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Listeria monocytogenes em linguiças do tipo frescal vendidos a varejo no município de Salvador-BA e eficácia do bacteriófago P100 no controle da contaminação pelo patógeno

Ramos, Lívia Píccolo 30 March 2009 (has links)
Submitted by Glauber Assunção Moreira (glauber.a.moreira@gmail.com) on 2018-08-17T18:29:03Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO LÍVIA.pdf: 1189498 bytes, checksum: 96fa84a1108802cb689c68727a4c29d1 (MD5) / Approved for entry into archive by Setor de Periódicos (per_macedocosta@ufba.br) on 2018-08-21T14:01:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO LÍVIA.pdf: 1189498 bytes, checksum: 96fa84a1108802cb689c68727a4c29d1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-21T14:01:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO LÍVIA.pdf: 1189498 bytes, checksum: 96fa84a1108802cb689c68727a4c29d1 (MD5) / RESUMO Os surtos de Doenças Veiculadas por Alimentos (DVA) constituem alvo de preocupação para as indústrias alimentícias e para os órgãos de saúde pública. Listeria monocytogenes é conhecida como um importante patógeno causador de doenças veiculadas por alimentos, e sua importância vem aumentando desde a década de 1980. Apesar de o número de casos da doença por ano ser relativamente baixo, a infecção pode ser grave, com letalidade acima de 30%. Em pesquisas realizadas no Brasil foi identificada uma incidência de 32% em amostras de produtos cárneos com uma taxa de isolamento de 80% em linguiças do tipo frescal elaboradas com carne suína. Apesar dos recentes avanços nas tecnologias de controle de patógenos em alimentos, os consumidores têm procurado alimentos “naturais”, isto é, submetidos a tratamentos menos agressivos e isentos de conservadores químicos. Em 2007, o Departamento de Agricultura dos Estados Unidos (USDA) e a agência norte-americana Food and Drug Administration (FDA) aprovaram o uso do LISTEXTM P100, um bacteriófago específico para o controle de Listeria monocytogenes, para todos os tipos de alimentos. Bacteriófagos são vírus que infectam somente bactérias e não infectam células animais ou vegetais. Eles estão largamente distribuídos no ambiente, e o homem está exposto a eles em altas concentrações através da água e dos alimentos, sem qualquer efeito adverso à sua saúde. A importância que a carne representa na alimentação humana, associada à necessidade de se oferecer sempre um alimento inócuo e incapaz de veicular doenças ao homem, motivou o desenvolvimento desta pesquisa, que teve como objetivos verificar a ocorrência de Listeria monocytogenes em linguiças do tipo frescal vendidas a varejo em estabelecimentos comerciais da cidade de Salvador-BA e avaliar a eficácia do agente antimicrobiano, bacteriófago P100 (LISTEXTM P100), sobre células de Listeria monocytogenes inoculadas artificialmente no alimento. Foram examinadas 40 amostras de linguiças do tipo frescal de carne suína e 40 de frango, de diferentes marcas comerciais. Isolou-se Listeria spp. em 12 amostras (15%), das quais três (3,75%) foram positivas para L. monocytogenes. Entre as espécies, L. innocua foi isolada com maior frequência, em 11 amostras (13,75%); em duas amostras foram detectadas as duas espécies. As cepas de L. monocytogenes isoladas das amostras pertenciam ao sorotipo ½a. Na investigação da eficácia do uso do bacteriófago P100 no controle da contaminação do embutido pelo microrganismo, verificou-se uma redução de três ciclos logarítmicos na população inicial do microrganismo, diferença estatisticamente significativa (p<0,05). Também foi encontrada diferença significativa (p<0,05) quando se comparou o tratamento no tempo 0 (zero) e no tempo 10, com aumento da população do patógeno no alimento após 10 dias de armazenamento, o que remete a necessidade de se utilizar um fago com título mais elevado. / ABSTRACT The outbreaks of Food-borne Diseases are a reason of concern for the food industries and public health organs. Listeria monocytogenes is known as an important pathogen causing diseases transmitted by food and its importance has been growing since the 1980s. Although the number of disease cases per year is relatively low, the infection can be serious, with lethality rate at 30%. Research works conducted in Brazil reported an incidence of 32% in meat product samples with an isolation rate of 80% in Brazilian fresh sausage (“linguiça do tipo frescal”) made with pork meat. Despite the recent technological advancements in pathogen control in foods, consumers have sought natural foods, i.e., foods submitted to less