffeic acid as a potential chemical marker for this biological activity. The third part of this investigation aimed to improve the bioavailability and favor the therapeutic use of the natural products studied. EEBd and caffeic acid were incorporated into liposomal carrier systems. The incorporation of both samples into liposomes did not alter their antioxidant activity towards neutrophils, as compared with their respective free forms. Finally, this study examined the therapeutic effect of EEBd and caffeic acid, both in the free form and incorporated into liposomes, in an animal model of arthritis. The free samples markedly improved the joint inflammatory parameters: they reduced edema and migration of total cells and neutrophils, and slightly lowered the levels of the inflammatory cytokines tumor necrosis factor ? and interleukin 6 and 1? (TNF-?, IL-6, and IL-1?, respectively). In addition, incorporation of EEBd and caffeic acid into liposomes can help to reduce their concentrations required to achieve the desired therapeutic effect. Based on the set of results obtained in this study, we conclude that EEBd has a great potential to become a therapeutic adjuvant in the treatment of neutrophil-mediated inflammatory diseases, and that caffeic acid is a possible chemical marker of the anti-inflammatory activity of the extract.

Baccharis dracunculifolia é conhecida por sua interação com insetos, especialmente Apis mellifera L., por possuir ampla diversidade de metabólitos secundários, bem como, por apresentar várias atividades biológicas. Suas folhas são pontuadas por tricomas secretores ricos em metabólitos secundários e também apresentam dutos secretores, estruturas que produzem e armazenam os óleos essenciais. Os metabólitos secundários de B. dracunculifolia são usados pelas abelhas A. mellifera para a produção de própolis ?verde?, que é extremamente valorizada pelas indústrias farmacêuticas, pois apresenta atividades antitumoral, antimicrobiana, antiinflamatória, antiulcerogênica, dentre outras. Considerando estas importantes atividades biológicas, e a necessidade de padronização da própolis, os objetivos do presente trabalho foram: desenvolver metodologia analítica por cromatografia gasosa para quantificar os constituintes majoritários presentes no óleo essencial da planta cultivada; desenvolver e validar metodologia analítica por CLAE capaz de garantir a autenticidade dos extratos hidroalcoólicos de B. dracunculifolia, bem como de própolis verde; determinar o perfil de variabilidade dos componentes voláteis e fixos de 10 diferentes acessos cultivados durante o período de 12 meses. De acordo com os resultados obtidos, o cultivo da espécie foi eficiente, observando-se rápido crescimento, cerca de 1 m de altura a partir do quarto mês de plantio, obtendo-se boa quantidade de biomassa, em média de 400 g por acesso, no período de análise. Com a metodologia desenvolvida para os voláteis foi possível analisar 480 amostras nos 12 meses de amostragem e identificar 14 componentes presentes no óleo das folhas cultivadas. As análises semiquantitativas indicaram que o nerolidol é o volátil majoritário, correspondendo em aproximadamente 50 % do óleo, sendo detectado durante todo ano e, por isso, o mesmo deve ser o maior responsável pelas propriedades odoríferas intensas, as quais são extremamente valorizadas pelas indústrias de fragrâncias e cosméticos. Além disso, com base no perfil de variabilidade dos voláteis, a época de floração foi a menos produtiva em termos de óleo essencial, em média de 0,3 %. Por outro lado, o período de fevereiro a abril foi o mais produtivo, em média de 1 % de óleo a partir das folhas secas. Adicionalmente, dentre os acessos cultivados, somente o 4 não é viável para o cultivo em larga escala. Esta população apresentou diferenças morfológicas em relação às folhas e se destacou pela baixa produtividade de óleo ao longo do ano. A metodologia desenvolvida por CLAE, permitiu distinguir e quantificar simultaneamente 10 padrões cromatográficos (ácido caféico, ácido cumárico, ácido ferúlico, ácido cinâmico, aromadendrina-4?-metil éter, drupanina, isosakuranetina, artepelin C, bacarina e ácido 2,2-dimetilcarboxietenil-2H-1-benzopirânico), os quais podem ser encontrados tanto em amostras hidroetanólicas de alecrim do campo bem como em amostras hidroalcoólicas de própolis verde. Além disso, todas as características de desempenho do método apresentaram resultados aceitáveis, conforme sugeridos pela Anvisa e Inmetro, e podem garantir com segurança e confiabilidade a quantificação dos metabólitos de interesse. Na análise das substâncias fixas, observou-se que o ácido caféico é o componente majoritário, correspondendo em média de 60 % dos fenólicos em análise. O perfil de variabilidade do artepelin C e bacarina foi crescente no decorrer dos meses em estudo, demonstrando teores mais elevados no último trimestre de amostragem, correspondendo em média de 8 e 25 % respectivamente. O flavonóide aromadendrina-4?-metil éter demonstrou concentrações diferenciadas durante o ano. Todavia, este flavonóide juntamente com o ácido caféico podem ser considerados marcadores quimiotaxonômicos da planta cultivada, já que os mesmos foram detectados durante todo ano e em todas as populações. Contudo, considerando a produção, tanto dos voláteis como dos compostos fenólicos, todos os acessos cultivados, com exceção da população 4, podem ser cultivados em larga escala para estes propósitos / Baccharis dracunculifolia is well known for its interaction with insects, mainly Apis mellifera L., for bearing a wide range of secondary metabolites, as well as for displaying many biological activities. Its leaves are punctuated with secretory thricomes rich in secondary metabolites and secretory ducts, which produce and store essential oils. B. dracunculifolia secondary metabolites are used by Apis mellifera to produce ?green? propolis, which is of great importance for pharmaceutical industry, since it displays anticancer, antibacterial, antiinflammatory and antiulcer, among other activities. Considering the displayed biological activities by B. dracunculifolia and the need to standardize the green propolis raw material, the aims of the present work were: a) to develop a gas chromatography analytical methodology to quantify the major volatile constituents in its cultivated populations; b) to develop and validate a HPLC method to quantify the major phenolic compounds present in the aerial parts of B. dracunculifolia, and in the crude green propolis. The developed chromatographic tools were used to study the seasonal influence in the biosynthesis of both volatile oils and phenolic components in 10 different cultivated populations during one year period. All the cultivated populations grew quite well, since it achieved 1 m in height in the fourth month of growth, and it produced an average of 400 g of biomass per individual. Using the developed GC methodology it was possible to analyze 480 samples, and to quantify 14 volatile components of the leaves during one year of its cultivation. The GC analysis indicated that nerolidol was the major compound present in the volatile fraction, about 50 %, which was detected during the entire experiment, and it shall be the most responsible compound for its intense fragrance with importance for cosmetic industry. On one hand, it was observed that during the flowering period the volatile oil production was lower, about 0.3 % w/w, and on the other hand, during the months of February, March and April, its production was higher, about 1 % w/w in dry leaves. Besides, it was observed that population 4 stood out, since it was morphologically different from all others and produced lower yielding of volatile components during the entire year. The HPLC developed methodology allowed to separate and quantify 10 phenolic (caffeic acid, coumaric acid, ferulic acid, cinnamic acid, aromadendrin-4?-methyl ether, drupanin, isosakuranetin, artepillin C, bacharin, 2,2-dimethylcarboxyethenyl-2H-1-benzopyran acid) compounds simultaneously in both B. dracunculifolia and green propolis ethanol extracts. Moreover, all the evaluated validation parameters displayed acceptable results, as established by Brazilian Governmental regulation agencies, Anvisa and Imetro, and it provide very good results for the accurate quantification of phenolic compounds of interest. The analysis indicated that caffeic acid was the major compound present in the analyzed samples, and it corresponded to 60 % of the total quantified phenolic compounds. The contents of artepelin C and bacharin varied greatly during the studied period, displaying higher contents during the last trimester of 8 e 25 %, respectively. The flavonoid aromadendrin-4?-methyl ether has not displayed a coherent pattern during the experiment, since it variable greatly. However, aromadendrin along with caffeic acid could be considered good chemical markers for the analysis of cultivated B. dracunculifolia, considering that both were found in all the samples. Overall, considering the production of both the volatile and phenolic compounds, all the cultivated populations, with exception of the population 4, could be cultivated in large scale for these purposes.

Baccharis dracunculifolia é conhecida por sua interação com insetos, especialmente Apis mellifera L., por possuir ampla diversidade de metabólitos secundários, bem como, por apresentar várias atividades biológicas. Suas folhas são pontuadas por tricomas secretores ricos em metabólitos secundários e também apresentam dutos secretores, estruturas que produzem e armazenam os óleos essenciais. Os metabólitos secundários de B. dracunculifolia são usados pelas abelhas A. mellifera para a produção de própolis ?verde?, que é extremamente valorizada pelas indústrias farmacêuticas, pois apresenta atividades antitumoral, antimicrobiana, antiinflamatória, antiulcerogênica, dentre outras. Considerando estas importantes atividades biológicas, e a necessidade de padronização da própolis, os objetivos do presente trabalho foram: desenvolver metodologia analítica por cromatografia gasosa para quantificar os constituintes majoritários presentes no óleo essencial da planta cultivada; desenvolver e validar metodologia analítica por CLAE capaz de garantir a autenticidade dos extratos hidroalcoólicos de B. dracunculifolia, bem como de própolis verde; determinar o perfil de variabilidade dos componentes voláteis e fixos de 10 diferentes acessos cultivados durante o período de 12 meses. De acordo com os resultados obtidos, o cultivo da espécie foi eficiente, observando-se rápido crescimento, cerca de 1 m de altura a partir do quarto mês de plantio, obtendo-se boa quantidade de biomassa, em média de 400 g por acesso, no período de análise. Com a metodologia desenvolvida para os voláteis foi possível analisar 480 amostras nos 12 meses de amostragem e identificar 14 componentes presentes no óleo das folhas cultivadas. As análises semiquantitativas indicaram que o nerolidol é o volátil majoritário, correspondendo em aproximadamente 50 % do óleo, sendo detectado durante todo ano e, por isso, o mesmo deve ser o maior responsável pelas propriedades odoríferas intensas, as quais são extremamente valorizadas pelas indústrias de fragrâncias e cosméticos. Além disso, com base no perfil de variabilidade dos voláteis, a época de floração foi a menos produtiva em termos de óleo essencial, em média de 0,3 %. Por outro lado, o período de fevereiro a abril foi o mais produtivo, em média de 1 % de óleo a partir das folhas secas. Adicionalmente, dentre os acessos cultivados, somente o 4 não é viável para o cultivo em larga escala. Esta população apresentou diferenças morfológicas em relação às folhas e se destacou pela baixa produtividade de óleo ao longo do ano. A metodologia desenvolvida por CLAE, permitiu distinguir e quantificar simultaneamente 10 padrões cromatográficos (ácido caféico, ácido cumárico, ácido ferúlico, ácido cinâmico, aromadendrina-4?