aggressive treatments without chemical preservatives. In 2007, the Department of Agriculture of the United States (USDA) and the North America Agency Food and Drug Administration (FDA) approved the use of LISTEXTM P100, a bacteriophage specific for the control of Listeria monocytogenes, for all types of food. Bacteriophages are viruses that infect only bacteria and do not infect animal or plant cells. They are widely distributed in the environment and humans are exposed to them at high concentrations through water and foods, without any adverse effect to health. The role played by meat in human nutrition, associated to the need of offering an innocuous food, incapable of transmitting diseases to humans, has led to the development of this research, whose objectives were to verify the incidence of Listeria monocytogenes in Brazilian fresh sausages sold in commercial establishments in the city of Salvador-BA and to evaluate the efficacy of the antimicrobial agent bacteriophage P100 (LISTEXTM P100) in the cells of Listeria monocytogenes artificially inoculated in the food. Forty samples of type pork Brazilian fresh sausages and 40 samples of chicken, of different commercial brands were taken. Listeria spp was isolated in 12 samples (15%) of which three (3.75%) were positive for L. monocytogenes. Among the species, L. innocua was isolated with greater frequency in 11 samples (13.75%); the two species were detected in two samples. The strains of L. monocytogenes isolated from the samples belonged to the serotype ½a. When investigating the efficacy in the use of the bacteriophage P100 in controlling Brazilian fresh sausage contamination by the microorganism, the results showed a reduction of three logarithmic cycles in the initial population of the microorganism, a statistically significant difference (p<0.05). A significant difference (p<0.05) was also found when 0 (zero) time treatment was compared with time 10 treatment, showing increase in the pathogen’s population in the food after 10 days of storage and the need to use a phage with a higher titer.
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Análise in-silico de integrases no fitopatógeno Xylella fastidiosa: diversidade, sítios de integração e associação com bacteriófagos. / In silico analysis of integrases in the phytopathogen Xylella fastidiosa: diversity, integration sites and association with bacteriophages.

Alessandro de Mello Varani 03 September 2008 (has links)
Os elementos genéticos móveis encontrados no genoma da bactéria Xylella fastidiosa (Xf) são representados principalmente por bacteriófagos (na forma de profagos inseridos no genoma) e ilhas genômicas. As integrases são responsáveis pelo processo de mobilização (integração e/ou excisão) destes elementos, através do mecanismo de recombinação sítio-específica. Bacteriófagos e ilhas genômicas estão associados a eventos de rearranjos genômicos e à aquisição e ou interrupção de genes importantes para bactéria, tendo implicação direta na diversidade e organização genômica e, por conseqüência, na diferenciação entre linhagens. A extensão e o impacto desses eventos é o foco deste trabalho, através da análise in-silico das integrases e sua associação com regiões de profagos e ilhas genômicas, no genoma de quatro linhagens de Xf. Os dados aqui apresentados corroboram o papel das integrases e seus elementos genéticos móveis associados como agentes chaves no processo de diversidade e evolução da organização genômica entre as quatro linhagens de Xf. / The mobile genetic elements found in the genome of the bacterium Xylella fastidiosa (Xf) are mainly represented by bacteriophages (as prophages inserted into the genome) and genomic islands. The integrases are responsible for the process of mobilization (integration and / or excision) of these elements through the mechanism of site-specific recombination. Bacteriophages and genomic islands are associated with events of genomic rearrangements and the acquisition and or interruption of important genes for bacteria, with direct involvement in diversity and genomic organization and, consequently, the differentiation between strains. The extent and impact of these events are the focus of this work, through in-silico analysis of integrase and association with regions of prophages and genomic islands in the genome of four strains of Xf. The data presented here support the role of integrases and their mobile genetic elements associated as key players in the process of evolution and diversity of genomic organization between the four strains of Xf.