-metil éter, drupanina, isosakuranetina, artepelin C, bacarina e ácido 2,2-dimetilcarboxietenil-2H-1-benzopirânico), os quais podem ser encontrados tanto em amostras hidroetanólicas de alecrim do campo bem como em amostras hidroalcoólicas de própolis verde. Além disso, todas as características de desempenho do método apresentaram resultados aceitáveis, conforme sugeridos pela Anvisa e Inmetro, e podem garantir com segurança e confiabilidade a quantificação dos metabólitos de interesse. Na análise das substâncias fixas, observou-se que o ácido caféico é o componente majoritário, correspondendo em média de 60 % dos fenólicos em análise. O perfil de variabilidade do artepelin C e bacarina foi crescente no decorrer dos meses em estudo, demonstrando teores mais elevados no último trimestre de amostragem, correspondendo em média de 8 e 25 % respectivamente. O flavonóide aromadendrina-4?-metil éter demonstrou concentrações diferenciadas durante o ano. Todavia, este flavonóide juntamente com o ácido caféico podem ser considerados marcadores quimiotaxonômicos da planta cultivada, já que os mesmos foram detectados durante todo ano e em todas as populações. Contudo, considerando a produção, tanto dos voláteis como dos compostos fenólicos, todos os acessos cultivados, com exceção da população 4, podem ser cultivados em larga escala para estes propósitos / Baccharis dracunculifolia is well known for its interaction with insects, mainly Apis mellifera L., for bearing a wide range of secondary metabolites, as well as for displaying many biological activities. Its leaves are punctuated with secretory thricomes rich in secondary metabolites and secretory ducts, which produce and store essential oils. B. dracunculifolia secondary metabolites are used by Apis mellifera to produce ?green? propolis, which is of great importance for pharmaceutical industry, since it displays anticancer, antibacterial, antiinflammatory and antiulcer, among other activities. Considering the displayed biological activities by B. dracunculifolia and the need to standardize the green propolis raw material, the aims of the present work were: a) to develop a gas chromatography analytical methodology to quantify the major volatile constituents in its cultivated populations; b) to develop and validate a HPLC method to quantify the major phenolic compounds present in the aerial parts of B. dracunculifolia, and in the crude green propolis. The developed chromatographic tools were used to study the seasonal influence in the biosynthesis of both volatile oils and phenolic components in 10 different cultivated populations during one year period. All the cultivated populations grew quite well, since it achieved 1 m in height in the fourth month of growth, and it produced an average of 400 g of biomass per individual. Using the developed GC methodology it was possible to analyze 480 samples, and to quantify 14 volatile components of the leaves during one year of its cultivation. The GC analysis indicated that nerolidol was the major compound present in the volatile fraction, about 50 %, which was detected during the entire experiment, and it shall be the most responsible compound for its intense fragrance with importance for cosmetic industry. On one hand, it was observed that during the flowering period the volatile oil production was lower, about 0.3 % w/w, and on the other hand, during the months of February, March and April, its production was higher, about 1 % w/w in dry leaves. Besides, it was observed that population 4 stood out, since it was morphologically different from all others and produced lower yielding of volatile components during the entire year. The HPLC developed methodology allowed to separate and quantify 10 phenolic (caffeic acid, coumaric acid, ferulic acid, cinnamic acid, aromadendrin-4?-methyl ether, drupanin, isosakuranetin, artepillin C, bacharin, 2,2-dimethylcarboxyethenyl-2H-1-benzopyran acid) compounds simultaneously in both B. dracunculifolia and green propolis ethanol extracts. Moreover, all the evaluated validation parameters displayed acceptable results, as established by Brazilian Governmental regulation agencies, Anvisa and Imetro, and it provide very good results for the accurate quantification of phenolic compounds of interest. The analysis indicated that caffeic acid was the major compound present in the analyzed samples, and it corresponded to 60 % of the total quantified phenolic compounds. The contents of artepelin C and bacharin varied greatly during the studied period, displaying higher contents during the last trimester of 8 e 25 %, respectively. The flavonoid aromadendrin-4?-methyl ether has not displayed a coherent pattern during the experiment, since it variable greatly. However, aromadendrin along with caffeic acid could be considered good chemical markers for the analysis of cultivated B. dracunculifolia, considering that both were found in all the samples. Overall, considering the production of both the volatile and phenolic compounds, all the cultivated populations, with exception of the population 4, could be cultivated in large scale for these purposes.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elementos pre-textuais.pdf: 567197 bytes, checksum: b26ed97be7d0d26d6ba01f298cc6bef8 (MD5) Previous issue date: 2009-06-29 / This study aimed to chemically analyze extracts of propolis samples and leaves of plant species of the Baccharis genus in the region of Ponta Grossa - PR, to classify the regional propolis compared to the green propolis (PG12). Baccharis dracunculifolia, the source of green propolis, may present metabolic changes related to environmental factors. To compare with published data, the essential oils obtained by hydrodistillation from the leaves of female (0.81%) and male (0.85%) specimens of B. dracunculifolia harvested in the dry season were analyzed by GC-MS. The two samples showed a low monoterpenes/sesquiterpenes ratio (0.85/96.88% ♀; 2.35/ 95.25% ♂). The monoterpenes b-pinene, limonene and terpinen-4-ol were identified. The main sesquiterpenes hydrocarbons are b-caryophyllene (♀ 7.88%; ♂ 8.88%), b-humulene (♀ 4.61%; ♂ 2.18%), germacrene D (♀ 5.53%; ♂ 4.04%) trans-b- guaiene (♀ 7.98%; ♂ 6.06%) and cadinene (♀ 7.34%; ♂ 5.48%). The oxygenated sesquiterpenes (E)-nerolidol (♀ 24.69%; ♂ 17.16%) and spathulenol (♀ 14.62%; ♂ 21.39%) were found as the major constituents. The high yield, the low monoterpenes / sesquiterpenes ratio and the high proportions of oxygenated sesquiterpenes are the main characteristics of the essential oil of B. dracunculifolia from this region. The leaves of three species of Baccharis (B. dracunculifolia, B. semiserrata and B. uncinella) were extracted using a Soxhlet apparatus with the sequence of solvents chloroform, ethyl acetate and methanol, and the extracts were analyzed by TLC, UV and HPLC. Free phenolic acids were identified: caffeic acid (Bd ♀ and Bd ♂), p-coumaric acid (Bd ♀), ferulic acid (Bd ♀, ♂ Bd, Bu and Bs) and the flavonoid rutin (Bd ♀, Bd ♂, Bu). Thus, it is demonstrated for the first time, the co-occurrence of polar phenolic substances in these three plant species. The ethanol extracts obtained from 13 samples of propolis were analyzed by TLC-HR and UV-VIS, allowing the classification of the regional propolis in three groups. The most characteristic sample of each type (ADI, WS- 3, RS-2) was chosen for analysis by HPLC in comparison with green propolis PG12. Fresh sprouts of male and female specimens of B. dracunculifolia were extracted by rinsing with methanol and the extracts were analyzed by HPLC. All extracts of propolis and B. dracunculifolia showed artepillin C ensuring that this plant is the source of regional propolis. The caffeic acid, ferulic acid and p-coumaric acid were identified in the four samples of propolis. Apigenin is present only in the regional propolis samples, between 2.4% and 3.9%, while crisin was identified only in the PG12, but as a main component (18.1%). An unidentified flavonoid (lma x 365 nm, 42,96 min) is the main substance present in the three samples of regional propolis and also the extract obtained by the rinsing of the plant sprouts. All the ethanol extracts of regional propolis showed excellent levels of antioxidant activity when tested against the radical DPPH, several of them getting to be more effective than the PG12. A comparative analysis of antioxidant power and chemical composition of the samples indicates that the unidentified flavonoid is responsible for the strong antioxidant activity of ADI and WS-2 compared to RS-2 and PG12. / Neste trabalho, foram analisados extratos de amostras de própolis e de folhas de espécies vegetais do gênero Baccharis da região de Ponta Grossa – PR, visando classificar a própolis regional em comparação com a própolis verde (PG12). Baccharis dracunculifolia, a fonte da própolis verde, pode apresentar variações metabólicas relacionadas a fatores ambientais. Para comparar dados publicados sobre esta planta com dados obtidos do vegetal coletado nesta região, foram analisados por CG-EM os óleos essenciais obtidos por hidrodestilação das folhas de espécimes feminino (0,81%) e masculino (0,85%) de B. dracunculifolia colhidos na estação seca. As duas amostras apresentaram baixa razão monoterpenos/sesquiterpenos (0,85/96,88% ♀; 2,35/95,25% ♂). Foram identificados os monoterpenos b-pineno, limoneno e terpinen-4-ol. Os sesquiterpenos hidrocarbonetos principais foram: b-cariofileno (♀ 7,88%;♂ 8,88%), a-humuleno (♀ 4,61%; ♂ 2,18%), germacreno D (♀ 5,53%; ♂ 4,04%), trans-b- guaieno (♀ 7,98%; ♂ 6,06%) e d-cadineno (♀ 7,34%; ♂5,48%). Os sesquiterpenos oxigenados (E)-nerolidol (♀ 24,69%; ♂ 17,16%) e espatulenol (♀ 14,62%; ♂ 21,39%) se encontraram como constituintes majoritários. O alto rendimento, a baixa relação monoterpenos/sesquiterpenos e as altas proporções de sesquiterpenos oxigenados são as principais características do óleo essencial de B. racunculifolia desta região. As folhas de três espécies de Baccharis (B. dracunculifolia, B. semiserrata e B. uncinella) foram extraídas em aparelho Soxhlet com a sequência de solventes clorofórmio, acetato de etila e metanol, analisando-se os extratos por CCD, UV e CLAE. Foram dentificados os ácidos fenólicos livres: ácido caféico (Bd ♀ e Bd ♂), ácido p-cumárico (Bd ♀), ácido ferúlico (Bd ♀, Bd ♂, Bu e Bs) e o flavonóide rutina (Bd ♀, Bd ♂, Bu). Assim, demostrou-se, pela primeira vez, a co-ocorrência de substâncias fenólicas polares nestas três espécies vegetais. Os extratos etanólicos obtidos de 13 amostras de própolis foram analisados por CCD-AR e UV-VIS, permitindo classificar as própolis regionais em três grupos. Foi escolhida a amostra mais característica de cada grupo (ADI, WS-3, RS-2) para análise por CLAE em comparação com a própolis verde PG12. Brotos frescos dos espécimes masculino e feminino de B. dracunculifolia foram extraídos por enxágüe com metanol e também submetidos à análise por CLAE. Todos os extratos, de própolis e de B. dracunculifolia, apresentaram artepilina C garantindo que esta é a fonte vegetal da própolis regional. Os ácidos caféico, ferúlico e pcumárico foram identificados nas quatro amostras de própolis. Apigenina estaria presente somente nas própolis regionais, entre 2,4% e 3,9%, enquanto a crisina foi identificada somente na PG12, mas como componente principal (18,1%). Um flavonoide (lmáx 365 nm, 42,96 min) é a substância principal das três amostras de própolis regionais e também do extrato obtido por enxágue dos brotos da planta, mas não foi identificado. Todos os extratos etanólicos de própolis regionais apresentaram excelentes níveis de atividade antioxidante quando testados frente ao radical DPPH, vários deles chegando a ser mais efetivos que o da PG12. Uma análise comparativa do poder antioxidante e da composição química das amostras permitem concluir que o flavonóide não identificado é o responsável pela fortíssima atividade antioxidante de ADI e WS-2 em comparação com RS-2 e PG12.