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Caracterización de un bacteriófago específico de Escherichia coli aislado de aguas residuales de “La Taboada”

Punil Luciano, Renzo Jonás January 2017 (has links)
Se aisla un bacteriófago que infecta a Escherichia coli denominado ФGF1, y se caracteriza de manera físico-química y microbiológica. El bacteriófago ФGF1 es resistente al cloroformo, estable hasta la temperatura de 50 °C y en los rangos de pH 5-8, además muestra un amplio rango de hospedero infectando también a Shigella sonnei que es una bacteria estrechamente relacionada a Escherichia coli. Al realizar la curva de crecimiento de un paso se observa un periodo de latencia de 15 minutos y un tamaño de explosión aproximado de 85 fagos. Este bacteriófago presenta un morfotipo C3 que es extremadamente raro, y pertenece a la familia Podoviridae. Por las características mostradas este bacteriófago es un buen candidato para futuras aplicaciones en reducción o eliminación de Escherichia coli. / Tesis
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Interações entre DNA de bacteriófagos e partículas biomiméticas catiônicas / Interactions between Bacteriophage DNA and Cationic Biomimetic Particles

Rosa, Heloísa 29 September 2008 (has links)
A associação entre DNA de cadeia de longa e partículas catiônicas foi caracterizada por determinações de tamanho (espalhamento de luz dinâmico), análise de potencial-zeta, turbidimetria, estabilidade coloidal, microscopia de força atômica (AFM) e determinação de citotoxicidade dos arranjos contra a bactéria E. coli a partir da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC). Partículas de poliestireno sulfato (PSS) de diversos tamanhos foram recobertas por uma bicamada de brometo de dioctadecildimetilamônio (DODAB) e entituladas partículas biomiméticas catiônicas PSS/DODAB. Estas são altamente organizadas, catiônicas e monodispersas. Em seguida, por adição de &#955;, T5 ou T2-DNA, os arranjos supramoleculares PSS/DODAB/DNA foram obtidos e caracterizados em função da concentração de DNA e tamanho de partícula (80-700 nm). Em baixas concentrações de DNA, foram obtidos arranjos catiônicos PSS/DODAB/DNA de boa estabilidade coloidal, polidispersidade moderada e alta citotoxicidade contra E. coli. A partir da concentração de DNA correspondente à neutralização de cargas, foram obtidos arranjos neutros ou aniônicos de baixa estabilidade coloidal, alta polidispersidade e citotoxicidade moderada. Arranjos similares a nucleossomos foram visualizados por AFM para alguns arranjos na situação de neutralização de cargas (potencial-zeta igual a zero). Estão em perspectiva experimentos com DNA plasmidial que poderão revelar o papel do tamanho de partícula, carga e polidispersidade sobre a transfecção de genes em sistemas de células-modelo / The interaction between giant bacteriophage DNA and cationic biomimetic particles was characterized from sizing by dynamic light-scattering, zeta-potential analysis, turbidimetry, colloid stability, atomic force microscopy (AFM) and determination of cytotoxicity against E. coli from colony forming unities (CFU) counting. Firstly, polystyrene sulfate (PSS) particles with different sizes were covered by a dioctadecyldimethylammonium bromide (DODAB) bilayer yielding the so called cationic biomimetic particles (PSS/DODAB). These cationic particles are highly organized, present a narrow size distribution and were obtained over a range of particle sizes. Thereafter, upon adding &#955;, T5 or T2-DNA to PSS/DODAB particles, supramolecular assemblies PSS/DODAB/DNA were obtained and characterized over a range of DNA concentrations and particle sizes (80-700 nm). Over the low DNA concentration range, PSS/DODAB/DNA assemblies were cationic, colloidally stable with moderate polydispersity and highly cytotoxic against E. coli. From DNA concentration corresponding to charge neutralization, neutral or anionic supramolecular assemblies PSS/DODAB/DNA exhibited low colloid stability, high polydispersity and moderate cytotoxicity. Some nucleosome mimetic assemblies were observed by AFM at charge neutralization (zetapotential equal to zero). In perspective are experiments with plasmid DNA which will possibly reveal the role of particle charge, size and polydispersity for PSS/DODAB/DNA mediated gene transfection
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Isolamento de bacteriófagos líticos para Rhodococcus sp