Os neutrófilos são células fagocíticas do sistema imunológico mobilizadas principalmente no combate a infecções. Estas células são capazes de matar os micro-organismos através da desgranulação, que leva à liberação de moléculas antimicrobianas, e da produção de espécies reativas de oxigênio. Embora o recrutamento de neutrófilos seja essencial para a proteção do organismo, sua ativação excessiva resulta na intensa liberação de moléculas citotóxicas no meio extracelular, o que pode desencadear o desenvolvimento e/ou agravar o quadro clínico de doenças autoimunes e inflamatórias, como a artrite reumatoide. Uma possível abordagem terapêutica para o tratamento destas doenças é a modulação das funções efetoras dos neutrófilos. Estudos prévios mostraram que o extrato etanólico das folhas de Baccharis dracunculifolia (EEBd) possui grande potencial terapêutico, uma vez que apresenta expressiva atividade antioxidante frente ao metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Para dar continuidade à investigação da atividade anti-inflamatória e/ou imunomoduladora deste extrato, o presente trabalho avaliou, na primeira etapa, o seu efeito modulatório sobre importantes funções efetoras de neutrófilos que medeiam o reconhecimento a e eliminação de patógenos - fagocitose, desgranulação e atividade microbicida - e sobre a atividade de enzimas lisossomais. Verificou-se que o EEBd, dependendo da concentração, inibe o metabolismo oxidativo dos neutrófilos sem alterar a capacidade de defesa das células. Na segunda etapa, foi avaliada a atividade antioxidante de sete compostos isolados do EEBd - ácido cafeico, ácido cumárico, ácido ferúlico, ácido cinâmico, aromadendrina-4?-metil éter, isosacuranetina e hispidulina - frente ao metabolismo oxidativo dos neutrófilos, a fim de propor possíveis marcadores químicos para as atividades biológicas do extrato. Os resultados apontaram o ácido cafeico como um potencial marcador químico da atividade biológica em questão. Na terceira etapa, com o intuito de aumentar a biodisponibilidade e favorecer o uso terapêutico dos produtos naturais estudados, o EEBd e o ácido cafeico foram incorporados em lipossomas, e constatou-se que a incorporação não alterou suas atividades antioxidantes frente aos neutrófilos, quando comparado às respectivas amostras na forma livre. Por fim, foi avaliado o efeito terapêutico do EEBd e do ácido cafeico, ambos na forma livre e incorporada em lipossomas, em um modelo animal de artrite. Verificou-se que as amostras na forma livre melhoraram expressivamente os parâmetros inflamatórios nas articulações, promovendo redução do edema e da migração de células totais e de neutrófilos, e discreta diminuição da concentração das citocinas inflamatórias TNF-?, IL-6 e IL-1?. Além disso, a incorporação do EEBd e do ácido cafeico em lipossomas pode auxiliar na redução das suas concentrações necessárias para a obtenção dos efeitos terapêuticos desejados. Assim, pode-se concluir que o EEBd tem grande potencial para se tornar um agente terapêutico adjuvante no tratamento de doenças inflamatórias mediadas por neutrófilos, sendo o ácido cafeico um possível marcador químico para a atividade anti-inflamatória do extrato. / Neutrophils are phagocytic immune cells mobilized primarily to fight against infections. These cells are capable to kill microorganisms through degranulation, which leads to the release of antimicrobial molecules, and production of reactive oxygen species. Although neutrophil recruitment is essential for host protection, excessive activation of these cells culminates in intense discharge of cytotoxic molecules to the extracellular milieu, which can elicit the development of and/or aggravate the clinical condition in autoimmune and inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. Modulation of the effector functions of neutrophils is a possible therapeutic approach to treat these diseases. Previous studies have shown that the ethanolic extract of Baccharis dracunculifolia leaves (EEBd) has a great therapeutic potential due to its significant antioxidant effect towards the oxidative metabolism of neutrophils. To continue investigating the anti-inflammatory and/or immunomodulatory action of such extract, the first part of the present work examined its modulator effect on three important effector functions of human neutrophils that mediate recognition and clearance of pathogens - phagocytosis, degranulation, and microbial killing - and on the activity of lysosomal enzymes. EEBd inhibited the oxidative metabolism of neutrophils without affecting their defense ability, depending on the extract concentration used. To propose possible chemical markers for the biological effects of the extract, the second part of this study evaluated the antioxidant activity of seven compounds isolated from EEBd - caffeic acid, coumaric acid, ferulic acid, cinnamic acid, aromadendrin-4\'-methyl ether, isosakuranetin, and hispidulin - towards the oxidative metabolism of neutrophils. The results pointed to caffeic acid as a potential chemical marker for this biological activity. The third part of this investigation aimed to improve the bioavailability and favor the therapeutic use of the natural products studied. EEBd and caffeic acid were incorporated into liposomal carrier systems. The incorporation of both samples into liposomes did not alter their antioxidant activity towards neutrophils, as compared with their respective free forms. Finally, this study examined the therapeutic effect of EEBd and caffeic acid, both in the free form and incorporated into liposomes, in an animal model of arthritis. The free samples markedly improved the joint inflammatory parameters: they reduced edema and migration of total cells and neutrophils, and slightly lowered the levels of the inflammatory cytokines tumor necrosis factor ? and interleukin 6 and 1? (TNF-?, IL-6, and IL-1?, respectively). In addition, incorporation of EEBd and caffeic acid into liposomes can help to reduce their concentrations required to achieve the desired therapeutic effect. Based on the set of results obtained in this study, we conclude that EEBd has a great potential to become a therapeutic adjuvant in the treatment of neutrophil-mediated inflammatory diseases, and that caffeic acid is a possible chemical marker of the anti-inflammatory activity of the extract.