Santos, Valesca Peter dos January 2016 (has links)
O Rhodococcus equi é uma das principais causas de pneumonia piogranulomatosa e linfadenite em potros de 1-6 meses de idade, resultando em alta morbidade e muitas vezes em óbito. Em propriedades endêmicas, a enfermidade é responsável por gerar altos custos para tratar e prevenir a doença. Com o objetivo de propor uma alternativa para o controle ambiental do Rhodococcus equi, foi aplicado um protocolo para isolamento de bacteriófagos. Foram isoladas 14 amostras de bacteriófagos, obtidas do ambiente de criação de cavalos. Estas apresentaram capacidade de lisar in vitro amostras de campo de Rhodococcus equi com diferentes intensidades. O resultado obtido nos possibilita sugerir que os fagos podem ser uma alternativa natural para a redução da bactéria no ambiente. / Rhodococcus equi is an important cause of pyogranulomatus pneumonia and lymphadenitis in foals 1-6 months of age, resulting in high morbidity and often mortality. In endemic properties, the disease is responsible for generating high costs to treat and prevent disease. In order to propose an alternative to the environmental control of Rhodococcus equi, a protocol for isolation of bacteriophages was applied. Fourteen bacteriophage samples were isolated obtained from horse breeding environment. They showed capacity to lyse in vitro Rhodococcus equi field samples with different sensitivities. The results obtained allows us to suggest the phage as a natural alternative to reducing R. equi population.
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Codigestão anaeróbia de dejeto suíno e carcaça suína: produção de biogás e inativação de patógenos / Anaerobic co-digestion of swine manure and carcass: biogas yield and pathogens inactivation

Tápparo, Deisi Cristina 16 February 2017 (has links)
Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2017-08-30T13:20:01Z No. of bitstreams: 2 Deisi_Tapparo2017.pdf: 1334800 bytes, checksum: e1f7fae75650df8c87e6f134d2dad8cf (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-30T13:20:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Deisi_Tapparo2017.pdf: 1334800 bytes, checksum: e1f7fae75650df8c87e6f134d2dad8cf (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The swine breeding stands out on worldwide due to its constant growth. However, environmental problems have increased as the activity gains recognition, consequently, planning and management of waste produced have been required in the systems. Animal carcasses disposal inside or outside the animal rearing farms is under concern and object of discussion about good practices to do it considering biosecurity aspects. One alternative is the swine manure and swine carcass co-digestion in order to improve biogas production. At the same time, it is known that animal carcass has some pathogenic microorganisms of zoonotic importance. In this context, this research aimed at studying swine carcass co-digestion and swine manure as well as its implications on biogas yield and digestate sanitation. This study was carried out under mesophilic temperature (37 ºC) and triplicate tests. Biogas volume was measured using eudiometer tubes, according to VDI 4630. The trials used the carcass sample digestion in a separate way and loading rates of carcass/manure were 3, 7.5 and 15kg.m-3manure, which represented 1, 2.5 and 5 times of mortality/manure production rates on typical swine farms (Mortality rate of 7% .year-1 for matrices). The inactivation trials were carried out in separated. Then it was evaluated the inactivation of the following microorganisms models (E. coli, Salmonella enterica serovar Senftenberg, PCV2, and bacteriophage MS2 and PhiX-174). Four inactivation strategies were carried out at two temperatures (24 ºC and 37 ºC) and two swine carcass/swine manure ratios were also studied (3kgcarcass.m-3manure and 15 kgcarcass.m-3manure). The swine carcass presented biochemical methane potential (BMP) of 1076 ± 48 LNbiogas.kgSVadic-1, and its co-digestion with swine manure increases biogas production potential when compared to manure monodigestion. The model microorganisms such as E. coli, S. Senftenberg and PCV2 (37°C) were completely inactivated until 30 days, while PCV2 (24°C), MS2 and PhiX-174 were more resistant. The temperature of co-digestion process influences the time required for microorganisms’ inactivation. Inactivation