Em comunidades vegetais podem existir diversos tipos de interações entre os indivíduos presentes, independente destes serem da mesma espécie (intraespecíficas) ou de espécies diferentes (interespecíficas). Em campo nativo caracterizado por efeitos de abandono, fortes modificações da estrutura da vegetação e reduções na diversidade têm sido observadas, atribuídos, entre outros fatores, à entrada de espécies arbustivas. Através de dados ecofisiológicos dos indivíduos participantes no processo, como taxa fotossintética, condutância estomática e transpiração foliar, é possível determinar se existe alguma interação entre as espécies presentes, Baccharis dracunculifolia, Baccharis trimera e Andropogon lateralis, se esta é benéfica, o que poderia caracterizar um processo de facilitação, se estas espécies estão competindo por recursos, ou até mesmo a ocorrência de neutralismo entre elas. Além disso, a caracterização da vegetação campestre em situações com ou sem arbustos pode contribuir para a avaliação do efeito dos arbustos. Para a realização desse estudo foram alocadas 15 parcelas com a presença da espécie arbustiva B. dracunculifolia e 15 parcelas, pareadas às primeiras, onde tal espécie não se encontra, totalizando 30 parcelas. Verificaram-se parâmetros fisiológicos, como taxas de fotossíntese e transpiração, a condutância estomática e a eficiência do uso da água das espécies selecionadas baseado na sua representatividade no ambiente de estudo, B. trimera e A. lateralis, bem como a estrutura, composição e diversidade da vegetação. Também foi realizado um censo da própria população de B. dracunculifolia. A fim de caracterizar as interações entre a espécie arbustiva e as espécies em sua sub-copa foram comparadas as médias dos parâmetros fisiológicos bem como parâmetros (diversidade, composição, riqueza) da comunidade vegetal em parcelas com ou sem arbustos por meio de análise de variância. Os resultados mostraram que B. dracunculifolia exerce certa competição para as duas espécies-alvo, mas não causa mudanças muito fortes na estrutura da vegetação. Como também foi observado que a população de B. dracunculifolia não esta conseguindo se regenerar num campo abandonado, pode ser concluído que a espécie, apesar da modificação forte da fisionomia vegetal, tem pouco impacto na dinâmica sucessional de um campo abandonado. / In plant communities, several types of interactions between individuals can occur, regardless of these being of the same species (intraspecific) or of different species (interspecific). In a grassland areas characterized by natural effects of abandonment, strong changes in vegetation structure and reduction in diversity have been observed, attributed, among other factors, to encroachment by a shrub species. Through ecophysiological data of individuals participating in the process, such as photosynthetic rate, stomatal conductance and leaf transpiration, it is possible to determine whether there is any interaction between the shrub species, Baccharis dracunculifolia, and two species growing under its canopy, Baccharis trimera and Andropogon lateralis, and, if so, if this it is beneficial, which could characterize facilitation of a process, if these species are competing for resources, or even neutrality between them. Furthermore, the characterization of the grassland community in situations with or without shrub can contribute to evaluate the effect of the latter. To conduct this study, 15 plots with the presence of shrub species B. dracunculifolia and 15 plots, paired with the first, where that species is not found were allocated in an abandonend grassland, totaling 30 plots. Physiological parameters (rates of photosynthesis and transpiration and stomatal conductance) of the two species selected based on their high abundance in the environment were studied, as well as the structure, composition and diversity of vegetation. Also, a census of the population of B. dracunculifolia itself was conducted. In order to characterize the interactions between the shrub species and the species in growing in its subcanopy the mean physiological parameters as well as parameters (diversity, composition, richness) of the plant community in plots with or without shrubs were compared by analysis of variance (ANOVA). The results showed that B. dracunculifolia exerts some competition between species, but does not cause strong changes in vegetation structure. As also could be noted that B. dracunculifolia is not regenerating in the abandoned grassland, it can be concluded that the species, despite the strong modification of vegetation physionomy, has little impact on the successional dynamics of abandoned grassland.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-28Bitstream added on 2014-06-13T19:21:23Z : No. of bitstreams: 1 cestari_sh_me_botib.pdf: 678977 bytes, checksum: 1130003d081bc601ecb929d1c4d15ded (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Doença inflamatória intestinal (DII) é um termo que engloba várias doenças crônicas do trato gastrintestinal, principalmente colite ulcerativa (CU) e Doença de Crohn (DC), cuja etiologia ainda não é completamente conhecida, mas que se caracterizam por um curso crônico onde se alternam períodos de remissão e de atividade de duração variáveis. Embora DII tenha sido alvo de muitas pesquisas nos últimos anos, as drogas utilizadas correntemente causam sérios efeitos colaterais quando usados em altas doses ou durante um período prolongado, o que limita seu uso. Considerando-se a etiologia multifatorial das DII, produtos que reúnam atividades antioxidante, antiinflamatória e imunomoduladora representam uma possibilidade potencial para a descoberta de novas drogas eficazes na prevenção e tratamento desta doença. Neste sentido, inúmeras alternativas de pesquisas surgem com base em produtos naturais. Este trabalho testou a atividade antiinflamatória do extrato acetato de etila de