results suggest that, during co-digestion at 37°C, there is a greater pathogen reduction when compared to the same process at 24° C. It is recommended to use a pre-treatment process to biodigestor without heating system and under mesophilic temperature to ensure biosafety. / A suinocultura se destaca no cenário mundial devido ao seu constante crescimento. Todavia, os problemas ambientais aumentam à medida que a atividade ganha reconhecimento, por isso, são necessários planejamento e gestão dos resíduos produzidos nos sistemas. Um dos desafios da atividade é a destinação de animais mortos, logo, são necessárias alternativas que aliem proteção do meio ambiente e saúde pública bem como opções de baixo custo. Uma das alternativas é realizar a codigestão de carcaça suína com dejeto suíno para melhorar a produção de biogás. Ao mesmo tempo, é de conhecimento que a carcaça animal possui micro-organismos patogênicos de importância zoonótica. Nesse contexto, o objetivo desta pesquisa foi estudar a codigestão de dejeto suíno e carcaça suína, suas implicações sobre a produção de biogás e sanitização do digestato. Os estudos de digestão foram conduzidos em batelada, sob condições mesofílicas (37ºC) e em triplicata. Foram utilizados tubos eudiômetros para mensurar o biogás produzido, conforme norma VDI 4630. Os experimentos envolveram a digestão de amostras de carcaça em separado e das relações de mistura entre carcaça e dejeto nas seguintes proporções: 3; 7,5 e 15 kgcarcaça.m-3dejeto, as quais representaram 1; 2,5 e 5 vezes a mortalidade encontrada em granjas comerciais (mortalidade de 7%.ano-1 para matrizes). Os experimentos de inativação de patógenos foram conduzidos em separado. Avaliou-se a inativação de micro-organismos modelos (E. coli, Salmonella entérica serovar Senftenberg, PCV2, MS2 e PhiX-174). Quatro estratégias de inativação foram estudadas: duas temperaturas (24ºC e 37ºC) e duas relações de carcaça suína/dejeto suíno (3kg.m-3 e 15kg.m-3). Os resultados mostraram que a carcaça suína tem um potencial de 1076 ± 48 LNbiogás.kgSVadic-1, e a sua codigestão com dejeto suíno aumenta o potencial de produção de biogás comparando com a monodigestão do dejeto. Os micro-organismos modelo E. coli, S. Senftenberg e PCV2 (37 ºC) foram totalmente inativados em 30 dias, enquanto o PCV2 (24 ºC), MS2 e PhiX -174 foram mais resistentes. A temperatura do processo de codigestão influencia no tempo necessário para a inativação dos micro-organismos. Os resultados de inativação sugerem que, durante a codigestão a 37 ºC, ocorre maior redução de patógenos quando comparada ao mesmo processo a 24 ºC. Recomenda-se a utilização de processo de pré-tratamento para biodigestores sem sistema de aquecimento e em temperaturas mesofílicas, a fim de garantir a biossegurança.
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Isolamento de bacteriófagos líticos para Rhodococcus sp

Santos, Valesca Peter dos January 2016 (has links)
O Rhodococcus equi é uma das principais causas de pneumonia piogranulomatosa e linfadenite em potros de 1-6 meses de idade, resultando em alta morbidade e muitas vezes em óbito. Em propriedades endêmicas, a enfermidade é responsável por gerar altos custos para tratar e prevenir a doença. Com o objetivo de propor uma alternativa para o controle ambiental do Rhodococcus equi, foi aplicado um protocolo para isolamento de bacteriófagos. Foram isoladas 14 amostras de bacteriófagos, obtidas do ambiente de criação de cavalos. Estas apresentaram capacidade de lisar in vitro amostras de campo de Rhodococcus equi com diferentes intensidades. O resultado obtido nos possibilita sugerir que os fagos podem ser uma alternativa natural para a redução da bactéria no ambiente. / Rhodococcus equi is an important cause of pyogranulomatus pneumonia and lymphadenitis in foals 1-6 months of age, resulting in high morbidity and often mortality. In endemic properties, the disease is responsible for generating high costs to treat and prevent disease. In order to propose an alternative to the environmental control of Rhodococcus equi, a protocol for isolation of bacteriophages was applied. Fourteen bacteriophage samples were isolated obtained from horse breeding environment. They showed capacity to lyse in vitro Rhodococcus equi field samples with different sensitivities. The results obtained allows us to suggest the phage as a natural alternative to reducing R. equi population.