folhas de Baccharis dracunculifolia em diferentes doses (5 a 200 mg/Kg) em duas condições experimentais distintas: quando a mucosa colônica está intacta (efeito preventivo); quando a mucosa colônica está afetada por um processo inflamatório intestinal (efeito curativo) assim como preventivo da recidiva do processo inflamatório, similar ao que ocorre com a colite ulcerativa em humanos. Diferentes marcadores bioquímicos de inflamação colônica foram avaliados, incluindo glutationa e atividade das enzimas mieloperoxidase e fosfatase alcalina. Experimentos in vitro adicionais foram realizados para testar a atividade antioxidante de diferentes concentrações do EBD. A administração oral do extrato acetato de etila de folhas de Baccharis dracunculifolia na dose de 5 mg/Kg protege o cólon de ratos do processo inflamatório através de um mecanismo que envolve a diminuição... / Inflammatory bowel disease (IBD) is a term employed to several chronic disease of the digestive tract, usually ulcerative colitis (UC) and Crohn’s disease (CD), their etiology has not been clearly elucidated, but which are characterized by variable chronic and spontaneously relapsing inflammation. Although IBD has been the target of many studies in the last years, the drugs commonly used cause serious side effects when employed in high doses or while a long time, limiting their use. Whereas the multifactor etiology of IBD, products with antioxidant, anti-inflammatory and imunnomodulatory activities play potential possibility to discovery of news drugs effective in the prevention and treatment of these disorders. In this way, many alternatives appear based in natural products. This study tested the anti-inflammatory activity of ethyl acetate extract of Baccharis dracunculifolia leaves (BDE) at different doses (5 to 200 mg/Kg) in two experimental settings: when the colonic mucosa is intact (preventive effect) or when the mucosa is in process of recovery after an initial insult (curative effect) such as relapse common in human IBD. Different biochemical markers of colonic inflammation were also evaluated, including glutathione, myeloperoxidase and alkaline phosphatase activities. Additional in vitro experiments were performed in order to test the antioxidant activity of different concentrations of BDE. BDE administrated orally at lowest dose, 5 mg/Kg, protects the rat colon of the inflammatory process through a mechanism which involve an improvement on intestinal oxidative stress associated to inflammation, such as reduction of the myeloperoxidase activity and maintenance of endogenous antioxidant levels, such as the glutathione, and that intestinal anti-inflammatory activity can be due to phenolic compounds presence in extract. The specie studied showed the new possibility for the prevention and treatment to this disorder.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-16Bitstream added on 2014-06-13T18:32:14Z : No. of bitstreams: 1 bufalo_mc_me_botfm.pdf: 873569 bytes, checksum: 732268a58a4b437314708002aff621de (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Baccharis dracunculifolia is the most important vegetal source of propolis in southeast Brazil, and researchers have been investigating its biological properties. Propolis is a complex resinous hive product collected by bees from several plants, showing a very complex chemical composition. It has been employed since ancient times, due to its therapeutic properties, such as antimicrobial, antiinflammatory, antioxidant, immunomodulatory and antitumoral activities, among others. The goal of this work was to compare the cytotoxic action of B. dracunculifolia, propolis and 2 isolated compounds (caffeic and cinnamic acids) on HEp-2 cells in vitro. These cells were incubated with different concentrations of each variable, and cell viability was assessed by crystal violet method. Lower concentrations of B. dracunculifolia (extract and essential oil), propolis as well as caffeic and cinnamic acids, showed no cytotoxic activity against HEp-2 cells. On the other hand, elevated concentrations (50 and 100 μg/100μL) exerted a cytotoxic action, and propolis showed a more efficient action than its vegetal source and isolated compounds. Further investigation is still needed in order to explore the potential of these variables as antitumor agents and to understand their mechanisms of action. Baccharis dracunculifolia is the most important botanical source of the southeastern Brazilian propolis, and its potential for the development of new phytotherapeutic medicines has been investigated. Propolis is commonly used for its antimicrobial and immunomodulatory activities. Nevertheless, B. dracunculifolia and propolis effects on poliovirus type 1 (PV1) were not investigated yet. Thus, the aim of this work was to evaluate the antiviral activities of B. dracunculifolia (extract and essential oil), propolis and some isolated compounds (caffeic and cinnamic acids) against PV1 replication in HEp-2 cells in three... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: José Maurício Sforcin / Banca: Ethel Lourenzi Barbosa Novelli / Banca: Rodrigo Tavanelli Hernandes / Resumo: Não disponível / Abstract: Baccharis dracunculifolia is the most important vegetal source of propolis in southeast Brazil, and researchers have been investigating its biological properties. Propolis is a complex resinous hive product collected by bees from several plants, showing a very complex chemical composition. It has been employed since ancient times, due to its therapeutic properties, such as antimicrobial, antiinflammatory, antioxidant, immunomodulatory and antitumoral activities, among others. The goal of this work was to compare the cytotoxic action of B. dracunculifolia, propolis and 2 isolated compounds (caffeic and cinnamic acids) on HEp-2 cells in vitro. These cells were incubated with different concentrations of each variable, and cell viability was assessed by crystal violet method. Lower concentrations of B. dracunculifolia (extract and essential oil), propolis as well as caffeic and cinnamic acids, showed no cytotoxic activity against HEp-2 cells. On the other hand, elevated concentrations (50 and 100 μg/100μL) exerted a cytotoxic action, and propolis showed a more efficient action than its vegetal source and isolated compounds. Further investigation is still needed in order to explore the potential of these variables as antitumor agents and to understand their mechanisms of action. Baccharis dracunculifolia is the most important botanical source of the southeastern Brazilian propolis, and its potential for the development of new phytotherapeutic medicines has been investigated. Propolis is commonly used for its antimicrobial and immunomodulatory activities. Nevertheless, B. dracunculifolia and propolis effects on poliovirus type 1 (PV1) were not investigated yet. Thus, the aim of this work was to evaluate the antiviral activities of B. dracunculifolia (extract and essential oil), propolis and some isolated compounds (caffeic and cinnamic acids) against PV1 replication in HEp-2 cells in three... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Em comunidades vegetais podem existir diversos tipos de interações entre os indivíduos presentes, independente destes serem da mesma espécie (intraespecíficas) ou de espécies diferentes (interespecíficas). Em campo nativo caracterizado por efeitos de abandono, fortes modificações da estrutura da vegetação e reduções na diversidade têm sido observadas, atribuídos, entre outros fatores, à entrada de espécies arbustivas. Através de dados ecofisiológicos dos indivíduos participantes no processo, como taxa fotossintética, condutância estomática e transpiração foliar, é possível determinar se existe alguma interação entre as espécies presentes, Baccharis dracunculifolia, Baccharis trimera e Andropogon lateralis, se esta é benéfica, o que poderia caracterizar um processo de facilitação, se estas espécies estão competindo por recursos, ou até mesmo a ocorrência de neutralismo entre elas. Além disso, a caracterização da vegetação campestre em situações com ou sem arbustos pode contribuir para a avaliação do efeito dos arbustos. Para a realização desse estudo foram alocadas 15 parcelas com a presença da espécie arbustiva B. dracunculifolia e 15 parcelas, pareadas às primeiras, onde tal espécie não se encontra, totalizando 30 parcelas. Verificaram-se parâmetros fisiológicos, como taxas de fotossíntese e transpiração, a condutância estomática e a eficiência do uso da água das espécies selecionadas baseado na sua representatividade no ambiente de estudo, B. trimera e A. lateralis, bem como a estrutura, composição e diversidade da vegetação. Também foi realizado um censo da própria população de B. dracunculifolia. A fim de caracterizar as interações entre a espécie arbustiva e as espécies em sua sub-copa foram comparadas as médias dos parâmetros fisiológicos bem como parâmetros (diversidade, composição, riqueza) da comunidade vegetal em parcelas com ou sem arbustos por meio de análise de variância. Os resultados mostraram que B. dracunculifolia exerce certa competição para as duas espécies-alvo, mas não causa mudanças muito fortes na estrutura da vegetação. Como também foi observado que a população de B. dracunculifolia não esta conseguindo se regenerar num campo abandonado, pode ser concluído que a espécie, apesar da modificação forte da fisionomia vegetal, tem pouco impacto na dinâmica sucessional de um campo abandonado. / In plant communities, several types of interactions between individuals can occur, regardless of these being of the same species (intraspecific) or of different species (interspecific). In a grassland areas characterized by natural effects of abandonment, strong changes in vegetation structure and reduction in diversity have been observed, attributed, among other factors, to encroachment by a shrub species. Through ecophysiological data of individuals participating in the process, such as photosynthetic rate, stomatal conductance and leaf transpiration, it is possible to determine whether there is any interaction between the shrub species, Baccharis dracunculifolia, and two species growing under its canopy, Baccharis trimera and Andropogon lateralis, and, if so, if this it is beneficial, which could characterize facilitation of a process, if these species are competing for resources, or even neutrality between them. Furthermore, the characterization of the grassland community in situations with or without shrub can contribute to evaluate the effect of the latter. To conduct this study, 15 plots with the presence of shrub species B. dracunculifolia and 15 plots, paired with the first, where that species is not found were allocated in an abandonend grassland, totaling 30 plots. Physiological parameters (rates of photosynthesis and transpiration and stomatal conductance) of the two species selected based on their high abundance in the environment were studied, as well as the structure, composition and diversity of vegetation. Also, a census of the population of B. dracunculifolia itself was conducted. In order to characterize the interactions between the shrub species and the species in growing in its subcanopy the mean physiological parameters as well as parameters (diversity, composition, richness) of the plant community in plots with or without shrubs were compared by analysis of variance (ANOVA). The results showed that B. dracunculifolia exerts some competition between species, but does not cause strong changes in vegetation structure. As also could be noted that B. dracunculifolia is not regenerating in the abandoned grassland, it can be concluded that the species, despite the strong modification of vegetation physionomy, has little impact on the successional dynamics of abandoned grassland.