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Caracterização de bacteriófagos líticos isolados de soro de queijos / Characterization of Lytic Bacteriophages Isolated from Cheese Whey

Eller, Monique Renon 16 July 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3209236 bytes, checksum: 730f245d59f62f2daccf53d9d6fb9b93 (MD5) Previous issue date: 2010-07-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lactic acid bacteria (LAB) can be infected and lysed by an extensive range of bacteriophages, which is recognized as the main cause of failure or slow fermentation in the modern dairy industry. Contaminated fermentation processes affect product quality or even cause its complete loss. Although technological advances have reduced the incidence of these infections, they certainly do not eliminated it. The objective of this work was the isolation, identification and molecular characterization of lytic bacteriophages of Lactococcus lactis from sera from lactic fermentation. For this, serum samples were collected from three different dairies facilities. From one of them, were isolated 17 bacteriophages, which were propagated in L. lactis grown in GM17 medium and molecularly characterized using the techniques of multiplex PCR, DNA restriction profile, protein profile, transmission electron microscopy, cloning and sequencing. The extraction of the genome of bacteriophages isolated and its analysis revealed a strand of DNA of 48 kb for phage LIMG1 and 42 kb for phage LIMG4, while phage protein profile allowed the distinction of four groups, and the differentiation between them was consistent with the sample from which they were isolated. The PCR, coupled to microscopic analysis, confirmed the presence of members of the group 936-type phages, Siphoviridae family, the most abundant in dairy products worldwide. Phages contain isometric heads with 50 nm in diameter and a 180 nm long tail, without basal plate. The amplified sequence of isolate LIMG1 revealed high identity with other members of 936-type phages, although two punctual mutations had differed LIMG1 from the others. / Bactérias do Ácido Láctico (BAL) podem ser infectadas e lisadas por uma extensa faixa de bacteriófagos, o que constitui reconhecidamente a principal causa de fermentação falha ou lenta na indústria de laticínios moderna. Processos fermentativos contaminados prejudicam a qualidade do produto ou causam até mesmo sua perda completa. Embora avanços tecnológicos tenham reduzido a incidência destas infecções, eles certamente não as eliminaram. Assim, o objetivo deste trabalho foi o isolamento, identificação e caracterização molecular de bacteriófagos líticos de Lactococcus lactis a partir de soros provenientes de fermentações lácticas. Para isto, amostras de soro foram coletadas em três diferentes laticínios e, a partir deles, foram isolados 17 bacteriófagos, os quais foram propagados em L. lactis cultivado em meio GM17 e caracterizados molecularmente utilizando-se as técnicas de multiplex PCR, perfil de restrição enzimática de DNA, perfil proteico, microscopia eletrônica de transmissão, clonagem e sequenciamento. A extração do genoma dos bacteriófagos isolados e sua análise revelaram uma fita de DNA de 48 kb para o isolado LIMG1 e 42 kb para o isolado LIMG4, enquanto o perfil de proteínas dos fagos permitiu a distinção de quatro grupos, sendo que a diferenciação entre eles foi condizente com a amostra da qual foram isolados. A técnica de PCR, associada à análise microscópica, confirmou a presença de fagos do grupo 936, família Siphoviridae, o mais abundante em laticínios em todo o mundo. Foram encontrados fagos de cabeça isométrica de 50 nm de diâmetro e caudas longas de cerca de 180 nm de comprimento, sem placa basal. O sequenciamento do genoma do isolado LIMG1 revelou alta identidade com outros representantes do grupo 936, embora tenham sido encontradas duas mutações pontuais que o diferenciaram dos demais.
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Isolamento de bacteriófagos líticos para Rhodococcus sp

Santos, Valesca Peter dos January 2016 (has links)
O Rhodococcus equi é uma das principais causas de pneumonia piogranulomatosa e linfadenite em potros de 1-6 meses de idade, resultando em alta morbidade e muitas vezes em óbito. Em propriedades endêmicas, a enfermidade é responsável por gerar altos custos para tratar e prevenir a doença. Com o objetivo de propor uma alternativa para o controle ambiental do Rhodococcus equi, foi aplicado um protocolo para isolamento de bacteriófagos. Foram isoladas 14 amostras de bacteriófagos, obtidas do ambiente de criação de cavalos. Estas apresentaram capacidade de lisar in vitro amostras de campo de Rhodococcus equi com diferentes intensidades. O resultado obtido nos possibilita sugerir que os fagos podem ser uma alternativa natural para a redução da bactéria no ambiente. / Rhodococcus equi is an important cause of pyogranulomatus pneumonia and lymphadenitis in foals 1-6 months of age, resulting in high morbidity and often mortality. In endemic properties, the disease is responsible for generating high costs to treat and prevent disease. In order to propose an alternative to the environmental control of Rhodococcus equi, a protocol for isolation of bacteriophages was applied. Fourteen bacteriophage samples were isolated obtained from horse breeding environment. They showed capacity to lyse in vitro Rhodococcus equi field samples with different sensitivities. The results obtained allows us to suggest the phage as a natural alternative to reducing R. equi population.
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Interações entre DNA de bacteriófagos e partículas biomiméticas catiônicas / Interactions between Bacteriophage DNA and Cationic Biomimetic Particles

Heloísa Rosa 29 September 2008 (has links)
A associação entre DNA de cadeia de longa e partículas catiônicas foi caracterizada por determinações de tamanho (espalhamento de luz dinâmico), análise de potencial-zeta, turbidimetria, estabilidade coloidal, microscopia de força atômica (AFM) e determinação de citotoxicidade dos arranjos contra a bactéria E. coli a partir da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC). Partículas de poliestireno sulfato (PSS) de diversos tamanhos foram recobertas por uma bicamada de brometo de dioctadecildimetilamônio (DODAB) e entituladas partículas biomiméticas catiônicas PSS/DODAB. Estas são altamente organizadas, catiônicas e monodispersas. Em seguida, por adição de &#955;, T5 ou T2-DNA, os arranjos supramoleculares PSS/DODAB/DNA foram obtidos e caracterizados em função da concentração de DNA e tamanho de partícula (80-700 nm). Em baixas concentrações de DNA, foram obtidos arranjos catiônicos PSS/DODAB/DNA de boa estabilidade coloidal, polidispersidade moderada e alta citotoxicidade contra E. coli. A partir da concentração de DNA correspondente à neutralização de cargas, foram obtidos arranjos neutros ou aniônicos de baixa estabilidade coloidal, alta polidispersidade e citotoxicidade moderada. Arranjos similares a nucleossomos foram visualizados por AFM para alguns arranjos na situação de neutralização de cargas (potencial-zeta igual a zero). Estão em perspectiva experimentos com DNA plasmidial que poderão revelar o papel do tamanho de partícula, carga e polidispersidade sobre a transfecção de genes em sistemas de células-modelo / The interaction between giant bacteriophage DNA and cationic biomimetic particles was characterized from sizing by dynamic light-scattering, zeta-potential analysis, turbidimetry, colloid stability, atomic force microscopy (AFM) and determination of cytotoxicity against E. coli from colony forming unities (CFU) counting. Firstly, polystyrene sulfate (PSS) particles with different sizes were covered by a dioctadecyldimethylammonium bromide (DODAB) bilayer yielding the so called cationic biomimetic particles (PSS/DODAB). These cationic particles are highly organized, present a narrow size distribution and were obtained over a range of particle sizes. Thereafter, upon adding &#955;, T5 or T2-DNA to PSS/DODAB particles, supramolecular assemblies PSS/DODAB/DNA were obtained and characterized over a range of DNA concentrations and particle sizes (80-700 nm). Over the low DNA concentration range, PSS/DODAB/DNA assemblies were cationic, colloidally stable with moderate polydispersity and highly cytotoxic against E. coli. From DNA concentration corresponding to charge neutralization, neutral or anionic supramolecular assemblies PSS/DODAB/DNA exhibited low colloid stability, high polydispersity and moderate cytotoxicity. Some nucleosome mimetic assemblies were observed by AFM at charge neutralization (zetapotential equal to zero). In perspective are experiments with plasmid DNA which will possibly reveal the role of particle charge, size and polydispersity for PSS/DODAB/DNA mediated gene transfection

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